溶剂对反相液相色谱中峰形影响-JXF
液相色谱分离的溶剂效应
液相色谱分离的溶剂效应“溶剂效应”会导致哪些峰形异常？如何避免溶剂效应？在HPLC分析中样品溶剂的选择和流动相是怎样的联系？为何建议使用流动相溶解样品？。
一系列的问题都和样品溶剂的选择密切相关，如何解决真正的溶剂效应问题，又如何分辨哪些是非溶剂效应问题，不同的问题有不同的解决方法，有哪些前辈留下的实战经验可供分享呢？一起来看看吧！什么是溶剂效应?样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时可能会造成的峰展宽、峰分叉现象。
即色谱图上较早洗脱的峰前沿或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为正常的现象。
例如样品溶液的溶剂是100%乙腈（100%的强溶剂），而流动相的组成则较弱，18%的乙腈与72%的水。
第一个峰是开叉的，并且与第二个峰相比，明显地变宽了。
当样品溶液的溶剂变成流动相时，所有的峰形都改善了，且变得尖锐。
可能发生溶剂效应的情况：●出峰时间早；●保留弱；●进样量大。
用流动相溶解样品能够得到很好的峰形当溶解样品的溶剂不同于流动相时，样品溶剂与流动相发生混合，样品溶剂被冲稀。
如果进样溶剂之强度高于流动相，样品在瞬间会表现为在较强溶剂中，并以较快速度通过色谱柱。
表现在色谱图上就是∶色谱峰的保留时间缩短。
`当进样溶剂与流动相混合时，一部分分子会先与流动相混合，致使这些分子通过色谱柱的速度发生变化，使峰形扭曲，发生变形。
洗脱较早的色谱峰峰变形要比洗脱晚的色谱峰严重。
解决进样溶剂问题的关键是使进样体积足够小，这样稀释过程会非常快；或使用比流动相弱的溶剂溶解样品。
较弱的溶剂会使样品在色谱柱上发生浓缩，在某些情况下，色谱峰会比使用较强溶剂时窄一些。
因此，在通常情况下，如果溶解样品的溶剂比流动相强，进样体积应不高于25mL。
进样体积大小与进样溶剂与流动相之间的差别大小有关。
这一差别很容易凭经验得到∶逐渐加大进样体积，直至发生峰变形现象。
采用比发生峰变形时小一些的进样体积即可。
问题中发生的峰变形就是因为溶解样品的溶剂甲醇强度远远高于流动相，因而得到了变形的、展宽的峰。
溶剂系统对RP—HPLC分离性能的影响
溶剂系统对RP—HPLC分离性能的影响作者：肖欢等来源：《湖北农业科学》2015年第09期摘要：反相高效液相色谱（RP-HPLC）中所用的溶剂系统是影响其分离性能的重要因素之一。
本研究以尿嘧啶、苯酚、萘、芘、联苯、1-萘酚、2-萘酚、邻甲酚为标准样品，考察了溶剂强度、溶剂极性等对反相色谱分离性能的影响。
采用溶剂三角形法优化了多组分样品分离的溶剂体系，得出最佳分离溶剂系统为甲醇/水（1∶1，V/V）。
在此条件下，对中药茶多酚及大黄提取物进行了分离，效果较好。
关键词：反相高效液相色谱（RP-HPLC）；溶剂系统；溶剂三角形中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）09-2226-03反相高效液相色谱（RP-HPLC）是液相色谱中最常用的模式，广泛应用于化工、制药、生物工程等领域。
RP-HPLC溶剂系统的选择与优化一直是液相色谱领域的热门研究课题[1，2]。
尽管目前在这一方面有很多文献可供参考，但对于多组分目标物的分析与分离，仍存在很多问题，且有效选择并优化色谱的溶剂系统也十分困难[3-5]。
本研究在考察了溶剂系统的强度、极性等参数对RP-HPLC分离性能影响的基础上，使用简便易行的三角形法优化多组分体系分离的溶剂体系，进而得出最佳分离溶剂体系，并应用于中药提取物的分离。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂LC-10ATVP高效液相色谱仪配有SPD-10AVP紫外检测器（日本岛津公司）与N2000色谱数据工作站（浙江大学智达信息工程有限公司）。
SB2200超声仪（上海申波超声公司）。
所用试剂均为分析纯，购于国药集团。
水为去离子水。
中药茶多酚及大黄原料为市售。
所有标准样品质量纯度不低于95%。
1.2 试验方法1.2.1 色谱分析条件色谱柱为Agilent SB C18柱；流动相为不同比例的反相溶剂体系；流速为1.0 mL/min；检测波长为254 nm；检测温度为25 ℃；进样体积为2 ？滋L。
论液相色谱的溶剂效应
