开题报告1稿
毕业论文开题报告范文(共)3篇
毕业论文开题报告范文(共)
第一篇：选题背景与研究意义
一、选题背景
随着社会的不断发展和进步，网络已经成为我们生活中
不可或缺的一部分。
人们通过网络可以快速地获取信息、交流和消费，网络的应用范围也越来越广泛。
而随着网络的普及，网络安全问题也越来越受到人们的关注。
网络安全问题的发生会给个人、企业乃至整个社会带来很大的损失。
因此，加强网络安全已经成为当今社会中非常重要的任务。
然而，随着网络攻击手段的不断更新和完善，传统的网
络安全技术已经无法满足当前网络安全的需求。
为了更好地保障网络安全，需要引入新的技术手段和策略。
人工智能作为当前最为热门的技术之一，已经在很多领域得到了广泛的应用，其在网络安全领域中也具有非常广阔的应用前景。
二、研究意义
本研究选取人工智能在网络安全中的应用作为研究对象，旨在探究人工智能在网络安全领域中的应用情况，查明人工智能技术如何应用于网络安全，并评估其应用效果。
该研究对于推动人工智能技术在网络安全领域的发展，提高网络安全水平，构建信息安全保障体系具有重要的理论和实践意义。
同时，本研究将通过实证研究的方式，探讨在基于人工
智能的网络安全系统中，如何提高网络安全的防御能力，并提高网络安全的效率与准确性，为进一步探究和拓展人工智能在网络安全领域的应用提供参考。
通过本研究的实证结果，将为
研究者提供有益的参考意见和对策建议，促进人工智能在网络安全领域中的应用发展。
综上所述，本研究将有助于深入探究人工智能在网络安全中的应用，为提高网络安全水平提供了新的思路和方法，提供应用效果的评估方法，具有重要的实际意义。
开题报告范文一
开题报告范文一各位领导，各位专家，老师们：我校《在网络环境下基本教育模式的研究》课题，是重庆市电化教育现代教育技术“十五”专项科研课题（课题批准号：02－dt －10）。
经领导批准，今天开题，我代表课题研究组，将本课题的有关情况向各位领导、专家和老师们汇报如下：一、本课题选题的依据在现代素质教育的形势下，建设为素质教育服务的、现代化的、功能完善的教育教学资源系统，拓展学生自主学习的空间，发展学生的多种能力，特别是创新能力，已经成为中学教育必须研究的课题。
现代信息技术特别是计算机网络技术的飞速发展，使我们的教育模式产生了质的飞跃，网络化教育将成为信息时代的重要标志和组成部分。
探索、研究并构建适宜于在计算机网络环境下的教育教学模式，是教育界亟待解决的课题，也是我们责无旁贷的使命。
在网络教育时代，不仅需要有先进科学的教学手段、高效互动的教学方式，更需要有丰富实用的教学资源、完备的教学体系。
在网络化教育的大环境下，教师应该成为网络教育的主导力量。
而目前，我们的教师对信息技术、网络教育尚不熟悉，利用网络实施教育教学尚有距离，尤其是建立“在网络环境下的教育教学新模式”还有待起步，基于此，我们提出了本课题的研究。
二、本课题研究的条件开展本课题研究具有以下有利条件：背景条件：国家教育部大力推进信息技术教育，虚拟学校、远程教育等应运而生；重庆市教委大力普及信息技术教育，通过评选信息技术示范校加大力度；渝中区率先建立局域网，并通过已经实施了三年的“双创课题”研究，使教师的教学理念有了极大改观；随着课改的进一步深入，现代技术特别是信息技术在教育教学中得到了广泛的应用。
基础条件：我校通过一年多的艰苦奋斗，信息技术无论在硬件上，还是软件上，都打下了坚实的基础：硬件上：我校建成了以光纤为网络骨干，采用千兆高速以太网，集视频教学、监控、信息服务、学校管理于一体的校园网络，实现了“班班通”；全校所有的教室都安装了数字投影机、实物展示台、100英寸电动玻珠屏幕、多功能讲台、监控摄像机、29英寸电视机，上课教师人手一台笔记本电脑。
