无病毒苗木的培育

（2） 茎尖的剥离与接种
在解剖镜下，将灭菌的外植体放在一个衬有无 菌湿滤纸的培养皿内（防止茎尖变干 ），用解剖 针将叶片和叶原基剥掉，当一个闪亮半圆球的顶端 分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组 织切下来(0.2~0.5mm)，可带1~2枚幼叶，然后将 其接种到培养基上。
注意：剥离与接种尽量要快，以防茎尖变褐死亡。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以 是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。
植物组织内病毒含量随与茎尖距离加大而增加的原因
① 在植物体内，病毒易于通过微管系统移动，但分生 组织中无此系统；病毒在细胞间移动的另一个途径 是通过胞间连丝，但它的速度极慢，难以赶上活跃 生长的茎尖。
② 活跃生长的茎尖分生组织代谢活性很高，致使病毒 无法复制。
（2） 热空气处理
适用：对活跃生长的茎尖效果较好
方法：将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般
在35~40℃下处理几十分钟至数月。处理时间因植物而异， 如香石竹于38℃下处理两个月，其茎尖所含病毒即可被清除。 马铃薯在35℃下处理几个月才能获得无病毒苗。
特点：热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。例
由于病毒对植物造成如此严童的危害，所以世界各 国都积极开始重视这方面的研究。
3、无病毒苗培育的意义
1. 去除病毒危害，提高作物品质与产量。采用生物、物理、 化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。而通过 组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提 高产量、质量。因此，到60至70年代在花卉、蔬菜和果树 等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染，有利于保护环境. 栽培去病毒植物可减 少药剂的使用。
（3）培养条件
温度：22℃左右 光强：2000~3000Lx 光照时间：每天16h 。 微茎尖需数月培养才能成功。 茎尖培养的继代培养和生根培
养和一般器官的培养相同。
由于在低温和短日 照下，茎尖有可能 进入休眠；所以较 高的温度和充足的 日照时间必须保证。
影响微茎尖培养的因素
（1） 外植体大小
（apical meristem）
茎的最幼龄叶原基上方的 一部分，最大直径约 100um,最大长度约
250um
（1） 外植体的预处理
将带幼叶的茎芽叶片在75％酒精中浸蘸数秒钟 （叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花）或用0．1％次 氯酸钠表面消毒l0min（叶片包被松散的芽，如香石 竹，蒜和马铃薯等）。
是当植物组织处于高于正常温度的环境中 时，组织内部的病毒受热后部分或全部钝化， 不能生成或生成病毒很少，以致病毒含量不断 降低从而达到脱毒的目的 。
热处理方法 （1） 温汤浸渍处理
适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
外植体越大，茎尖越易成活，分化率越高，产 生再生植株的机会越大，但脱毒效果越差；
外植体越小，茎尖越难成活，分化率越低，产 生再生植株的机会越小，但脱毒效果越好。
（2）培养条件
在茎尖培养中，较高的温度和充足的光照有利 于茎尖的培养。
脱毒技术在菠萝、香蕉、草莓、马铃薯、 菊花、香石竹、唐菖蒲、水仙、郁金香、 百合、大丽花、白鹤芋等主要园艺作物上 已成功应用。从根本上解决了植物的退化 问题。
一、 无病毒苗培育的意义 二、 培育无病毒苗木的方法 三、 无病毒苗木的鉴定
一、 无病毒苗培育的意义
1、无病毒苗木的概念
是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在 植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。
二、 无病毒苗培育的方法
1、热处理脱毒 2、微茎尖培养脱毒 3、其他途径脱毒
1、热处理脱毒
发现：
1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的 甘蔗(现证明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保 持30min，甘蔗就可去病生长良好。以后此方法被 广泛用于防治许多植物的病毒病。
热处理又称治疗法。
原理：
通常危害植物的病毒有几百种，并且随着栽培时间的延 长，危害程度越来越严重，种类越来越多。尤其是靠无性繁殖 的作物，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累， 危害日趋严重。而以种子进行繁殖的种类，可随着世代的交替 而去除病毒，病毒只能危害一个世代。
2、病毒在植物上的危害
病毒的危害给植物生产带来的损失很大，如草莓病 毒的危害，使草莓产量严重降低，品质大大退化。葡萄 扇叶病毒使葡萄减产10％~18％，花卉病毒的危害一般 会影响花卉的观赏价值，其表现是花少而小，产生畸形、 变色等。
重要的作用。适当提高生长素(0.1~0.5 mg/L)与细胞 分裂素的浓度，避免使用易促进愈伤组织化的2，4-D， 宜换用稳定性较好的NAA或IBA，细胞分裂素可用Kt 或 BA。有时需添加活性炭。
微茎尖培养方法
茎尖
顶端分生组织及其下方 1—3个幼叶原基构成
（shoot tip）
外
植
体
茎的顶端分生组织
第三章 组织培养技术
第六节 植物无病毒苗的培育
多数园艺植物，特别是无性繁殖植物，都 易受到病毒侵染（一种、一种以上）。
病毒侵染不一定都会造成植物死亡，甚至 不表现可见症状，但可传递给下一代，并 逐代积累，导致植物种性退化，使产量、 品质下降甚至死亡，造成生产上的巨大损 失。
应用组织培养技术获得无病毒植株是目前 防治作物病毒病最有效的方法和根本措施。
③ 若植物体内存在病毒钝化系统，它在分生组 织中比在任何其它区域都有更高的活性而钝化 病毒，使分生组织不受浸染。
④ 茎尖分生组织存在较高水平的内源生长素， 可抑制病毒的增殖。
培养基
培养基： 一般以White、Morel和MS作为基本培
养基，尤其是提高钾盐和铵盐的含量会有利于茎尖的 生长。
植物激素： 其种类与浓度对茎尖生长和发育具有
如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。因此热处 理需与其他方法配合应用，才可获得良好的脱毒效果 。
2、微茎尖培养脱毒
茎尖培养脱毒原理
感染病毒植株的体内病毒的分布不均匀，病毒的数量 随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染 程度越低，生长点(分生组织约0.1~1.0mm区域)则几乎不 含或含病毒很少。