论液相色谱的溶剂效应一通常概念及其局限目前公认的溶剂效应的理解是样品溶剂强度大于流动相时造成色谱峰变形的现象。
比如100%纯乙腈溶解样品，注入流动相为乙腈—水（18：82）的反相系统中，会造成峰分叉或拖尾的现象。
但是这种概念不能解释其他由于所选稀释剂导致的峰变形现象，如溶出样品，在pH6.8溶出介质中取出的样品注入某些缓冲盐—有机相系统中保留时间不稳定及色谱峰变形。
二概念扩展与详述鉴于许多由稀释剂导致的色谱峰变形的现象不能用目前的溶剂效应解释，我觉得有必要将溶剂效应的概念延伸。
溶剂效应，顾名思义，就是由于样品中某些组分在稀释剂与流动相所处的状态的较大差异导致的色谱行为表现异常的情况。
1 洗脱能力的差异目前一般意义上的理解说的就是这种情况，不再赘述。
2 电离状态的差异药物活性成分很大一部分都是能离子化的样品，原料药都是成盐状态，如盐酸达卡他韦，帕瑞昔布钠等。
此类样品它们都会电离，且基本上都不是完全电离，一部分是离子化状态，一部分是分子状态，两种不同的状态在流动相和固定相之间的分配是不一样的。
在反相系统中，分子状态和固定相结合的更紧密，保留更强，离子状态更亲和于流动相，保留较弱。
如果样品在稀释剂中的电离状态和流动相的电离状态有非常大的差异，例如上文提到的溶出样品，样品的稀释剂是pH6.8溶出介质，缓冲盐是10Mm/l的磷酸盐溶液（pH3.0）,这就很可能发生保留时间不稳定及色谱峰变形的现象。
样品假如是碱性样品，它在pH6.8溶出介质中大多未电离，而在磷酸盐溶液（pH3.0）有很大一部分是电离状态，在样品溶液和流动相接触混合的过程中，需要一段时间将电离状态缓冲至流动相所处的状态。
这个时间如果较长，就会导致色谱行为的异常。
从以上的分析，应该可以看出，解决类似问题的办法有三个，样品溶液用流动相稀释，减少进样量，或者增强流动相缓冲能力。
增加缓冲能力的做法请参见我的《方法开发缓冲盐使用指导原则》3 溶解性的差异做与参比制剂的溶出曲线对比试验中，经常会在溶出介质中加入表面活性剂，我想有很多人就会发现样品的保留时间飘忽不定。
一篇长文让您完全理解液相色谱中的溶剂效应
一篇长文让您完全理解液相色谱中的溶剂效应液相色谱（liquid chromatography, LC）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、环境等各个领域。
在液相色谱中，溶剂是一个重要的组成部分，并且溶剂的选择和使用会对色谱分离的效果产生显著影响。
本文将详细介绍液相色谱中的溶剂效应，帮助读者更好地理解并优化液相色谱实验。
溶剂在液相色谱中的作用溶剂在液相色谱中具有多重作用，主要包括：1. 分离基质的溶解：溶剂的主要作用是将待分离的混合物中的样品物质溶解为液相。
溶剂的极性和溶解度会影响样品物质在液相中的溶解度，进而影响样品的分离效果。
通常情况下，选择与样品物质相似或足够极性的溶剂可以提高样品物质的溶解度。
2. 液相的选择：液相色谱分为正相液相色谱和反相液相色谱两种类型。
正相液相色谱（Normal Phase Chromatography, NPC）使用极性溶剂作为流动相，极性固定相对样品物质进行分离；反相液相色谱（Reverse Phase Chromatography, RPC）使用非极性溶剂作为流动相，非极性固定相对样品物质进行分离。
溶剂的选择和组合会直接影响分离效果和分离机理。
3. 色谱峰的形状和保留时间：溶剂的性质和使用量会影响色谱峰的形状和保留时间。
峰形的对称性、峰高、峰宽等参数会受到溶剂的选择和使用方式的影响。
溶剂选择不当或使用不当可能导致峰形不对称、峰形分离不良，以及保留时间不稳定等问题。
4. 色谱柱寿命：溶剂的选择和使用方式也会影响色谱柱的寿命。
某些溶剂会对色谱柱产生腐蚀或破坏作用，从而缩短色谱柱的使用寿命。
此外，溶剂的质量和纯度也会对色谱柱的寿命产生影响。
溶剂效应的影响因素液相色谱中的溶剂效应受多个因素的影响，主要包括：1. 溶剂极性：溶剂的极性与待分离物质的极性需相匹配。
如果待分离物质和溶剂的极性相差太大，可能导致溶液不稳定、溶解度不足或溶解度过高等问题。
2. 溶剂选择：不同的样品物质可能需要使用不同的溶剂才能得到较好的分离效果。
试述反相高效液相色谱中溶剂的影响及消除
试述反相高效液相色谱中溶剂的影响及消除摘要：液相色谱仪在食品、药品检验中是不可或缺的精密仪器，因使用广泛，前人在使用原理、技术应用、仪器维护等方面积累了大量的经验，而溶剂效应容易在试验被忽略，本文基于笔者十多年的色谱工作实践中，针对溶剂对液相色谱行为的各种影响和消除做了一些总结，可作为液相色谱分析的参考。
