动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定
动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定
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动物性蛋白质饲料
胃蛋白酶消化率的测定过滤法
参考标准：GB/T 17811-2008
一、适用范围
二、实验原理
已脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定),在恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化16小时,过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。
三、实验用品
三、实验内容
照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤纸后,用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次,并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸(用滤纸将残渣包裹好),无损地移入100烧杯中并置于105℃烘箱内烘干。
5 粗蛋白质
的测定将上述已烘干的滤纸包无损地移入
凯氏烧瓶中，按《FOSS 定氮仪测
定饲料中粗蛋白含量的方法》测定
残渣粗蛋白质的质量分数（ω
2
）。同时，称取脱脂风干的样品
0.3 g（精确至0.0002 g），直接
按《FOSS 定氮仪测定饲料中粗蛋
白含量的方法》测定脱脂未酶解的
样品中粗蛋白质的质量分数（ω
1
）。
测定残渣粗蛋白质时应从每个
样品残渣粗蛋白质中减去酶液
的空白值。
6 计算X- 试样胃蛋白酶消化率，以质
量分数计（%）；
ω
1
- 脱脂未酶解的样品中粗蛋
白质的质量分数（%）；
ω
2
- 脱脂酶解后的残渣中粗蛋
白质的质量分数（%）。
重复性：1每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对≤6%；
2 每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其
粗蛋质含量允许相对偏差
>25% 1％
10% ≤10% 3％ 3 每个试样胃蛋白酶消化率测定结果保留三位有效数字。 误差来源及分析 误差来源控制方案 附录2：盐酸标准溶液的配制与标定 参考标准：GB/T601-2002 1.盐酸标准溶液的配制 按下表的规定量取盐酸，注人1000m L 水中，摇匀。 2.盐酸标准溶液的标定 按下表的规定称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50ml.水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min ，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时做空白试验。 3.计算 盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCI)].数值以摩尔每升(mol/L 表示，按式(2)计算： M V V m HCl C ?-?= )21(1000 )( m- 无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g); V1 -盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(ml); V: -空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL) M- 无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/mol) 注意事项： 1.灼烧温度不能超过300度，当温度超过300度时无水碳酸钠分解，可将马福炉的温度调至250，等升温稳定后再调至280，或者将马福炉事先升温至280度，待稳定后再放入无水碳酸钠 2.无水碳酸钠的称量质量小于0.2g 时要用十万分子之一天平称量。 3.混合指示剂为 %甲基红，%溴甲酚绿，1：1混合。 4.滴定一定要滴到暗红色再煮沸，可事先根据大体浓度计算大约的滴定体积。 5.滴定终点到达之后一定是再次去煮不会变回绿色。 黄芪多糖对蛋鸡生产性能和饲料表观消化率的影响杨秋霞，王洪芳，陈辉，王翠菊，高杨，吴鹏威，郭小虎，葛帅，黄仁录(1．河北农业大学动物科技学院，河北保定071001；2沧州职业技术学院，河北，沧州061001) 摘要：试验选取生产性能相近的380日龄海兰灰蛋鸡1440只，随机分为6组，每组4个重复，每个重复60只。以玉米-豆粕型日粮为基础日粮，第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V、Ⅵ组为试验组，分别在基础日粮中添加50mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg、200 mg/kg和250 mg/kg的黄芪多糖，研究黄芪多糖对蛋鸡生产性能和饲料表观消化率的影响，试验期8周。试验结果表明：(1)料蛋比，试验I组与试验Ⅳ 组相比差异极显著(P<0.01)，与试验II组相比差异显著(P<0.05)，试验II、Ⅳ、V组分别与试验Ⅵ组差异显著(P<0.05)；(2)每只鸡每天平均耗料，试验III、Ⅳ、V组极显著低于对照组(P<0.01)。试验II、Ⅵ组显著低于对照组(P<0.05)；(3)日粮中添加黄芪多糖对钙的表现消化率有显著性影响，试验V组钙表观消化率显著高于试验Ⅵ组(P<0.05)。综合评定认为100-200mg/kg为适宜添加量。 