小课题开题报告
⼩课题开题报告⼩课题开题报告（精选6篇） 在当下社会，报告的使⽤频率呈上升趋势，报告包含标题、正⽂、结尾等。
你所见过的报告是什么样的呢？下⾯是⼩编为⼤家收集的⼩课题开题报告（精选6篇），仅供参考，希望能够帮助到⼤家。
⼩课题开题报告篇1 ⼀、课题研究的背景和意义 教学语⾔的运⽤是⼀门艺术，恰当的语⾔能够激发学⽣学习的热情，激励其前进。
苏霍姆林斯基指出：“教师的语⾔是⼀种什么也代替不了的影响学⽣⼼灵的⼯具。
”对于课堂评价来讲，评价语⾔质量的⾼低不仅影响着学⽣的学习效果，更关系到学⽣的终⾝发展。
课堂评价是师⽣情感交融的⽆形通道,是促进知识建构的有效阶梯。
⼼理学表明，当学⽣某种良好的⾏为出现后，如能及时地得到认可，就会产⽣某种⼼理满⾜，形成愉悦的⼼境，并使同类⾏为继续向更层次需要作出积极努⼒。
在实践过程中，不难发现当前的⼩学数学课堂教学中评价语⾔还有许多不尽⼈意的地⽅: 1、评价语⾔过于贫乏。
教师的课堂评价总是“很好”、“真棒”、“好极了”等语⾔。
2评价语⾔夸⼤其词。
“棒、棒，你真棒”的夸奖声。
⼀些简单的问题，也会掌声雷动。
3、评价语⾔过于苛刻，对于学⽣回答的答案与⾃⼰预设的不⼀致时，教师不仅没有给予肯定和引导，反⽽给予讽刺意味的消极评价。
4、评价语⾔含糊敷衍。
学⽣回答问题时，常出现⽭盾或不确切的情况。
对于学⽣模棱两可的答案，教师常常会把问题抛给学⽣讨论，或者⼲脆就不了了之。
⽽对于回答错误的学⽣，或学⽣回答得不太准确时，教师⼀般都置之不理，或者含糊的给予评价。
针对现今课堂中教师评价⽤语存在的⼀些弊端，改变教师评价观念，把握评价的时机，合理的、充分的运⽤课堂评价语⾔的魅⼒，及时的激励和调动学⽣的学习积极性，提⾼课堂教学的效率，促进学⽣的全⾯发展和个性发展。
使数学课堂呈现勃勃⽣机，充满活⼒。
⼆、课题名称的界定和解读 课堂评价⽤语是指在课堂教学这⼀特定的时空范围内,教师以⼝语形式,对学⽣在课堂内的表现做出的即时反馈性评价。
课题开题报告(1份)
武清区教育科研课题研究材料《小学数学合作学习的实践研究》开题报告课题负责人：刘正营杨村第十二小学2013年3月《小学数学小组合作学习的实践研究》开题报告一、课题的提出及其意义：《数学新课程标准》中强调指出：动手实践、自主探索与合作交流是学生学习数学的重要方式，学生学习活动应当是一个生动活泼的、主动的和富有个性的过程。
传统的数学课堂教学存在诸多局限：第一，从教学目标来看，过于重视知识结果的获得，缺少获得知识的过程，忽视学生积极主动参与，因而难以达到学会学习、形成正确的学习价值观的目的；第二，从教学内容来看，过于强调书本知识和学科本位，不能将学生生活实际与社会发展与学习内容相联系，不能关注学生在学习活动中的感受与体验，因而学生所学所得的只是死的知识，不能为其终身发展打下基础；第三，从教学方式来看，过于单一，不能认真实施新课程所倡导的学生主动参与、乐于探究、勤于动手实践的方式，缺乏学习过程中的对话与互动，因而也就失去了学习的主人地位。
总之，在这样的思想支配下的课堂教学，以本为本，唯师唯上，学生失去了学习的生命活力与价值。
随着素质教育的不断深入实施，人们逐渐意识到，要培养富有创新精神的人才，必须着眼于改变学生的学习方式：即在帮助学生开展接受型学习的同时，培养学生主动探究、主动学习的方式。
从而进一步发挥学生的学习主体探究意识，形成有益于终身教育的学习方式和创新思想。
