脂肪组织蛋白的提取方法.doc
检测生物组织中糖类脂肪和蛋白质的方法
检测生物组织中糖类脂肪和蛋白质的方法糖类的检测方法：1.放射免疫法：利用放射性同位素标记的抗体或反应物与目标糖类结合，通过测量放射同位素的放射性强度来定量糖类。
2.高效液相色谱法：利用高效液相色谱仪将样品中的糖类分离，并通过检测器测定糖类的浓度。
3.还原糖法：通过还原糖的特性，将还原糖与试剂反应生成有色化合物，通过测量其吸光度来定量糖类的浓度。
4.酶法：利用具有特异性的酶针对特定的糖类进行酶解反应，生成可测定的产物，通过检测产物的浓度来定量糖类。
脂肪的检测方法：1.水解法：将样品中的脂肪水解为脂肪酸和甘油，再通过酶法或化学法测定脂肪酸或甘油的浓度。
2.胆固醇氧化酶法：利用脂肪样品中的胆固醇通过酶催化反应生成可测定的产物，通过测量产物的浓度来定量脂肪。
3.紫外吸收法：利用脂肪样品中的化学结构特性，通过紫外光谱测量脂肪的吸光度来定量脂肪的含量。
4.气相色谱法：通过气相色谱仪将样品中的脂肪分离，并通过检测器测定脂肪的浓度。
蛋白质的检测方法：1.低里氏法：利用低里氏试剂与蛋白质发生反应，形成可测定的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量蛋白质的浓度。
2.高效液相色谱法：利用高效液相色谱仪将样品中的蛋白质分离，并通过检测器测定蛋白质的浓度。
3.毛细管电泳法：将样品中的蛋白质在电场作用下在毛细管中分离，根据蛋白质的电荷、大小和形状的差异来测定蛋白质的浓度。
4.射流显色法：利用射流试剂将蛋白质样品中的蛋白胺基酸与试剂反应生成有色产物，通过测量产物的吸光度来定量蛋白质的浓度。
需要注意的是，以上方法中的每一种都有其适用范围和局限性，具体选择方法时需根据实验要求、样本特性和实验设备等因素进行合理选择。
此外，还可结合多种方法进行确认和校准以提高检测结果的准确性和可靠性。
提蛋白质的原理及步骤
蛋白质提取是一项基础实验，通常用于从组织或细胞中提取纯度较高的蛋白质样品，以便进行各种蛋白质研究。
常规的蛋白质提取步骤包括以下几个主要步骤：
1. 细胞或组织的裂解：将待提取的样品裂解以释放出蛋白质。
裂解方法取决于被裂解的细胞类型，可使用机械法、化学法、超声波或高压等方法进行裂解。
2. 蛋白质的分离：将蛋白质与非蛋白质组分进行分离，常用的方法有沉淀、过滤、离心和柱层析等。
3. 蛋白质的纯化：通过进一步的分离和纯化来获得高纯度的蛋白质。
这些步骤通常需要进行多次，每次都使用不同的方法来分离和纯化蛋白质。
提蛋白质的原理是基于蛋白质的化学和物理特性进行分离和纯化。
蛋白质分子量大小、电荷、亲水性等特性不同，容易与不同化学试剂、柱层析介质或生物酶相互作用。
通过调节这些条件和步骤，就可以使不同的蛋白质与其它组分分离出来，并得到纯度较高的蛋白质样品。
虽然蛋白质提取步骤较多，但因为各种蛋白质的特性不同，所以实验时需要根据需要选择不同的提取和分离方法以获得更理想的效果。
提取蛋白的常规方法
1、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。
但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，- 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation因而对提取要求更复杂一些。
原料的选择主要依据实验目的定。
从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。
尽量要新鲜原料。
但有时这几方面不同时具备。
含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。
一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。
要事前调查制备的难易情况。
若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。
如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。
但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。
研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。
可能时尽量用全年均可采到的原料。
对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。
2、前处理a、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。
要剔除结缔组织及脂肪组织。
如不能立即进行实验，则应冷冻保存。
除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。
不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。
如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。
⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。
蛋白质提取常用试剂及操作方法
蛋白质提取常用试剂及操作方法一、原料选择和前处理（一）原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。
但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，因而对提取要求更复杂一些。
原料的选择主要依据实验目的定。
从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。
尽量要新鲜原料。
但有时这几方面不同时具备。
含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。
一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。
要事前调查制备的难易情况。
若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。
如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。
但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。
研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。
可能时尽量用全年均可采到的原料。
对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。
（二）前处理1.细胞的破碎材料选定通常要进行处理。
要剔除结缔组织及脂肪组织。
如不能立即进行实验，则应冷冻保存。
除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。
不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。
如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。
⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。
重点实验课检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
二、高考命题角度预测 (1)若以血液为材料检测血浆中是否含有还原糖和蛋 白质，对实验材料应如何处理？请分析原因。 提示：对血液进行离心后取上清液(血清)进行检测。 因血液为红色，会干扰实验结果。离心后去除血细胞，可 排除干扰。
(2)种子萌发过程中，蛋白质含量会发生变化。现有萌 发两天和四天的大豆种子，请设计实验，探究大豆种子萌 发时蛋白质含量是增加还是减少。(简要说明原理即可)
为什么？_________________________________________。 (3)已知生长素含量增加能提高细胞内乙烯的含量。如果对青柿 子喷洒一定浓度的生长素，则青柿子继续成熟时曲线②将呈现出 ________趋势，曲线①将呈现出________趋势。
