实验一谷胱甘肽
谷胱甘肽的制备及含量测定
• 3.谷胱甘肽的主要来源 • 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重 要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很 高，达100～1000mg/100g,在人体血液中含26～ 34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～ 15mg/100g,在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～ 33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较 低(0.06～0.7mg/100g)。
谷胱甘肽的制备及含量测定
一、谷胱甘肽的背景知识
• 1.谷胱甘肽是一种什么 样的物质 谷胱甘肽(glutathiose,rglutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种 含γ-酰胺键和巯基的三 肽，由谷氨酸、半胱 氨酸及甘氨酸组成。 谷胱甘肽：还原型谷胱 甘肽、阿拓莫兰、古 拉定
提取工艺
1、取5g干酵母，与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸腾的水中。 2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入，使混合液保持在95-100℃，沸腾5min。 放置冰水中速冷。 3、在2000rpm速度下离心10min，取上清液，即谷胱甘肽抽提液。 4、谷胱甘肽抽提液，调pH至3.0。 5、上处理好的732阳离子交换吸附柱吸附。 6、用0.25mol/L的NaOH溶液洗脱，洗脱流速10ml/min。收集洗脱液， 洗脱终点用亚硝基氰化钠检测。 7、中和洗脱液至pH6.5。
•
谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢、自由基 等氧化从而使它持续正常发挥运输氧的能力。还原型谷胱 甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合，生成水和氧化型 谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 • 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥， 并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶 重新恢复活性。 • 谷胱甘肽还可以抑制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 • 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减 少等症状，有强有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体 的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促进 其排出体外，起到中和解毒作用 。
《2024年谷胱甘肽的合成及其活性的初步评价》范文
《谷胱甘肽的合成及其活性的初步评价》篇一一、引言谷胱甘肽（Glutathione）是一种重要的生物活性分子，在人体内具有广泛的生理功能，包括抗氧化、解毒、抗炎等作用。
随着生物医药的不断发展，谷胱甘肽的合成及其活性的研究越来越受到人们的关注。
本文旨在初步评价谷胱甘肽的合成方法及其活性，为进一步研究其生物医学应用提供基础。
二、谷胱甘肽的合成2.1 合成路径谷胱甘肽的合成主要通过化学合成和生物合成两种方法。
化学合成法主要是通过氨基酸之间的缩合反应得到谷胱甘肽，而生物合成法则利用细胞内的酶促反应进行合成。
本文将主要介绍化学合成法。
2.2 化学合成法化学合成法主要包括L-谷氨酸和L-半胱氨酸之间的缩合反应。
首先，将L-谷氨酸和L-半胱氨酸在适宜的pH值下进行混合，加入缩合剂进行缩合反应，然后进行脱水和脱氨处理，得到谷胱甘肽。
该方法操作简便，适合规模化生产。
