高效液相色谱流动相
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于分离、定量和分析化合物的分析技术。
其中流动相是HPLC中至关重要的组成部分，它对于保证分离效果和分析准确性起着重要的作用。
在使用HPLC进行分析时，流动相的要求有以下几个方面：1.纯度高：流动相的纯度是保证实验准确性的重要因素。
纯度高的流动相可以减少背景噪音和干扰，提高信号峰的清晰度和分辨率。
纯度要求也有助于减少一些物质的附着和积聚，保护HPLC设备的寿命。
2.溶解性好：流动相要有足够的溶解性，以溶解待分离样品中的化合物。
能够完全溶解的样品可以均匀地分布在流动相中，利于成分的迁移和分离。
如果溶解性不好，可能会导致分离效果不佳、峰形不对称和信号峰低。
3.无气泡：气泡在流动相中会造成流动相的剧烈波动，影响分离效果和信号峰的清晰度。
在流动相中可以通过采取适当措施来去除气泡，包括使用真空除泡器、在流动相中添加脱气剂或在流动相上施加超声波。
4.恒定性好：在HPLC分析过程中，流动相的流动速率和成分应该是恒定不变的，以确保分离的稳定性和重复性。
流速的变化可能会导致信号峰的宽度不一致和峰形变形，从而降低分离效果。
5.选择性好：流动相的选择性是指其与待分离样品之间的相互作用程度。
流动相选择性的好坏会直接影响分离效果和峰形。
根据样品的性质和需求，可以选择不同的流动相，如有机溶剂、水或缓冲盐溶液等。
6.可适应性广：流动相可以根据待分离样品的性质和需求进行选择和调整。
不同的样品可能需要不同的流动相组合和浓度梯度，以达到最佳的分离效果。
综上所述，高效液相色谱法中流动相的要求包括：纯度高、溶解性好、无气泡、恒定性好、选择性好和可适应性广。
这些要求的满足将有助于提高分析结果的准确性和可靠性，同时也可以保护HPLC设备的寿命。
高效液相色谱的原理
高效液相色谱的原理高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种基于分子间相互作用力进行化合物分离和分析的方法。
它主要由四个部分组成：流动相，固定相，色谱柱和检测器。
其原理如下：1. 流动相：液相在常温下以高压泵的作用下通过色谱柱，它可以是有机溶剂、水或其他特定的溶剂组合。
流动相在整个过程中起到带动样品运动以及分离化合物的作用。
2. 固定相：为了实现分离，需要使用一种高表面积的固相材料将样品担持在流动相中进行分离。
固定相通常以粉末或颗粒的形式填充在色谱柱中，常见的固定相材料有硅胶、高性能液相色谱柱（如C18）等。
固定相的选择取决于目标分析化合物的特性。
3. 色谱柱：色谱柱是将固定相填充在其中的管状包层，它是高效液相色谱分离的关键部分。
色谱柱的长度、内径和填充粒径等参数会对分离效果产生影响。
较长、较细的柱内填充材料可以提高分离效率，但也会增加分析时间。
4. 检测器：在色谱柱出口处使用检测器来检测化合物的浓度。
常用的检测器包括紫外-可见吸收检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电化学检测器等。
检测器将检测到的信号转化为可见的色谱图谱，用以分析和定量目标化合物。
在高效液相色谱分离过程中，样品溶液被注入到进样器中，经由高压泵送入色谱柱。
在色谱柱中，化合物会与固定相发生不同程度的相互作用，并在流动相的作用下逐渐分离。
分离出的化合物会依次出现在检测器中，通过检测器的信号输出，我们可以获得色谱图，并通过峰面积或峰高等参数对化合物进行定量和定性分析。
高效液相色谱的优点包括分离效率高、分析速度快、样品制备简单等，因此被广泛应用于生物医药、农药残留、环境监测等领域的化学分析。
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化学、生物和制药样品的色谱技术。
在高效液相色谱过程中，流动相的选择和性能对分析的准确性和分离效果有着重要的影响。
下面将详细介绍高效液相色谱法中流动相的要求。
1.基础流动相特性：流动相应具有一定的极性和溶解性能。
常用的流动相包括水和有机溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈等。
流动相的选择应考虑到待分离组分的性质和分析目的，要保证样品能够溶解并很好的分离。
常用的流动相配比为水/有机溶剂（如乙腈）的比例，比如常见的70:30、50:50等。
2.pH值调节：根据待分离物和色谱柱的性质，适当调节流动相的pH值可以改变待分离物的电离状态，从而影响它们在色谱柱上的分配行为。
比如，对于具有酸性基团的分析物，可以通过酸或碱的加入来调节流动相的pH值，以影响它们与色谱固定相之间的相互作用。
3.离子强度调节：有些样品中可能存在电解质，其离子强度会对分离产生影响。
在这种情况下，可以通过添加相应的盐来调节流动相的离子强度，以改变分析物与色谱固定相的相互作用。
常用的盐有甲酸铵、硫酸铵、三氟乙酸等。
4.流速控制：流动相的流速也对色谱分离的效果有着重要的影响。
流速过快可能导致分离不充分，流速过慢则会增加分析时间。
流速的选择需根据待分离物的性质、色谱柱的尺寸和色谱仪的性能等因素综合考虑。