而实施小组合作学习就是在教学过程中，让学生之间、师生之间通过自主研究、民主探索、平等合作、发现问题、解决问题，相互启发、共同提高实践创新能力、增加学习质量和个体素质，形成一种生动活泼、潜力无穷、人人参与、主动积极学习的活动形式。
苏霍姆林斯基曾说过：在人的心灵深处，都有一种根深蒂固的需要，这就是希望自己是一个发现者，研究者，探索者。
在儿童的精神世界里，这种需要特别强烈。
从心理学角度分析，知识的获得是一种主动的认识活动，学习者不应是信息的被动接受者，而应该是知识获取过程的主动参与者。
【开题报告】开题报告示例一
开题报告示例一一、研究背景与意义随着时代的发展，[领域名称]在我国逐渐展现出其独特的魅力与价值。
然而，在深入挖掘和传承这一领域的过程中，我们不可避免地遇到了诸多难题。
为此，本研究旨在通过对[领域名称]的深入研究，揭示其内在规律，为我国[领域名称]的发展提供有益的借鉴与启示。
二、研究现状与评析近年来，国内外学者对[领域名称]的研究取得了丰硕的成果。
然而，在众多研究成果中，仍存在以下不足：1. 对[领域名称]的内涵和外延缺乏系统性的梳理；2. 对[领域名称]的历史演变和现状分析不够深入；3. 缺乏对[领域名称]在实际应用中的创新与发展。
鉴于此，本研究将结合当前[领域名称]研究的现状，对已有成果进行评析，为后续研究提供理论支持。
三、研究内容与方法（一）研究内容1. 对[领域名称]的内涵和外延进行系统梳理；2. 分析[领域名称]的历史演变和现状；3. 探讨[领域名称]在实践中的应用与创新；4. 提出促进[领域名称]发展的策略与建议。
（二）研究方法1. 文献研究法：通过对国内外相关文献的梳理与分析，掌握[领域名称]研究的最新动态；2. 案例分析法：选取具有代表性的[领域名称]案例，深入剖析其成功经验与不足；3. 实证研究法：结合实际调查，对[领域名称]的发展状况进行实证分析；4. 比较研究法：对比国内外[领域名称]的发展，寻求适合我国国情的创新发展路径。
四、研究计划与进度安排（一）研究计划1. 第一阶段：文献综述与理论基础构建（1-3个月）2. 第二阶段：案例分析与实证研究（4-6个月）3. 第三阶段：成果总结与撰写论文（7-9个月）（二）进度安排1. 第1个月：完成文献检索与阅读；2. 第2个月：撰写文献综述报告；3. 第3个月：完成理论基础构建；4. 第4个月：选取案例并进行分析；5. 第5个月：进行实证研究；6. 第6个月：撰写案例分析与实证研究报告；7. 第7-9个月：总结研究成果，撰写论文。
五、预期成果与创新点（一）预期成果1. 形成一套关于[领域名称]的系统性理论框架；2. 揭示[领域名称]在实际应用中的创新与发展路径；3. 为我国[领域名称]的发展提供有益的借鉴与启示。
课题开题报告(1)
课题开题报告一、开题活动简况[开题时间、地点、过程简述、评议专家(课题组外专家不少于2人)、参与人员等]开题时间：2018年10月22日下午3点开题地点：南丰县第一中学过程简述：课题负责人李红娟老师召集课题组成员召开课题开会，课题组成员就课题的研究开展做论证，交流。
参与人员：李红娟、吴莉、黄俊琴、何凤、林志勇评议专家：罗鹏、李光伟、程文红课题题目：基于微课的翻转课堂教学模式实验研究课题内容：研究的目标：1、在国家新一轮基础教育课程改革的过程中，教师在学科教学中运用信息技术，改变教学方式，探索适合本学科特点的教学模式。
2、组建教学资源库，利用校园网，达到资源共享；学科教师具有自己能够制作微视频课件的能力，提高教育教学技术。
3、将传统以教师为中心的教学模式，转变成以学生的自由学习为中心的翻转式课堂，提高课堂教学的有效性。
