实验一 细胞凝集反应与细胞膜的
细胞凝集反应实验报告 山东大学
科目细胞生物学实验题目细胞凝集反应细胞凝集反应【实验目的】1.了解细胞膜的表面结构；2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理；3.学习研究细胞凝集反应的方法。
【实验原理】1.凝集素凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖转移结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。
常用的为植物凝集素，通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。
在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。
凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞凝集。
凝集素引起的血细胞凝集，其细胞膜结构没有发生变化，与血液凝固中发生的复杂生物化学过程完全不同；另外，凝集素能与不同的糖蛋白特异结合，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，因此，Ponder提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。
人们利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定。
ABO血型鉴定主要用于临床输血，在皮肤、肾等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体；不孕症和新生儿溶血症病因的分析及亲子鉴定等。
另外，凝集素在临床疾病防治、机体生理活动调控以及生物工程等方面展示出了十分广阔的应用前景。
如：植物凝集素可抑制受精；芸豆凝集素可直接抑制HIV-1反转录酶的活性，减少HIV感染者的病毒载量；细胞膜表面糖复合物的糖链结构与肿瘤细胞增殖、侵染、转移等发展过程密切相关，凝集素芯片技术实现了对癌症的快速、高通量检测，有助于筛选出癌症相关的糖链标志物。
2.细胞凝集细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。
《细胞生物学实验》教学大纲
《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验课程编号：12030037课程类别：专业基础课/必修课学时/学分： 24/0.75开设学期：第四学期说明一、课程性质细胞生物学实验是生物科学和生物工程专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位。
通过实验，不仅使学生加深对细胞生物学理论知识的理解和认证，同时通过对细胞生命现象的观察和亲手操作，使学生获得有关细胞生命活动的感性知识，有效地提高理论课的教学效果，并使学生掌握细胞生物学实验的基本原理、方法和技能，培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事教学或科学研究打下坚实的基础。
二、教学目标通过细胞生物学实验，使学生们更加牢固地掌握细胞生物学基本知识和基本理论，对细胞的结构和功能有全面、真实的认识，使学生们掌握细胞生物学的基本实验方法和技能。
三、学时分配表序号实验项目实验时数实验类型内容与要求小计实验1细胞膜的渗透性及细胞凝集反应4设计性了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度，掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理实验2叶绿体的分离与荧光观察3验证性掌握荧光显微镜的原理和使用方法；观察叶绿体的自发荧光与次生荧光；通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法实验3植物细胞骨架的观察4验证性掌握光学显微镜观察植物细胞骨架的原理和方法实验4鸡血细胞的体外融合6综合性了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术实验5巨噬细胞吞噬现象的观察7综合性通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的活动观察，加深理解细胞吞噬作用的过程和意义；掌握小白鼠腹腔注射给药方法和颈椎脱臼处死法合计24四、实验方法与要求建议本课程采用传统的实验教学方法，2人一组操作，结合多媒体、小组讨论与集体讨论、实验设计、教学录像、细胞生物学小知识和小技巧介绍等多种教学手段，帮助学生通过本课程的学习全面地掌握细胞生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，以提高学生从事教学和科学研究的综合素质。
细胞凝集胞实验报告
实验1.血细胞凝集Lab1.Blood cell agglutination摘要：细胞凝集指的是细胞与细胞之间通过某种凝集素的作用而相互粘连在一起的现象，最终形成大的细胞团块。
而凝集素由于可使细胞凝集而成为一种重要实验和临床试剂。
本次实验就是通过进行对兔血细胞的凝集操作，观察细胞凝集现象，并掌握凝集素促进细胞凝集的实验原理和操作方法。