三、谷胱甘肽的活性评价3.1 抗氧化活性评价谷胱甘肽具有较强的抗氧化能力，可以清除体内的自由基，保护细胞免受氧化损伤。
通过体外实验，我们可以评价谷胱甘肽的抗氧化活性。
具体方法为：将不同浓度的谷胱甘肽与自由基反应体系进行反应，通过测定反应体系中剩余自由基的含量来评价谷胱甘肽的抗氧化活性。
3.2 解毒活性评价谷胱甘肽还具有解毒作用，可以与有毒物质结合形成无毒或低毒的化合物，从而保护细胞免受毒性损伤。
通过体内和体外实验，我们可以评价谷胱甘肽的解毒活性。
具体方法为：将谷胱甘肽与有毒物质进行共孵育，然后测定有毒物质在体内的代谢情况和细胞毒性变化，从而评价谷胱甘肽的解毒活性。
四、实验结果与讨论4.1 化学合成法实验结果通过化学合成法合成的谷胱甘肽纯度较高，产率稳定，适合规模化生产。
同时，该方法的反应条件温和，对环境友好，符合绿色化学的要求。
4.2 活性评价结果与讨论通过抗氧化活性和解毒活性的评价，我们发现谷胱甘肽具有较强的抗氧化和解毒能力。
在抗氧化方面，谷胱甘肽可以有效地清除自由基，保护细胞免受氧化损伤。
谷胱甘肽的实验报告
一、实验背景谷胱甘肽（Glutathione，GSH）是一种非蛋白巯基化合物，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，广泛存在于生物体内。
近年来，研究表明谷胱甘肽具有多种生物学功能，如抗氧化、解毒、免疫调节等。
本实验旨在探究谷胱甘肽的抗氧化活性，为其在医药、食品等领域的应用提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料（1）谷胱甘肽标准品（纯度≥98%）（2）维生素E标准品（纯度≥98%）（3）FeSO4·7H2O（4）EDTA-Na2（5）无水乙醇（6）蒸馏水（7）721分光光度计（8）电子天平2. 实验方法（1）标准曲线绘制①准确称取维生素E标准品10mg，置于100mL容量瓶中，加入无水乙醇溶解，定容至刻度，配制成100μg/mL维生素E标准溶液。
②分别取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL维生素E标准溶液于10mL容量瓶中，加入0.1mol/L FeSO4·7H2O溶液1.0mL，EDTA-Na2溶液1.0mL，混匀。
室温下放置10min。
③以蒸馏水为空白，于510nm波长处测定吸光度。
④以维生素E浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（2）谷胱甘肽抗氧化活性测定①准确称取一定量的谷胱甘肽标准品，加入无水乙醇溶解，配制成一定浓度的谷胱甘肽溶液。
②取1.0mL谷胱甘肽溶液于10mL容量瓶中，按照维生素E标准曲线绘制方法进行实验。
③以蒸馏水为空白，于510nm波长处测定吸光度。
④根据标准曲线计算谷胱甘肽的抗氧化活性。
三、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以维生素E浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=0.066x+0.0015，R²=0.998。
2. 谷胱甘肽抗氧化活性测定取1.0mL谷胱甘肽溶液进行实验，测定吸光度为0.068。
根据标准曲线计算，谷胱甘肽的抗氧化活性为80μg/mL。
四、结论本实验结果表明，谷胱甘肽具有一定的抗氧化活性，其抗氧化活性为80μg/mL。
谷胱甘肽转移酶抑制剂筛选方法一
谷胱甘肽转移酶（GST）还原型谷胱甘肽占绝大多数。
谷胱甘肽转移酶 (GST) 是广泛分布于哺乳动物、植物、鸟类、昆虫、寄生虫及微生物体内的一组多功能同工酶。
GST是由23-29KDa的不同亚基构成的同源二聚体，每一类GST同工酶中组成的亚基种类有多种，因此编码GST同工酶的基因是一个巨大的超基因家族。
GST主要功能是催化某些内源性或外来有害物质(过氧化物、α, β2不饱和醛酮、烷基或芳香基化合物)的亲电子基团与还原型谷胱甘肽的巯基偶联，增加其疏水性使其易于穿越细胞膜，分解后排出体外，从而达到解毒的目的，有抑制细胞癌变的功能。
通常认为，谷胱甘肽转移酶的作用是催化谷胱甘肽与外来的或内在的有害物质亲电结合排出体外而起到解毒的作用，但是对于治疗癌症药物的研究主要是针对能够抑制谷胱甘肽转移酶（GST）活性的酶抑制剂，而不是GST催化解毒作用。