4、创设出适合信息化的教学环境，尝试在网络环境下信息技术与学科的整合。
研究内容：微课由一线教师自行开发，针对某个学科知识点、重难点或教学环节而精心设计和开发的一种短小精悍的、支持多种学习方式的教学视频。
视频时间可在8到10分钟左右，切合教学实际，为教师所需，为教师所用，解决了工作中的棘手问题。
不难发现，微课的“时间短”、“内容广”、“容量小”、“目标明确”等核心特征，解决了传统教学资源的不足，不仅是一种新资源类型，更是一种全新的教学模式和学习方式。
研究重点：“微课”与“翻转课堂”，把重点放在“激发学生的学习主动积极性”与“优化课堂教学实践”。
打破传统的以教师为中心的教学模式，转变成以学生的自由学习为中心的翻转式课堂，提高课堂教学的有效性。
研究思路：（1）按照实施方案，设计问卷调查，并对回收来的调查问卷进行分析，了解学生们对微课的认识情况。
（2）建立以课题组为单位的学习小组，加强理论学习，广泛收集资料，提高课题组教师的教育科研能力。
（3）探索适合学生的微课案例，开始进行微课制作，在设计制作过程中不定期开展微课沙龙，交流各自关于微课的思考。
优秀开题报告范文(热门9篇)
优秀开题报告范文(热门9篇)（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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开题报告范文（通用6篇）
开题报告开题报告范文（通用6篇）艰辛而又充满意义的大学生活即将结束，毕业前大家都要写毕业设计，而我们做毕业设计前要先写开题报告，那么你有了解过开题报告吗？下面是小编帮大家整理的开题报告范文（通用6篇），希望能够帮助到大家。
开题报告篇1一、论文名称、课题来源、选题依据论文名称：基于BP神经网络的技术创新预测与评估模型及其应用研究课题来源：单位自拟课题或省级政府下达的研究课题选题依据：技术创新预测和评估是企业技术创新决策的前提和依据。
通过技术创新预测和评估，可以使企业对未来的技术发展水平及其变化趋势有正确的把握，从而为企业的技术创新决策提供科学的依据，以减少技术创新决策过程中的主观性和盲目性。
只有在正确把握技术创新发展方向的前提下，企业的技术创新工作才能沿着正确方向开展，企业产品的市场竞争力才能得到不断加强。
在市场竞争日趋激烈的现代商业中，企业的技术创新决定着企业生存和发展、前途与命运，为了确保技术创新工作的正确性，企业对技术创新的预测和评估提出了更高的要求。
二、本课题国内外研究现状及发展趋势现有的技术创新预测方法可分为趋势外推法、相关分析法和专家预测法三大类。
（1）趋势外推法。
指利用过去和现在的技术、经济信息，分析技术发展趋势和规律，在分析判断这些趋势和规律将继续的前提下，将过去和现在的趋势向未来推演。
生长曲线法是趋势外推法中的一种应用较为广泛的技术创新预测方法，美国生物学家和人口统计学家RaymondPearl提出的Pearl曲线（数学模型为：Y=L？M[1+A？exp（—B·t）]）及英国数学家和统计学家Gompertz提出的Gompertz 曲线（数学模型为：Y=L·exp（—B·t））皆属于生长曲线，其预测值Y为技术性能指标，t为时间自变量，L、A、B皆为常数。
Ridenour 模型也属于生长曲线预测法，但它假定新技术的成长速度与熟悉该项技术的人数成正比，主要适用于新技术、新产品的扩散预测。
成人高等教育毕业论文开题报告(1)(1)
成人高等教育毕业（设计）论文开题指导教师
论文参考文献综述（包括课题现状和发展趋势）
