开题报告1稿教材
《优秀传统文化与语文教学》开题报告1

《中华优秀传统文化与语文教学有效结合途径的研究》课题开题报告论文一、课题的背景与课题的提出在全球化时代背景下, 文化软实力日益成为综合国力的重要组成部分, 而中华民族五千多年的悠久文明和灿烂文化正是我国文化软实力的集中体现。
当前, 加强中华优秀传统文化教育, 对于引导青少年学生坚定走中国特色社会主义道路、实现中华民族伟大复兴中国梦的理想信念, 具有重大而深远的历史意义。
这是教育系统持续推进社会主义核心价值体系建设的重要和关键环节。
党的十七届六中全会提出要建设优秀传统文化传承体系, 十八大对这一问题进一步做出了战略部署, 十八届三中全会强调要完善中华优秀传统文化教育。
习近平总书记就中华优秀文化的传承与弘扬多次作出重要指示, 为新形势下加强中华优秀传统文化教育指明了方向, 提供了强大动力。
自教育部印发了《完善中华优秀传统文化教育指导纲要》以来, 我校领导及语文组老师就开始了认真学习和积极探索思考。
在中国社会向社会主义市场经济转型过程中, 随着改革开放,外来文化的渗透, 越来越多的中国孩子热衷于外来文化,越来越远离自己的传统文化, 甚至对祖国的传统文化产生了冷漠感, 许多优秀民族传统文化正在消失, 用方块汉字传承的中华民族几千年的文化正面临断层的危险。
如何弘扬中华优秀传统文化, 激发人们的爱国主义情怀, 特别是在语文教学中更好地向学生传播传统文化, 这是每一个语文教育工作者应该且必须认真思考的问题。
《语文新课程标准》指出: “语文是最重要的交际工具, 是人类文化的重要组成部分。
工具性和人文性的统一, 是语文课程的基本特点。
语文课程应致力于学生语文素养的形成与发展, 应培育学生热爱祖国语文的思想感情。
在语文教学过程中, 在语言能力发展的同时, 培养爱国主义情感, 社会主义道德品质, 逐步养成正确的价值观念和积极的人生态度, 提高文化品位和审美情趣。
”中国传统文化受西方文化冲击程度之烈为亘古未有。
年轻一代正越来越远离自己的传统文化, 我们培养了一批无根的孩子, 如果一个人缺失自己民族的传统文化, 就不能明智地了解自己的过去和审视眼前的处境, 就很有可能缺乏社会责任感。
开题报告(定稿)

开题报告(定稿)开题报告(定稿)一、项目背景与选题意义1.1 项目背景项目背景说明项目的起源、背景以及产生该项目的原因。
1.2 选题意义选题意义详细阐述所选项目的重要性、现实意义以及对学科发展、社会经济发展的影响。
二、项目研究目标与内容2.1 项目研究目标明确项目研究的总体目标,并详细说明目标的具体要求。
2.2 项目研究内容项目研究的各个方面内容及涵盖的范围。
三、文献综述3.1 国内外研究现状对国内外相关领域的研究进展进行梳理,分析当前研究的热点和存在的问题。
3.2 国内外研究的差距指出当前国内外研究之间的差距,简要说明需要进行本研究的原因。
四、研究方法与技术路线4.1 研究方法详细介绍项目研究所采用的研究方法,包括实证研究、理论分析、实验模拟等。
4.2 技术路线列出研究过程中所需的关键技术,并给出实施的步骤和方案。
五、项目进度计划5.1 主要任务与时间节点将项目的主要任务划分为各个时间节点,并说明每个任务的完成时间。
5.2 里程碑节点设立项目的重要里程碑节点,用于检查项目进展情况。
六、预期成果与创新点6.1 预期成果明确本项目预期达到的主要成果。
6.2 创新点分析本项目的创新之处,突出本研究与现有研究的差异与创新。
七、存在的问题与解决方案7.1 存在的问题梳理当前项目研究中存在的问题,包括技术、理论等方面。