5.除气和过滤：流动相中的气泡和杂质会影响液相的流动性和检测信号的稳定性。
因此，在使用前应对流动相进行除气处理，以减小气泡对色谱分离的干扰。
同时，对流动相进行过滤处理，可以去除其中的固体颗粒和微生物等。
通常使用0.45μm的滤膜进行过滤。
6.流动相稳定性：流动相应具有良好的稳定性，以保证分析结果的准确性和重复性。
一般来说，流动相中的溶液成分要充分溶解，不发生相分离和析出现象。
所以，流动相的配制要求严格，要遵循相应的配方和混合方法，并在使用前进行充分的搅拌和均匀。
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求
高效液相色谱法是一种分离和分析化学样品的优秀技术。
在高效液相
色谱法中，流动相的选择是非常重要的，因为它不仅影响色谱分离的效率，也决定了检测灵敏度和分离度。
在高效液相色谱法中，流动相的要求主要包括以下几个方面：
1.溶解度：流动相应当是对分离物有较好的溶解度。
如果流动相的溶
解度不够好，则可能会导致某些物质无法被很好地分离出来。
此外，流动
相的溶解度过高则可能导致某些物质在固定相上直接沉淀或附着。
2.稳定性：流动相应当在一定时间内保持稳定，以便对样本进行分离
和分析。
如果流动相的稳定性不够好，则可能会出现峰形变、噪声等问题。
3.精度：流动相应当具备一定的精度，以便保证样品分离和检测结果
的准确性和可重复性。
如果流动相的精度不够好，则可能导致结果不一致
或无法进行复现性研究。
4.兼容性：流动相应当与固定相兼容，以便保证正确的分离。
如果流
动相与固定相不兼容，则可能导致某些固定相材料受损，影响分离质量。
5.选择性：流动相应当具备一定的选择性，以便对不同化学物质进行
分离。
选择不同的流动相可以实现对物质的不同选择性和分离效果。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。
其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。
一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。
一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。
溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。
在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。
一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。
2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。
甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。
水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。
3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。
在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。
2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。
3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。
二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。
这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。
2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。
这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。
高相液相色谱的原理
高相液相色谱的原理
高效液相色谱是一种用于化学分析分离技术，原理基于样品分子在液相中的分配和吸附作用。
HPLC的主要组成部分包括流动相、固定相、进样器、色谱柱和检测器。
1.流动相：HPLC中的流动相是由溶剂组成的移动液体，它通过一个高压泵被输送到色谱柱中。
流动相可以是单一溶剂或是由不同溶剂组成的混合物。
不同的样品需要使用不同的流动相来实现分离。
2. 固定相：色谱柱中填充有固定相材料，通常是细小颗粒的吸附剂或分配剂。
固定相选取的原则是与待分离样品分子具有不同亲和性，以实现有效的分离。
常用的固定相材料包括硅胶、脱水纤维素、聚合物胶体、金属氧化物等。
3. 进样器：进样器用于将待分析样品以精确的体积注入到流动相中。
进样过程需要保证样品在进入色谱柱之前均匀混合。
4. 色谱柱：色谱柱是HPLC的核心部分，它是一个细长的管状结构，内壁填充有固定相。
样品在流动相的作用下通过色谱柱，分离成不同成分。
5. 检测器：色谱柱中分离的样品成分在通过检测器时会被检测到。
