脂肪组织固定液
常用的组织固定液及配制
常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。
1甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。
易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。
用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。
10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。
经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。
2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。
固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。
3 中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。
此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。
4 AF液（混合固定液）95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。
也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。
此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。
以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。
yzbai wrote:（1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。
对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。
能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。
经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。
（2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。
固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。
几种细胞固定方法选择最佳固定液标准是：（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。
固定剂 (2)
1.甲醛：非沉淀，渗透强，固定均匀组织收缩小。
固高尔基线粒体，糖。
含粘液时间长。
去除甲醛色素；Schridde,Verocay.2.重铬酸钾：有毒橘红色，固高尔基线粒体穿透快，固定的组织几乎完全不收缩，乙醇脱水后明显收缩，流水12-24h。
常用于混合固定液：Zenker,Helly,Maximov,Regaud.3.苦味酸：黄色，易燃易爆，穿透慢，组织收缩明显，无硬化，对脂肪和类脂无作用，可软化火棉胶，可使皮肤软化，固定时间＜24h，乙醇中加碳酸锂水或浓氨水去苦味酸产生的黄色。
4.升汞：穿透低，固蛋白质，临用加冰醋酸，用0.5%碘酒去汞，0.5%硫代硫酸钠脱碘。
5.醋酸：刺激气味无色液体，沉淀核蛋白，保存染色体6.铬酸：强氧化剂，固定的组织避光。
7.锇酸：强氧化剂，剧毒，电镜必须固定剂。
线粒体内质网固定，后流水洗12-24h8.丙酮：易挥发易燃，常用于酶的固定9.三氯醋酸：无色易潮解，易溶于醇和醚，良好的脱钙剂。
10.乙醇：固定兼脱水作用。
是还原剂，85-95%用于糖原，肝组织，阿米巴原虫尤文瘤染色。
渗透力差，组织收缩，易挥发和吸收水分。
11.B-5：醋酸钠升汞甲醛。
固定淋巴组织。
12.Bouin：外科标本良好固定液，结缔组织，对脂肪好，含脂肪的淋巴结核脂肪瘤，三色染色最好，胞核鲜明，胞质差，24h,有毒，乙醇洗，苦味酸：甲醛：冰醋酸15:5:113.Carnoy：染色体，DNA,RNA好，糖原尼氏体，糖原蓄积病，速度快，＜4h，冰醋酸氯仿无水乙醇。
14.Muller：缓慢，用于媒染和硬化神经组织，固定时间可以很长，过程需常更换液体，重铬，硫酸钠，蒸馏水。
15.Orth：胚胎，神经脂肪组织，临时配制，暗处固定，24h,固定液黑色不能再用。
水洗12-24h，重铬，硫酸钠，蒸馏水，甲醛用时加16.PFG：多肽类抗原，免疫电镜研究，对细胞抗原性结构保存好，对苯醌，多聚甲醛，戊二醛二甲胂酸钠缓冲液17.PLP,PLPD：过碘酸钠，富含糖类固定，6-8h，过碘酸盐，赖氨酸，多聚甲醛，磷酸缓冲液，PLPD配方PLP液，重铬酸钾，4°C固定36-54h18.Rossman:糖原固定12-24h95%乙醇洗，无水乙醇，苦味酸饱和液，甲醛19.Zenker：形态学常用固定，胞核胞质染较清晰，常三色染，免疫球蛋白染最好，横纹肌肉瘤恶性畸胎瘤，病毒包涵体尼氏小体，对含血量多的脾脏肺梗不合适，12-36h，脱汞。
[精华]植物组织各类固定液及优弊病
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动物组织各种固定液及优缺点编号类别名字配方优缺点或备注甲醛：从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低.缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,临床活检不用.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。
1 10%缓冲福尔马林固定液甲醛100ml蒸馏水900mlNaH2PO44gNa2HPO4 6.5g该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面研究都较好,尤其是对免疫组化的染色.2 10%福尔马林固定液甲醛100 ml自来水900ml 这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。
3 10%福尔马林盐固定液甲醛100ml自来水900mlNacl 9克先将Nacl溶于水，再加入甲醛。
这也是一种较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染色，增加染色的强度4 Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液75ml甲醛 2 ml冰醋酸 5 ml 该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。
而甲醛对组织有收缩作用。
两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。