7.2 解决方案提出解决问题的具体方案,包括方法、步骤以及时间安排。
八、项目预算与资金申请8.1 项目预算列出项目所需的各项费用,包括设备购买、实验费、人员奖励等。
8.2 资金申请说明所需的资金数量,并给出资金申请的渠道及方式。
九、风险与安全性分析9.1 风险分析分析项目实施过程中可能出现的风险,并阐述相应的风险应对措施。
9.2 安全性分析评估项目实施过程中的安全性,并提出项目安全管理措施和防范措施。
十、项目评估与推广应用10:1 项目评估设立合理的评估指标,对项目实施过程和成果进行评估。
10:2 推广应用阐述项目成果的推广应用价值,提出相关推广策略和措施。
【开题报告】开题报告示例一

开题报告示例一一、研究背景与意义随着时代的发展,[领域名称]在我国逐渐展现出其独特的魅力与价值。
然而,在深入挖掘和传承这一领域的过程中,我们不可避免地遇到了诸多难题。
为此,本研究旨在通过对[领域名称]的深入研究,揭示其内在规律,为我国[领域名称]的发展提供有益的借鉴与启示。
二、研究现状与评析近年来,国内外学者对[领域名称]的研究取得了丰硕的成果。
然而,在众多研究成果中,仍存在以下不足:1. 对[领域名称]的内涵和外延缺乏系统性的梳理;2. 对[领域名称]的历史演变和现状分析不够深入;3. 缺乏对[领域名称]在实际应用中的创新与发展。
鉴于此,本研究将结合当前[领域名称]研究的现状,对已有成果进行评析,为后续研究提供理论支持。
三、研究内容与方法(一)研究内容1. 对[领域名称]的内涵和外延进行系统梳理;2. 分析[领域名称]的历史演变和现状;3. 探讨[领域名称]在实践中的应用与创新;4. 提出促进[领域名称]发展的策略与建议。
(二)研究方法1. 文献研究法:通过对国内外相关文献的梳理与分析,掌握[领域名称]研究的最新动态;2. 案例分析法:选取具有代表性的[领域名称]案例,深入剖析其成功经验与不足;3. 实证研究法:结合实际调查,对[领域名称]的发展状况进行实证分析;4. 比较研究法:对比国内外[领域名称]的发展,寻求适合我国国情的创新发展路径。
四、研究计划与进度安排(一)研究计划1. 第一阶段:文献综述与理论基础构建(1-3个月)2. 第二阶段:案例分析与实证研究(4-6个月)3. 第三阶段:成果总结与撰写论文(7-9个月)(二)进度安排1. 第1个月:完成文献检索与阅读;2. 第2个月:撰写文献综述报告;3. 第3个月:完成理论基础构建;4. 第4个月:选取案例并进行分析;5. 第5个月:进行实证研究;6. 第6个月:撰写案例分析与实证研究报告;7. 第7-9个月:总结研究成果,撰写论文。
五、预期成果与创新点(一)预期成果1. 形成一套关于[领域名称]的系统性理论框架;2. 揭示[领域名称]在实际应用中的创新与发展路径;3. 为我国[领域名称]的发展提供有益的借鉴与启示。
开题报告发言稿

开题报告发言稿
尊敬的各位老师、亲爱的同学们:
大家好!今天我很荣幸能够站在这里,向大家介绍我的开题报告。
我的课题是关于“环境保护与可持续发展”,我将从环境问题
对人类社会的影响以及可持续发展的重要性这两个方面展开研究。
首先,我将探讨环境问题对人类社会的影响。
随着工业化和城
市化的加速发展,环境问题已经成为全球性的难题。
空气污染、水
污染、土地沙漠化等问题严重影响了人类的健康和生存环境。
我们
每个人都应该意识到环境问题的严重性,积极采取行动来改善环境,保护地球家园。
其次,我将探讨可持续发展的重要性。
可持续发展是指在满足
当前需求的同时,不损害子孙后代满足其需求的能力。
在经济发展
的同时,我们必须考虑到对环境和资源的影响,实现经济、社会和
