不同组织的蛋白提取方法99
提取膜蛋白的方法
提取膜蛋白的方法提取膜蛋白是一项关键的实验步骤，用于研究膜蛋白的结构和功能。
本文将介绍几种常用的膜蛋白提取方法。
1. 浸泡法浸泡法是一种简单的膜蛋白提取方法。
将细胞或组织样品置于适当的缓冲液中，如磷酸盐缓冲液或生理盐水中，并加入一些溶解剂（如阴离子洗涤剂）以破坏膜结构。
浸泡一段时间后，离心以分离出溶液中的膜蛋白。
2. 磷脂双层溶液法磷脂双层溶液法利用磷脂双层膜的特性来提取膜蛋白。
首先，将细胞或组织样品放入含有磷脂双层的液体中。
磷脂双层膜与细胞膜相似，可吸附并保持膜蛋白的结构和功能。
然后，用洗涤液洗涤磷脂双层，使膜蛋白释放到洗涤液中。
3. 超声法超声法是一种物理方法，通过超声波的能量来提取膜蛋白。
将细胞或组织样品置于含有缓冲液的管中，并使用超声波处理。
超声波的能量可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到缓冲液中。
然后，对溶液进行离心，将膜蛋白分离出来。
4. 酸碱提取法酸碱提取法利用pH的变化来提取膜蛋白。
首先，将细胞或组织样品放入酸性或碱性溶液中，并搅拌。
酸性或碱性环境可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到溶液中。
然后，通过调整pH值，使膜蛋白沉淀，进一步提纯。
5. 亲水基质法亲水基质法是一种通过亲水基质与疏水膜蛋白的选择性结合来提取膜蛋白的方法。
细胞或组织样品与亲水基质接触，亲水基质与细胞膜的亲水区域结合，使膜蛋白释放到溶液中。
然后，通过离心和洗涤步骤来分离和纯化膜蛋白。
这些方法在膜蛋白的研究中应用广泛，但根据具体的实验目的和样品特性，可以选择适合的方法进行膜蛋白提取。
实验中还应注意选择合适的缓冲液、溶液浓度和温度，并结合离心、洗涤等步骤进行蛋白的纯化和分离。
此外，需要根据实验目的选择合适的检测方法，如SDS-PAGE、Western blot等来确定提取的膜蛋白的质量和纯度。
总之，膜蛋白提取是膜生物学研究的重要一环，不同方法适用于不同的样品和实验要求。
正确选择和操作提取方法可以高效地提取膜蛋白，并为后续研究提供可靠的样品。
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤步骤一：收集和处理样品首先，需要收集要研究的动物细胞或组织样品。
样品可以是从细胞培养物中收集的细胞，也可以是从动物体内收集的组织。
在收集样品之前，可以用生理盐水冲洗样品，以去除与研究无关的物质。
步骤二：细胞破碎和组织研磨接下来，需要将细胞破碎或组织研磨，以释放细胞内或组织内的蛋白质。
对于细胞破碎，可以使用一些方法，如机械破碎、超声波破碎或冻融破碎等。
对于组织研磨，可以使用搅拌器或研磨器等工具进行研磨。
步骤三：离心步骤四：蛋白质提取将经过离心的上清液取出，即为蛋白质提取物。
蛋白质提取液可以选择不同的组成，以适应研究的目的。
一般来说，一个典型的蛋白质提取液可能包含以下成分：蛋白酶抑制剂（如PMSF）、还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）、溶解剂（如甲醇或异丙醇）、洗涤剂（如Triton X-100或Tween-20）以及缓冲液（如磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液）等。
这些成分对于蛋白质的稳定性、可溶性和抽提效果起着重要作用。
步骤五：蛋白质浓缩为了浓缩蛋白质，可以使用一些方法，如醋酸沉淀、有机溶剂沉淀或钙盐沉淀等。
这些方法可以使蛋白质从提取液中沉淀下来，以减少液体体积并提高蛋白质浓度。
步骤六：蛋白质分析最后，可以对蛋白质抽提物进行分析。
常用的蛋白质分析方法包括SDS-凝胶电泳、Western blotting、质谱分析等。
这些方法可以用于分析蛋白质的分子质量、浓度、结构和功能等。
总结起来，动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤包括：收集和处理样品、细胞破碎和组织研磨、离心、蛋白质提取、蛋白质浓缩和蛋白质分析。
这些步骤的选择和优化将根据具体的实验目的和要求进行调整。
蛋白提取方法
蛋白提取方法蛋白是构成生物细胞的基本组成部分，它们在细胞中承担着重要的生物功能，如调节细胞活动，参与代谢反应和分子交互等。
蛋白质的提取是生物学上研究蛋白质本身及其生物学功能的基础，也是生物医学研究的基础和进行商业应用的前提条件。
因此，正确有效的蛋白提取方法的选择至关重要。
一、蛋白提取动机蛋白的提取有多种动机，例如研究形式结构、鉴定活性、分离活性组分等。