常用的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
检测器对于不同化合物具有不同的灵敏度和选择性。
在HPLC中，样品分子在流动相和固定相之间同时发生分配和吸附作用。
样品分子的分配行为取决于样品与流动相和固定相之间的相互作用力，如溶解度、极性、电荷等。
不同组分的样品在色谱柱中因为这些相互作用力的差异而实现分离。
分离程度的好坏取决于流动相的选择和固定相的性质。
通过控制流动相的组成、流速和固定相的性质，HPLC可以实现对复杂混合物的高效分离和定量分析。
hplc的流动相
hplc的流动相HPLC的流动相HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析方法，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
在HPLC分析过程中，流动相是至关重要的组成部分，它直接影响着分析结果的准确性和可靠性。
流动相是指在HPLC柱中流动的溶剂或溶液，它能够将样品带入柱中进行分离。
流动相的选择要根据待分析物的性质和目的来确定，常见的流动相包括有机溶剂和水的混合物，以及酸性或碱性缓冲液等。
有机溶剂是HPLC中常用的流动相之一。
有机溶剂具有良好的溶解性和流动性，能够有效地溶解待分析物，并在柱上产生合适的保留时间。
常见的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈等。
选择有机溶剂时，要考虑其溶解度和挥发性，以及对柱和检测器的影响。
水是另一种常用的流动相。
水是广泛存在于自然界中的溶剂，具有良好的溶解性和流动性。
在HPLC中，水常用作极性物质的流动相，能够有效地分离极性化合物。
此外，水还可以与有机溶剂混合使用，以调节溶剂的极性，实现对不同化合物的分离。
除了有机溶剂和水，酸性或碱性缓冲液也常用作流动相。
酸性或碱性缓冲液可以调节流动相的pH值，对某些具有酸碱性的化合物具有良好的溶解性和分离能力。
常见的缓冲液有磷酸盐缓冲液、醋酸缓冲液等。
选择缓冲液时，要考虑其缓冲能力、稳定性以及对柱和检测器的影响。
在HPLC分析中，流动相的选择要根据待分析物的性质和目的来确定。
一般来说，对于非极性物质，可以选择有机溶剂作为流动相；对于极性物质，可以选择水或酸碱缓冲液作为流动相。
此外，还需要考虑流动相与柱和检测器的相容性，以及流动相的流速和温度等因素。
HPLC的流动相是HPLC分析中不可或缺的组成部分，它直接影响着分析结果的准确性和可靠性。
在选择流动相时，需要根据待分析物的性质和目的来确定，并考虑流动相与柱和检测器的相容性。
合理选择和优化流动相的使用，可以提高HPLC分析的效果，为科学研究和生产实践提供可靠的数据支持。
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，其流动相的选择对分离效果至关重要。
常用的流动相分为以下几种：
1. 甲醇：甲醇是一种常用的有机溶剂，具有良好的溶解性和极性。
在反相色谱中，甲醇常与水混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。
2. 乙腈：乙腈是一种有机溶剂，具有较高的极性。
与甲醇类似，乙腈也可以与水混合作为流动相，用于反相色谱中对极性物质的分离。
3. 水：水是一种无机溶剂，具有良好的极性。
在正相色谱中，水常与有机溶剂（如甲醇、乙腈等）混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。
4. 乙酸乙酯：乙酸乙酯是一种有机溶剂，具有较弱的极性。
在正相色谱中，乙酸乙酯可以与水混合作为流动相，用于分离弱极性物质。
5. 庚烷：庚烷是一种非极性有机溶剂，适用于分离非极性物质。
在反相色谱中，庚烷可以与甲醇或乙腈混合作为流动相。
6. 混合溶剂：根据被测物的极性和分离需求，可以选用两种或多种溶剂混合作为流动相。
例如，甲醇与水混合用于反相色谱，乙腈与水混合用于正相色谱等。
流动相的选择应考虑以下因素：
1. 被测物的极性：根据被测物的极性选择相应的流动相，以实现良好的分离效果。
2. 固定相的选择：根据固定相的极性，选择与之匹配的流动相。
3. 检测器的要求：某些检测器对流动相的极性有要求，需根据检测器类型选择合适的流动相。
4. 实验条件：如流速、柱温等实验条件，也会影响流动相的选择。
在高效液相色谱法中，常用的流动相包括甲醇、乙腈、水、乙酸乙酯、庚烷等，具体选择需根据被测物的极性、固定相、检测器要求等因素综合考虑。
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高效液相色谱流动相高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。
2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。
3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。