关键词：高效液相色谱、溶剂效应高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
该法具有高效、准确、灵敏等特性，广泛应用于各种领域及行业。
高柱效、高分离度、是我们做色谱追求的目标，但是在试验中往往存在很多问题，比如：柱效低、峰拖尾，峰展宽，峰变形等等，有些容易解决，有些尝试很多途径都无法改善，当然可能会是方法本身的原因，但是也存在一些忽略的问题：比如本文中提到的溶剂效应，笔者从事食品药品检验十一年，在工作中总结了一些液相色谱法应用中的经验。
本文主要叙述在RPHPLC-UV中溶剂的对色谱行为的影响及消除。
1、溶剂的紫外吸收对色谱行为的影响及消除1.1溶剂的紫外吸收对色谱行为的影响：RPHPLC-UV中，待测成分是通过其在特定波长有紫外吸收而检测的。
在分析时，系统中持续稳定的通过流动相，进样中的各种组分通过色谱柱分离后进入检测器检测再转化成我们所需的信号，如果溶剂存在紫外吸收，就会产生一个色谱峰，当溶剂与待测组分完全分离时，溶剂峰的存在并不影响测定，但当溶剂与待测组分不分离时，溶剂峰的存在将影响我们的测定。
1.2溶剂的紫外吸收对色谱行为影响的消除1.2.1以流动相为溶剂。
当进样溶剂为流动相时，溶剂的紫外吸收与流动相一致，在进样中不形成色谱峰，从而消除溶剂峰的影响。
1.2.2调整流动相的比例。
在常规的检验中，有时溶剂是不能改变的，这时可以适当的调整流动相的比例。
在RPHPLC中，所用的溶剂一般极性较大，在色谱中表现为弱保留或不保留，而待测成分一般能在色谱柱中保留，所以可以通过调整流动相的比例，使溶剂峰和待测成分峰分离。
溶剂效应对液相色谱的影响
溶剂效应对液相色谱的影响
液相色谱的溶剂效应，是指不同的溶剂对液相色谱的分离效果的影响。
不同的溶剂具有不同的溶解性，这样就会导致不同的迁移率，也就会对组分的分离性有明显的影响。
具体的溶剂效应主要有以下几种：
1、溶解度效应：不同的溶剂中由于溶解度不同，容易出现时间段长短、电泳速率快慢、移动速度快慢等问题，进而引起分离效果变差，电泳上的效应就表现为一些分离效果重叠。
2、极性效应：极性的溶剂也会影响色谱的分离效果，极性的溶剂会影响物质的极性，从而影响色谱分离的效果，电泳上的表现是移动位置偏移。
3、電泳效果：不同溶剂的pH值不同，也会影响色谱电泳的效果，影响移动速率，从而影响电泳上的分离效果。
4、電空效果：相同溶剂下，不同电解质浓度可以影响色谱电空的影响，电空上的表现以电泳位移为特征。
所以，溶剂效应对液相色谱的分离效果无疑也有很明显的影响，为了能够取得更好的分离效果，必须要选用合理的溶剂，避免不同的溶剂对液相色谱分离效果的
影响。
8种常见液相色谱峰解析常见原因及解决办法
8种常见液相色谱峰解析，常见原因及解决办法！对于每一个身经百柱的实验人员来说，液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门，科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映，有些问题可以通过改变设备参数得到解决，而有些问题则必须通过修改操作程序来解决，毕竟，正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。
小编在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总，大家一起来看一下吧。
1、拖尾峰1、筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。
需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。
2、色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。
需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。
3、有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。
更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。