关键词：黄芪多糖；生产性能；表现消化率 The effect of Astragalus polysaccharides on the performance and Apparent digestibility of feed of laying hens Y ang Qiuxia, WangHongfang ,Chen Hui, Wang Cuiju, GaoY an, Wu Pengwei ,Guo Xiaohu, Ge Shuai，Huang Renlu Abstract：At the age of 380 days，1440 Hy-line were randomly divided into 6 groups，with 4 replications per group and 60 hens per replication．The control group fed with basal diets，the testing group fed with basal diets adding 50mg/kg，100mg/kg，150mg/kg，200mg/kg，250mg/kg Astragalus Polysaccharide(APS) respectively. The experiment lasted 8 weeks. The main results were showed as follows:(1)The diets added with APS affect the rate of feed and with I Was egg，the experimental group IV compared group significantly different(P<0.01).The experimental group II compared with group 1 was significantly different(P<0.05). Compared with groups VI，Group II，IV，and V were significantly different，respectively(P<0.05).(2)The diets added with APS，the average daily feed consumption of group III,IV,V were significantly lower than the control group(P<0.01)，group II and groupⅥ were significantly lower than the control group(P<0.05).(3)The APS in diets significantly affected apparent digestibility of calcium, apparent digestibility of calcium of group V was significantly higher than group VI (P<0.05)．The appropriate amount is comprehensively assessed at 100-200mg/kg． Keywords：APS；production performance；apparent digestibility 黄芪的主要化学成分有多糖类、皂甙类、黄酮类物质及22种氨基酸和14种微量元素等营养物质。黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide，APS)是黄芪中含量最多、免疫活性较强的 第三章鱼类营养学原理 第一节蛋白质的营养 蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。那么在鱼类营养中，是不是饲料中的蛋白质水平越高就越好呢？为什么，在众多饲料蛋白源，一般鱼类对鱼粉的消化利用率比其它蛋白源饲料高呢？ （一）：蛋白质营养 1.蛋白质的组成 含C、H、O、N，部分蛋白质含少量Fe、P、S，蛋白质的平均元素含量：C 53%，H 7%，O 23%，N 16%，S+P <1% N平均含量为16%，这是概略养分分析法CP含量计算的理论依据。 CP=蛋白质含N量÷16%=蛋白质含N量×6.25 蛋白质的基本组成单位是氨基酸，主要由20种氨基酸组成。 2.蛋白质的生理功能 机体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20种氨基酸按不同比例组成的，并在体内不断代谢与更新。 ①细胞原生质的重要组成成分；是碳水化合物和脂肪不可替代的，是除水外，含量最多的营养物质，占干物质的50%，占无脂固形物的80%。 ②组织生长、更新、修补的物质来源。动物体蛋白质每天约 0.25-0.3%更新，约6-12月全部更新。 ③参与构成酶、激素和部分维生素。酶的本质是蛋白质；含氮激素：生长激素、甲状腺素、肾上腺素、胰岛素、促肠液激素；含氮维生素：尼克酸 ④蛋白质是水生动物主要的能量来源，为鱼类提供能量，转化为脂肪和糖类：蛋白质的燃烧热值为5.654卡/克，生理热价4.4卡/克左右 ⑤参与机体免疫：抗体的成份绝大部分均为蛋白质 ⑥参与遗传信息的控制：DNA、RNA ⑦维持毛细血管的正常渗透压 ⑧运输功能：血红素 ⑨参与血凝和维持血液酸碱平衡。 3.鱼类对饲料蛋白质的利用 ①消化部位：主要在胃和小肠上部, 20%在胃,60-70%在小肠,其余在大肠。 ②吸收：部位在小肠上部，主动吸收 吸收的顺序： L-AA > D-AA Cys>Met>Try>Leu>Phe>Lys≈Ala>Ser>Asp>Glu 胃蛋白酶（Pepsin）试剂盒使用说明 分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC2320 规格：50/24S 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入25mL试剂二充分溶解。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入25mL蒸馏水充分溶解。 试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入30mL蒸馏水充分溶解。 试剂六：液体×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，0.5μmol/mL酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。 产品说明： 胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。 胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。 自备仪器和用品： 研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min，调节波长到580nm，蒸馏水调零。 2.试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。 3.标准管：取EP管，加入100μL标准品，200μL试剂二，600μL试剂五，100 μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A标准管。 4.空白管：取EP管，加入100μL蒸馏水，200μL试剂二，600μL试剂五，100 μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A空白管。 5.对照管：取EP管，加入500μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入500 μL试剂四，盖紧后摇匀1min；加入100μL粗酶液，混匀后8000g4℃离心10分钟； 取上清液100μL，加入新EP管，再加入200μL试剂二，600μL试剂五，100μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A对照管。 6.测定管：取EP管，加入100μL粗酶液，500μL试剂三，置于37℃水浴保温 10min；加入500μL试剂四，盖紧后摇匀1min；8000g4℃离心10分钟；取上清液100μL，加入新EP管，再加入200μL试剂二，600μL试剂五，100μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A测定管。 注意：空白管和标准管只需要测定一次。 三、计算公式： 1)按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。 胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）=C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管 12 消化率和利用率 “消化率”或“利用率”是指食物中某一种或某一类营养素（如粗蛋白）在通过消化道时消失的量或比例，或者随废物排出的量或比例。因此，消化率首先是用来度量营养素消失的。被消化的营养素通常认为被机体生长和代谢所用，虽然事实常常并非如此。消化率还用来描述营养素的消化过程，比如蛋白质在被吸收之前先被水解成氨基酸。而营养素（比如氨基酸）的生物利用率则被定义为从某一特定原料中摄取的营养素可用于动物机体代谢的部分（Batterham, 1992; Ammerman et al., 1995; Lewis and Bayley, 1995）。营养素的生物利用率可以通过一系列方法学手段来评估。生物利用率可以揭示营养素的代谢利用，其具体内容将不在本章节详细讨论。 当食物被机体摄入后，在消化道中，食物混合物经过消化道的蠕动等物理作用被混合成更细小均一的食糜，并在此过程中以自由扩散、协助扩散和主动运输等方式被机体吸收。没有被吸收的部分则作为废物排出体外。所以在计算消化率时需要测量粪便中的营养素或能量的含量。以可消化能为例，可消化能事实上衡量了摄入的总能与粪便中总能的差异。关于完整的能量流向，将在第四章中详细叙述。 营养素被吸收后会在体内进行代谢，营养素中的能量会以含氮物质（如NH3+和尿素）的形式通过尿和鳃排泄掉。当这些物质中的能量被测定出来并从可消化能中减去，剩下的值便叫做代谢能（ME）。在前几版的《鱼虾营养需求》中，可消化能和代谢能的值都给了出来，但是在本版本中，只给出了可消化能值，这主要考虑到代谢能测量的难度及测定方法对其准确性的影响。还有，一般现在科研和商业饲料配方中大多也只给出可消化能值。 消化率测定方法 测定食物或饲料的消化率首先需要收集粪便。收集粪便的方法有直接法和间接法。不论直接法还是间接法都可以将被测物质单独投喂，也可以将被测物质加到饲料中作为饲料的一部分一起投喂，一般后者比较常用。在鱼类中使用直接法时，用一定量的饲料投喂实验鱼，然后收集所有的粪便。但是，收集水生动物的所有粪便难度较大，因为在水环境中很难将所有的粪便跟未吃完的饲料颗粒区分开，而且在水生环境中，粪便与通过尿和鳃排出的排泄物也混合在一起。Smith（1971, 1976）曾发明了一套限制饲喂系统来改进此方法。直接法最大的优点是粪便中所有的营养素和饲料组分都被 鸡饲料养分消化率的测定 18动科3班第三组 组员：满建军、陈昭瑾、何延扬、刘敏敏、朱莉莉、陈静茹 摘要：饲料营养价值是指饲料本身所含营养成分及这些营养成分被动物利用后所产生的营养效果。评定饲料营养价值也就必须依据饲料中营养物质的含量和饲料中营养物质在动物体内的营养效果。本实验经过三日预饲期和三日正式测定期，严格记录鸡的采食量和排粪量并在实验室测定了饲料蛋白含量和鸡粪中蛋白含量，计算得到鸡的表观消化率和饲料中蛋白质的消化率，以此定量评价饲料的营养价值。 关键词：消化试验蛋白质消化率鸡 一.实验原理 动物食入的某养分减去粪便中排除的养分即可称为消化养分。计算某养分的消化率是指饲料中某养分的可消化养分占饲料中该养分总量的百分率。 二.实验仪器 普通天平（载量500g，感量0.01g）、分析天平（感量0.0001g）、台秤（5kg，感量0.1g）、烘箱、铝制饭盒、镊子、凯式定氮仪、研钵、刮刀、样品袋 三.实验药品 10%硫酸、2%硼酸、4%氢氧化钠、硫酸铜、硫酸钾 三.实验方法步骤 1.鸡的选择与饲养管理 试验用鸡必须健康、营养状况良好，品种、年龄、性别一致，体重相近，并已按免疫程序进行了正常的免疫接种。 鸡舍应符合卫生防疫要求，鸡舍温度在15℃~27℃，除喂料与清扫粪便依据试验设计的要求照办，其余管理措施应按常规操作规程进行，每日给予试验鸡充足清洁的饮水任其自由饮水。 2.饲料的准备 用于测试的饲料要一次备齐，放在干燥干净的地方。 3.测试程序 ○1预饲期 目的：让试验鸡适应试验饲料、规程和环境，排空消化道原有的内容物，掌握动物的排粪规律，了解采食量。 预饲期为三天，在预饲期间严格按照正式期的喂料时间进行。