主要研究内容、方法及预期目的
研究企业绩效评价体系，分析考核者以及被考核者之间的关系，研究考核链条，
统计管理数据，判断企业绩效评价流程。
方法：文献研究、调查法、资料收集法。
将企业绩效评价体系以及战略管理方式进行研究，分析绩效评价方案，探索管理路径，使企业达到预期的管理目的。
课题
进度计划
8.15~16收集资料
关键成功因子在关键业务流程的支持下，通常可划分为“非常支持”、“比较支持”“不支持”等等相关的等级，根据等级的不同依次给予相应的分数。同时，分数获得越高的流程对其也就越重要，可以被当做企业非常重要的关键业务流程。
论文与工作单位及具体从事工作岗位关联描述（结合实际写作）
将流程绩效考核划分成流程链纵向绩效考核与流程控制横向绩效考核两种考核模式。纵向流程链绩效考核指的是执行流程最后一项活动环节考核上一项环节活动的这行人员。其中极有可能包含考核同部门内部的上下级以及各部门的员工，甚至考核各部门各级别员工。根据绩效的相关理论，考核绩效可在同部门实施，如考核上下级之间；还可以采取跨部门的考核方法，例如，公司考核部门领导或是业务部门领导之间的相互考核。
自企业的相关战略确定以来，第一步就会对于企业关键流程的甄选工作，这是相当困难的工作，据相关人士提出对于企业关键流程甄选不能缺少关键成功因子的观念。专业人士认为，企业甄选关键流程组织完全可以使用关键成功因子的相关方法，由于，此种方法能促使企业的目标有效的相结合，非常符合企业的发展需求，通过企业关键业务流程对于成功因子法的支持状态，对企业的业务流程进行确定。确定的方式和关键因子的方式极其相似。
优秀课题开题报告范例1
优秀课题开题报告范例一、开题活动简况(开题时间、地点、主持人、评议专家、参与人员等)会议时间：xxxx年x月xx日会议地点：xx小学小会议室主持人：xxx评议专家：市区教科所领导和专家参与人员：课题主持人、课题组全体成员 ;业务副校长、教科室主任、部分中青年骨干教师二、开题报告(题目、内容、方法、组织、分工、进度、经费分配、预期成果等，要求具体明确、可操作，限5000字左右，可加页)。
《小学生素质综合评价实验研究》开题报告我校申报的课题是《小学生素质综合评价实验研究》，经山东省教育科学规划办公室审批，于2011年11月被列为省“十二五”规划研究课题。
为使课题研究落到实处，达到研究目的，今天特邀请市区教科所的领导和专家为我们进行课题论证。
下面我就本课题的研究目的、研究内容、研究方法、课题组织、进度、经费分配、预期成果等各方面作简要阐述，请各位专家给予指导和帮助。
一、研究目的1.课题提出背景实施素质教育是我国基础教育面向21世纪所做出的战略选择，但在素质教育日益深入，新课程理念不断深化的今天，教育评价机制仍然存在着诸多缺陷与不足。
在学校内部，传统的评价与考试制度，严重制约了素质教育的实施，无论是校长还是普通教师在社会的压力和功利主义影响下，不得不为学校的“声誉”和单位的“成绩”而忽视甚至放弃对学生综合素质的培养。
解决这一顽症的根本途径就是改变“以升学率和成绩评价教育的单一评价机制”，建立多元化多方位的综合素质评价机制，引导评价制度向多元化方向发展。
对学生进行综合的素质培养与评价，使学生成为真正健康的人，才能适应未来社会的需求，担当起建设和谐社会的需要。
我校在小学生综合素质评价方面已进行了多年的研究与实践，积累了一定的理论认识和实践经验，为了进一步拓宽评价的渠道与途径，完善评价的方法、内容、形式，彰开题主要研讨课题研究的可行性，重在清晰思路、聚焦问题和分工落实。