环境的协调发展。
只有这样,我们才能够为子孙后代留下一个更加
美好的世界。
在我的研究中,我将通过调查问卷、实地考察等方法,收集相
关数据,分析环境问题对人类社会的影响,探讨可持续发展的路径和措施。
我相信通过我的努力,可以为环境保护和可持续发展提供一些有益的建议和思考。
最后,我希望在座的各位老师和同学们能够给予我宝贵的意见和建议,帮助我完善我的研究方案,为实现环境保护和可持续发展贡献自己的一份力量。
谢谢大家!。
开题报告演讲稿

开题报告演讲稿尊敬的各位老师、亲爱的同学们:大家好!今天我来为大家分享我的开题报告演讲稿,主题是关于我所研究的课题的初步探索与思考。
首先,请允许我简要介绍一下我的研究背景和目的。
我所在的研究领域是当前热门的某某领域,我选择了本课题进行探究的主要原因在于其在实践中的重要性以及在理论方面的深度广度。
我期望通过本次探究,为解决某某领域的某些关键问题提供新的视角和方法。
接下来,我将详细介绍我的研究内容和目标。
一、研究背景及意义随着科技的快速发展,我们所研究的领域正在面临前所未有的机遇与挑战。
在此背景下,本课题的研究具有非常重要的现实意义和理论价值。
通过对该领域已有文献的梳理与分析,我认识到本研究旨在解决的问题具有重要的理论和实践价值,并对未来该领域的发展有着深远的影响。
二、研究内容与方法本课题主要探究的是关于某某领域的核心问题,我将从以下几个方面展开研究:一是理论基础的研究,二是实证分析的设计与实施,三是理论与实践相结合的策略探讨。
在研究方法上,我将采用文献综述法、实证研究法以及案例分析法等多种方法相结合的方式,确保研究的科学性和可行性。
三、研究目标本次研究的目的是通过对现有理论和实践的梳理与分析,找出本领域的瓶颈问题并尝试提出解决方案。
我希望通过本研究达到以下几个目标:一是深化对某某领域的理解;二是为解决该领域的问题提供新的思路和方法;三是推动该领域的进一步发展。
四、研究进度安排接下来的一年里,我将按照以下步骤进行深入研究:首先是收集相关文献并进行梳理分析;其次是进行实证研究的准备工作;然后是开展实地调研和数据分析;最后是撰写研究报告并得出结论。
我将严格按照时间节点推进研究工作,确保按期完成。
五、预期成果与创新点通过本次探究,我预期能够取得一系列研究成果,包括学术论文、研究报告等形式的成果。
同时,我希望能够在解决本领域核心问题的过程中有所创新,提出具有前瞻性的观点和方法。
创新点主要体现在以下几个方面:一是理论创新,二是方法创新,三是实践创新。
开题报告书一

题 目 论《围城》的女性形象及现实意义 辉______ 学生姓名 ___赵 学
号 __ 10040208___ __汉语言文学 1002 班___ 绍 华______
专业班级
指导老师 ___杨
2014 年月日
论文(设计题目
论《围城》中的女性形象及现实意义
课题目的、意义、国内外有关研究动态 (一)目的、意义: 在小说《围城》中,钱钟书先生站在男性视角,以自己特有的冷静、刻薄的 写作手法,对其笔下的女性进行了毫无保留地讽刺和批判。 本文通过以女性视角 运用女性主义理论及批评方法并且结合具体时代的社会文化背景,从女性特有 的心理思维模式,具体情感、行为等对《围城》中的女性形象、女性意识进行全 面分析。从而发掘出对新时期现代女性的审美特点、经济独立、政治地位、家 庭话语权,以及对爱情的态度、对职业的考虑和对女性自身发展的需求等方面 的现 实意义。 (二)国内外有关研究动态: 钱钟书先生的小说《围城》曾分别在二十世纪八十年代初和九十年代初形 成两次热潮,八十年代, 《围城》在海外被译成英、俄、日、法等多种文字, 同时有许多人为其出了不少研究和推崇性质的文章及专著,最早是美籍华裔学 者夏志清在《中国现代小说史》中极力推崇《围城》 ,这一次还局限在文学界 这个小圈子里,第二次则由于《围城》被搬上电视荧幕,其影响几乎扩及全社 会,形成名副其实的“围城热” 。与此同时,对《围城》的研究亦得到很快的 发展,并且已和海外的研究接上了轨。其中特别是对《围城》的主题、结构、 人物形象、语言风格等方面用力较多,成绩也较为突出。现在,围城的探索仍 在继续。
指导教师意见:
签名:
年
月
日
开 题 报 告 会 纪 要
时 地
开题报告(第一稿)

在招聘渠道的选择上,可以选择猎头、内部招聘、辅以专场招聘会、网络招 聘、校园招聘、平面媒体等丰富多样的招聘渠道。招聘的重点在于企业的管理人 员,选择主要通过企业内部招聘为主。 4、衰退期的企业招聘人才策略
人力资源管理工作随着企业的发展,中国经济的不断进步,全球经济一体化 的逐步交融,会呈现出很多新的变化,人力资源从业者应该紧密跟踪这些变化。
不断创新,其核心目的在与不断推进企业发展和企业战略实现,确保企业经营的 成功和企业规模、整体经营绩效的不断提升,使企业保持鲜活的创造力。
企业最初创业前期的孕育阶段主要有以下特点:企业的创始人通常具有新技 术或企业家精神,管理活动通常被忽略企业的主要精力几乎完全用在生产和销 售新产品上。企业资金实力不强,市场抵抗力弱,时刻面临着巨大的生存压力, 其灵活性和成长性较强。
此时,在招聘渠道的选择上,对于一般岗位的员工,可以通过的校园招聘和 网络招聘和这类费用低、选择面较广的招聘方式,对于一些对工作经验要求不是 很高的岗位通过招聘应届生补充。其次,在员工入职待遇的选择上。可以选择通 过较低保障、较高弹性的薪酬设计方式让员工和企业共同分担风险和分享成果, 对于一些关键岗位的员工可以采用类似股票期权的方式进行长期激励。再次,人 才招聘吸引的手段上,主要依靠公司良好的行业发展前景、工作的挑战性、职业 的成长性和领导者的个人魅力等方面加以吸引。 2、成长期的企业招聘人才策略
嘉兴学院南湖学院毕业论文(设计)开题报告
题 目: A 企业人才招聘方案设计
系 别: 商学系
专 业: 人力资源专
班 级: 人力 N082
开题报告 (一稿)

2009年,朱笛发表在《教育教学研究》上的《新课程背景下农村学生学习困境的分析》(2009年4月)主要从学习困境现象的分析、学习过程、学习结果等方面对从村学生的学习现状进行分析。
3、通过阅读相关书籍完成论文的提纲。
4、通过前期的准备工作来完成开题报告。
研究工作进度安排及各阶段预期达到的目标:
第一阶段:2016年10月—2016年11月
与指导教师一起商讨制定研究课题,广泛收集相关的文献资料并进行分析,确定论文题目。
第二阶段:2016年12月—2016年1月
收集相关文献资料,撰写开题报告,在指导老师的指导下反复修改开题报告,确定开题报告,在指导老师同意后进行开题答辩;同时编写调查问卷,进行问卷调查。
以上都是前人对农村中小学生自主学习现状从社会、学校的教学模式、学习氛围等方面研究,很少从学生自身找原因。所以本文的突破点从农村学生自身出发来激发他们的学习兴趣,培养自主学习的习惯;以及从老师方面加强对学生的引导构建学习的氛围;学校方面应该注重对自主学习氛围的营造,来弥补前人研究方面的不足之处。
研究内容
2.1学生对学习缺乏兴趣
2.2家长对学生学习不重视
2.3班风对学习的影响
2.4老师对自主学习重视度不够
2.5学校对自主学习重视度不够
3、提高中小学生自主学习的建议
3.1 学生自身重视自主学习