关键词：细胞凝集、凝集素前言：凝集素是一类能专一识别糖并与之非共价可逆结合的非酶非抗体蛋白质。
凝集素是指从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红细胞，故名凝集素。
凝集素按来源可分为植物凝集素、动物凝集素和微生物凝集素三大类;植物凝集素分为7个家族：豆科凝集素、几丁质结合凝集素、单子叶甘露糖结合凝集素、2型核糖体失活蛋白、木菠萝素家族、葫芦科韧皮部凝集素和苋科凝集素；动物凝集素按分子结构分为C-型凝集素、S-型凝集素、P-型凝集素、I-型凝集素等。
在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出的寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。
凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞凝集。
其反应机制如下图：凝集素在生化、医学等方面有广泛的应用：1.凝集素在实验室中经常被用来分离、纯化蛋白质植物凝集素的功能是结合细胞表面上的糖蛋白，动物凝集素的功能包括结合可溶性的细胞外或细胞内糖蛋白。
凝集素在实验室中经常用来分离、纯化糖蛋白。
这是由于植物凝集素能专一性地、非共价地可逆结合糖蛋白中不同类型的糖链结构，所以首先分别用凝集素亲和层析方法分离富集正常细胞和癌细胞的细胞裂解液中的糖蛋白，从细胞裂解物中高通量的分离出N-糖苷键型糖蛋白之后，再利用双向凝胶电泳技术对于被凝集素吸附的糖蛋白进行分离，最后利用质谱技术进行鉴定。
2.凝集素介导细胞与细胞、细胞与基质的粘附选凝素是一类Ca2+依赖的、能与特异糖基识别并结合的细胞粘附分子，主要介导白细胞与血管内皮细胞或血小板的识别和粘附。
细胞生物学实验
二、实验原理
植物原生质体是除去细胞壁后为原生质所包围的“裸露细胞”，是开展基础研究的理想材料。其中酶解法分离原生质体是一个常用的技术，其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成，因而使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分，除去细胞壁而使原生质体释放出来。
原生质体分离纯化或融合后，在适当的培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团，长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体培养中最基础也是最关键的环节。
选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。
将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。
利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。
将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体(混有部分细胞核)。
二、实验原理
凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。
01
凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。
01
三、实验仪器
显微镜、粗天平、载玻片、滴 管、 离心管、离心机等.
用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
洋葱、小麦种子或黄豆幼根根尖
人口腔上皮细胞
五、实验内容与实施过程
1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓ 染色10-l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察
细胞生物学实验报告——凝血
图1. 凝集素介导的细胞与分子或细胞间相互作用模型（引自Chapman and Hall 1989）。
A. 同种细胞间相互作用。
B. 不同种细胞间相互作用。
在本实验中，土豆块茎凝集素介导的红细胞凝集属于A 类中由上至下数第二种类型，即凝集素可溶，可以同时与两个红细胞表面的糖蛋白寡糖链结合，在两个红细胞之间形成连接。
山东大学细胞生物学实验报告植物凝集素介导的红细胞凝集反应姜政 2012/10/6实验目的：观察凝血的过程和凝血后红细胞的聚集状态，理解细胞间凝集反应与细胞膜表面结构的关系，了解植物凝集素使红细胞凝集的基本原理和凝集素的应用领域。
实验原理：凝集素（Lectins ）是一种能与细胞膜表面糖蛋白寡糖链特异性结合的蛋白质，多数含糖，广泛存在于植物提取物、动物组织、各种微生物包括病毒中，其中以植物凝集素（Phytohemagglutinin ，PHA ）分离到的种类最多。
植物凝集素在植物体内主要参与防卫机制[1]，识别入侵微生物和愈合伤口，在豆类植物中，凝集素还与植物与特定固氮菌形成共生有关[2]；在体外，凝集素最典型的效应是引起细胞凝集。
通常认为，凝集素介导细胞凝集的基本原理是：可溶性凝集素分子能与细胞膜表面的糖蛋白寡糖链特异性结合，使不同细胞的糖蛋白通过凝集素分子彼此连结，进而引起细胞间凝集（图1）。