开题活动建议由市级教育科学规划领导小组办公室或高校科研管理部门负责组织实施，并尽可能向社会开放显评价的功能与实效，进一步发挥评价促进学生发展、教师提高和改进教学实践等功能，经教科室研究考察，确定了这一实验课题。
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陇东学院生命科学与技术学院本科学士学位论文开题报告题目：大肠杆菌噬菌体分离纯化研究学院：生命科学与技术学院专业：生物科学班级： 10级生科（1）班姓名：郑小云指导教师：毛宁2013 年 5 月 1日大肠杆菌噬菌体分离纯化研究一、选题依据1、选题目的噬菌体是一类感染细菌、放线菌、真菌等微生物的病毒，体积微小、结构简单、具有严格的寄生性，广泛存在于自然界的各个角落，包括河水、土壤、污水以及健康人的机体中。
噬菌体作为指示微生物，在监测水质环境、指示污染程度等方面的研究有非常重要的作用。
因此，分离和研究噬菌体，弄清噬菌体与其宿主之间的生态学关系，对于监测水质环境，控制水质污染等方面的工作无疑具有重要指导意义。
大肠杆菌噬菌体，是指寄生在大肠杆菌内的一种噬菌体，属于细胞病毒的一种，具有专一性,一种噬菌体只在一种细菌中生活,而不能在另一种细菌中生活。
它主要存在于一些动物的粪便和污染水源中，肠出血性大肠杆菌引起的疾病症状包括腹部绞痛和腹泻，一些病例可能发展为血性腹泻（出血性大肠炎）。
潜伏期3至8天，平均为3至4 天。
大多数病人10天内康复，但是有少数病人（特别是幼儿和老年人）的染病可能发展为威胁生命的疾病，例如溶血尿毒综合症（HUS）。
溶血尿毒综合症的特点是急性肾衰竭、溶血性贫血和血小板减少。
据统计63%至85%的病例是由于通过食物感染病菌的。
大肠杆菌噬菌体是一种可以感染大肠杆菌并且在大肠杆菌体内复制繁殖的病毒，当其感染大肠杆菌后，便会破坏大肠杆菌的细胞结构以及引起细菌致死，待大肠杆菌死亡之后，繁殖的大量噬菌体便会冲破死亡大肠杆菌，再去感染别的大肠杆菌，最终引起大肠杆菌的大范围死亡。
鉴于噬菌体有溶菌作用和严格的种型特异性，可利用噬菌体作细菌的鉴定和分型，亦可用于检测标本中的未知细菌和防治某些传染病。
噬菌体作为一种新的治疗制剂已受到广泛关注[ 1]，本实验旨在通过分离大肠杆菌噬菌体, 研究其生理特性，为噬菌体作为一种生物制剂用于治疗细菌性感染提供实验依据。
为预防和治疗大肠杆菌感染引起的疾病探索一种极为有效的方法。
2、选题意义通过这个实验我们可以研究清楚大肠杆菌噬菌体各方面的生理特性，以及大肠杆菌噬菌体与大肠杆菌的关系，可以探究出大肠杆菌噬菌体感染大肠杆菌的最佳条件，测出大肠杆菌噬菌体的效价和最佳感染复数，对于利用大肠杆菌噬菌体治疗大肠杆菌引起的疾病方面的研究提供实验依据，这样可以为大肠杆菌感染患者做出一份贡献，帮助他们早日康复，不受病菌的折磨。
通过这个实验题目让我将所学的生物专业课程应用到实验中去，在实验过程中总结和运用四年所学的知识；同时也通过实验过程复习有关实验的基础知识和基本操作方法，锻炼实验操作能力，为以后工作打下坚实的基础。
3、国内外研究现状英国细菌学家和内科医生Frederick Twort和法裔加拿大细菌学家FlixDHerelle分别在1915年和1917年独立发现了噬菌体，不久之后就用来治疗感染性疾病。
dHerelle最早从来自痢疾的临床样本研究中观察到噬菌体滴度的增加正好伴随着病人的康复过程。
他将噬菌体称为“外源性免疫因子”[2] 。
1934年美国科学家报道了利用噬菌体疗法治疗肠球菌感染的成功率可达80% [3] 。
但随着抗生素的成功推广应用，二次世界大战之后美国和西欧的大多数国家都终止了噬菌体制剂的研制。
