高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项
高中生物实验中酒精、盐酸,氢氧化钠、染色剂、细胞状态、使用显微镜的实验总结
高中生物实验中酒精、盐酸，氢氧化钠、染色剂、细胞状态、使用显微镜的实验总结高中生物实验中酒精的作用1、体积分数为50%的酒精 (必修1 P18)作用洗去浮色。
原理苏丹?是弱酸性染料，易溶于体积分数为50%酒精。
应用脂肪的鉴定实验。
2、体积分数为95%的酒精 (必修1 P115，必修2 P88)作用: 解离原理:用质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精1?1混合，能使组织中的细胞相互分离开来。
应用:观察植物细胞的有丝分裂;低温诱导植物染色体数目的变化(冲洗卡诺氏液)。
3、体积分数为70%的酒精(75%酒精也可以)作用:消毒杀菌。
原理:体积分数为75%的酒精，能够顺利地渗入到细菌体内，吸收细菌蛋白的水分,使其脱水变性凝固而失去功能，以达到消毒杀菌的目的。
应用:果酒和果醋的制作(选修1 P4)微生物的培养;植物组织培养(选修1P34)。
70%的酒精擦拭双手，擦拭接种台。
土壤中小动物类群丰富度的研究(作为防腐剂，保存土壤小动物必修3 P76) 4、无水乙醇 (必修1 P97)作用:提取色素。
原理:叶绿体中的各种色素均是有机物，能溶解在有机溶剂中，各色素在无水酒精中的溶解度较大，且酒精无毒，方便操作。
应用:绿叶中色素的提取与分离。
5、工业酒精(一般是体积分数为95%的酒精)作用燃烧加热。
原理酒精是富含能量的有机物，燃烧能产生大量的热量。
应用必须加热的实验,如生物组织中还原糖的鉴定(必修1 P18)，比较过氧化氢在不同条件下的分解(必修1P)，微生物培养(选修1P15、21),胡萝卜素的提取、分离鉴定(选修1P78)等实验。
高中生物实验中盐酸的作用1、实验:观察DNA和RNA在细胞中的分布必修1 P26(1) 质量分数8%盐酸(水解)能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞; (2) 质量分数8%盐酸(水解)使染色体中DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂结合。
2、实验:影响酶活性的条件必修1 P84质量分数5%盐酸用于调节PH值。
染色的基本原理、方法及注意事项！
染⾊的基本原理、⽅法及注意事项！染⾊的基本原理、⽅法及注意事项！！染⾊的基本原理、⽅法及注意事项百欧博伟⽣物涂⽚及染⾊是微⽣物学的基本技术，也是观察细菌最简单且⾏之有效的⽅法。
通常情况下，由于细菌个体较⼩，较透明或半透明，如未经染⾊往往不易观察识别。
因此借助于染⾊法可使细菌着⾊，与视野背景形成鲜明对⽐，从⽽易于在显微镜下进⾏观察。
简单染⾊法即只⽤⼀种染料对涂⽚进⾏染⾊，该法简便易⾏，适⽤于菌体的⼀般形态观察。
通常情况下由于细菌菌体多带负电荷，易和带正电荷的碱性染料结合⽽被染⾊，因此常⽤碱性染料进⾏简单染⾊，如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等。
所有的苯胺染料，均可⽤来做简单染⾊法的染⾊剂。
在进⾏染⾊之前的制⽚过程是影响染⾊结果好坏的关键性步骤。
制备细菌染⾊⽚⼀般要经过涂⽚、固定、染⾊、⽔洗、⼲燥等步骤(见下图),然后⽤显微镜，甚⾄油镜观察。
(⼀)涂⽚取⼀⼲净的载玻⽚，滴加⼀⼩滴蒸馏⽔于载玻⽚中央。
按⽆菌操作要求，接种环经灼烧灭菌，待冷却后⽤接种环从菌种试管斜⾯上(培养⽫表⾯)挑取少量培养物(不要挑破培养基),置于载玻⽚上的⽔滴中，与⽔混合并轻轻涂布成直径约1cm左右的均匀薄层。
操作完成后，接种环要再经灼烧灭菌，放归原处。
(⼆)⼲燥将涂⽚于室温中⾃然⼲燥或者置于酒精灯⽕焰⾼处，微热烘⼲。
切记不能直接在⽕焰上烘烤，以免菌体烤焦变形，影响对菌体的观察。
(三) 固定涂⽚标本⾯向上，快速通过酒精灯⽕焰外焰2次~3次，进⾏标本固定。
固定的⽬的在于杀死细菌以固定其细胞结构；保证菌体牢固地粘附在载玻⽚上，染⾊或⽔洗时不⾄于脱落；同时改变菌体对染料的通透性，有利于着⾊，增强染⾊效果。
固定时，以载玻⽚背⾯加热处触及⽪肤⽽不觉过烫为宜(⼀般不超过60 )。
(四)染⾊标本玻⽚⽔平放置，滴加1滴~2滴染⾊液，使染⾊液完全覆盖涂⽚区域，染⾊时间视不同标本和染料的性质⽽定。