研究表明，GST的酶活性水平与肿瘤的耐药性密切相关心。
因此，GST可能是治疗耐药肿瘤的潜在药物作用靶点。
与GSTs相关疾病有：人类癌症包括胃癌，结肠癌，胰腺癌和肺癌动脉粥样硬化和冠心病。
近年来对GST抑制剂的研究越来越多，研究报道的GST抑制剂主要有：依他尼酸（EA）及其类似物、TLK199及其类似物、黄酮类化合物、双功能基化合物，还有其他一些抗虐药物如乙嘧啶和奎尼丁等等。
抗肿瘤药物与GSH作用模式图：图中GST-∏是人体内一种Ⅱ相代谢酶，其对肿瘤的耐药作用主要由其解毒功能引起，其作用机制：①催化谷胱苷肽(GSH)与亲电子药物如各种烷化剂结合，增加其水溶性，加速其排泄而使药效减低；②清除葸环类药物等产生的自由基，减轻药物自由基对细胞的损伤；③通过直接与药物结合的形式降低药物活性等。
机理解释：图中是一个肿瘤细胞，当治疗肿瘤的药物顺铂进入细胞时，GST就会催化谷胱甘肽GSH与顺铂结合而将其排出体外，所以为了加强药效，就需要使GST的功能受到抑制，GST 抑制剂占据GST酶活性位点，使GST无法催化GSH与顺铂结合，这样就会降低抗肿瘤药物的耐药性。
谷胱甘肽的还原实验报告
一、实验目的1. 了解谷胱甘肽（GSH）的还原特性。
2. 掌握还原型谷胱甘肽（GSH）的制备方法。
3. 探讨GSH在生物体内的抗氧化作用。
二、实验原理谷胱甘肽（GSH）是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽，广泛存在于生物体内。
GSH具有强大的抗氧化作用，可以清除体内的自由基，保护细胞免受氧化损伤。
本实验通过化学还原法，将氧化型谷胱甘肽（GSSG）还原为GSH，并观察其抗氧化活性。
三、实验材料1. 实验试剂：氧化型谷胱甘肽（GSSG）、NADPH、FAD、Tris-HCl缓冲液、pH 7.4、pH 8.0、pH 9.0的磷酸盐缓冲液、pH 10.0的氢氧化钠溶液、0.1 mol/L的EDTA-Na2溶液、0.1 mol/L的FeCl3溶液、2,2'-联氮-二（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸二钠盐）（ABTS）溶液。
2. 实验仪器：紫外-可见分光光度计、恒温水浴锅、高速离心机、电子天平、移液器、比色皿等。
四、实验方法1. GSH的制备将一定量的GSSG溶解于pH 7.4的Tris-HCl缓冲液中，加入适量的NADPH和FAD，在37℃水浴锅中反应30分钟。
反应结束后，用高速离心机离心去除沉淀，收集上清液即为GSH。
2. GSH的鉴定取一定量的GSH溶液，加入适量的FeCl3溶液，观察溶液颜色的变化。
若溶液颜色由黄色变为棕色，则说明GSH已成功制备。
3. GSH的抗氧化活性检测将一定量的GSH溶液加入ABTS溶液中，观察溶液颜色的变化。
以相同浓度的ABTS溶液作为对照，在532 nm处测定溶液的吸光度。
通过计算GSH的还原能力，评价其抗氧化活性。
五、实验结果1. GSH的制备将GSSG溶解于pH 7.4的Tris-HCl缓冲液中，加入NADPH和FAD，反应30分钟后，溶液颜色由黄色变为棕色，说明GSH已成功制备。
2. GSH的鉴定将制备的GSH溶液加入FeCl3溶液中，溶液颜色由黄色变为棕色，证明GSH已成功制备。
谷胱甘肽含量测定
0.1mol/L(ｐＨ６.８)磷酸钠缓冲液：配制方法见附录。
4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（5，5’-dｉthiobis-2-nitｒobｅnoｉc acid，ＤＴNB)溶液:称取1５．8mg DTNB，用0.1mol／L、pＨ6.8磷酸缓冲液溶解,定容至10ml，混匀,4℃保存。现用现配。
另取２支试管,分别加入1mｌ上清液、1ml 0.1mｏl/L磷酸缓冲液(pH7.７)。向一支试管加入０.５ml4mmoｌ/LDTNB溶液,另一支试管中加入0.５ｍl0.1moｌ/L磷酸缓冲液（pH6.8）,将两支试管置于25℃保温１0miｎ。按照制作标准曲线的方法,迅速测定显色液在波长412nm处的吸光度,分别记作ODs和ODｃ。重复3次。
0
2.提取
取材后,称取2.5g样品置于研钵中，加入5mｌ经4℃预冷的50g／L三氯乙酸溶液(含5mmol／L Na2-EDＴA）,在冰浴条件下研磨成匀浆后，于4℃、１2000g离心20min。收集上清液来测定谷胱甘肽含量，测量提取液体积。