近年来细菌耐药性问题不断突现，用抗生素治疗细菌感染面临巨大的挑战，一些科学家和临床工作者开始重视噬菌体制剂的研制。
研究者Harper解释了为什么噬菌体疗法现在又被重新使用起来了，因为每一个噬菌体对某种类型的细菌有高度的特异性，而且它们需要正确的宿主细胞才能够进行复制。
靶细菌越多，噬菌体的繁殖速度越快，越能在最短时间内杀死细菌。
因此用噬菌体来治疗大量细菌的感染性疾病变得有可能，比如慢性耳朵感染、肺部感染以及伤口感染等。
研究者还表示，对于多种类型的细菌感染，仅仅需要一点点噬菌体就可以治疗感染性疾病。
而且我们可以直接用噬菌体型的喷雾剂、滴液或者膏状物来治疗感染，当然了，最主要的好处是噬菌体不会感染人类的细胞，从这点来说，噬菌体治疗方法对于治疗人类的细菌性感染疾病变得非常安全。
近年来，日益增加的细菌抗生素耐药性对于我们治疗感染来说越来越困难，而且新型抗生素研发的速度远远赶不上耐药细菌出现的速度。
目前研究者正在加速研究噬菌体治疗细菌感染这种疗法。
目前，噬菌体疗法的临床试验正在进行之中，第一例临床安全试验是2005年进行的，相关试验结果于2009年已经发表出来了，结果证实了噬菌体疗法的有效性和安全性。
研究由Ampliphi公司进行，一旦临床试验成功后，未来，噬菌体的治疗方法将会彻底治疗细菌感染以及细菌的耐药性。
二、研究的主要内容及预期目标1、研究的主要内容本实验运用噬菌斑法从环境污水中分离鉴定大肠杆菌噬菌体并进行纯化，先培养大肠杆菌至对数期，取大肠杆菌培养液于牛肉膏蛋白胨培养基中，加入经离心并过滤除菌的污水样，37℃摇床培养以增殖噬菌体；然后将以上培养液3000r/min离心30min，将上清液过滤除菌，取100ml滤液及5ml大肠杆菌液加入50ml 3倍牛肉膏蛋白胨培养液中，37℃培养12~18h进行噬菌体富集；重复上述富集方法两次后进行噬菌体的收集、验证噬菌体的存在、纯化大肠杆菌噬菌体，得到纯化的大肠杆菌噬菌体后测定大肠杆菌噬菌体的效价、最佳感染复数和一步生长曲线。
2、预期目标感染复数是为研究病毒感染与产出之间量效关系而提出的一个重要生物学指标。
不同噬菌体的最佳感染复数不同, 测定一个特定噬菌体的最佳感染复数对噬菌体颗粒的分离纯化、结构蛋白的制备、基因组的提取以及噬菌体呈现技术等研究有指导意义[ 4,5]。
本实验预期能从污水中分离出大肠杆菌噬菌体。
富集之后进行分离纯化，从而可以测出噬菌体的效价、最佳感染复数和一步生长曲线。
为进一步研究噬菌体的生理特性提供实验依据。
三、研究方法1 材料与仪器用品1.1材料噬菌体样品：阴沟污水（100ml），土壤菌种：大肠杆菌培养基： 3倍牛肉膏蛋白胨培养液（4瓶，每瓶50ml），牛肉膏培养液，牛肉膏蛋白胨半固体培养基（倒上层用），牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（倒底层平板用）1.2培养基及培养液的配制按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。
反之，则用1mol/L HCl进行调节。
注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行，然后进行过滤分装就可以了。
1.3仪器设备离心机，细菌滤器，抽滤装置，恒温水浴锅，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，无菌涂布器，无菌吸管，培养皿，三角瓶，移液管，试管，漏斗等2方法步骤2.1大肠杆菌噬菌体的分离及噬菌斑的观察2.1.1培养大肠杆菌培养大肠杆菌至对数期600nm（OD值0.8左右）2.1.2增殖噬菌体样品取上述大肠杆菌培养液6ml于盛有50ml 3倍牛肉膏蛋白胨培养液的三角瓶内，后加入污水样100ml（离心并过滤除菌），继续37℃摇床振荡培养12～14h，以增殖噬菌体。