将选好的试验鸡饲养在代谢试验笼内，饲喂准备好的测定饲料，由于鸡的消化道较短，食入的饲料残渣在24h内即可排净，且鸡适应新饲料约需要48h。此外，在预饲期间，要摸清试验鸡采食和排粪尿规律，确定每日排泄物收集分界点与每次饲喂量，在 动物蛋白质的胃蛋白酶消化率（体外消化） 一、适用范围： 本方法适用于动物性原料品质的判定。 二、原理： 用脱脂的样本在一个热的胃蛋白酶溶液中，稳定地不断搅拌约16小时，予以消化。测定它的蛋白质含量。这种方法不能用于植物蛋白质饲料原料或混合饲料，因为，它们所含复杂的碳水化合物是不能被胃蛋白酶消化的。将溶解了的蛋白质全部作为可消化的，并用其对粗蛋白质的百分率来表示。 三、设备： 1、恒温水浴振荡器：45±2℃。 2、测定粗蛋白质的全套设备。 3、过滤装置。 4、索氏脂肪浸提器。 四、试剂： 除测定粗蛋白质用的试剂外，尚需以下试剂： 1、%胃蛋白酶溶液的配制：先稀释盐酸到1L。在使用前，现配%胃蛋白酶溶液。 2、所有胃蛋白酶应具有1：3000的活性。 3、加热稀盐酸至42—45℃，然后加入胃蛋白酶2g,轻轻地搅动，使其溶解（此时不要加热！）。即得在L盐酸中的%胃蛋白酶溶液。 五、测定步骤： 1、准确称取1g脱脂试样，放入300ml碘量瓶内，加入经过预热（42—45℃）的%胃蛋白酶溶液150ml，盖好塞子，在45℃下边搅拌边消化16小时，消化后用滤纸过滤，然后用温水洗净滤纸上的不消化物。将不消化物连同滤纸转入消化管中，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定不消化物中的粗蛋白质含量。 2、另取1份脱脂分析试样，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定其粗蛋白质含量。然后，根据消化的和不消化的粗蛋白质含量计算出试样的胃蛋白酶消化率。 六、测定结果计算与分析： 1、计算： 动物蛋白质胃蛋白酶消化率（%）= A-B ×100 A 式中：A—试样中粗蛋白质的含量（%）。 B—试样中的不消化物粗蛋白质的含量（%）。 饲料中蛋白质的消化吸 动物饲料中蛋白质的含量常以粗蛋白的形式表述，然而，粗蛋白的分析值并不能代表饲料中有效的蛋白质含量。如果饲料中粗蛋白含量高，但其蛋白质的有效利用率较低，未被消化吸收的蛋白积累过多，可能会引发肠道健康问题。 影响饲料蛋白质消化吸收的因素有很多： 1、动物因素 动物的个体差异、年龄阶段、不同品种等，对饲料中蛋白质的消化能力都会有影响。 2、饲粮因素 饲料中蛋白质的种类、纤维水平、酶抑制因子也会影响动物的蛋白消化率。如羽毛粉的蛋白含量高达80%，但其中仅有25%的蛋白可消化，因为羽毛粉中含量较大的角蛋白不易被消化利用；纤维物质能加速蛋白质在消化道排空，阻碍其消化，所以高纤维日粮饲料中蛋白消化率较低；一些农副产品中含有蛋白酶抑制因子，如生大豆中含有胰蛋白酶抑制因子、生马铃薯中含有的糜蛋白酶抑制因子能抑制蛋白酶活性，降低蛋白质的消化率。 3、加工因素 饲料加工生产过程中，粉碎、热处理、发酵、降解等程序可能影响蛋白质的理化性质，降低可消化吸收的蛋白含量。如粉碎不完全，蛋白酶与饲料作用的表面积小，可利用的蛋白质不能被充分水解，影响其吸收。 动物摄入的蛋白质经过消化以后，以小肽和氨基酸形式在小肠吸收，未能被消化分解的蛋白质会进入大肠被有害微生物分解利用，引起肠道微生物紊乱诱发腹泻，而通过有害微生物的发酵作用产生的大量有害物质如胺类、NH3等会被机体吸收，再通过肝脏的处理转化排出，使得原本用来维持机体生长和健康的能量被这个生理过程消耗，降低了蛋白质的营养质量。另外，由于未消化蛋白质带来 的环境污染问题也日益突出，因此，如何提供动物适宜的营养，提高消化率，最大程度地降低未消化蛋白进入后肠道应是动物营养研究的新方向。 因此，笔者认为可以从以下两个方面解决饲料中蛋白质的消化吸收问题： 1、适当降低蛋白浓度，配比平衡 随着理想氨基酸模式的研究推广，动物饲料配方中粗蛋白的含量已不能完全彰显配方的营养价值，很多厂家推出的低蛋白日粮逐渐被用户认可并得到良好的反响。低蛋白日粮虽然从表面看粗蛋白含量有所下降，但其中的可消化蛋白含量、氨基酸配比较之以前更为合理，而蛋白质与其他营养物质的含量也应遵循不同动物的生长需要合理配比。研究认为，在中低蛋白日粮中合理配比氨基酸和能量等，可以提高蛋白质利用率，降低饲料成本，减少污染物排放。 2、提高消化道前段蛋白质的消化率 提高动物对蛋白质消化率的主要手段除了适量，最重要的是质优，而质优则意味着价高，因此养殖低成本与饲料配方高品质的矛盾长期存在。于是，非常规、低品质原料的优化处理被提上日程，即在动物对营养物质的消化吸收过程中增加体外预消化过程，降解抗营养因子、大分子物质、提高原料消化性的同时赋予功能性，一举多得。另外，体外消化的效率要远远高于动物体内消化，对于幼龄动物、应激期动物作用更为显著。目前，饲料中应用的酶解蛋白、小肽类、生物发酵类原料都属于预消化原料的范畴，为饲料工业的可持续发展提供了新思路。 目的：建立胃蛋白酶的质量标准，确保产品质量。 适用范围：胃蛋白酶的质量检验。 责任者：QC按本标准进行检验。 内容 胃蛋白酶 Weidanbaimei Pepsin 本品系自猪、羊或牛的胃黏膜中提取制得的胃蛋白酶，按干燥品计算，每1g中含胃蛋白酶活力不得少于3800单位。 [性状] 本品为白色至淡黄色的粉末；无霉败臭；有引湿性；水溶液显酸性反应。 [鉴别] 取本品的水溶液，加5%鞣酸或25%氯化钡溶液，即生成沉淀。 [检查] 干燥失重取本品，在100℃干燥4小时，减失重量不得过5.0%（附录VIII L）。 微生物限度取本品，依法检查（附录XI J）。每1g供试品中细菌数不得过5000个，霉菌和酵母菌数不得过100个，并不得检出大肠埃希菌；每10g供试品中不得检出沙门菌。[效价测定] 对照品溶液制备精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液（取1 mol/L盐酸溶液65ml，加水至1000ml）溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液。 供试品溶液制备取本品适量，精密称定，加上述盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2～0.4单位的溶液。 