使组织固定达到优良的固定水平5 醛糖钙固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸钙20g蒸镏水90ml 先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。
固定液
1．经过固定的组织可保持在10%福尔马林或70%乙醇中。
2．染色前脱掉组织中的苦味酸①自来水冲洗②50%乙醇③或70%乙醇饱和碳酸锂
乙醇BOUIN’S液（DUBOSCQ-BRAZIL FLUID）
用途：用于固定肾活检，组织学制备固定液。
试剂：
乙醇Bouin’s贮存液:
80%乙醇750.0ml
甲醛300.0ml
步骤：
1．活检标本要立即放入Hollande’s固定剂中，标本容器上注明时间。
2．标本完成固定后保持在70%乙醇中。
3．不能让Hollande’s液固定的标本与磷酸缓冲福尔马林接触，否则会出现蓝色沉淀。
ORTH’S液
用途：用于证实肾上腺胞浆中嗜络微粒，这种证明可能对嗜络细胞瘤的诊断很重要。不是一种好的多用途的固定剂。
苦味酸5.0g
充分混合，液体稳定性2年，标明配制日期。
工作液：
贮存液70.0ml14.0ml
醋酸5.0ml10.0ml
使用前加醋酸。
固定时间：1～4小时。
步骤：
1．把新鲜组织标本放进乙醇Bouin’s工作液中。
2．充分固定后把组织移到70%的乙醇中。
HOLLANDE’S固定液
用途：作为胃肠和前列腺活检基本固定剂，这种固定剂让H.E染色更清晰，它“软化”组织避免切片脆裂。苦味酸会溶解掉红细胞。
ZENKER’S液
用途：Zenker’s液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，对细胞核固定最好，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织标本尽量不要选Zenker’s液固定。
试剂：
Zenker’s贮备液：
脂肪组织冰冻切片步骤
脂肪组织冰冻切片步骤
脂肪组织冰冻切片的步骤如下：
1. 取材：在合适的环境下获取脂肪组织，一般大小为1.5×1.5×0.5cm，注意应尽量剔除脂肪组织、钙化、骨质等影响切片质量的成分。
2. 速冻：使用液氮或干冰-丙酮（乙醇）法将组织速冻。
液氮法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内，然后将其放入盛有液氮的小杯内，注意小盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，10~20s组织即迅速冰结成块。
干冰-丙酮（乙醇）法是将150~200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，然后使用异戊烧进行速冻。
3. 切片：将速冻后的组织块固定在切片机上，调整切片的厚度为4~6μm，然后进行切片。
4. 贴片：将切好的组织切片立即放入冰冻固定液中固定10~20秒，然后取出贴片。
5. 染色：使用苏木精染液进行染色，室温下染色1分钟，如果室温较低，则需要适当延长染色时间。
6. 水洗：染色后进行水洗，洗去多余的染液。
7. 封片：将切片晾干后，使用合适的封片剂进行封片。
注意，在整个过程中，都需要保持组织的冷冻状态，以防止组织内的冰晶形成和细胞结构的破坏。
同时，切片和染色的过程中，也需
要注意避免切片过厚或过薄，以及染色过深或过浅，以保证切片的质量。
以上信息仅供参考，具体操作可能会因实际情况和设备的不同而有所差异。
常用固定液的性质、用途
常用固定液的性质、用途和配置1．单一固定液的性质和用途（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。
酒精可溶解脂肪、类脂体，所以不能用酒精固定脂肪。
酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。
单独固定使用酒精的浓度应为95—100％。
无水酒精渗透力较差，并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。
酒精除固定作用外，还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可保存于70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。
无水乙醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。
酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合使用。
（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称福尔马林，一般使用浓度为10％福尔马林（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液10ml 与90ml 蒸馏水混合即可，实际上其含量只有4％甲醛。
这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。
甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。
它是一种应用广泛，使用简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的固定及保存。
尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。
更适于病理组织的制片及大体积标本的保存，一般组织需固定24 小时以上，固定后的组织可移入50％酒精中逐步脱水。
甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被氧化为甲酸。
在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24 小时后失效。
甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉淀，在高温下又成为甲醛。
不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。
所以在备用的福尔马林中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。
组织固定原理
动物组织的固定原理及固定液在组织病理学中，不管是组织切片乃至电镜还是大体标本的保存，都必须进行及时的适当的和有效的固定。
组织只有经过固定，才能完成随后的一系列的制作，直至切片的最后完成。
（一）、固定的作用组织经一系列的处理后，就必须进行固定，当然有的组织是先固定，再进行处理，然后再固定。
固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。
（二）固定的目的1、能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。
细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。