2.1.3富集噬菌体将以上培养液3000r/min离心30min，将上清液过滤除菌，取100ml 滤液及5ml大肠杆菌液加入50ml 3倍牛肉膏蛋白胨培养液中，37℃培养12～18h进行噬菌体富集。
将以上富集液3000r/min离心30min后，取上清液10mL加入 5mL 3×倍牛肉膏蛋白胨培养液及相应宿主菌液1mL，室温下放置 1h，37℃ 120rpm振荡培养 3.5h。
2.1.4验证噬菌体存在2.1.4.1双层琼脂平板法倒下层琼脂：融化下层培养基，倒平板（约 10mL/皿）待用。
倒上层琼脂：融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至 50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液 0.2mL，待检样品液或上述噬菌体增殖液 0.2～0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。
恒温培养：30℃恒温培养 6～12h观察结果。
如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑──噬菌斑。
2.1.4.2 单层琼脂平板法省略下层培养基，将上层培养基的琼脂量增加至2%，融化后冷却至 45℃左右，如同上法加入指示菌和检样，混合后迅速倒平板。
30℃恒温培养 6～16h后观察结果。
2.1.5收集噬菌体将上述培养液于 4℃下 12000g 离心 30min，上清液再经微孔滤膜（0.22μm）过滤，滤液即为拟含有相应宿主菌噬菌体的原液。
2.2大肠杆菌噬菌体纯化(1)用接种环取菌液一环接种于液体培养基内，再加人0.1ml大肠杆菌悬液，使混合均匀。
(2）取上层琼脂培养基，溶化并冷至48℃（可预先溶化、冷却，放48℃水溶箱内备用）,加入以上噬菌体与细菌的混合液0.2ml，立即混匀，并立即倒人底层培养基上，混匀，置37℃培养12h。
(3）此时长出的分离的单个噬菌斑，其形态、大小常不一致，再用接种针在单个噬菌斑中刺一下，小心采取噬菌体，接入含有大肠杆菌的液体培养基内。
于 37℃培养。
（4）等待管内菌液完全溶解后，过滤除菌，即得到纯化的噬菌体。
2.3噬菌体效价的测定2.3.1 倒平板将融化后冷却到45℃左右的下层肉膏蛋白胨固体培养基倾倒于11个无菌培养皿中，每皿约倾注10mL培养基，平放，待冷凝后在培养皿底部注明噬菌体稀释度。
2.3.2 稀释噬菌体按10倍稀释法，吸取0.5mL大肠杆菌噬菌体，注入一支装有4.5mL1%蛋白胨水的试管中，即稀释到10-1，依次稀释到10-6稀释度。
2.3.3 噬菌体与菌液混合将11支灭菌空试管分别标记10-4、10-5、10-6和对照。
分别从10-4、10-5和10-6噬菌体稀释液中吸取0.1mL于上述编号的无菌试管中，每个稀释度平行做三个管，在另外两支对照管中加0.1mL无菌水，并分别于各管中加入0.2mL大肠杆菌菌悬液，振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀，置37℃水浴中保温5min，让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。