(五)⽔洗染⾊到⼀定时间后，倾去染液，斜置玻⽚，⾃玻⽚上端⽤⾃来⽔冲洗⾄流下的⽔⽆⾊为⽌；或将玻⽚置于玻⽚架上，⽤洗瓶倾注⽔流进⾏⽔洗。
高中生物常用的染色剂染色机理
普知--关于遗传物质被碱性染料染色~碱性液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用1．2龙胆紫C笛HIN具有金属光泽的暗绿色粉末。
能溶于水、三氯甲烷和醇；难溶于醚。
加热至275℃分解。
其1％一2％溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。
2染色剂的配制2．1配方1醋酸一洋红染液取100mL45％冰醋酸，煮沸后徐徐加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗锈铁钉，煮沸10min，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。
2．2配方2龙胆紫染液，取龙胆紫1～2g，溶解在100mL2％乙酸溶液中，直到溶液成深紫色为止(实验过程中视具体情况溶液可适当稀释)。
保存在棕色瓶内。
3染料的作用机理3．1碱性染料染色试剂的酸碱性与溶液的酸碱性不是一回事。
染色试剂的酸碱性，其划分依据在于染料分子电离后的有色成分是阳离子还是阴离子，如果着色的基团是阳离子的为碱性染料，着色的基团是阴离子的为酸性染料3_2染色机理龙胆紫能不能染DNA?还是只是把染色质上的蛋白质染色?或是DNA和蛋白质都被染色?上文提到，碱性染料的着色基团是阳离子，着色基团可以与细胞中的带负电荷部分牢固地结合。
DNA是酸性物质，可电离出H，其余的部分就带上了负电荷。
因此，带负电荷部分就能和碱性染料电离出的着色阳离子通过电荷问的引力作用牢固结合，而被染上颜色。
有的染色作用随溶液中的pH值而变动。
细胞的主要成分是蛋白质，它含有氨基和羧基，在酸性溶液中，当溶液的pH值小于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带正电荷，易被酸性染料染色；在碱性溶液中，当溶液的DH值大于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带负电荷。
容易被碱性染料染色。
所以，可以得出结论：碱性染料使染色体着色，使DNA和蛋白质都被染色。
只不过这2种物质被染色的机理是不同的。
4碱性染料用酸配制的原因龙胆紫和洋红都溶于水和酒精。
而做实验用的龙胆紫和洋红溶液。
却都是用醋酸溶液配制的。
这又是为什么呢?原因有2个：1)是为了染色物能方便地进入细胞内，又不会发生细胞膨胀。
高考生物知识点总结染色剂
高考生物知识点总结染色剂染色剂是一种特定的化合物或物质，常用于染色实验、工业生产以及日常生活中。
在生物学中，染色剂在显微镜下用于染色细胞和组织，以便观察和研究其结构和功能。
下面将对高考生物中与染色剂相关的知识点进行总结。
一、染色剂的分类染色剂可以根据其化学性质和应用领域进行分类。
常见的分类包括：1.生物染色剂：如增强细胞和组织的对比度，使其更易于观察。
常见的生物染色剂有伊红、姬蓝、甲苯红等。
2.生理染色剂：用于检测生物体内各种化学成分的存在和变化，如碘液检测淀粉、苏丹红检测脂肪等。
3.荧光染料：具有荧光性质的染色剂，可用于显微镜下观察光学反应和细胞成分。
亚甲基蓝和荧光素是常见的荧光染料。
4.工业染料：应用于纺织、皮革和造纸等工业领域的染料，如亚甲基橙、甲基紫等。
二、染色剂的作用原理染色剂通过与物质的化学反应或物理吸附，使其显色。
主要的作用原理有：1.酸碱性染色：染料与细胞或组织中的某种成分发生酸碱反应，达到染色的目的。
例如靛蓝染色DNA时，DNA的磷酸基团与靛蓝形成盐类。
2.亲和性染色：染料与细胞或组织中的某种成分具有生物亲和性，通过物理吸附来染色。
例如血红蛋白与伊红发生亲和性染色。
3.氧化还原反应染色：某些染剂需要经过氧化还原反应才能显色。
例如苏丹红通过氧化还原反应将脂肪染色为红色。
三、染色剂在生物学中的应用染色剂在生物学中具有广泛的应用，如：1.组织染色：通过染色剂将组织特定的结构或成分显色，便于观察和研究。
常用的组织染色剂有伊红、姬蓝、碘液等。
2.细胞染色：染色剂可以用于染色细胞的不同部位或细胞器，如细胞核、线粒体等。
常用的细胞染色剂有苏丹红、亚甲基蓝等。
3.生物化学实验：染色剂在生物化学实验中用于检测和分析特定的化学成分。