固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。
另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。
因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。
2、保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖元等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。
细胞的固有物质，即细胞核、内质网、线粒体、高尔基器、溶酶体、过氧体，细胞骨架，组织液，抗原、糖元等。
这些物质，如果不将其及时固定，是很容易丧失的，尤其是溶酶体，很容易受到破坏，因此应特别小心。
3、使组织硬化，便于切块。
刚离体的组织，除了胃组织以外，都是柔软的组织，尤其是胃肠道的组织，如果在没有固定时就取材，效果就很差，不是取材不规整，就是厚薄不均，粘膜和肌层很容易分开，因此，要取得规整标致的材料，就必须将组织彻底固定，再行取材。
病理检验技术练习题库(附答案)
病理检验技术练习题库（附答案）一、单选题（共118题，每题1分，共118分）1.以下说法错误的是A、修复的细胞需与癌细胞鉴别B、修复的细胞核可见多个大的、不规则的核仁C、修复的细胞可见细胞核异常,体积大D、修复的新上皮细胞的胞质常呈嗜酸性E、修复的细胞核可见异常有死分裂正确答案：D2.石蜡切片时展片温度以( )为宜A、42-48℃B、大于75℃C、70℃-75℃D、56-58℃E、60-69℃正确答案：A3.一般情况下,医院病理科在收到送检申请单和标本后()个工作日内应签发病理学诊断报告书。
A、2-3B、5-7C、7-8D、8-10E、3-5正确答案：E4.关于分泌性腺上皮细胞,以下说法错误的是A、在细胞学涂片上常呈立方形或柱状B、分泌性腺上皮分布于消化道和相关腺体、男性和女性生殖道C、细胞质常呈嗜酸性D、核多位于细胞底部E、胞质呈透明状或浑浊,常含黏液正确答案：C5.Mallory磷钨酸苏木精(PTAH)染色法通常用于显示()A、横纹肌纤维B、平滑肌纤维C、网状纤维D、弹力纤维E、神经纤维正确答案：A6.Carnoy液除了常用于糖原和尼氏体的固定外,还有下面哪项特点()A、该固定方法适用于标本的长期保存B、对于染色体固定佳,显示DNA和RNA效果好C、用于保存脂类D、该固定液固定速度慢而温和E、该固定渗透力差正确答案：B7.住院患者查询病理学检查资料的期限是()A、送检后5年B、送检后10年C、送检后30年D、送检后25年E、送检后20年正确答案：C8.以下哪些疾病是可以通过细胞学作出诊断①各种白血病②乳腺癌③食管癌④甲状腺癌⑤前列腺癌A、①②④B、①②⑤C、①②③D、①③④E、①④⑤正确答案：C9.尸检准备室的基本设施应包括A、尸检专用器械和柜具B、参与尸检人员使用的隔离衣物和消毒器具C、办公设施D、消毒设施E、以上都是正确答案：E10.关于病理解剖室和器械的清洁、消毒,下面不正确的是()A、器械用后清水冲洗干净,浸泡在1:1000苯扎溴铵(新洁尔灭)内含0.5%亚硝酸钠溶液中4~6小时B、器械用后清水冲洗干净,也可以浸泡在10%的甲醛水溶液中消毒2~4小时C、病理解剖室只需定期用水冲洗地面和靠近地面的墙壁D、打开紫外线灯进行空气消毒,室温不低于20℃,相对湿度不超过50%,一般照射20~30分钟E、打开紫外线灯进行空气消毒,剂量不应低于900μW▪s/cm2正确答案：C11.关于急性炎症,以下说法错误的是A、起病急,病程短B、局部红肿热痛C、细胞学涂片上可见淋巴细胞多D、全身症状明显E、细胞学涂片上可见坏死物质正确答案：C12.计算机病理档案管理系统应具有的功能包括()A、信息输入B、分类统计C、按需检索D、资料备份及输出E、以上都是正确答案：E13.以下说法错误的是A、上皮细胞较少发生凋亡B、凋亡的染色质致密之后碎裂降解呈小颗粒状称为凋亡小体C、凋亡的细胞质无变化D、凋亡于坏死既有区别又有联系E、细胞膜多破裂正确答案：C14.对于重铬酸钾固定剂,对其描述下面错误的是()A、重铬酸钾固定的组织,酸性染料着色良好B、用于固定高尔基体和线粒体效果较好C、重铬酸钾为橙红色晶体,有毒D、组织穿透速度快E、重铬酸钾固定的组织明显收缩正确答案：E15.以下说法错误的是A、病理检验技术人员是基础研究或临床病理学诊断的得力助手B、病理检验技术人员是医疗、教学和科研机构中不可缺少的技术力量C、病理检验技术人员是医院病理科辅助管理者D、病理诊断的准确性和及时性与病理检验技术人员的工作质量和技术水平有关E、没有高质量的病理切片就难以做出正确的病理诊断正确答案：C16.石蜡包埋时应注意A、有无特殊包埋面B、石蜡中有杂物应过滤后使用C、包埋温度不宜过高D、A、B、C都对E、A、B、C都不对正确答案：D17.以下属于细胞病理学诊断的优点的是①易于学习掌握②患者易于接受③利用医院现有的设备可以获得较深处标本④局部无手术切口有利于放射等治疗进行⑤能充分显示组织学关系A、①③④⑤B、①②③④C、①②③④⑤D、②③④⑤E、①②④⑤正确答案：B18.病理检验室的面积要求一般要达到()m2。
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脂肪组织固定液
简介：
固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。
固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。
固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
Leagene 脂肪组织固定液由Bouin's 固定液和乙醇组成，实际上其成分为PA 、甲醛、乙酸、乙醇等。
PA 可沉淀蛋白引起组织收缩，但不会使组织硬化, 其与甲醛和乙酸混合后，穿透速度加快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的微细结构显示的很清晰，是一种良好的脂肪瘤和脂肪肉瘤的固定液。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
2、 一般脂肪瘤和脂肪肉瘤需要固定48h 。
如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过36h 。
注意事项：
1、 脂肪组织固定液对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作， 避免吸入。
2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。
4、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。
5、 取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。
6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
编号 名称 DF0190 Storage 脂肪组织固定液 500ml RT 避光 使用说明书 1份。