测定法 取试管6支，其中3支各精密加入对照品溶液1ml，另3支各精密加入供试品溶液1ml，置37℃±0.5℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟，立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，取续滤液备用。另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照紫外-可见 胃蛋白酶工艺设计、产品检验方法、产品质量标准 09生物工程2班0902012041王照福 摘要：胃蛋白酶（英文名称：Pepsin）是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞（gastricchiefcell）所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。胃蛋白酶的前体被称为胃蛋白酶原。胃腺主细胞分泌的蛋白酶。初分泌时为无活性的胃蛋白酶原，在胃酸或已激活的胃蛋白酶的作用下转变为具活性的胃蛋白酶。在适宜环境下(pH约为2)可将蛋白质分解为和胨，很少产生小分子肽或氨基酸。自猪、牛、羊等胃粘膜提取的胃蛋白酶用作助消化药。常与稀盐酸同时用于幼畜消化不良性腹泻和慢性萎缩性胃炎。本文论述胃蛋白酶工艺设计、产品检验方法、产品质量标准。 关键词：胃蛋白酶、胃蛋白酶工艺设计、工艺设计、产品检验方法 胃蛋白酶工艺设计 胃蛋白酶(pepsin)属于天冬氨酸蛋白水解酶类，是胃消化蛋白水解酶，猪胃蛋白酶的分子量为31～36kD，其前体是猪胃蛋白酶原[1]。不同动物来源的胃蛋白酶含量多少主要依动物的食性而改变：草食性动物＞肉食和杂食性动物，最低是反刍类动物[2]。我国是生猪生产大国，生猪屠宰量占世界第一位，猪胃原料极为丰富，但以猪胃为原料，提取高附加值的猪胃蛋白酶的生产技术还相对落后。目前我国对猪胃蛋白酶的提取研究较少，提取方法主要应用酸法浸提和碱性缓冲溶液浸提，应用到生产中的主要是酸法浸提，但现有工艺参数提取的猪胃蛋白酶活力较低，经乙醚脱脂、浓缩干燥后酶活力仅为1948.5U/g[3]。国外对猪胃蛋白酶的提取研究较早，将酸法浸提得到的粗提液通过有机溶剂和盐析沉淀后得到了商业结晶胃蛋白酶[ 4 ]，但此工艺复杂，耗时长。利用传统的酸法、碱法工艺生产胃蛋白酶，生产周期长、生产工艺参数不确定，得到的猪胃蛋白酶活力低且不稳定。张丽萍，王莹，崔素萍在单因素试验的基础上，应用二次回归正交旋转组合设计，以猪胃蛋白酶活力为指标，建立猪胃蛋白酶活力与盐酸浸提液量、盐酸浓度、提取温度、浸提时间等因素间的数学模型。结果：回归模型较好的反应了猪胃蛋白酶活力与盐酸浸提液量、盐酸浓度、提取温度、浸提时间的关系；酸法提取工艺最佳条件为：浸提液量6.2ml、盐酸浓度1.6%、温度45℃、浸提时间59.9min，提取的猪胃蛋白酶粗酶液活力可达4751.0U/g。 胃蛋白酶活力检验方法及产品质量标准 胃蛋白酶系自健康的猪、羊或牛的胃黏膜中提取的，为白色或淡黄色的粉末，无霉败臭，有引湿性，易溶于水，在50℃～52℃活力最大。在我厂主要用于培养基(肉肝胃酶消化汤) 收稿日期:2001-02-13 《淡水渔业》2001年第31卷第3期 草鱼对九种饲料的干物质、蛋白质和脂肪的表观消化率 罗 莉 林仕梅 叶元土 (西南农业大学水产系,重庆400716) 摘要 本试验采用外源指示剂(C r2O 3),测定了草鱼种对玉米、麦麸、次粉、米糠、标粉、小麦、大麦、玉米糟和稻谷九种能量饲料的干物质、粗蛋白和粗脂肪的表观消化率。试验结果表明:草鱼对九种能量饲料的干物质表观消化率大小顺序为:小麦(88.17%)>标粉(79.39%)>玉米(77.57%)>麦麸(62.67%)>玉米糟(62.61%)>次粉(61.64%)>大麦(59.97%)>稻谷(51.21%)>米糠(47.41%);粗蛋白表观消化率大小顺序为:小麦(87.06%)>米糠(76.36%)>麦麸(73.20%)>次粉(71.53%)>玉米糟(70.99%)>标粉(67.03%)>玉米(64.543%)>稻谷(64.33%)>大麦(59.36%);粗脂肪表观消化率大小顺序为:小麦(82.49%)>玉米糟(78.32%)>标粉(75.22%)>玉米(73.09%)>稻谷(58.99%)>次粉(53.22%)>麦麸(52.42%)>大麦(50.09%)。 关键词 草鱼 饲料原料 蛋白质 脂肪 消化率 消化率是指被动物消化吸收的养分占食入养分的百分率。无论对饲料原料,还是全价配合饲料,消化率都是评定其营养价值高低的重要参数之一。 在水产养殖业大力发展,和作为我国主要淡水经济鱼类的草鱼,其市场售价日益下降的今天,配制能满足草鱼需要的营养平衡饲料,并尽可能提高配合饲料的可消化性、可利用性,以降低饲料系数和草鱼养殖饲料成本,这便成了众多营养研究者、饲料生产者和养殖户共同关心的问题。然而,配制营养平衡的饲料的一个重要前提是要了解饲料原料的消化率。基于此,本试验测定了草鱼对九种饲料原料干物质,蛋白质和脂肪的表观消化率,希望能为草鱼饲料营养价值的评定,以及更合理地设计草鱼饲料配方提供一部分依据。1 材料和方法1.1 试验鱼 试验草鱼由本系试验渔场提供,体重为150～200g ,平均体重180±18g 1.2 试验用箱与试验用水 试验在20个循环流水的圆锥型玻璃钢材料水 族缸中进行。每个缸容积为0.25m 3(见图1),水源为曝气去氯后的自来水,每一水族缸配有一充气头充氧,每天换水量1/5。养殖用水每隔0.5小时循环一次,用80目筛网过滤去除饲料、粪便及脱落鳞片等残渣后,经沉淀池沉淀,再用生物膜去除氨氮。试验期间水质保持在溶解氧6mg /L 以上,pH6.5左右,水温23℃±1 ℃。 图1 单个养殖箱示意图 1.3 试验饲料的配制 试验饲料由70%的基础饲料和30%的被测饲料原料组成(见表1)。基础饲料由鱼粉、豆粕、菜粕、次粉和a -淀粉组成,其配方和营养成分见 动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定 Hessen was revised in January 2021 动物性蛋白质饲料 胃蛋白酶消化率的测定过滤法 参考标准：GB/T 17811-2008 一、适用范围 二、实验原理 已脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定),在恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化16小时,过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。 