例如用碘液检测淀粉或重铬酸钾检测脂肪。
4.药物研发：染色剂在药物研发过程中用于观察和评估新药的吸收、分布和代谢情况。
四、染色剂的安全性和环保性染色剂在使用过程中需要注意其安全性和环保性。
高中生物必修一实验知识点总结
绿叶中的色素不止一种，他们都能溶解在层析液中。然而，它们在层析液中的溶 解度不同；溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快；反之则慢。这样，几分钟之 后绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。且溶解度最高的是胡 萝卜素，它随层析液在滤纸上扩散的最快；叶黄素和叶绿素a的溶解度次之，叶 绿素b的溶解度最低，扩散的最慢。
比较项目
斐林试剂
双缩脲试剂
使用方 法
呈色反 应条件 不 同 反应原 点 理 颜色 浓度 相同点
甲液和乙液混合均匀后 使用时先加A液再加B 方可使用，且现配现用 液
需水浴加热 不需加热即可反应
还原糖中的醛基被 Cu(OH)2氧化， Cu(OH)2被还原为 Cu2O
砖红色
具有两个以上肽键的化 合物在碱性条件下与 Cu2＋反应生成络合物
问题探讨: 1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出 一部分样液？ 作对照 2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3～4滴而不能 过量？
过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，
而掩盖生成的紫色。
3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？ 时间太长，Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而 无法参与反应。
取少量脂肪样液，加入苏 丹Ⅲ，震荡，可看到溶液 呈了橘黄色，本实验我们 用苏丹Ⅲ做染液。
蛋白质+双缩脲试剂→紫色络合物
豆浆、蛋清、牛奶都是很 好的实验材料。
本实验我们用蛋清做实验材料， 在用蛋清做实验材料时，要注意 将蛋清稀释，如果稀释不够，反 应后的产物会粘固在试管内壁上， 使反应不容易彻底。
深化
实验课题：观察DNA和RNA在细胞中的分布 一、实验原理 1.碱性染料能使核酸着色，甲基绿和吡罗红均为碱性染料； DNA﹢甲基绿→绿色，RNA ﹢吡罗红→红色。 甲基绿与吡罗红作为混合染料使用可显示细胞中DNA和RNA在细胞中的分布。 2.盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与 蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
高中生物实验颜色反应与各种试剂作用总结
高中生物颜色反应1．还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀2．苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅳ+脂肪→红色3．蛋白质+双缩脲试剂→紫色4．淀粉+碘液→蓝色5．DNA的染色与鉴定染色原理：DNA+甲基绿→绿色应用：可以显示DNA在细胞中的分布。
鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂。
6．RNA的染色与鉴定染色原理：RNA+吡罗红→红色应用：可以显示RNA在细胞中的分布。
注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂，而不是单独染色，而且要现配现用。
7．健那绿专一性染线粒体的活细胞染料原理：健那绿(Janus green B)染液，是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。
线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。
（另:观察细胞中叶绿体不用染色）8．酒精的检测原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色。