3.测定
取1支试管,依次加入1ml蒸馏水、1ｍl０.１mol/L磷酸缓冲液（ｐH7.7)和０.5ml 4mmol/L DTNB荣毅仁，混匀,即为绘制标准曲线的0号管液。以此溶液作为参比,在波长41２ｎm处对分光光度计进行调零。
项目
试管号
０
1
２
3
4
5
100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液/ｍl
0
０.2
0．4
0．6
0．8
1．0
蒸馏水/ml
１.0
0.8
０．６
0.4
0．2
0
０.1ｍol／LｐH7.7磷酸缓冲液／ml
谷胱甘肽(GSH)含量测定
谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。
3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。
五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。
2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。
3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。
谷胱甘肽的提取流程
谷胱甘肽的提取流程1.首先，取动物组织，如鸡蛋、鱼或禽类的皮肤、鱼鳃等，将其清洗干净。
First, take animal tissues such as egg, fish or poultry skin, fish gills, etc., and wash them clean.2.然后，用生理盐水或其他缓冲液将组织切成小块，使其保持新鲜。
Then, cut the tissues into small pieces with physiological saline or other buffers to keep them fresh.3.接着，加入酶溶液，如胰酶，将组织悬浮液在37°C下摇床振荡4-12小时。
Next, add enzyme solution, such as trypsin, and suspend the tissue in a shaker at 37°C for 4-12 hours.4.经过酶解后，离心沉淀。
取上清液，进行多次洗涤和离心，以除去杂质和残余酶。
After enzymatic hydrolysis, centrifuge and collect the supernatant, then wash and centrifuge multiple times to remove impurities and residual enzymes.5.将上清液经过滤纸过滤，得到粗提物，再用硫酸沉淀分离杂蛋白。
Filter the supernatant through filter paper to obtain crude extract, and then use sulfuric acid precipitation to separate impurities.6.过滤后，将上清液中的谷胱甘肽在冰醋酸中沉淀，再用乙醇洗涤并干燥。
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实验原理
• 谷胱甘肽的性质
• 从活性干酵母中提取谷胱甘肽的原理 及评价方法优劣的指标 • 提取的注意事项 • 工业上提取谷胱甘肽的流程
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谷胱甘肽的性质
1. 谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽， 半胱氨酸侧链基团上连有一个活泼的巯基决定了其有氧 化型（GSSG）和还原型（GSH）两种形式。 2. 谷胱甘肽的分子量为307.2，等电点为5.93，溶于水、 稀醇、有机酸、酯类，不溶于醇、醚、丙酮；在水溶液 中易被氧化，在pH3.0~7.0环境下较稳定。 3. 谷胱甘肽广泛存在于动、植物和微生物体内，干酵母中 含有约1％谷胱甘肽，是提取谷胱甘肽最常用的原料。 • 生理功能 抗氧化、清除自由基、解毒（CO、重金属）等。