蛋白提取既可以用于基本生物学研究，也可用于临床诊断，在从分子水平解释疾病发病机理和从抗病毒新药研发方面发挥重要作用。
二、蛋白提取方法1.超声提取法超声蛋白质提取是一种与传统的蛋白提取技术相比较更快捷的新型技术。
它的原理是，利用特定频率的高声波熔融细胞壁，蛋白质就能被融合在液体中。
优点是：此法可提取高纯度蛋白质，操作简便，可以大量提取，而且可以提取活性蛋白，不会因长时间性热处理而失去活性。
2.离子交换技术离子交换法是一种常用的蛋白提取技术，它是利用离子交换树脂对蛋白质进行离子交换染色，以分离蛋白。
它的优点是：操作简便，提取蛋白的效率高；不会受温度和pH的影响；根据离子强度的大小可以提取活性蛋白；选择交换材料可以提取不同的蛋白。
3.沉淀法沉淀法是非离子性的一种技术，它的原理是利用特定的物质把蛋白质从溶液中沉淀出来。
它的优点是：可以提取活性蛋白，能够提取任何种类的蛋白；可以提取特定蛋白，从而降低沉淀蛋白和其它物质的比例；操作简便，可以快速大量提取蛋白。
4.膜技术膜技术是一种常用的研究蛋白功能和结构的技术，它是利用特定分子组织膜与蛋白结合来提取蛋白。
它的优点是：提取的蛋白质纯度高，可以提取活性的特异性蛋白；还可以同时提取一系列蛋白质；可以提取表达量低的特异性蛋白。
5.硬酸柔酯法硬酸柔酯蛋白提取是一种提取蛋白质活性和纯度高的技术。
它的原理是利用硬酸柔酯将蛋白和其他溶解物分离开来。
其优点是：可以提取不同类型的蛋白；可以提取超低量的蛋白；可以提取活性蛋白，不会因热处理而失去活性；可以提取高纯度的蛋白，操作简便。
动物固体组织蛋白提取-Protocol
动物固体组织蛋白提取1、前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、裂解液配制：：100：1，现配现用。
（100010）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10管体系中加入：7-8粒磁珠、100组织、110、1 。
b、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c、将组织匀浆转入1.5的管中（管、离心管）。
12000 4°C 离心15。
d、离心后管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a、配工作液：溶液A：溶液50：1（200：4）。
*200；2*（1+1）*4。
需测试复孔。
标本X，则需Ac、复孔，取蛋白6加入0.6管，再加入542O，混匀。
即10倍稀释。
d、取20-25 10倍稀释蛋白样本加入96孔板平底板内，再加入200工作液，混匀振荡后，37℃30。
注：应现加蛋白样本，再加工作液。
玉米不同组织提取总蛋白浓度测定2种方法的比较
ｎ ｅ ａ ｒ — ｉ ｓ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ｓ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｌ ｙ ｓ ｉ ｎ ｅ ｍａ ｉ ｚ ｅ，ｂ ｙ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ Ｐ ｌ ａ ｎ ｔ Ｔ ｏ ｔ ａ ｌ Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｅｘ ｔ ｒ ａ ｔｉ ｏ ｏ ｎ Ｋｉ ｔ ．Ｔｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈｏ ｔ ｓ ｅ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｐ ｏｔ ｒ ｅ ｉ ｎ ｓ ｗａ ｇ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ －
西
４ Hale Waihona Puke ６ 南农业
学
报
２ ０ １ ４年 ２ ７卷 １期
Ｖ０ Ｌ ２ ７ Ｎｏ ． １
Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ｗ ｅ ｓ ｔ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
文章编 号 ： １ ０ ０ １— ４ ８ ２ ９ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ ４ ５ ６— ０ ３
玉 米 不 同组 织提 取 总 蛋 白浓 度测 定 ２种 方 法 的 比较
杨文鹏 ， 王 伟 ， 王 明春 ， 王 秀影
（ １ ． 贵州省旱粮研究所 ， 贵州 贵 阳 ５ ５ ０ ０ ０ ６ ； ２ ．贵州省农业生物技术重点 实验室 ，贵州 贵 阳 ５ ５ ０ ０ ０ ６ ）