9．CO2的检测原理：CO2可以使澄清的石灰水变混浊，也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。
10．染色体（或染色质）的染色原理：染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液或改良的苯酚品红）染成深色。
应用：用高倍镜观察细胞的有丝分裂。
11．亚硝酸盐的检测出现玫瑰红原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
应用：将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。
12．脲酶的检测原理：细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，使PH升高，从而使酚红指示剂变红。
应用：在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂，培养某种细菌后，看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素。
13．伊红美蓝检测大肠杆菌原理：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的代谢产物（有机酸）与伊红美蓝结合使菌落呈现黑色。
高考生物试题中有关染色剂使用的考查
高考生物试题中有关染色剂使用的考查一染色剂的应用1 DNA和RNA的染色鉴定甲基绿和吡罗红是混合染色剂。
甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末。
溶于水，显蓝绿色。
稍溶于乙醇，不溶于戊醇。
吡咯在盐酸作用下聚合成为吡咯红，可与 RNA 结合呈现红色。
这两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。
利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以观察到DNA和RNA在细胞中的分布情况。
注意：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进人细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
② 2种染色剂要混合使用，而且要现配现用。
2 健那绿染液与线粒体的观察健那绿染液是专一性的线粒体的活细胞染料，线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态( 即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原成为无色状态。
因此可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。
线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。
3. 碱性染料与染色体的观察生物实验中所用的染料，按其来源可分为天然染料和人工染料两大类。
人工染料根据其主要化学成分的性质，又分成碱性染料、酸性染料和中性染料三大类，其碱性、酸性和中性是由染料中有色部分的性质所决定的。
若染料的有色部分为阴离子，即为“酸性”染料；若染料的有色部分为阳离子，则称为“碱性”染料；若染料的阴、阳离子均有颜色，则称为“中性”染料。
染色体(质)是细胞核内容易被碱性染料染成深色的物质。
在观察植物细胞有丝分裂实验中，常用龙胆紫溶液使染色体染成紫色，也使用醋酸洋红溶液使染色体着红色。
二者染色时间都不可过长。
l ％～ 2 ％龙胆紫溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。
龙胆紫溶液的配制是将龙胆紫溶解在质量分数为2％的醋酸溶液中配制而成。
染色中使用的龙胆紫溶液略呈酸性，l％醋酸洋红本身也是酸性，同样具有碱性的助色基团。
高一生物染色知识点
高一生物染色知识点生物染色是生物学研究中重要的技术手段之一，通过染色可以使细胞、组织和器官的结构更加清晰可见，方便观察和研究。
本文将介绍一些高一生物学中常见的染色知识点，包括原核生物染色、真核生物染色以及染色体的结构和功能。
一、原核生物染色原核生物是指没有真核细胞核的生物，如细菌。
在对原核生物进行染色时，常用的染色方法有革兰氏染色和抗酸抗碱染色。