[解析] (1)柿子在成熟过程中由苦涩变甘甜与淀粉的转化 有关，淀粉逐渐转化为具有甜味的还原糖，因此，青柿子中淀 粉含量高、还原糖含量少，黄柿子中淀粉含量少、还原糖含量 高；曲线②所示物质随时间变化含量逐渐减少，因此表示淀粉 含量的变化，曲线①表示还原糖含量的变化。(2)检测还原糖时， 斐林试剂的甲液、乙液要等量混合均匀后，再加入待测溶液中， 并要水浴加热。(3)根据题意可知，对青柿子喷洒一定浓度的生 长素后，青柿子细胞内乙烯的含量将增加。乙烯促进果实成熟， 因此淀粉的分解速度将加快，即曲线②加速下降，相应地，还 原糖的生成也将加快，即曲线①加速上升。
比较 项目
斐林试剂
双缩脲试剂
甲液 成分 0.1 g/mL
NaOH溶液
乙液
0. 05 g/mL CuSO4溶液
A液
B液
0.1 g/mL 0.01 g/mL NaOH溶液 CuSO4溶液
比较项目
斐林试剂
双缩脲试剂
反应原理 添加顺序
检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质
检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质
要检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质，可以使用以下
几种常见的实验方法：
1. 糖类检测：
- 阳离子交换色谱法（Ion exchange chromatography）：根据糖类的荷电性质，在具有阳离子交换基团的色谱柱上
进行分离和测定。
- 蒽酮法（Anthrone method）：利用蒽酮与糖类形成彩
色产物，测定其吸光度，从而定量分析糖类含量。
2. 脂肪检测：
- 总脂肪测定法（Total lipid assay）：通过提取组织样品
中的脂肪，使用溶剂进行提取，然后通过酶解、酶判定、
光度法或色谱法测定脂肪含量。
- 中性脂肪测定法（Neutral lipid assay）：使用溶剂提取组织中的中性脂肪，然后使用酶判定、高效液相色谱法等进行测定。
3. 蛋白质检测：
- 比色法：如布拉德福酮碱试剂法（Bradford assay）、双酮化合物法（Biuret method）等，根据蛋白质与特定试剂形成复合物，通过光吸收法或比色法测定颜色变化，从而定量分析蛋白质含量。
- 生物素-链霉亲和素（Biotin-streptavidin assay）：通过生物素与链霉亲和素的特异性结合，配合荧光标记物或酶标记物，测定蛋白质含量。
总的来说，具体的方法选择要根据实验目的、仪器设备和实验条件来决定。
另外，还可以结合一些生物学技术，如免疫印迹法、质谱分析和核磁共振等，对糖类、脂肪和蛋白质进行定量和定性分析。
脂肪组织蛋白的提取方法
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3127 BB-3311 BB-3703 BB-3182 BB-3185 BB-3191
1. 提取液制备：每 500ul 蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置 冰上备用。
2. 取 100mg 组织样本剪碎，加入蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼 可见固体①。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在 4℃，10000rpm 条件下离心 5 分钟。 4. 将含有脂肪的上清吸入蛋白离心管中，套上液体收集管，在 4℃，12000rpm 条
产品简介： 贝博脂肪组织蛋白提取试剂盒适用于从各种脂肪含量高的实体组织和细胞，如脂肪细
胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取总蛋白。提 取过程简单方便，可在 1 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶 对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜 包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等
BB-3181 的试剂盒。
产品特点： 1、 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。 2、 将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。 3、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 4、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 5、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包 含 7 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。 该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白 酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
实验一：检测生物组织中的糖类-脂肪-蛋白质
实验检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质一、实验原理:某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应.注意事项：还原糖的检测和观察:①还原糖有葡萄糖，果糖,麦芽糖；②甲乙液必须等量混合均匀后再加入样液中，现配现用；③必须用水浴加热脂肪的鉴定：①切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰，有的地方模糊.②酒精的作用是:洗去浮色③需使用显微镜观察④使用不同的染色剂染色时间不同蛋白质的鉴定：①先加A液1ml,再加B液4滴②鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比资料一：生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。
前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有,为非还原糖. 可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu 2O沉淀。
如：加热葡萄糖+ 2Cu2+ + 4OH—葡萄糖酸+ Cu 2O↓(砖红色)+ H 2O 即Cu 2+被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色沉淀淀粉遇碘变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。
资料二:脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。
它是构成人体组织的正常成分，脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞内。
苏丹三染液其实是苏丹三固体颗粒溶于高浓度乙醇（70%-95％,多用95％）配制而成的，而脂肪同样较易溶于高浓度乙醇,所以染色时间长了就会让样品中的脂肪溶解,洗浮色的时候被洗掉，就观察不到了。
在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别.脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。
脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。
临床上常对组织切片进行染色观察.资料三：蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。
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