3.2家长应该鼓励学生自主学习
3.3老师提倡自主学习
3.4学校营造自主学习的氛围
完成论文的条件及拟采用的研究方法:
1.拟定论文题目及确定研究方法;
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陇东学院生命科学与技术学院本科学士学位论文开题报告题目:大肠杆菌噬菌体分离纯化研究学院:生命科学与技术学院专业:生物科学班级: 10级生科(1)班姓名:郑小云指导教师:毛宁2013 年 5 月 1日大肠杆菌噬菌体分离纯化研究一、选题依据1、选题目的噬菌体是一类感染细菌、放线菌、真菌等微生物的病毒,体积微小、结构简单、具有严格的寄生性,广泛存在于自然界的各个角落,包括河水、土壤、污水以及健康人的机体中。
噬菌体作为指示微生物,在监测水质环境、指示污染程度等方面的研究有非常重要的作用。
因此,分离和研究噬菌体,弄清噬菌体与其宿主之间的生态学关系,对于监测水质环境,控制水质污染等方面的工作无疑具有重要指导意义。
大肠杆菌噬菌体,是指寄生在大肠杆菌内的一种噬菌体,属于细胞病毒的一种,具有专一性,一种噬菌体只在一种细菌中生活,而不能在另一种细菌中生活。
它主要存在于一些动物的粪便和污染水源中,肠出血性大肠杆菌引起的疾病症状包括腹部绞痛和腹泻,一些病例可能发展为血性腹泻(出血性大肠炎)。
潜伏期3至8天,平均为3至4 天。
大多数病人10天内康复,但是有少数病人(特别是幼儿和老年人)的染病可能发展为威胁生命的疾病,例如溶血尿毒综合症(HUS)。
溶血尿毒综合症的特点是急性肾衰竭、溶血性贫血和血小板减少。
据统计63%至85%的病例是由于通过食物感染病菌的。
大肠杆菌噬菌体是一种可以感染大肠杆菌并且在大肠杆菌体内复制繁殖的病毒,当其感染大肠杆菌后,便会破坏大肠杆菌的细胞结构以及引起细菌致死,待大肠杆菌死亡之后,繁殖的大量噬菌体便会冲破死亡大肠杆菌,再去感染别的大肠杆菌,最终引起大肠杆菌的大范围死亡。
鉴于噬菌体有溶菌作用和严格的种型特异性,可利用噬菌体作细菌的鉴定和分型,亦可用于检测标本中的未知细菌和防治某些传染病。
噬菌体作为一种新的治疗制剂已受到广泛关注[ 1],本实验旨在通过分离大肠杆菌噬菌体, 研究其生理特性,为噬菌体作为一种生物制剂用于治疗细菌性感染提供实验依据。
为预防和治疗大肠杆菌感染引起的疾病探索一种极为有效的方法。
2、选题意义通过这个实验我们可以研究清楚大肠杆菌噬菌体各方面的生理特性,以及大肠杆菌噬菌体与大肠杆菌的关系,可以探究出大肠杆菌噬菌体感染大肠杆菌的最佳条件,测出大肠杆菌噬菌体的效价和最佳感染复数,对于利用大肠杆菌噬菌体治疗大肠杆菌引起的疾病方面的研究提供实验依据,这样可以为大肠杆菌感染患者做出一份贡献,帮助他们早日康复,不受病菌的折磨。
通过这个实验题目让我将所学的生物专业课程应用到实验中去,在实验过程中总结和运用四年所学的知识;同时也通过实验过程复习有关实验的基础知识和基本操作方法,锻炼实验操作能力,为以后工作打下坚实的基础。
3、国内外研究现状英国细菌学家和内科医生Frederick Twort和法裔加拿大细菌学家Flix DHerelle分别在1915年和1917年独立发现了噬菌体,不久之后就用来治疗感染性疾病。
dHerelle最早从来自痢疾的临床样本研究中观察到噬菌体滴度的增加正好伴随着病人的康复过程。
他将噬菌体称为“外源性免疫因子”[2] 。
1934年美国科学家报道了利用噬菌体疗法治疗肠球菌感染的成功率可达80% [3] 。
但随着抗生素的成功推广应用,二次世界大战之后美国和西欧的大多数国家都终止了噬菌体制剂的研制。