三、实验用品 三、实验内容 照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤纸后,用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次,并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸(用滤纸将残渣包裹好),无损地移入100烧杯中并置于105℃烘箱内烘干。 5 粗蛋白质 的测定将上述已烘干的滤纸包无损地移入 凯氏烧瓶中，按《FOSS 定氮仪测 定饲料中粗蛋白含量的方法》测定 残渣粗蛋白质的质量分数（ω 2 ）。同时，称取脱脂风干的样品 0.3 g（精确至0.0002 g），直接 按《FOSS 定氮仪测定饲料中粗蛋 白含量的方法》测定脱脂未酶解的 样品中粗蛋白质的质量分数（ω 1 ）。 测定残渣粗蛋白质时应从每个 样品残渣粗蛋白质中减去酶液 的空白值。 6 计算X- 试样胃蛋白酶消化率，以质 量分数计（%）； ω 1 - 脱脂未酶解的样品中粗蛋 白质的质量分数（%）； ω 2 - 脱脂酶解后的残渣中粗蛋 白质的质量分数（%）。 重复性：1每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对≤6%； 2 每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其 粗蛋质含量允许相对偏差 >25% 1％ 10% 实验一 鱼类饲料的总消化率及其 蛋白质消化率的测定 一、 实验目的 掌握用外源指示剂Cr 2O 3间接测量鱼、虾饲料消化率的基本方法。 二、原 理 与饲料均匀混合的外源指示剂Cr 2O 3，完全不被动物吸收而随粪便排出。根据指示剂及蛋白质(或其他营养成分)在食物及粪便中的含量变化，饲料的总消化率和蛋白质的消化率由如下两式给出： 饲料总消化率：D(％)=[1－'B B ] ×100 蛋白质消化率：D(％)=[1－ 'A A ×'B B ] ×100 A 、A’分别为饲料粪便中的粗蛋白含量； B 、B’分别为饲料和粪便中的Cr 2O 3 含量 三、实验材料 1．试验鱼 可根据实际情况选择实验鱼的种类。但用易驯化、习惯实验环境的鱼类(如金鱼、锦鲤、罗非鱼等)较好。体重20～25g ，每试验组10尾。 2．水族箱 每试验组配50～1001容积的水族箱2个，一个作投饲槽、一个作排泄槽。 3. 充氧设备 每水族箱配微型充气泵一台 4. 集粪工具 每组配虹吸管1支、漏斗2个及玻璃纤维若干 5. 小捞网1个 6. 100目分样筛1个 7. 100ml 凯式烧瓶2只 8. 100ml 容量瓶1个，10ml 容量瓶10个 9．刻度移液管l 套。 10．凯氏定氮装置1套。 11．分光光度计一台。 一、 试验饲料的制备 试验饲料的组成可用第二章表2—7的典型配方。但其中的酪蛋白和明胶用优质鱼粉代为简便起见，也可直接使用市售鱼用饲料，经重新粉碎后使用。 全部试验饲料要统—制作。所有干性原料要经粉碎，并通过100目筛。化学纯Cr 2O 3，也要经过100目筛。按每千克干饲料的1％准确称取Cr 2O 3，与少量的干性原料混合，分四级逐步扩大到全部干性饲料组分，充分混合均匀，混合操作可在大白搪瓷盆进行。因Cr 2O 3为绿色，所以从盆壁上是否留有团状绿色痕迹来判断混合的均匀程度，若有必要，可进行均匀度检查，变异系数要求小于5%。混合均匀程度决定试验的成败。平均每组制作200g 饲料。 二、 投饲与粪便采集 食物蛋白质消化率 食物蛋白质消化率(digestibility)是反映食物蛋白质在消化道内被分解和吸收的程度的一项指标；是指在消化道内被吸收的蛋白质占摄入蛋白质的百分数；是评价食物蛋白质营养价值的生物学方法之一。一般采用动物或人体实验测定，根据是否考虑内源粪代谢氮因素，可分为表观消化率和真消化率两种方法。(一)蛋白质(N)表观消化率[apparent protein(N)digestibilitvl即不计内源粪氮的蛋白质消化率。通常以动物或人体为实验对象，在实验期内，测定实验对象摄人的食物氮(摄入氮)和从粪便中排出的氮(粪氮)，然后按下式计算： 蛋白质(N)表观消化率(％)=(I-F)／I×100 式中l 代表摄入氮，F 代表粪氮 (二)蛋白质(N)真消化率[true protein(N)digestibility] 考虑粪代谢时的消化率。粪中排出的氮实际上有两个来源。一是来自未被消化吸收的食物蛋白质；二是来自脱落的肠粘膜细胞以及肠道细菌等所含的氮。通常以动物或人体为实验对象，首先设置无氮膳食期，即在实验期内给予无氮膳食，并收集无氮膳食期内的粪便，测定氮含量，无氮膳食期内的粪氮即粪代谢氮。成人24 小时内粪代谢氮一般为0.9～1.2g；然后再设置被测食物蛋白质实验期，实验期内摄取被测食物，再分别测定摄人氮和粪氮。从被测食物蛋白质实验期的粪氮中减去无氮膳食期的粪代谢氮，才是摄人食物蛋白质中真正未被消化吸收的部分，故称蛋白质(N)真消化率。计算公式如下： 蛋白质(N)真消化率(％)=I-(F-Fk)／I×100 式中I 代表摄入氮，F 代表粪氮，Fk 代表粪代谢氮由于粪代谢氮测定十分繁琐，且难以准确测定，故在实际工作中常不考虑粪代谢氮，特别是当膳食中的膳食纤维含量很少时，可不必计算Fk；当膳食中含有多量膳食纤维时，成年男子的Fk 值，可按每天12mgN／kg 体重计算。 食物蛋白质消化率受到蛋白质性质、膳食纤维、多酚类物质和酶反应等因素影响。一般来说，动物性食物的消化率高于植物性食物。如鸡蛋、牛奶蛋白质的消化率分别为97％、95％，而玉米和大米蛋白质的消化率分别为85％和88％。 一：苏玉永,徐楚鸿,吕永宁.多酶微片胶囊中胃蛋白酶的活力测定[J].2004.24(4):214-125 2.1.1对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液(取1 moL·L-1盐酸溶液65 mL,加水至1000 mL,摇匀,即得)制成每1 mL中含0.5 mg的溶液,摇匀,备用。 2.1.2供试品溶液的制备取本品5粒,将内容物中的5片粉红色的胃蛋白酶糖衣片置研钵中,研细。