4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。
液相色谱流动相溶剂的选择步骤选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。
2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。
在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。
在液相色谱常用混合溶剂作流动相。
混合溶剂的P'具有加和性: P'ab= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。
溶剂极性对容量因子的影响: ?正相色谱:k2' / k1' = exp [(P1',P2')/2] ?反相色谱:k2' / k1' = exp[(P2',P1')/2] 在液相色谱中, 一般溶剂的极性变化二个单位, 溶质的分配比差不多能有十倍的变化。
3)溶剂选择性分类按溶剂分子的特殊作用类型(色谱选择性)进行分类, 采用三个不同的常数表示: ?Xe(接受质子参数)~易与含羟基的分子作用(如酸类、酚类); ?Xd(给质子参数)~易与碱性化合物作用(如胺、亚砜等); ?Xn(强偶极参数)~易与偶极距较大的溶质分子作用(如硝基化合物、腈、亚砜和胺类等)。
常用溶剂分成八组。
同一组溶剂的三个选择性参数相近，其选择性相似。
改变色谱选择性，应从相距较远的溶剂组挑选其他溶剂。
4) 流动相的优化通过考察流动相组成对保留时间和分离因子等色谱参数的影响，获得最佳的分离选择性和较短分析时间。
气相色谱的日常维护一、保证汽化室密封垫的气密性1、进样口的硅橡胶垫的寿命与汽化室的温度有关，一般可以用数十次，硅橡胶垫漏气时会引起基线的波动，分析的重现性变差，从而使结果不准。
2、由于进样器穿刺过多，使硅橡胶垫碎屑进入汽化室，如果碎屑过多，高温时会影响基线的稳定，或者形成鬼峰。
因此为保证分析的正常进行请经常更换密封垫和经常检查汽化室的气密性。
二、经常清理汽化室或衬管1、由于长期使用，汽化室和衬管内常聚集大量的高沸点物质，如遇某次分析高沸点物质时就会逸出多余的峰，给分析带影响，因此要经常用有机溶剂清洗汽化室和衬管。
2、汽化室的清洗:卸掉色谱柱，在加热和通气的情况下，由进样口注入无水乙醇或丙酮，反复几次，最后加热通气干燥。
三、气路的经常性检漏1、一般情况下，在购置新仪器时已经进行过检漏，但是在使用过程中如发现灵敏度降低、保留时间延长、出现波浪状的基线等，则应重新检漏，尤其是氢气气路更应该经常性检漏，以免发生危险。
2、有的控制阀门是用“O”形橡胶圈，由于长期磨损，可能漏气;进样口硅胶垫不经常更换、色谱柱没有接好…….都可能漏气。
故要经常检漏～四、热导检测器(TCD)的清洗1、拆下色谱柱，换上一根空的短的色谱柱，通载气，升高柱温箱和检测室温度至200,250度，从进样口注入2ml有机溶剂，重复数次，通气至干燥。
2、清洗时绝对不能通电桥电流。
否则会损坏检测器～～～～五、电子俘获检测器(ECD)的清洗1、清洗法同热导检测器。
2、清洗有机溶剂不能用电负性的有机溶剂如三氯甲烷、四氯化碳等，可用苯、正已烷等。
于250度。
3、对于放射源是Ni63检测器温度在250,300之间，而氚钪源温度应不高4、在清洗ECD时必要时做好个人防护～～六、氢焰检测器(FID)的清洗1、清洗的目的是为了提高检测器的绝缘程度。
2、污染严重时可卸下收集极、极化极、喷嘴。
收集极、极化极可用无水乙醇浸泡擦洗，底座和喷嘴用有机溶剂反复冲洗，通气管路也要彻底清洗，喷嘴口要平整光滑，如有毛刺可用油石或什锦锉、砂纸打磨光滑，再用乙醇反复冲洗，然后用热冷风交替吹干。
3、固定这些电极的绝缘体可在无水乙醇中浸泡10,15min ，用绸子或纱布擦拭干净。
烘干待安装。
4、装配时要恢复原状，做到俯视喷嘴、极化极、收极集三者同心，侧视极化极与喷嘴口二者处于同一水平。
5、注意:清洗完后，所有的配件禁止用手接触，安装时要戴干净手套，所有的工具用前要清洗干燥。
七、氮磷检测器(NPD)及火焰光度检测器(FPD)的清洗由于上述二检测器与FID结构基本相似，故清洗方法参考FID的清洗。
NPD注重铷铢的清洗;而FPD则应注重光窗的清洗，但注意不要将光电管暴露于强光下如何防止FID收集极上的积垢清除收集极积垢，拆洗FID时，常把喷嘴拆断造成了不可挽回的损失。
依据FID工作原理，收集极对地为高阻，一般都在107欧姆以上，所以收集极的一般污染或收集极和静电计连接不良，除非在限制灵敏度操作外不会造成严重的噪声。
所以当操作FID遇到尖峰噪声(基线毛刺)不提倡首先拆洗FID检测器，而应先寻找其它引起噪声的原因如:1.气流比是否合适;2.汽化室严重污染;3.柱流失严重(老化不够);4.静电放大器不稳定;5.极化电压不稳定;6.有关信号连接接触不良;7.市电不稳定;8.接地不正确;9.数据处理机有故障或参数设置不合理;10.气体纯度欠佳(特别是使用各种气体发生器时);11.色谱柱连接以后各接头有严重漏气。
我们经常看到检测器特别是收集极内沉积的白色粉末壮物质，均是硅酮型固定相流失经FID 中燃烧后生成的二氧化硅所致。