红细胞膜表面有大量糖蛋白，其中一些糖蛋白具有特异性，比如人类A 型红细胞表面的α-N -乙酰-D-半乳糖胺和O 型红细胞表面的α-L-海藻糖就分别决定了人类的A 血型和O 血型[3]。
本实验就是利用植物凝集素与红细胞表面糖蛋白受体的特异性结合实现红细胞凝集。
土豆块茎凝集素（potato tuber lectin ）是一种能结合几丁质的富含羟脯氨酸的糖蛋白，单体分子量约50, 000，包含至少三个不同的结构域，其中富含胱氨酸的区域与麦胚凝集素（wheat germ agglutinin ，WGA ）等几丁质结合蛋白具有同源性[1, 4]。
细胞实验预习报告
实验一细胞凝集反应实验目的：1.了解细胞膜表面结构。
2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理。
3.学习研究细胞凝集反应的方法。
实验原理：凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质，被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。
凝集素使细胞凝集是因为它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。
大多数凝集素存在于储藏器官中，作为一种氮源；对某些植物而言，受到危害时，凝集素作为一种防御蛋白发挥作用。
凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。
实验材料及试剂：1.马铃薯块茎2.显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支3.PBS缓冲液4.2%的红细胞液实验步骤：1.制备鸡血悬液：取1ml鸡血于离心管中，加食盐水至5ml，用滴管吹打均匀，平衡后放入离心机中，2000r/min来离心5min。
离心完毕后，将上清液倾倒再加食盐水至5ml，2000r/min，离心5分钟。
连续重复5次，最后得到的鸡血细胞再加入食盐水至5ml，即为2%的红细胞悬液。
2.取两个玻片，分别向两玻片上滴加一滴鸡血。
向其中一个鸡血玻片上再滴加一滴土豆凝集素，另一玻片不加，作为对照。
然后同时向两玻片滴加一滴PBS缓冲液，静置5min，观察血细胞的凝集反应。
注意事项：1.注意控制加入双凹片孔中的液体的量，以免双凹片的2个孔中液体混合。
2.样品加到孔中后，摇一下双凹片，并进行计时。
实验二叶绿体的分离与荧光现象实验目的:1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。
实验原理：将组织匀浆悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞的常用方法。
由于沉降系数和所受到的离心力的不同以及自身性质的不同，可用不同的转速来分离出不同的细胞器。
荧光显微技术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。
某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时就能在极端的时间内射出比照射光波长更长的光，这种光称为荧光。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导2009 年11 月目录前言 (1)细胞生物学实验守则 (2)实验一：动物细胞的基本形态观察和细胞计数 (3)实验二：细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察 (6)实验三：聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合 (8)实验四：线粒体和液泡系的超活染色与观察 (9)实验五：植物细胞微丝束的光学显微镜观察 (10)实验六：叶绿体的分离与荧光观察 (13)实验七：DNA的显示——Feulgen反应 (15)实验八：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察 (18)实验九：小鼠骨髓染色体标本的制备与观察 (20)实验十：染色体C-带技术 (23)实验十一：细胞内化学成分的显示方法——酸性磷酸酶的显示 (25)实验十二：开放性实验——蚕豆（Vicia faba）根尖细胞微核监测技术 (27)细胞生物学实验考试大纲····························································错误！未定义书签。
实验考试试题示例········································································错误！未定义书签。
细胞凝集试验报告
细胞凝集反应实验报告【摘要】细胞凝集素可以将不同的细胞粘连在一起，在显微镜下可以观察到最终形成大的细胞团块，可以观察到细胞的凝集现象。
通过不同的变量，控制细胞凝集反应因素，观察细胞凝集程度。
【关键字】血细胞凝集素凝集反应【背景介绍】细胞凝集指细胞与细胞之间通过某种凝集素的作用而相互粘连在一起的现象，最终形成大的细胞团块，在不用显微镜时即可用肉眼看到的明显的现象。
早在1896年，Widal就利用伤寒患者的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。