4、流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。
调节PH值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。
2、前沿峰1、样品过载：被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。
降低样品含量。
2、样品溶剂选择不恰当：当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。
选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。
3、色谱柱损坏：色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。
更换色谱柱。
4、在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。
调整流动相洗脱梯度。
3、倒峰1、样品折射率小：示差折光检测器测的信号是折射率，出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。
2、密度的原因：密度不一样，出来的峰正倒不一样。
反相液相色谱系统峰及其形成原因
反相液相色谱系统峰及其形成原因2016-10-17作者：Bruce Lee来源：药渡网1概述在反相液相色谱中，死体积附近往往会形成一个或一些正的或者倒的色谱峰，这些色谱峰独立于样品而存在，可以统称这些色谱峰为系统峰。
一般地，系统峰的产生与所使用的色谱柱，流动相添加剂以及起始有机相的比例有关。
从经典色谱塔板理论出发，流动相经泵混合经由管路系统引入到色谱柱内，流动相内的所有组分，均会在固-液两相之间分配，直到平衡。
而当样品或者其他与起始流动相组成比例不同的溶液被注入色谱柱的时候，色谱柱头部的各物质的分配平衡被干扰，每种物质的平衡状态被干扰之后再次回复到平衡状态的过程中，也就产生了系统峰，检测到的系统峰的种类与多少和采用的检测器的种类有关(如一些盐离子在紫外检测器上无法被检测到，却可以被CAD检测器检测到)。
如下图1所示，流动相为ACN：Water=4：96，添加剂TFA的浓度为0.1%，进样溶剂组成为ACN：Water=4.4：95.6，添加剂TFA的浓度为0.1%。
图中的正负色谱峰即为典型的系统峰。
2反相液相色谱系统峰的影响因素如前所述，反相色谱系统中，系统峰的形成与色谱柱，流动相的组成特别是添加剂的种类以及浓度有关，此外配置样品的溶剂的组成也是十分重要的因素。
如下图2A所示，流动相的组成为乙腈与纯水，添加剂为1：1的1,5-二氯蒽醌与1,8-二氯蒽醌，进样溶液为与流动相比例相同的乙腈与纯水；图2B所示，流动相的组成为乙腈与纯水，进样溶液为1：1的1,5-二氯蒽醌与1,8-二氯蒽醌溶液。
由上图2A与图2B，1,5-二氯蒽醌与1,8-二氯蒽醌在两张色谱图中互为镜像，此外区别还在与图2A与图2B中的两个色谱峰的峰面积的绝对值的差异。
上述现象，亦可说明反相液相色谱系统峰的形成与流动相的组成以及样品溶剂组成之间具有密不可分的关联。
又如下图3所示，流动相为乙腈-水体系，流动相中还添加有另外两种添加剂，浓度分别为0.001 M，采用等度洗脱模式。
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溶剂对反相液相色谱中峰形影响Solvent effect the HPLC performance in reversed phase Chromatography忆峰（Yvan Lee） -201405-Sino摘要:随着分析仪器的不断更新，HPLC在常规分析工作中担任着愈来愈重要的角色。
其中反相色谱的高性价比及通用性，一直在高效液相色谱法中占较大的比例。
关于色谱洗脱条件的筛选，建立，许多文献集中在流动相与色谱柱的调整，而样品溶剂相关的文章则较少。
笔者以实际工作经历中发现不同溶出介质对色谱峰形的影响为基础并结合相关的文献，就样品溶剂对反相液相色谱中峰形的影响进行了一个的归纳与总结。
并对其中的机制提出了一些浅显的论述。