近年来细菌耐药性问题不断突现,用抗生素治疗细菌感染面临巨大的挑战,一些科学家和临床工作者开始重视噬菌体制剂的研制。
研究者Harper解释了为什么噬菌体疗法现在又被重新使用起来了,因为每一个噬菌体对某种类型的细菌有高度的特异性,而且它们需要正确的宿主细胞才能够进行复制。
靶细菌越多,噬菌体的繁殖速度越快,越能在最短时间内杀死细菌。
因此用噬菌体来治疗大量细菌的感染性疾病变得有可能,比如慢性耳朵感染、肺部感染以及伤口感染等。
研究者还表示,对于多种类型的细菌感染,仅仅需要一点点噬菌体就可以治疗感染性疾病。
而且我们可以直接用噬菌体型的喷雾剂、滴液或者膏状物来治疗感染,当然了,最主要的好处是噬菌体不会感染人类的细胞,从这点来说,噬菌体治疗方法对于治疗人类的细菌性感染疾病变得非常安全。
近年来,日益增加的细菌抗生素耐药性对于我们治疗感染来说越来越困难,而且新型抗生素研发的速度远远赶不上耐药细菌出现的速度。
目前研究者正在加速研究噬菌体治疗细菌感染这种疗法。
目前,噬菌体疗法的临床试验正在进行之中,第一例临床安全试验是2005年进行的,相关试验结果于2009年已经发表出来了,结果证实了噬菌体疗法的有效性和安全性。
研究由Ampliphi公司进行,一旦临床试验成功后,未来,噬菌体的治疗方法将会彻底治疗细菌感染以及细菌的耐药性。
二、研究的主要内容及预期目标1、研究的主要内容本实验运用噬菌斑法从环境污水中分离鉴定大肠杆菌噬菌体并进行纯化,先培养大肠杆菌至对数期,取大肠杆菌培养液于牛肉膏蛋白胨培养基中,加入经离心并过滤除菌的污水样,37℃摇床培养以增殖噬菌体;然后将以上培养液3000r/min离心30min,将上清液过滤除菌,取100ml滤液及5ml大肠杆菌液加入50ml 3倍牛肉膏蛋白胨培养液中,37℃培养12~18h进行噬菌体富集;重复上述富集方法两次后进行噬菌体的收集、验证噬菌体的存在、纯化大肠杆菌噬菌体,得到纯化的大肠杆菌噬菌体后测定大肠杆菌噬菌体的效价、最佳感染复数和一步生长曲线。
2、预期目标感染复数是为研究病毒感染与产出之间量效关系而提出的一个重要生物学指标。
不同噬菌体的最佳感染复数不同, 测定一个特定噬菌体的最佳感染复数对噬菌体颗粒的分离纯化、结构蛋白的制备、基因组的提取以及噬菌体呈现技术等研究有指导意义[ 4,5]。
本实验预期能从污水中分离出大肠杆菌噬菌体。
富集之后进行分离纯化,从而可以测出噬菌体的效价、最佳感染复数和一步生长曲线。
为进一步研究噬菌体的生理特性提供实验依据。
三、研究方法1 材料与仪器用品1.1材料噬菌体样品:阴沟污水(100ml),土壤菌种:大肠杆菌培养基: 3倍牛肉膏蛋白胨培养液(4瓶,每瓶50ml),牛肉膏培养液,牛肉膏蛋白胨半固体培养基(倒上层用),牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(倒底层平板用)1.2培养基及培养液的配制按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。
另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。
溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。
反之,则用1mol/L HCl进行调节。
注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行,然后进行过滤分装就可以了。