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实验结果记录与分析
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相关应用
医学：1其巯基以螯合重金属、氟化物、芥子气等毒素中毒 2在肝炎、溶血性疾病以及角膜炎、白内障和视网膜疾病 等，作为治疗或辅助治疗的药物。 3近来日本学者发现谷胱甘肽具有抑制艾滋病毒的功能 4养颜美容护肤，防止皮肤老化及色素沉着，减少黑色素 的形成 食品 1加入到面制品中，缩短面包制造时间并起到食品营 养的强化作用及其他功能 2加入到酸奶和婴幼儿食品中，相当于维生素C，可起到 稳定剂的作用 3加到肉制品和干酪等食品中，具有强化风味的 效果。
从酵母中提取谷胱甘肽
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4/21/2014中粗提谷胱甘肽的各种方法； • 掌握谷胱甘肽含量测定的方法。
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实验材料
• 试剂：活性干酵母粉，1mol/L盐酸， 0.25mol/L氢氧化钠，硫酸铵饱和溶液，固体 硫酸铵，8mol/L氨水，1%亚硝基铁氰化钠 001×7树脂 （凝胶型苯乙烯强酸性阳离子交 换树脂） 仪器：真空抽滤机 分光光度计 层析
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原理
• 提取原理
谷胱甘
肽是小分子物质，且在水中的溶解度较大， 故可选择一些温和的方法从干酵母中提取谷 胱甘肽。 在细胞不完全破碎的条件下，只要细 胞壁表面出现一些裂缝，谷胱甘肽就可以扩 散到水中
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工业上提取谷胱甘肽的流程
诱变剂：亚硝基胍、紫外线
酵母 高产酵母 热水抽提 离心去残渣
pH4.5左右的磷 酸盐缓冲液洗脱
吸附层析法： 壳聚糖做吸附 剂
提取液调 pH7.0左右
浓缩
脱色
喷雾干燥
成品
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注意事项
• • • • 提取时间要尽量短，防止其被氧化； 提取温度要尽量低，但反复冻融谷胱甘肽易分解 谷胱甘肽在偏酸性的条件下易保持还原态； 适当的固液比，既保证尽量多的谷胱甘肽被溶出 也保证提取液中谷胱甘肽的浓度较高，便于后续的 分离纯化。 • 适当的搅拌速度，既保证适当的传质速度，便于 谷胱甘肽扩散到溶剂中，也保证工业生 产中能耗适当。
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提取方法介绍
1. 热水提取法：1g 干酵母，加15mL 热水，95度水浴10min，立即冷却， 取8mL离心（5000rpm，15min），取5mL上清液滴定，记录滴定体积。 2. 冷冻研磨处理后有机酸搅拌提取：1g 干酵母，先在研钵中研细，加 入10mL蒸馏水混匀，－20度冷冻呈半固体状，研磨5min，加入5mL36 ％乙酸，室温下搅拌提取15min，取8mL离心（5000rpm，15min），取 5mL上清液滴定，记录滴定体积。 3. 酸热处理酸水搅拌提取：1g干酵母，加入15mL 2％ H2SO4，60度水浴 下搅拌抽提15min，立即冷却，取8mL离心（5000rpm，15min），取 5mL上清液滴定，记录滴定体积 4. 有机酸－稀醇搅拌提取：1g 干酵母，加入15mL 乙酸－乙醇混合液 （v:v=2:1），室温下搅拌抽提15min，取8mL离心（5000rpm，15min） 取5mL上清液滴定，记录滴定体积。 注：待滴定的谷胱甘肽提取液置4度冰箱保存，防止其被氧化
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含量测定
1.在试管中加入1g硫酸铵粉末，1ml谷胱甘肽
待测液，3ml硫酸铵饱和溶液，摇匀 2.加0.5ml1%亚硝基铁氰化钠，再加入 0.7ml8mol/L氨水溶液，混合 3.用分光光度计在525nm进行比色，读取吸光 度 4.根据公式计算出谷胱甘肽的浓度 Y=4.0914X+0.0028 Y是光密度值，x是谷胱甘 肽的浓度，单位mg/l