组织提取蛋白步骤
组织提取蛋白步骤
嘿，朋友们！今天咱就来唠唠组织提取蛋白那些事儿。
你想想看，蛋白就像是身体里的小宝贝，咱们得小心翼翼地把它们给弄出来。
首先呢，得把组织准备好呀，这就好比要做饭得先有食材不是？把组织弄得干干净净的，可不能有啥杂质混进去。
然后呢，就该给组织来点儿“魔法药水”啦，让它舒舒服服地躺在那里，把蛋白慢慢地释放出来。
这时候就像是在哄小宝贝开心，得有耐心，不能着急。
接下来呀，得把这些混合的东西好好地搅和搅和，让蛋白充分地和其他东西分开。
这就像洗衣服一样，得把脏东西都洗掉，留下干净的蛋白。
再之后呢，把搅和好的东西通过一些特殊的办法，比如离心啥的，把蛋白给分离出来。
就好像从一堆沙子里把金子给挑出来一样，得细心，不能把蛋白给弄丢了。
哎呀，这提取蛋白的过程可不简单呐！就像一场小小的冒险，每一步都得走好。
要是哪一步不小心出了差错，那蛋白可能就不乖乖出来啦。
你说，这是不是挺有意思的？咱得像爱护宝贝一样对待这些蛋白，让它们能好好地为咱的实验或者研究服务呀。
在这个过程中，可不能粗心大意哦！要是不小心把蛋白给弄坏了，
那不就白忙活啦？所以呀，每一个步骤都得认真对待，就像对待一件
特别重要的事情一样。
而且哦，不同的组织提取蛋白的方法可能还不太一样呢！这就好比
不同的菜有不同的做法，得根据实际情况来调整。
总之呢，组织提取蛋白可不是一件随随便便就能做好的事情。
得有
耐心、细心，还得有那么一点儿小技巧。
大家可得好好记住这些步骤，说不定啥时候就能派上大用场呢！你说是不是呀？哈哈！。
蛋白提取方法
蛋白质提取的方法总汇 2005-4-15 23:00:00 来源：生命经1、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！2、植物组织蛋白质提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！3、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
骨组织蛋白提取方法(一)
骨组织蛋白提取方法(一)骨组织蛋白提取骨组织蛋白是一种对于骨骼生长及修复都非常重要的蛋白质。
因此，提取骨组织蛋白对于医学研究及实践都非常重要。
本文将详细介绍几种常见的骨组织蛋白提取方法。
钙盐溶解法钙盐溶解法是最常用的骨组织蛋白提取方法之一。
主要原理是以EDTA或酸溶解骨骼中的无机物，释放出骨基质中的有机物质，包括蛋白质，以达到提取目的。
优点：简便易行，不需要干燥过程；无需昂贵的设备。
缺点：不能完全分离纯净的成分；酸和EDTA的使用可能对骨基质蛋白的活性和稳定性产生影响。
碱性清洗法碱性清洗法是通过在碱性条件下清洗骨组织，去除无机物质，使有机物质（蛋白质）裸露出来，从而实现骨组织蛋白的提取。
优点：纯净度相对比较高。
缺点：提取时间较长，可能对蛋白质质量产生影响。
超声波法是通过超声波对骨组织进行蛋白提取。
超声波的震荡作用会使得细胞结构变得不稳定，而从而加快细胞组分离。
优点：提取效率相对较高。
缺点：适用性较窄，需要较昂贵的超声设备。
总结骨组织蛋白提取方法虽然各异，但都可以达到相同的目的：将骨基质中的有机物质提取出来。
每种方法都有其优势和不足，因此在不同场合下需要选择不同的提取方法。
接下来，我们将对每种骨组织蛋白提取方法进行更详细的说明。
钙盐溶解法钙盐溶解法是一种常见的骨组织蛋白提取方法，主要用于提取胶原蛋白和骨形成蛋白。
步骤1.将新鲜的骨组织除去软骨、骨髓和周围结缔组织，洗净。
2.用酸或EDTA将骨组织中的钙盐溶解。
3.以不同的方式，如离心过滤、电泳或柱层析等，分离出所需的蛋白物质。
1.采用钙盐溶解法提取骨组织蛋白应使用先进的离子交换柱分离技术，以避免由于低温或定向结晶导致蛋白结构受损。
2.钙盐溶解法在提取蛋白的过程中常需要酸洗，因此操作时需要注意安全。
碱性清洗法碱性清洗法主要用于提取胶原蛋白，常用的碱性溶液有NaOH和Na₂CO₃。
步骤1.将新鲜的骨组织除去软骨、骨髓和周围结缔组织，洗净。
2.用较高浓度的碱性溶液（如NaOH）在低温下清洗骨组织。
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不同组织的蛋白提取方法
2017-07-18
不同组织的蛋白提取方法
一、植物组织蛋白质提取方法
1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml
1、1Mtris-HCl（PH8）45ml
2、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g