加上述盐酸溶液少许,研磨均匀,移至100 mL量瓶中。加上述盐酸溶液至刻度,摇匀。精密量取适量,用上述盐酸溶液制成每1 mL中 约含0.2～0.4单位的溶液。 2.1.3测定法取试管6支,其中3支各精密加入对照品溶液1 mL,另3支各精密加入供试品溶液 1 mL,置(37±0.5)℃水浴中,保温 5 min。精密加入预热至(37±0.5)℃的血红蛋白试液5 mL,摇匀,并准确计时,在(37±0.5)℃水浴中反应10 min。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5 mL,摇匀,滤过。取续滤液备用。另取试管2支,各精密加入血红蛋白试液5 mL。置(37±0.5)℃水浴中保温10 min,再精密 加入5%三氯醋酸溶液5 mL。其中1支加供试品溶液1 mL,另1支加盐酸溶液1 mL,摇匀,滤过。取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照分光光度法,在275 nm波长处测定吸收度,见图1,图2。算出平均值A s和A,按下式计算: 式中,As为对照品的平均吸收度;A为供试品的平均吸收度;Ws为对照品溶液每1 mL中含酪氨酸对照品的量μg;n为供试品稀释倍数。在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmoL酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力单位。 2.2干扰试验按照处方配制无胃蛋白酶的空白样品,取适量,按2.1项下方法操作,结果在275 nm波长处几乎无吸收,说明处方中其他组分对胃蛋白酶活力的测定无干扰。 2.3线性试验精密称取经105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品85 mg,加上述盐酸溶液溶解并稀释至100 mL。再精密量取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL各3份分别置试管中,依次加上述盐酸溶液至1.0 mL,按2.1项下方法操作,测得吸收度A值分别为:0.1383,0.2536,0.3757,0.4905,0.6111, 线性回归方程为:Y=0.5912X+0.01909(r=0.9999),线性范围为:0.17 ～0.85 g·L-1,说明本方法具有良好的线性关系。 2.4回收试验按处方制备高、中、低各3份共9份模拟样品,按2.1项下方法 分别测定回收率,平均回收率为101.6%,结果见表1 影响饲料消化吸收率有哪些因素 饲料营养成分的消化，由于养殖动物的种类、品种、年龄而不同，即使同一种动物也由于饲料的特性及组成而不同，了解和运用这些知识，对于为养殖动物创造良好消化条件，提高饲料的可消化性，从而提高养殖动物产量是很有益的。 1 饲料中蛋白质含量的影响 饲料中蛋白质含量是否会影响蛋白质的消化吸收率。由于在研究中随着蛋白质含量的变化，其他饲料成分也相应改变，因而消化吸收率的变化，是由于饲料成分的影响，还是由于蛋白质含量的影响，这给判断带来一定的困难。赤筑（1956）用酪蛋白+淀粉+盐类的混合饲料投喂稚鲤，观察到蛋白质含量在10%时消化吸收率低，而蛋白质含量在20％—40%时，消化吸收率没有大的差别。他认为蛋白质含量低时，消化吸收率也低的原因，可能是受到内因性N成分的影响；他在另一研究中发现，蛋白质含量低时，表观消化吸收率也小，但如把内因性蛋白态N量以0.04毫克/克体重加以修正时，则与真消化吸收率大体一致，因而认为在低蛋白质含量所看到的表观消化率的降低，不是由于添加淀粉所成绩卓著起的，而是由于内因性蛋白态N所致。 麦康森研究对虾对氨基酸的消化吸收率，发现氨基酸的消化吸收率在一定程度上与其含量存在正相关的关系。 2 水温的影响 王克行（1984）研究指出，在20-32℃水温范围内，仔虾的生长速度随着水温的上升而加快，水温对生长速度的影响是否通过提高消化吸收率来体现?谢宝华等（1983）报道，配合饵料在不同水温25℃和30℃条件下，其消化速度和蛋白质消化率均无明显不同。麦康森等（1988）用51 Cr2O3作指标物质掺入小杂 鱼、虾中进行实验，结果表明，在20-30℃范围内，消化吸收率在85.90％—88.67%之间，可见水温并不明显影响蛋白质的消化吸收率。 3 粉碎粒度的影响 用18目、40目、60目、80目、100目过筛的花生饼粉喂虾，测其消化吸收率。结果表明，用18目过筛的花生饼粉的蛋白质消化吸收率降至80%以下，这显然是颗粒太粗，消化液难以渗入所致；40目至100目过筛的花生饼粉，其蛋白质消化吸收率没有明显差异，基本在同一水平上。稻叶、获野用体重10克和100克的虹鳟研究了白色鱼粉的颗粒大小和消化率的关系，看到颗粒大，消化率差，颗粒越小，消化越好，如果太细了也就没有差别。 4 不同干燥方法的影响 用60℃烘干、晒干和远红外烘干三种方法处理的花生饼粉喂虾，蛋白质消化率没有明显差异，在91%左右。60℃烘干者较烘干者略高；用100℃烘干者，其消化率降至88.9%。此外，还发现经过105℃烘干的花生饼粉，对虾厌食，这可能是经高温处理，使蛋白质变性，导致结构改变，不易消化所致。远红外烘干的花生饼，其氨基酸的消化率与60℃烘干者相比，苏氨酸和缬氨酸略有上升，其余氨基酸消化率差别不大。长时间加热，会使蛋白质变性，产生不受消化酶作用的产物。这是因为加热处理使色氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸和糖之间产生褐变反应，此褐变反应产物消化酶难以使之分解，故蛋白质的消化吸收率降低。 5 消化时间的影响 蛋白质在消化道中被消化的程度取决于受消化酶作用的时 蛋白质消化率 蛋白质消化率是指一种食物蛋白质可被消化酶分解的程度。蛋白质消化率越高，被人体吸收利用的可能性越大，营养价值也越高。蛋白质消化率的计算方法：蛋白质消化率=蛋白质中被消化吸收的氮的数量/食物中含氮总量*100% 比如，在日常生活中，大豆类产品，如豆腐和豆浆中的蛋白质消化率都很高 2012年营养师报考条件最新更新https://www.360docs.net/doc/4218704135.html, 世纪合众营养学院提供营养保健师报考条件点击了解营养保健师报考条件400-66.. 