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，分为革兰氏阳性染色和革兰氏阴性染色。
革兰氏阳性细菌染色后呈紫色，而革兰氏阴性细菌染色后呈粉红色。
抗酸抗碱染色可用于鉴定结核杆菌等具有酸酶分泌能力的细菌。
抗酸染色方法中最常用的是抗酸快速染色法和抗酸琼脂红法，染色后结核杆菌呈红色。
二、真核生物染色真核生物是指具有真核细胞核的生物，如动植物细胞。
在对真核生物进行染色时，常用的染色方法有核染色和细胞器染色。
核染色常用的染料有伊红、格里姆萨染料、苏木精和五甲基绿等。
对细胞核进行染色后，能够使核的形态结构清晰可见，便于研究细胞核的内部组织。
细胞器染色是对特定的细胞器进行染色，常用的染料有苏木素、亮蓝色素和伊红等。
细胞器染色可以使细胞器的形态和分布情况更加明显，帮助研究细胞器的功能和作用机制。
三、染色体的结构和功能染色体是生物体细胞核中的一种细长的结构，它携带了生物体遗传信息的基本单位。
染色体由DNA和蛋白质组成。
染色体的主要功能是储存和传递遗传信息。
在染色体的结构中，中心区域为着丝粒，两侧为染色体臂。
着丝粒的主要作用是参与有丝分裂过程中染色体的运动和分离。
染色体臂则包含了基因信息，其中的DNA序列决定了生物体的遗传特征。
染色体能够通过染色体构象变化来调控基因的表达。
在正常的细胞周期中，染色体会发生收缩、扩展、屈曲等不同的构象变化，从而使得特定的基因在特定的时期被启动或关闭。
这样，生物体可以根据不同的环境和发育需求来调控基因的表达，实现细胞的分化和功能的多样化。
总结生物染色是生物学研究中的重要技术，通过染色可以使细胞和组织的结构更加清晰可见，便于观察和研究。
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高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项朱秋霖，马天兵兰州二中，兰州 730000 摘要：目的：探究高中生物试验中常见染色剂的使用方法及常见问题与注意事项方法：通过一些简单的实验验证与参考文献得出结论。
结果：验证与总结出生物试验中常见染色剂的染色原理及所遇到的染色问题的原因。
关键词：高中生物学实验染色剂显色原理注意事项The common dye staining principle and precautions in the highschool biology curriculumZhu Qiulin，Ma TianbingLanzhou NO.2 middle secondary school class8 grade2，lanzhou 730000Abstract:Objective: To explore the use of high school biology test stains and FAQs Notemethod: through some simple experiments verify references concluded.Results:Validation andsummed up a common biological test stain dyeing principle and coloring problem encountered byreason.Keywords:high school biology experiment stain color rendering principle Precautions1.常见染色剂常见的高中生物染色显色反应，其实质是化学反应或者物理反应，按照其反应本质，可分为下列几类[5]：1.1 氧化还原反应类染色剂通过氧化还原反应生成某些具有特殊颜色的物质，利用其与生物组织中某些具有还原性的物质或代谢产物进行化学反应，宏观上产生颜色变化，通过颜色变化,鉴别某些生物组织中的目标物质。
1.1.1 斐林试剂由于生物组织中的葡萄糖，果糖和麦芽糖等含有具有还原性的醛基，因此称其为还原性糖[1]。
利用斐林试剂，与还原糖发生还原反应，生成砖红色沉淀。
利用这一性质，可鉴定生物组织液中的还原性糖的存在与否，亦可以用来分析糖尿病人尿液成分。
配方为2.5mol/L的氢氧化钠溶液（甲液）；约0.31mol/L的硫酸铜溶液（乙液）。