这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！
或者用三氯醋酸―丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上1
3、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：
提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的'DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜
应用TRIPURE提取蛋白质步骤：
含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）
倒转混匀，置室温10min
离心：12000g，10min，4度，弃上清
加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）
振荡，置室温20min
离心：7500g，5min，4度，弃上清
重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次
沉淀中加入100％乙醇2ml
充分振荡混匀，置室温20min
离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀
1％SDS溶解沉淀
离心：10000g，10min，4度
取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
2XBUFFER，然后煮5－10三、材料：细菌蛋白
2%的SDS，20mmol的2-巯基乙醇
四、肿瘤组织
0-4°C生理盐水冲洗组织表面血迹，以1：9（即100ug重量加入900ul体积）的比例加入蛋白匀浆提取液，0-4°C冰水混合物中用1ml匀浆器制成10%的蛋白匀浆。
匀浆在10000G离心10-15分钟，取上清备用。
注：蛋白匀浆提取液(PH7.6)：Nacl50mMTris10mMEDTA1mM，PMSF1mM，
Na3VO4.12H2O0.5mMNaF50mMBenzamidine1mM
五、脑组织
将切取的组织用4℃预冷的0.01mol/l的PBS漂洗去血渍，再用滤纸吸干残留的PBS，将组织称重，将0.1G组织放入1ml的玻璃匀浆器，加入800l裂解液在冰
上充分匀浆，将得到的匀浆液用液氮反复冻融3次，室温静置30mins，
4℃15000r/min离心1h，小心避开脂层，吸取上清，分装，-80℃保存。
裂解液配方如下：
尿素7mol/l
硫脲2mol/l
CHAPS4%(m/v)
DTT65Mmol/L(上样前临加)
IPGBuffer0.5%(V/V)(上样前临加)
PMSF2ug/l(m/V)(上样前临加)
DNA酶12ug/l(m/V)(上样前临加)
RNA酶A2ug/l(m/V)(上样前临加)
六、细胞系蛋白提取
1.用枪吸弃培养板中的培养基，PBS避免细胞脱壁）
2.加1ml预冷的PBS
3.4℃
上清得细胞沉淀
4.6孔板60ul/孔，培养瓶100ul/孔）重悬细30min（不定时轻弹EP管，使细胞混悬于裂解液中，从而使裂解充分，也可不弹）
5.4℃12000rpm20min离心，取上清于新EP管中4000rpm3min离心，弃
CellLysisBuffer
组分浓度：20mMTris-HClPH7.5
150mMNacl
1mMEDTA
0.5%NonidetP-40
1mM钒酸钠
1mMPMSF
PIS（蛋白酶抑制剂）
配制方法
20mMTris-HClPH7.5
150mMNacl
1mMEDTA
调完PH后加0.5%NonidetP-40
裂解细胞时下列溶剂（全部溶解）以1:100比例加入裂解液中
100mM钒酸钠（粉剂配成100mM后分装于1.5mlEP管中-20度储存）
100mMPMSF（粉剂配成100mM后分装于1.5mlEP管中-20度储存，避光）PIS （蛋白酶抑制剂）（-20度储存）
七、酵母蛋白的提取方法
1准备SD/-Leu或是YPD培养基20ml，酵母过夜培养，30℃，230rpm。
2测OD600约1.0。
3100ml过夜培养物，1000g，离心，，44弃上清，重悬于80ul抽提
buffer0.1MTris-Cl（PH7.5），0.2M，20％甘油，5mMEDTA，1mMPMSF。
(100×)：PMSF，RT保存。
533ul（425-600um）。
冰上操作，涡流10min6回收玻璃珠，并尽可能取上清到另一预冷的玻璃管中。
740ul的抽提buffer，同上涡流。
8离心后分离上清（回收玻璃珠）。
9液氮快速冷冻，-70℃储存。