定氮仪/凯氏定氮仪https://www.360docs.net/doc/4218704135.html, 上海勇规自主研发生产销售凯氏定氮仪,不外排SO2,为企业量身打造更经济适用! 百度推广食物蛋白质消化率(digestibility)是反映食物蛋白质在消化道内被分解和吸收的程度的一项指标;是指在消化道内被吸收的蛋白质占摄入蛋白质的百分数;是评价食物蛋白质营养价值的生物学方法之一.一般采用动物或人体实验测定,根据是否考虑内源粪代谢氮因素,可分为表观消化率和真消化率两种方法. 1蛋白质表观消化率[apparent protein(N) digestibility] 即不计内源粪的蛋白质消化率,通常以动物或人体为实验对象,在实验期内,测定实验对象摄入的食物氮和从粪便中排出的氮,然后计算:蛋白质表观消化率(%)=(I-F)/I*100 式中I代表摄入氮,F代表粪氮 2蛋白质真消化率[true protein digestibility] 考虑粪代谢时的消化率,粪中排出的氮实际上有两个来源.一是来自未被消化吸收的食物蛋白质;二是来自脱落的肠粘膜细胞以及肠道细菌等所含的氮.通常以动物或人体为实验对象,首先设置无氮膳食期,即在实验期内给予无氮膳食.成人24小时内粪代谢氮一般为0.9-1.2g;然后再设置被测食物蛋白质实验期,实验期内摄取被测食物,再分别测定摄入氮和粪氮.从被测食物蛋白质实验期的粪氮中减去无氮膳食期的粪代谢氮,才是摄入氮和粪氮.从被测食物蛋白质实验期的粪氮中减去无氮膳食期的粪代谢氮,才是摄入食物蛋白质中真正未被消 米糠常规营养成分表观消化率及氨基酸回肠末端消化率的测定 ＜作者＞田科雄；高凤仙；贺建华；丁文革；易雪静 ＜首作者单位＞湖南农业大学动物科技学院，湖南长沙410128 ＜信息类型＞刊 ＜文献来源＞饲料工业 ＜出版时间＞2003，（5）：16~17 ＜关键词＞饲料质量控制；生物学评价；饲料产品；米糠；营养成分；表观消化率；氨基酸回肠末端消化率 ＜正文＞ 米糠是稻谷加工的主要副产品，由稻谷的果皮、种皮、外胚层、糊粉层、胚及少量胚乳组成。我国年产稻谷1.7亿吨左右，稻谷的出糠率在6 ％～7 ％之间，因此，我国的米糠饲料资源在1 100万吨以上。米糠脂肪含量高(16 ％～18 ％)，且多为不饱和脂肪酸，是动物必需脂肪酸的良好来源。粗蛋白质含量多在13 ％～15 ％之间，据此计算，我国每年可提供米糠蛋白质150万吨，而且一般认为其蛋白质的品质优于谷物饲料。饲料蛋白质的营养价值通常用其氨基酸的生物学效价来表示。但是，目前国内尚未见有关米糠的猪回肠末端氨基酸消化率的报道。本次试验用全收粪法测定米糠的常规营养成分表观消化率，用“T”型瘘管收粪法测定米糠的氨基酸表观消化率。为畜牧生产实践提供米糠营养价值的基础数据，以促进其合理利用。 1 材料与方法 1．1 试验材料 1．1．1 待测饲料 试验用米糠采用长沙市某大米加工厂新生产的，为防止米糠在试验期间氧化和霉变，在米糠中加入0.1 ％的防霉剂和0.01 ％的抗氧化剂，并添加0.5 ％的三氧化二铬作指示剂，充分混合均匀备用。 1．1．2 试验动物 选体重为35 kg的去势的生长公猪8头，单独饲养于猪专用消化代谢笼中。 1．2 试验方法 采用全收粪法测定米糠概略养分表观消化率；采用“T”型瘘管法测定其氨基酸回肠末端表观消化率。 1．2．1 试验动物瘘管手术 待试猪适应一周后作瘘管手术，将T型瘘管安装在十二指肠距回肠瓣约10 cm的位置。手术前试验猪禁食48台h，禁水12 h。手术创口在腹中线稍左(避开尿道口)，纵向作一长约6 cm的切口，分离内外腹斜肌，剪开腹膜，顺肠管向后找到回盲瓣，在距回盲瓣约10 cm处的回肠段上，紧贴回肠韧带横向做一长约4 cm的切口，将瘘管凹型端插入肠管，绕圆管行小肠荷包缝合，然后将瘘管送回腹腔。在左侧腹部距后肢10 cm处做一切口，由此将圆管引出，用螺母固定，注意松紧适宜，切勿使肠管扭转。按常规腹腔外科手术，分层将腹膜、肌肉和皮肤缝合，术后一周内连续使用消炎药物。术后恢复lO d，开始预试，预试期试猪饲喂全价日粮。 1，2．2样品收集和处理 手术恢复期后进入预试期，预试期10 d，预试开始即进入饲料过渡，预试期的最后3 d全部饲喂米糠。正式试验期(全收粪法)5 d，每天每头猪饲喂米糠600～800 g，分两次饲喂，保证饮水供应。记录每天的排粪量，并按20％取粪样加入10 ％的硫酸(每100克8～10 ml)，放于55～65 ℃烘箱烘干，待全部粪样收集完后，烘干、回潮、称重、制样，该样品用于常规养分消化率的测定。 全收粪法结束后隔一天，再用指示剂法收集5 d回肠末端的食糜，每天分4次收集，每次收集30 min，收集的样品保存于—20 ℃冰柜中，待全部样品收集完后，取约600 g食糜样65 ℃下恒温干燥、回潮，制样用于回肠末端氨基酸消化率的分析和测定。 1．2．3 测定指标与方法 常规营养成分需测定的指标为水分、粗灰分、粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、无氮浸出物和总能。采用概略养分分析法进行，参照GB6482—6439—86的标准方法测定；饲料与粪样中铬含量按GBl3088—91方法测定；饲料和排泄物的总能用WZR—1型全自动氧弹式测热仪测定。 氨基酸分析需测定的指标为赖氨酸、天冬氨酸等16种常见氨基酸。采用酸水解法，样品先用6 N盐酸水解24 h(110 ℃)，然后采用HPLC法测定其氨基酸含量。 1．3 数据统计 常规养分的消化率按全收粪法的表观消化率计算公式，氨基酸消化率按日粮和粪便中铬的含量，依据以下公式计算：黄芪多糖对蛋鸡生产性能和饲料表观消化率的影响
第三章 鱼类营养学原理蛋白质营养影响蛋白质消化率因素.
胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒使用说明
12-消化率和利用率
鸡饲料养分消化率的测定 (1)
动物蛋白质的胃蛋白酶消化率 体外消化
饲料中蛋白质的消化吸收
胃蛋白酶质量标准
胃蛋白酶工艺设计、产品检验方法、产品质量标准
草鱼对九种饲料的干物质_蛋白质和脂肪的表观消化率_罗莉
动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定
实验一 鱼类饲料的总消化率及其
食物蛋白质消化率
胃蛋白酶
影响饲料消化吸收率有哪些因素
蛋白质消化率
米糠常规营养成分表观消化率及氨基酸回肠末端消化率的测定