1.3仪器设备离心机,细菌滤器,抽滤装置,恒温水浴锅,高压蒸汽灭菌锅,超净工作台,无菌涂布器,无菌吸管,培养皿,三角瓶,移液管,试管,漏斗等2方法步骤2.1大肠杆菌噬菌体的分离及噬菌斑的观察2.1.1培养大肠杆菌培养大肠杆菌至对数期600nm(OD值0.8左右)2.1.2增殖噬菌体样品取上述大肠杆菌培养液6ml于盛有50ml 3倍牛肉膏蛋白胨培养液的三角瓶内,后加入污水样100ml(离心并过滤除菌),继续37℃摇床振荡培养12~14h,以增殖噬菌体。
2.1.3富集噬菌体将以上培养液3000r/min离心30min,将上清液过滤除菌,取100ml 滤液及5ml大肠杆菌液加入50ml 3倍牛肉膏蛋白胨培养液中,37℃培养12~18h进行噬菌体富集。
将以上富集液3000r/min离心30min后,取上清液10mL加入 5mL 3×倍牛肉膏蛋白胨培养液及相应宿主菌液1mL,室温下放置 1h,37℃ 120rpm振荡培养 3.5h。
2.1.4验证噬菌体存在2.1.4.1双层琼脂平板法倒下层琼脂:融化下层培养基,倒平板(约 10mL/皿)待用。
倒上层琼脂:融化上层培养基,待融化的上层培养基冷却至 50℃左右时,每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液 0.2mL,待检样品液或上述噬菌体增殖液 0.2~0.5mL,混合后立即倒入上层平板铺平。
恒温培养:30℃恒温培养 6~12h观察结果。
如有噬菌体,则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑──噬菌斑。
2.1.4.2 单层琼脂平板法省略下层培养基,将上层培养基的琼脂量增加至2%,融化后冷却至 45℃左右,如同上法加入指示菌和检样,混合后迅速倒平板。
30℃恒温培养 6~16h后观察结果。
2.1.5收集噬菌体将上述培养液于 4℃下 12000g 离心 30min,上清液再经微孔滤膜(0.22μm)过滤,滤液即为拟含有相应宿主菌噬菌体的原液。
2.2大肠杆菌噬菌体纯化(1)用接种环取菌液一环接种于液体培养基内,再加人0.1ml大肠杆菌悬液,使混合均匀。
(2)取上层琼脂培养基,溶化并冷至48℃(可预先溶化、冷却,放48℃水溶箱内备用),加入以上噬菌体与细菌的混合液0.2ml,立即混匀,并立即倒人底层培养基上,混匀,置37℃培养12h。
(3)此时长出的分离的单个噬菌斑,其形态、大小常不一致,再用接种针在单个噬菌斑中刺一下,小心采取噬菌体,接入含有大肠杆菌的液体培养基内。
于 37℃培养。
(4)等待管内菌液完全溶解后,过滤除菌,即得到纯化的噬菌体。
2.3噬菌体效价的测定2.3.1 倒平板将融化后冷却到45℃左右的下层肉膏蛋白胨固体培养基倾倒于11个无菌培养皿中,每皿约倾注10mL培养基,平放,待冷凝后在培养皿底部注明噬菌体稀释度。
2.3.2 稀释噬菌体按10倍稀释法,吸取0.5mL大肠杆菌噬菌体,注入一支装有4.5mL1%蛋白胨水的试管中,即稀释到10-1,依次稀释到10-6稀释度。
2.3.3 噬菌体与菌液混合将11支灭菌空试管分别标记10-4、10-5、10-6和对照。
分别从10-4、10-5和10-6噬菌体稀释液中吸取0.1mL于上述编号的无菌试管中,每个稀释度平行做三个管,在另外两支对照管中加0.1mL无菌水,并分别于各管中加入0.2mL大肠杆菌菌悬液,振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀,置37℃水浴中保温5min,让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。