其化学反应原理如下所示：2CH3(CH2OH)4CHO + 2Cu(OH)2→ 2CH3(CH2OH)4COOH + Cu2O↓ + 2H2O当甲乙两液混合后，立即生成蓝色的氢氧化铜沉淀（Cu(OH)2）。
Cu(OH)2与随后加入的还原性糖类在加热的条件下，会被还原性糖中的醛基还原成为砖红色的氧化亚铜（Cu2O）沉淀，从而鉴定还原糖。
1.1.2 班氏试剂班氏试剂亦是用以鉴定鉴别糖类物质的染色显色剂，但常用于尿糖的定性检测[3]。
常见配方如下：17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。
称取柠檬酸钠173克与无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加入蒸馏水600毫升，加热溶解。
冷却后，稀释到850毫升。
把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。
1.1.3 重铬酸钾酵母菌无氧呼吸产生乙醇，可用重铬酸钾（俗称红矾钾，分子式K2Cr2O7）溶液进行鉴定鉴别。
其染色显色过程中的化学反应方程式如下所示：3CH3CH2OH + 2K2Cr2O7 + 8H2SO4 → 3CH3COOH + 2Cr2(SO4)3 + 2K2SO4 + 11H2O橙色的重铬酸钾在酸性的条件下，与醇类反应，被还原成为灰绿色的硫酸铬。
从而用以鉴别醇类物质。
1.2 络合物（配合物）类染色显色剂络合物（又称配合物），是由可以给出孤对电子或多个不定域电子的一定数目的离子或分子（配体），和具有接受孤对电子或多个不定域电子的空位的原子或离子（统称为中心原子），按照一定的组成和空间构型所形成的化合物。
这类物质吸收光后，自身产生变化，光照消失后恢复原样，从而产生颜色变化。
1.2.1 碘，碘的乙醇溶液1864年德国科学家萨克斯在分析光合作用产物时，就利用了碘可以用于检测淀粉的性质（反应）。
直链淀粉由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外，碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位，两者形成一种蓝黑色络合物。
实验证明，单独的碘分子不能使淀粉-)。
这并非是淀粉与碘发生了化学反变蓝，实际上使淀粉变蓝的是碘分子离子(I3应，而是淀粉螺旋中央空穴恰能容下碘分子。
支链淀粉遇碘呈紫红色，淀粉跟碘显色结果，与淀粉的聚合度或相对分子质量有关。
1.2.2 双缩脲试剂双缩脲试剂用于鉴定蛋白质,为碱性含铜试液，呈蓝色。
由1%氢氧化钾、1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。
当底物中含有肽键时，试剂中的铜与多肽物质配位反应，配合物呈紫色。
双缩脲试剂中主要作用物为硫酸铜，而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境，因此它可被其他碱如氢氧化钠所代替。
向试剂中加入碘化钾，可延长试剂的使用寿命。
双缩脲鉴定多肽物质（包括蛋白质）的反应原理：双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）是有2个分子尿素在加热后放出一分子氨后得到的产物[1]。
在强碱性环境中，双缩脲与硫酸铜（CuSO4）作用，形成紫红色络合物，该反应即双缩脲反应。
双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的，而为氨基酸所没有的一种颜色反应。
一般分子中含有两个肽键的化合物与碱性铜溶液作用，就会形成紫色或蓝紫色络合物。
但是需要注意的是，除了-CO-NH-有此反应外，（-CONH2-）、（-CH2-）、（-NH2-）、（-CS-CS-NH2）等基团亦有此反应。
1.3 有机染色剂染色[6]利用有机染色剂染色的必备条件是具有颜色并且与被染物质之间有强的亲和力。
1.3.1 苏丹染色剂目前常见的染色剂为苏丹Ⅲ与苏丹Ⅳ染色剂。
苏丹Ⅲ与苏丹Ⅳ是人工合成的苏丹系列染色剂，常作为工业染色剂。
苏丹染色剂为亲脂性偶氮化合物，在脂肪类物质中的溶解度大于在其他溶质（酒精、丙酮）中的溶解度时，染色剂颗粒便在脂肪颗粒中大量积累，并呈现橘黄色或红色。
1.3.2 甲基绿、吡咯红、二苯胺在观察细胞中DNA和RNA的分布时，需要用甲基绿和吡罗红染色。
甲基绿是具有金属光泽的绿色结晶，溶于水，呈现蓝绿色。
在盐酸中显示红黄色，在碱性溶液中显示为无色。