至1900年，Landsteriner在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型，并于1930年获得了诺贝尔奖。
凝集实验灵敏度高，方法简便，迄今已成为通用的免疫学实验技术，广泛应用于临床检验。
凝集素是一种能够与糖类物质特异性结合的糖蛋白，具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞识别和粘连，从而将不同的细胞联系起来。
常见的凝集素有刀豆素A、麦胚素、花生凝集素、大豆凝集素等。
凝集素主要的作用就是凝集细胞和刺激细胞分裂，在细胞间形成“桥”的作用，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
细胞的凝集与细胞的细胞膜有关，细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被，目前普遍认为，细胞间的联系，以及细胞的生长分化，免疫反应等都与细胞表面的糖蛋白有关。
细胞凝集的作用很多，机体免疫中反应中，细菌等颗粒性病原体会与凝集素结合而产生凝集反应，从而被更好的清除。
细胞凝集在实际中应用广泛，在临床上血细胞的凝集作用可用于血型鉴定，同时凝集素可以作为饲料添加剂，帮助抵御感染。
【实验材料】1、试剂：土豆凝集素（已制备好）、2%兔血红细胞悬液、PBS缓冲液、生理盐水。
2、仪器：移液管、离心管、离心机、有凹坑的载玻片、带刻度的试管若干、显微镜。
【实验方法】1、检查实验所用的仪器是否完备，完好，准备实验；2、土豆切片，取2g放入10ml的PBS缓冲液中浸泡2h，获取土豆凝集素（此步骤已有老师准备好）；3、梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再去一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×；4、取1ml已制备好的2%的兔血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；（在实验时由于各方面原因，误将已制备好的2%兔细胞悬液当做兔的静脉血，而加入3ml 的生理盐水，进行离心分离，从而重复实验不必要的步骤，需要在以后实验时多注意老师讲解，准备好再进行实验，以免浪费时间）5、按如下表所示，用移液管取一滴凝集素或PBS液于载玻片凹坑内，再加一滴血细胞悬液，旋转混合摇匀，在加入血细胞悬液后即开始计时，观察细胞凝集需要多长时间，并平行三次，记录所需时间。
间接凝集实验报告
篇一：直接凝集反应实验报告免疫学·直接凝集反应实验报告实验一：玻片凝集实验1.实验原理：颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质（通常是0.85%nacl）存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。
凝集反应的方法有两种：①直接法；②间接法。
颗粒性抗原（如完整的细菌或细胞）与相应抗体在体外直接结合而出现的凝集反应，称为直接凝集反应。
如玻片凝集反应和试管凝集反应。
将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象，称为间接凝集反应。
如rf因子检测玻片凝集试验是使用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的凝集反应。
此类反应较简单迅速，常用于抗原或抗体的定性检测。
本次实验使用玻片凝集试验的原理进行人类abo血型的鉴定。
abo血型系统是按照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。
人类abo血型抗原有两种：a抗原和b抗原。
a型血红细胞表面具有a型抗原，血液中具有抗b抗体；b型血红细胞表面具有b型抗原，血液中具有抗a 抗体；ab型血红细胞表面具有a抗原和b抗原，血液中不具有抗a、b抗体；o型血红细胞表面不具有a、b抗体，但血液中含有抗a、b抗体。
若用已知的抗a血清和抗b血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可引起红细胞凝集，根据凝集反应结果便可判断出受试者的血型。
2.实验方法：（1）取洁净载玻片一张，用马克笔分为两格并注明a、b分区。
（2）倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗a血清一滴，滴在a区内；同法在b区内滴加抗b血清一滴。
（3）使用消毒液对左手无名指进行消毒，待消毒液自然干燥后，使用无菌三棱采血针快速刺破手指。
（4）用木棒的两端取血，分别在抗a血清和抗b血清中搅拌均匀。
（5）用无菌棉棒压迫手指止血。
（6）静置玻片数分钟后，观察红细胞凝集反应结果。
3.实验结果：4.结果分析：实验二：试管凝集实验1.实验原理：试管凝集反应是在试管内将待检血清对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，然后观察试管内有无凝集快出现。
细胞凝集和细胞膜的渗透性
是否 溶血
时间
结果分析
Company Logo
实验总结