为防止二氧化硅在检测器中积聚要注意以下几点:谱柱在连接检测器使用前充分老化。
最好应用纯度较高(如色谱级纯)的固定相OV-101;少用纯度差的DC-200。
在满足分析对FID灵敏度要求的情况下，尽量选择大一些的空气流量，以便把各种燃烧物排出FID。
在确认可能是FID污染引起某种脉冲尖峰干扰噪声后。
其清除积垢方法有以下三种供大家参考使用。
:注射若干微升氟里昂，燃烧形成氟化氢，氟化氢和二氧化硅反应后形成可挥发性物质。
?:拆下检测器的有关部分如:收集极，喷嘴，壳体，绝缘体等。
在超声波浴中清洗两小时，用蒸馏水漂洗。
装入检测器之前，再用丙酮清洗一次。
:若相关部分特别是收集极积垢太多时，可以用细颗粒砂纸打磨清洗也是一种好方法。
谱图异常问题与原因液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。
其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。
对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
a、峰拖尾原因解决方法 1、筛板阻塞 1、a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷 2、填充色谱柱 3、干扰峰 3、a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱 4、流动相PH选择错误 4、调整PH值。
对于碱性化合物，低PH 值更有利于得到对称峰 5、样品与填料表面的溶化点发生反应 5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱 b、峰前延原因解决方法 1、柱温低1、升高柱温 2、样品溶剂选择不恰当 2、使用流动相作为样品溶剂 3、样品过载3、降低样品含量 4、色谱柱损坏 4、见A1、A2 c、峰分叉原因解决方法 1、保护柱或分析柱污染 1、取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞，拆下来清洗。
如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相 2、改变样品溶剂。
如果可能采取流动相作为样品溶剂。
d、峰变形原因解决方法 1、样品过载 1、减少样品载量 e、早出的峰变形原因解决方法 1、样品溶剂选择不恰当 1、a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂 f、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法 1、柱外效应 1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) b、使用小体积的流通池 g、K’增加时，脱尾更严重原因解决方法 1、二级保留效应，反相模式 1、a、加入三乙胺(或碱性样品) b、加入乙酸(或酸性样品) c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品) d、更换一支柱子 2、二级保留效应，正相模式 2、a、加入三乙胺(或碱性样品) b、加入乙酸(或酸性样品) c、加入水(或多官能团化合物)d、试用另一种方法 3、二级保留效应，离子对 3、加入三乙胺(或碱性样品) h、酸性或碱性化合物的峰拖尾原因解决方法 1、缓冲不合适 1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液 i、额外的峰原因解决方法 1、样品中有其他组份 1、正常 2、前一次进样的洗脱峰 2、a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速 3、空位或鬼峰 3、a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积 j、保留时间波动原因解决方法1、温控不当 1、调好柱温2、流动相组分变化 2、防止变化(蒸发、反应等)3、色谱柱没有平衡 3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱 k、保留时间不断变化原因解决方法 1、流速变化 1、重新设定流速 2、泵中有气泡 2、从泵中除去气泡 3、流动相选择不恰当 3、a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相 l、基线漂移原因解决方法 1、柱温波动。
(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
) 1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图 2、流动相不均匀。
(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
)2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。