高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立

高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立目的：利用高脂、高能饲料建立肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模
型。

方法：140只雄性SD大鼠，体质量100±10g。

随机抽取20只作为正常对照组，喂食普通饲料；剩余120只用于模型建立，喂食高脂、高能饲料。

结果：O-N与OR-N组大鼠在喂养期间体重差距逐渐增大，至8w末，O-N组体重显著高于OR-N组及正常对照组（P <0.01）；两组ALT、TG均显著升高（P <0.05），而O-N组大鼠血清TC、TG显著高于OR-N组（P <0.05）；两组肝重量、脂肪重量及脂体比、肝指数均显著升高，O-N组肝重量、脂肪重量及体重均显著高于OR-N组（P <0.05，0.01），但肝指数、脂体比间未见显著差异；O-N组、OR-N 组肝细胞内弥散大量脂肪空泡。

结论：成功用高脂、高能饲料建立肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型，与人类发病特征相似，为肥胖与非酒精性脂肪的研究提供更有针对性的动物模型。

标签：肥胖抵抗；非酒精性脂肪肝；大鼠；动物模型
近年来，我国非酒精性脂肪肝（NAFL）的发病率呈上升趋势，特别是由于饮食结构的不合理引起的肥胖与NAFL的相关性，已成为人们关注的热点。

但在非酒精性脂肪肝动物模型建立的研究中发现，同一品系、同一批大鼠饲用相同的高脂饲料，其中部分发生肥胖，部分不发生肥胖，前者被称为肥胖傾向（obesity prone，OP），而后者被称为肥胖抵抗（obesity resistance，OR）[1]，具体机制尚不十分清楚。

为深入研究NAFLD的发病机制及肥胖与NAFLD的关系，建立符合人类自然发病规律的动物模型极为重要。

1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物：清洁级雄性SD大鼠140只，体重（100g±10g），由第四军医大学实验动物中心提供。

1.1.2 饲料主要成分：（1）高脂高能饲料：基础饲料78.9%、胆固醇1%、胆酸盐0.1%、蛋黄粉10%、猪油10%，能量密度为20.75 kJ/g；（2）基础饲料为实验动物标准饲料，能量密度为14.56 kJ/g。

饲料均购自于第四军医大学实验动物中心。

1.2 实验方法
1.2.1 动物分组与饲养：实验前大鼠称重，随机抽取20只，作为正常对照组，剩余120只用于制备肥胖与肥胖抵抗型大鼠NAFL模型。

两组分别喂食普通饲料及高脂、高能饲料，连续8w后，按体重分为肥胖（O-N组）及肥胖抵抗组（OR-N 组）。

8w内动态观察大鼠的一般情况、体质量变化，8w末每组随机取8只，禁食12小时后眼球后静脉丛取血，制备血清待测，结束后处死，取出肾周、睾周
脂肪垫称重，肝脏称重并观察病理形态变化。

1.2.2 肥胖与肥胖抵抗判定标准：体重大于正常对照组平均体重+1.96倍标准差的为O-N组，体重小于正常对照组平均体重+1.0倍标准差的为OR-N组[1，2]。

1.2.3 观察指标及测定方法：（1）一般情况：实验期间，每周称大鼠体质量1次，并观察毛色、食欲、行动、粪便、对外界刺激的反应情况；（2）病理组织学检查：肉眼观察大鼠肝脏大体变化，并作病理切片HE染色，光镜下观察大鼠肝脏脂肪变性情况。

（3）血清生化指标：8周末每组随机取8只大鼠，禁食12 h 后眼球后静脉丛取血，制备血清。

采用日立7600-020型全自动生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、总胆固醇（TC）、总三酰甘油（TG）（4）生理学指标观察：肝指数（liver index）=肝脏重量（g）/体重（g）×100%；脂体比（%）=[睾周脂肪量（g）+肾周脂肪量（g）]/体重（g）×100%。

1.3 统计分析
所有数据以计量资料以表示，应用SPSS 11.0软件包进行统计分析。

组间差异采用方差分析进行处理。

P＜0.05差异有显著性，P＜0.01差异非常显著。

2 结果
2.1 一般特征
与正常组大鼠比较，造模组大鼠饮水和尿量均明显增多，有些大鼠大便稀软，排泄物异味重，体毛光亮度减退，毛色偏黄，活动减少。

2.2 大鼠体质量变化
每周称大鼠体质量，动态观察其体质量间的改变情况（表1）。

挑出O-N组体质量增加最多的20只和OR-N组体质量增加最少的20只，作为观察对象，发现不同时间点的体质量间的差别具有统计学意义（P＜0.01）；多样本均数的两两比较，结果显示从第5周开始，O-N组体质量明显升高，第6周开始O-N组与OR-N组和正常对照组之间均有显著性差异（P＜0.05），OR-N组与正常对照组间无显著性差异。

2.4 对体脂含量及脂体比的影响
肉眼观察，8w处死的正常对照组大鼠肝脏颜色呈暗红；O-N组和OR-N组肝脏体积增大，包膜稍紧张，边缘圆顿，局部呈奶黄色，有油腻感；光镜下，正常组大鼠肝脏组织结构完整，基本无异常情况，O-N组和OR-N组可见弥散性肝细胞空泡变性，未见炎性变、坏死灶及肝纤维化，肝细胞肿胀明显，胞质内充满大量脂肪空泡。

根据《非酒精性脂肪肝诊断标准》，确定非酒精性脂肪肝模型建立成功。

3 讨论
本实验采用了高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝大鼠模型的方法，8周后大鼠血清生化检查大鼠TG、ALT水平明显高于正常组，肝指数升高，病理形态上形成脂肪肝，表明成功复制实验性大鼠非酒精性脂肪肝模型。

但在实验期间，每周称大鼠体质量，动态观察其体质量间的改变情况，发现从第5周开始，O-N组体质量明显升高，第6周开始O-N组与OR-N组和正常对照组之间均有显著性差异，OR-N组与正常对照组间无显著性差异。

提示同样喂食高脂、高能饲料，大鼠的体重出现明显分化。

在实验中发现26只SD大鼠喂高脂饲料18周后，其中有12只成为DIO-R 大鼠[4]。

本实验在非酒精性脂肪肝模型造模过程中也发现了这一现象，造模成功后，O-N组大鼠为67只（55.8%），OR-N组为24只（20%）。

在以往的研究中，往往忽略了肥胖抵抗的现象，或将体重过低的动物放弃，本实验将肥胖与肥胖抵抗发生的规律与非酒精性脂肪的建立相结合，利用其模型建立中均需高能、高脂饲料诱导的特性，成功地将非酒精性脂肪肝大鼠模型，在体重的差异上进行分类，从而建立肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型。

该模型建立的成功，将有助于深入研究肥胖与非酒精性脂肪肝发生的关系及调控机制，并使研究更加有针对性，为寻找有效地防治措施提供实验依据。

参考文献
[1] Levin BE，Triscari J，Sullivan AC.Altered sympathetic activity during development of diet-induced obesity in rats[J].Am J Physio1，1983，244（3）：R347-355.
[2] 王舒然，麻微微，赵丹，王国秀，蔺威鸣. 高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗动物模型建立[J]. 中国公共卫生，2007，7（23）：774-775.
[3] Lin HZ，Yang SQ，Chuckaree C，et a1.Metformin reverses fatty liver disease in obese leptin-deficient mice[J].Nature Medieine，2000，6（9）：998-1003.
[4]王从容，谭健，杨锡让.高脂饲料诱发大鼠肥胖模型的建立及间接推测体脂法[J].北京体育大学学报，1994，17（3）：20-23.。