溶血时间及现象的观察比较困难，可采用离 溶血时间及现象的观察比较困难，可采用离 心辅助的方法来判别兔血在哪些等渗液中最易溶 心辅助的方法来判别兔血在哪些等渗液中最易溶 血，哪些较慢，做一些定性的分析。经过离心之 哪些较慢，做一些定性的分析。 后，若上清液无色，证明在这个时间段血细胞没 若上清液无色， 发生溶血，若上清液略红，证明有溶血发生。 发生溶血，若上清液略红，证明有溶血发生。当 然这个方法不很精确，但却快速、便于观察。 然这个方法不很精确，但却快速、便于观察。
Company Logo
溶血现象
溶 血 前
溶 血 后
Company Logo
3. 兔红细胞的渗透性观察 等渗溶液（ 种 等渗溶液（10种） 取试管一支加入3mL等渗溶液，再加入1～2滴 等渗溶液，再加入 ～ 滴 取试管一支加入 等渗溶液 稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？ 稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无 溶血现象？为什么？若发生溶血，记下时间（ 溶血现象？为什么？若发生溶血，记下时间（自加 入稀释兔血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。 入稀释兔血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。
Company Logo
概念区别
等渗溶液和等张溶液之间的差别， 等渗溶液和等张溶液之间的差别，除各种药物不同的理化 之间的差别 特性外，主要是因为红细胞膜是生物膜， 特性外，主要是因为红细胞膜是生物膜，而不是理想的半 红细胞膜是生物膜 透膜。它除了能让水分子自由通过外， 透膜。它除了能让水分子自由通过外，也能让其他物质通 过不同途径出入，所以应区分等渗和等张溶液。等渗溶液 过不同途径出入，所以应区分等渗和等张溶液。 不一定是等张溶液，溶液只有经生物学的方法试验以后， 不一定是等张溶液，溶液只有经生物学的方法试验以后， 才能认为是等张的。 才能认为是等张的。 简单说， 简单说，溶质分子不能自由通过细胞膜的等渗溶液就是等 张溶液。 张溶液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
结果记录—例
相同浓度不同电解质溶液对膜通透性的影响
编号
1 0.17mol/L氯化钠
2 0.17mol/L氯化钾 3 0.17mol/L氯化铵
书写实验报告，并就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验 结果进行分析，见上表。
单位膜，而脂类和蛋白质又与糖分子结合为细胞 表面的分枝状糖外被。
磷脂：双分子层， 由极性头部和非极 性尾部构成
膜蛋白：整合或游 离于膜的两侧
糖链: 识别作用
Erythrocyte Membrane Skeleton
细胞质膜外表面的一层黏性多糖物 质，如动物细胞表面的糖蛋白、糖 脂中伸向膜表面的糖链，在细胞间 的联系和识别、细胞的生长分化、 细胞免疫、细胞接触抑制及肿瘤发 生等过程中发挥着重要作用。
5 相对分子量大小的影响 1mol/L 乙二醇 1mol/L丙三醇 1mol/L 葡萄糖
6 去垢剂的影响 0.2% Triton X-100 0.2% SDS
2ml 溶液＋0.2ml血，用手腕轻轻摆动，晃动试管观察溶 血时间，最长延长至15分钟，记录溶血时间、实验结 果。
注意事项
1. 溶血现象可用一张有字的白纸来辅助识别，能 够清楚地透过溶液看到溶液后方纸上清晰的字 迹时，为完全溶血。
目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋； 不溶血：－
结果记录—例
脂溶性大小对细胞膜通透性的影响
编号 溶液种类
是否 溶血
溶血 时间
结果分析
1 3mol/L甲醇
2 3mol/L 乙醇
3 3mol/L 异丙醇
结果记录—例 相对分子量对膜通透性的影响
编号 溶液种类
相对分 是否 子量 溶血
溶血 时间
ddH2O
2ml
轻摇混匀，观察颜色变化，若有溶血[溶
液由不透明的红色（隔着它看不到试管后面
纸上的字）变成红色透明澄清液（可清楚看
到纸上的字）] ，记下自加入鸡血到溶液透明
澄清的时间（注意结合镜检）
2 相同浓度不同电解质溶液
0.17mol/L氯化钠
0.17mol/L氯化铵
0.17mol/L氯化钾
2ml 溶液＋0.2ml血，用手腕轻轻摆动，晃动试 管观察溶血时间，最长延长至15分钟，记录溶 血时间、实验结果。
实验方法---制备血细胞
从集市买一只活鸡现杀取血5ml（防止污 染），放入盛有20ml Alsever,s 液瓶中， 混匀后置冰箱保存备用（2 周内使用）。
2. 使用前取用Alsever,s 液保存的新鲜鸡 血5ml，加入8ml的0.128 mol/L 的NaCl 溶液，小心混匀，1000 r/min 离心5min， 如此3 次洗涤，最后配成25%的鸡红细胞 （CRBC）悬液。
结果分析
1 1mol/L乙二醇 78
2 1mol/L 丙三醇 92
3 1mol/L 葡萄糖 180
[思考题]
1. 植物细胞凝集素在鸡红细胞液凝集过程 中起的作用？
2. 哪些因素影响细胞凝集反应？ 3. 为什么溶液中微量的去垢剂可对活细胞
产生严重的影响？
[实验方法]
(一) 细胞凝集反应
1 凝集素制备：土豆凝集素、韭菜凝集素
2 细胞凝集反应
凝集素
1滴
2%鸡血红细胞液 1 滴
载玻片上混匀，镜检
静置20min后,再镜检
3 对照