在进行DNA的鉴别鉴定中，使用其对DNA进行染色显色。
吡咯红是含有氮原子的杂环化合物，与RNA结合呈现红色。
DNA在酸性条件下加热，生成嘌呤碱基，脱氧核糖与脱氧嘧啶核苷酸，其中，脱氧核糖在酸性条件下加热，发生脱水反应，并生成ω-羟基-γ-酮基戊糖，与二苯胺（分子式C12H11N）反应，生成蓝色物质。
1.3.3 龙胆紫、醋酸洋红、刚果红龙胆紫与醋酸洋红用于细胞染色体的染色显色反应，在观察植物细胞有丝分裂时经常用来使染色质或染色体着色。
龙胆紫的稀溶液俗称紫药水，虽然在使用龙胆紫溶液染色时，溶液略显酸性，但因为其具有碱性基团，故其为一种碱性阳离子染色剂。
醋酸洋红（胭脂红、卡红）中的醋酸，是该染色剂的溶质。
醋酸增加了染色时细胞的通透性，利于洋红进入细胞核对染色体进行染色。
刚果红（棉红、直接大红、直接朱红）可以使纤维素直接着色的一种偶氮化合物染色剂。
1.4 酸碱指示剂类酸碱指示剂是一类结构复杂，但使用简单的弱有机酸或碱。
它们在溶液中能够部分电离，并且由于结构发生变化，导致其粒子的颜色发生变化，因而在不同的pH环境下呈现不同的颜色。
生物学实验中常用的酸碱指示剂有溴麝香草酚蓝的水溶液和酚红。
高中生物课程实验中“探究酵母菌的呼吸方式”，可以用溴麝香草酚蓝的水溶液来鉴定是否有二氧化碳的生成。
由于酵母菌无氧呼吸生成的二氧化碳并与水反应生成碳酸呈弱酸性，所以由蓝变黄，其中间过渡色为绿色。
酚红为有机弱酸，变色范围为6.8至8.0由黄变红。
可用来检测尿素分解细菌的产物——氨（在溶液中为铵）2. 常见问题及注意事项2.1为什么经常碘遇淀粉不变蓝？课本中经常提及淀粉遇碘变蓝，可是在中学生物或化学实验中，经常见到淀粉遇碘不呈现蓝色，而是呈现紫色或其他颜色。
中学生甚至教师经常被这个问题所困扰，究其原因，主要是因为淀粉的结构及实验条件如温度、PH值等所导致的。
淀粉为白色粉末，由10%～30%的直链淀粉和70%～90%的支链淀粉组成。
溶于水的直链淀粉借助分子内的氢键卷曲成螺旋状。
如果加入碘液，碘液中的碘分子便嵌入到螺旋结构的空隙处，并借助范德华力与直链淀粉分子联系在一起，形成了一种络合物。
在此络合物中，淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位，淀粉与碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。
在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，络合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。
例如，直链淀粉的聚合度是200～980或相对分子质量范围是32，000～160，000时，络合物的颜色是蓝色。
分支很多的支链淀粉，在支链上的直链平均聚合度20～28，这样形成的包合物是紫色的。
支链淀粉部分水解可产生称为糊精的混合物。
糊精的聚合度更低，显棕红色、红色、淡红色等。
除结构外，还有以下因素也会影响：①温度：随着温度的升高, 淀粉溶液与碘显色的灵敏度降低, 且当温度高于45℃时此显色反应现象几乎看不到。
这是因为直链淀粉与碘显色的实质是直链淀粉的螺旋状圆柱刚好能容纳碘分子的钻入, 并受范德华引力吸引而形成络合物, 加热时络合物离解,碘分子从络合物中脱下，所以蓝色褪去；而冷却后, 脱下来的碘分子又逐渐与淀粉结合而再显蓝色。
② pH值：在不同的pH 值溶液中显色情况是不同的。
淀粉与碘的蓝色蓝色反应在pH= 3-5 的弱酸性溶液中进行最灵敏, 在pH小于8的弱碱性溶液中次之；在强酸性溶液中, 反应呈现蓝紫色；在pH大于9的碱性溶液中不显色。
发生上述不同显色反应的原因是：淀粉在强酸中会水解, 产生糊精等, 糊精和碘分子作用呈现红色, 在与深色的碘单质混合后，则呈现蓝紫色; 在强碱性溶液中, 碱将歧化成次碘酸盐和碘化物, 基本无单质碘的存在, 因而不显色; 在弱酸性溶液中, 碘基本不参与歧化反应, 所以单质碘数量多, 有利于与淀粉结合, 故显色反应比较明显。
③淀粉的新鲜程度：淀粉溶液越新鲜, 显色反应越明显。
配好的淀粉溶液放置的时间不同, 与碘分子作用时显示的颜色也有所不同。
淀粉溶液存放时间越长, 呈现的紫色越明显。
这是因为淀粉水溶液会缓慢地水解,为糊精等物质, 糊精与碘作用显红色, 因而久置的淀粉溶液会降低反应的灵敏度, 而且反应呈蓝紫色, 甚至紫红色。