关键词: 体外溶出;HPLC;溶剂效应;峰形异常;缓冲容量;表面活性剂;离子对试剂;方法开发Abstract: As the analytical apparatus developing, HPLC is more and more popular and important, and reversed phase chromatography plays a big role for its cheaper and suitability. There are lots articles about setting the HPLC method focus on Mobile phase and column screening, but little on diluent. The author summaries some influences of sample solvent in reversed phase chromatography according to the daily experiments and references. Some mechanisms are presented in this article also.Keyword: Dissolution; HPLC; solvent effect; abnormal peaks; buffer capacity; surface active agent; PIC; method development高效液相色谱法由于其专属性好，灵敏度高，分析快速等优点被广泛的使用在食品，化妆品，药品，石油化工，地质环境监测等诸多领域。
HPLC按色谱柱填料的性质又分为反相色谱，正相色谱，离子交换色谱，空间排阻色谱，手性色谱等[1]。
其中反相色谱由于其普适性原因占到了HPLC分析中大部分。
色谱分析者在工作中会经常遇到色谱峰型异常的问题。
这一般可以归结为峰过载，色谱柱柱头筛板堵塞，色谱柱损坏，系统死体积增大，二次保留，溶剂效应等[2]。
当出现色谱峰峰形异常时，进一针低样本量（如1uL），若峰型正态基本就可以断定为溶剂效应。
溶剂效应对峰型的影响有展宽，保留时间的飘移，峰面积的变化，分叉，双峰等[1~3，4]。
这在定性与定量分析中都会导致分析工作者对结果的误判，对此笔者结合相关文献和实际工作经历就反相色谱中溶剂效应的几种不同作用机制做了以下简单的总结。
1.溶剂强度此处所述的溶剂强度指溶剂使用的是与流动相兼容的有机体系。
色谱分析者经常会遇到样品水溶解性不佳的问题，最简便的处理方式之一便是以流动相中的纯有机相稀释并溶解样品。
一般情况下都可以得到满意解决，然偶尔也会发生峰形变异的问题。
王丽[3]等在按照《中国药典》2010版二部测定瑞格列奈其左旋异构体时发现，以甲醇配置的0.1mg/mL的样品溶液的色谱峰形状随着甲醇的比例减低峰型趋于正态，60%的甲醇/流动相A溶剂时才得到理想峰型。
见图X。
Column：Chiral AGP TM 100*4.0mm,5umMobile phase A:20mM KH2PO4(pH=7.0) , Mobile phase B:ACNColumn temperature: 25℃, Detector: UV 240nm, Inject volume:20uL笔者认为这主要是样品中强洗脱剂在样品分配平衡建立初期产生的额外洗脱作用力导致的结果。
溶剂强度的影响大小受样品在固定相中分配能力决定。
表观上即样品的保留时间越长，溶剂强度过大导致的峰型的变异程度/可能性越低。
对于此类的影响,我们可以通过降低进样量，降低溶剂强度，增加保留因子等手段加以解决[1,2,4]。
色谱峰的柱内展宽由多路径效应，纵向扩散，传质阻力三部分组成。
正常情况下上述影响只会导致导致峰的展宽而不会导致峰形变异，在检测器上表现的就是一个正态的峰形。
当溶剂强度大于流动相时，溶质谱带在柱头处就会由于溶剂的额外洗脱作用而变形，导致前沿的肩峰出现。
2.溶剂与流动相的兼容性为了兼顾难溶样品的溶解度，分析工作者有时会使用氯仿，乙酸乙酯，苯等作为溶剂进样。
此时的峰型变异的表现与1中所述的有所类似，但机理仍有所不同。
此时由于溶剂与流动相的兼容性不佳，直接包裹溶质跳过色谱初期的保留过程，待溶剂的分配平衡建立起来后溶质过于展宽，甚至直接部分冲出色谱柱所致。
这与谢孟峡等人的研究基本一致[3]。
色谱工作者会把反相色谱的保留机制形象化为流动相与固定相的分配过程，实际情况远比此复杂。
有报道表明色谱柱中的流动相约只有50%[12]是流动的。