PBS
１滴
2%鸡血红细胞液 １滴
载玻片上混匀，镜检
静置20min后,再镜检
（二）细胞膜的渗透性
1 低渗溶液
试管一支：
25％鸡血红细胞液 0.1ml
3 不同浓度的相同电解质和非电解质溶液
在16 支试管中，各加入不同浓度的葡萄糖及氯 化钠溶液2ml 后，分别滴加血液2 滴，轻轻摇 动试管，室温放置15min，观察发生溶血的浓 度，确定等渗浓度，并计算等渗摩尔系数。
4 脂溶性大小对细胞膜通透性的影响 3mol/L甲醇 3mol/L 乙醇 3mol/L 异丙醇
加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生 凝集。凝集素与糖结合的活性及专一性决定其 功能。
（二）细胞膜的渗透性 细胞膜是细胞与环境间进行物质与能量交
换的一种选择性通透屏障，可选择控制不同物 质进出细胞。水是生物界最普遍的溶剂，水分 子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通 过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就 是渗透。
2. 因相对分子质量大小对膜通透性有影响，所以 将溶血时间适当地延长至15min，15min时仍 然不溶即判断为不溶血。
3. 注意同组实验过程的同步性，尤其滴加血液的 操作要迅速。
4. 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃， 以免造成人为的红细胞破裂。
结果记录
绘制简图，表示血细胞的凝集过程；
图示血细胞凝集的原理。
比较马铃薯和韭菜凝集素的凝集效果。 （可用凝集率、细胞产生凝集所需时间 作为比较依据）
溶血状况观察
不溶血（－）--管内液体分两层：上层浅 黄色透明、下层红色不透明; 镜下观察时红 细胞完好呈双凹盘状。
不完全溶血（＋或＋＋）--试管内液体浑 浊、上层带红色者;镜下观察时部分红细胞 成碎片状。
[实验用品]
1. 器材:载玻片，显微镜、天平、滴管、 5ml移液管、试管、试管架等
2. 材料: 鸡血细胞 3. 试剂:土豆凝集素、韭菜凝集素、PBS缓
冲液、0.17mol/L氯化钠、 0.17mol/L 氯 化 钾 、 0 . 1 7 mol/L 氯 化 铵 、 0.32mol/L乙醇、 0.32mol/L甘油等
实验一 细胞凝集反应与细胞膜的渗透性
[实验目的]
1. 学习研究细胞凝集反应的方法，了解细胞发 生凝集反应的原因
2. 了解溶血现象及其发生机制。 3. 掌握细胞膜通透性的实验方法。 4. 观察并掌握相对分子量、脂溶性大小、电解
质和非电解质对细胞膜通透性的影响。
[实验原理]
（一）细胞凝集反应 细胞膜是由脂类双分子层镶嵌蛋白质构成的
溶血时光线较容易通过溶液，使溶液呈 现透明即溶血。
红细胞膨胀与收缩
将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由 于红细胞膜对各种溶质的通透性不同， 膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会 发生溶血现象。
溶质分子进入红细胞细胞内溶质浓 度增加细胞内渗透压增加胞外水分 进入红细胞细胞膨胀破裂细胞膜破 裂，血红素溢出即红细胞发生溶血
扩散与渗透
水的渗透同样是从自 由能高的地方向自由 能低的地方移动，如 果考虑到溶质的浓度， 水是从溶质浓度低的 地方向溶质浓度高的 地方流动。
将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大 量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋 白释放到介质中，由不透明的红细胞悬 液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种 现象称为溶血。
不同浓度相同电解质/非电解质
单位面积所含分子数相同，即有相同的 渗透压；同样浓度下,电解质产生的渗透 压往往大于非电解质。
等渗系数i＝溶液1的等渗物质量浓度/溶 液2的等渗物质量浓度
相同浓度不同电解质：
相同浓度不同非电解质：
相对分子量大小：小分子易进入
脂溶性大小：碳链越长，脂溶性越大
在不同相对分子量、脂溶性大小 以及电解质和非电解质等各种溶 液中， 红细胞质膜对各种溶质 的渗透性不同。
不同物质透入细胞的速度不同， 发生溶血所需时间不同。
发生溶血现象所需时间长短可作 为测量物质进入红细胞速度的一 种指标,从而测量各种物质通透 性的差别。
限制因素
各种物质跨膜运输的方式是不同 的，物质的通透性是由物质本身属性 和膜的结构性质（如脂溶性、分子大 小、所带电荷等）共同决定的；另外 物质穿膜的通透性还要受到细胞生理 状态和环境条件（如麻醉剂、热、辐 射、pH值、盐不平衡等）的影响
凝集素是一类含糖(少数例外) 、并能可逆 结合特异糖基的蛋白质，与糖的运输、储存物 质的积累、细胞间相互作用及细胞分裂调控等 有关，具有使细胞凝集、血型鉴定、促进淋巴 细胞分裂、防害抗虫等作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被的 寡糖链相连接，在细胞间起到“桥”的作用。
凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合 价，并与细胞膜上受体的分布有关。