第6章 无病毒苗木培育

植物无病毒苗的培育—方法
（三）微茎尖培养方法
茎尖
（shoot tip）
外
植
体
茎的顶端分生组织
（apical meristem）
顶端分生组织及其下方 1—3个幼叶原基构成
茎的最幼龄叶原基上方的 一部分，最大直径约 100um,最大长度约 250um
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1. 外植体的预处理 将带幼叶的茎芽叶片在75％酒精中浸蘸数秒钟
② 活跃生长的茎尖分生组织代谢活性很高，致使病毒无法复制。 ③ 若植物体内存在病毒钝化系统，它在分生组织中比在任何其它区
域都有更高的活性而钝化病毒，使分生组织不受浸染。 ④ 茎尖分生组织存在较高水平的内源生长素，可抑制病毒的增殖。
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（二）培养基
培养基： 一般以White、Morel和MS作为基本培
注意：剥离与接种尽量要快，以防茎尖变褐死亡。
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3. 培养条件
温度：22℃左右 光强：2000~3000Lx 光照时间：每天16h 。 微茎尖需数月培养才能成功。 茎尖培养的继代培养和生根
培养和一般器官的培养相同。
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由于在低温和 短日照下，茎尖有 可能进入休眠；所 以较高的温度和充 足的日照时间必须 保证。
养基，尤其是提高钾盐和铵盐的含量会有利于茎尖的 生长。
植物激素： 其种类与浓度对茎尖生长和发育具有
重要的作用。适当提高生长素(0.1~0.5 mg/L)与细胞 分裂素的浓度，避免使用易促进愈伤组织化的2，4-D， 宜换用稳定性较好的NAA或IBA，细胞分裂素可用Kt 或 BA。有时需添加活性炭。
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（四）影响微茎尖培养的因素 1．外植体大小
外植体越大，茎尖越易成活，分化率越高，产生再生 植株的机会越大，但脱毒效果越差；
外植体越小，茎尖越难成活，分化率越低，产生再生植 株的机会越小，但脱毒效果越好。
叶原基的存在与否也影响分生组织形成植株的能力， 一般认为，叶原基能向分生组织提供生长和分化所必需的生 长素和细胞分裂素。
特点：热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。例
如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。因此热处 理需与其他方法配合应用，才可获得良好的脱毒效果 。
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二、微茎尖培养脱毒
（一）茎尖培养脱毒原理
感染病毒植株的体内病毒的分布不均匀，病毒的数 量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感 染程度越低，生长点(分生组织约0.1~1.0mm区域)则几乎 不含或含病毒很少。
热处理又称温治疗法。
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（二）原理
是当植物组织处于高于正常温度的环境中 时，组织内部的病毒受热后部分或全部钝化， 不能生成或生成病毒很少，以致病毒含量不断 降低从而达到脱毒的目的 。
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（三）热处理方法
1. 温汤浸渍处理
适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
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2. 热空气处理
适用：对活跃生长的茎尖效果较好
方法：将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般
在35~40℃下处理几十分钟至数月。处理时间因植物而异， 如香石竹于38℃下处理两个月，其茎尖所含病毒即可被清除。 马铃薯在35℃下处理几个月才能获得无病毒苗。
由于病毒对植物造成如此严重的危害，所以世界各 国都积极开始重视这方面的研究。
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三、无病毒苗培育的意义
1. 去除病毒危害，提高作物品质与产量。采用生物、物理、 化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。而通过 组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提 高产量、质量。因此，到60至70年代在花卉、蔬菜和果树 等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染，有利于保护环境 栽培去病毒植物可减 少药剂的使用。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所 以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。
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植物组织内病毒含量随与茎尖距离加大而增加的原因
① 在植物体内，病毒易于通过微管系统移动，但分生组织中无此系 统；病毒在细胞间移动的另一个途径是通过胞间连丝，但它的速度 极慢，难以赶上活跃生长的茎尖。
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第二节 无病毒苗培育的方法 一、热处理脱毒 二、微茎尖培养脱毒 三、其他途径脱毒
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一、热处理脱毒
（一）发现：
1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的 甘蔗(现证明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保 持30min，甘蔗就可去病生长良好。以后此方法被 广泛用于防治许多植物的病毒病。
通常危害植物的病毒有几百种，并且随着栽培时间的延 长，危害程度越来越严重，种类越来越多。尤其是靠无性繁殖 的作物，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累， 危害日趋严重。而以种子进行繁殖的种类，可随着世代的交替 而去除病毒，病毒只能危害一个世代。
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二、病毒在植物上的危害
病毒的危害给植物生产带来的损失很大，如草莓病 毒的危害，使草莓产量严重降低，品质大大退化。葡萄 扇叶病毒使葡萄减产10％~18％，花卉病毒的危害一般 会影响花卉的观赏价值，其表现是花少而小，产生畸形、 变色等。
（叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花）或用0.1％次 氯酸钠表面消毒l0min（叶片包被松散的芽，如香石 竹，蒜和马铃薯等）。
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2. 茎尖的剥离与接种 在解剖镜下，将灭菌的外植体放在一个衬有无
菌湿滤纸的培养皿内（防止茎尖变干 ），用解剖 针将叶片和叶原基剥掉，当一个闪亮半圆球的顶端 分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组 织切下来，可带1~2枚幼叶，然后将其接种到培养 基上。
第五章 植物无病毒苗的培育
本章内容： 第一节 无病毒苗培育的意义 第二节 培育无病毒苗木的方法 第三节 无病毒苗木的鉴定 第四节 无病毒植物的利用
植物无病毒苗的培育
第一节 无病毒苗培育的意义 一、无病毒苗木的概念
是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在 植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。