其余在载体间隙，固定相间隙，固定相表面中的50%则相对静止。
溶质被固定相吸附必须先通过固定相表面的不动层。
若溶质所用的溶剂与流动相兼容性不佳，则会显著影响溶质在溶剂与流动相之间的传递，从而影响被固定相吸附的过程。
3.溶剂pH的影响流动相的pH对于易解离化合物的保留有着显著的影响。
这是由解离状态的化合物极性发生了显著的变化，导致固液分配系数发生了较大改变所致。
由于解离是个快速的动态过程，对色谱峰的展宽影响相对于溶质的三个传统途径较小，所以pH对化合物色谱行为的影响在HPLC上多体现的为保留时间的变化，而不是多个色谱峰。
以下为pH对峰形影响的一个较为显著的例子。
在以0.1N HCl作为溶出介质做（以下缩写AT）的溶出曲线时，笔者发现样品图谱中 AT峰所在的保留时间处出现了双峰（Figure 2）。
Column:GlobalC18150*4.6mm5um,MobilePhase:0.1%H3PO4/MeOH=30/70,Flow rate:1.0mL/min ,UVD 242nm，Inject volume:20uL.由于有报道AT在酸性条件下不稳定[6]，笔者初期推断是AT的降解峰，溶出释放度拟加和计。
但又发现不同溶出时间此两峰的比例几乎一致。
推断流动相中约10mM磷酸缓冲能力不足[7]，在较低pH（介质pH 约1.0）时，AT在分配平衡中有两个差异较大的分配系数—溶剂相与固定相分配系数1以及流动相与固定相分配系数2。
初期由于溶剂在进入色谱柱之前已经扩散，溶剂体积边缘以分配系数2洗脱，中部以分配系数1洗脱直接导致在进样初期极短的时间内主峰被洗脱成两个溶质段。
当笔者调节了溶出样品的pH后峰形正态。
此类影响可以归结于流动相缓冲浓度不足所致。
4.表面活性剂的影响体外溶出实验中，十二烷基硫酸钠（SDS）为难溶性药物的方法开发提供了一种简便的途径[8]。
B缓释片中SDS的加入导致溶出速度的减低，这可能是表面活性剂与缓缓释制剂水化层表层中的亲水基团结合导致扩散层增厚所致[9]。
笔者在做B缓释剂体外溶出时发现，增加了0.2%SDS 的0.1N HCl溶出介质中的样品在进第二针时B 中的C已经展宽到无法辨别（Figure 3）。
Column: SHISEIDO AQ-C18 150*4.6mm 5um,Mobile Phase: pH2.8H3PO4/MeOH=95/5,Flow rate:1.0mL/min ,UVD 280nm，Injectvolume:20uL.SDS也是阳离子对试剂，溶剂中SDS在与样品溶剂竞争吸附C18柱作用位点，导致第一针峰形拖尾。
由于流动相洗脱强度较低，SDS不易洗脱出来，卡比多巴和左旋多巴与固定相以两种保留机制作用-分配与离子交换[4，10]，导致后续峰变异。
笔者在流动相水相中增加了0.01%SDS与0.05% NaCL（减低C的离子换作用）后峰形正态（Figure 4）。
此例实际上可以引伸为溶剂离子强度对离子对色谱法的影响[4,10]。
Column: SHISEIDO AQ-C18 150*4.6mm 5um,Mobile phase : pH2.8H3PO4（adding 0.01%SDS and 0.05%NaCL）/ACN=90/10，Flowrate:1.0mL/min ,UVD 280nm，Inject volume:20ul.5.大体积进样的影响分析工作者在检测中有时会用到大体积进样来对痕量的物质进行定量。
这有时也会带来明显的峰型改变，这大多是由上述的综合影响所致，但笔者还是单独列出了此情景中最简单模式——样品初始体积大于理论的（0.4倍基线体积[4]）一个载荷量，最终导致的峰型展宽。
此种情形的机理类似于TLC中的点板不当导致的峰形拖尾[11] 。
色谱洗脱过程是一个复杂的动态过程。
在HPLC形成的初期，色谱工作者对色谱柱直径、填充粒径、填充形状、管路直径等对峰形的影响都进行过深入的论证。
如今有报道称蛇形阻力管与Z形阻力管可以减少纵向扩散效应，使峰型更加尖锐。
除去这些硬件参数外，高通量分析时，色谱工作者有时会忽略方法的耐用性，导致重现性较差。
分析实验室的方法转移时，对于复杂样品的分离，溶剂的改变有时会带来致命的后果——分离度的改变、峰型的改变、提取回收率的改变、溶液稳定性等。
本文所述的情景希望可以为色谱工作者提供额外的问题解决途径。
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