色谱柱使用操作规程
柱色谱法标准操作规程
柱色谱法标准操作规程柱色谱法是将固定相装在柱内，使样品随流动相沿一个方向移动而达到分离的方法。
（《中国药典》2010年版二部附录V C）附录收载的柱色谱法包括吸附柱色谱法和分配柱色谱法。
1 吸附柱色谱吸附柱色谱法是利用色谱柱内吸附剂对于样品中各组分的吸附能力的差异以达到分离目的的方法。
1.1 吸附剂常用的有：氧化铝、硅胶、聚酰胺、大孔吸附树脂等。
吸附剂的颗粒应尽可能大小均匀，除另有规定外，通常多采用直径为0.07～0.15mm的颗粒。
1.2 色谱柱色谱柱为内径均匀、下端缩口或具活塞的硬质玻璃管，下端通常用棉花或玻璃纤维塞住，以防止吸附剂流失。
1.3 吸附剂的填装1.3.1 干法将吸附剂均匀地一次加入至色谱柱中，振动管壁使其均匀下沉，打开色谱柱下端活塞，沿管壁缓缓加入洗脱剂；待柱内吸附剂全部湿润，且不再下沉为止，也可在色谱柱内加入适量的洗脱剂，旋开活塞，使洗脱剂缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。
装柱完毕，关闭下端活塞，操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。
1.3.2 湿法将吸附剂与洗脱剂混合均匀，采用搅拌除去其中气泡，打开下端活塞，缓缓倾入色谱柱中，然必要时，振动管壁使气泡排出，用洗脱剂将管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。
待平衡后，关闭下端活塞，操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。
1.4 供试品的加入1.4.1 干法加入法如供试品不易溶解于初始洗脱溶剂，可预先将供试品溶于易溶溶剂中，用少量吸附剂搅拌，采用加温或挥干方式除去溶剂，待干燥后，再将带有供试品的吸附剂加入至已装好的吸附剂上面，加入洗脱剂。
1.4.2 湿法加入法先将色谱柱中洗脱剂放至与吸附剂面相齐，关闭活塞；用少量初始洗脱溶剂使供试品溶解，沿色谱管壁缓缓加入供试品溶液，应注意勿使吸附剂翻起（亦可在吸附剂表面放入面积相当的滤纸），待供试品溶液完全转移至色谱管中后，打开下端活塞，使液面与柱面相齐，加入洗脱剂。
反相色谱柱的选择和使用 色谱柱操作规程
反相色谱柱的选择和使用色谱柱操作规程液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料紧要以硅胶为基质，在其表液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料紧要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
下面介绍一下反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1.柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时确定要注意流动相的PH范围。
一般的C18柱PH值范围都在2—8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；常常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
假如流动相PH较高或常常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH2—9或Zorbax的PH2—11.5的柱子。
2.填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基接受封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分别；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。
假如待分析的样品属酸性或碱性的化合物，可以选用填料经端基封尾的色谱柱。
二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要依照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是较佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理a、可以使用流动相溶解样品。
阴离子交换色谱柱安全操作及保养规程
阴离子交换色谱柱安全操作及保养规程阴离子交换色谱柱（Anion Exchange Chromatography Column）是一种常用的色谱分离技术。
在实验中，操作人员需要密切关注柱子的使用情况，以确保实验结果的准确性和人身安全。
本文将介绍阴离子交换色谱柱的基本操作规程和保养维护方法。
一、操作规程1. 准备工作•在进行操作之前，需要将色谱柱和固定装置进行清洁消毒。
•提前准备好所需的阴离子交换色谱树脂并按照要求进行催化活化。
•校准pH和Elution Buffer的浓度。
2. 样品预处理•根据实验要求对样品进行预处理，以提高阴离子交换色谱柱分离效果。
•样品必须保持干燥和无菌状态，以防止杂质和细菌的干扰。
•样品pH值和盐浓度的调整应根据实验要求进行。
3. 样品注入•注入样品之前，必须先将磷酸缓冲液从柱子上进行洗脱。
•样品注入时，流量应控制在柱子最大负荷的1/3以内。
•样品的浓度应根据实验要求进行，一般情况下，其浓度控制在0.2-1.0mg/mL。
4. 洗脱和洗涤•洗脱液的浓度要根据实验需要进一步调节。
一般而言，扰动强度和洗脱浓度成正比。
•在洗涤前，应该先用纯水或缓冲液将杂质洗出。
•洗脱和洗涤过程中，需要测定各阶段的洗脱液pH值，以确定实验关键点。
5. 清洗和储存•在操作结束后，需要对柱子进行清洗，以保证下次使用时能正常使用。
•阴离子交换色谱柱的储存条件需要根据实验方法进行。
一般来说，常温下可储存6-12个月。
二、柱子保养1. 储存和清洗•在使用之后，需要对柱子进行彻底的清洗，并将其储存在干燥通风的环境中。
•没有独立的储存条件时，柱子应储存在关闭的塑料袋内，以保证干燥和无菌状态。
•使用前应先对柱子进行检查，确定是否有磨损或裂纹等损坏状况。
2. 身体安全•在插入阴离子交换色谱柱或更换样品时，要避免接触柱子的端口或开启柱子，以免溶液或样品误飞溅。
•在使用过程中，要避免柱子突然断裂，防止溶液渗漏造成身体伤害。
凝胶填料凝胶色谱柱安全操作及保养规程
凝胶填料凝胶色谱柱安全操作及保养规程1. 引言凝胶填料凝胶色谱柱是一种常用的色谱柱，广泛应用于生物分离和分析领域。
本文档旨在介绍凝胶填料凝胶色谱柱的安全操作方法和保养规程，以确保实验过程的安全和凝胶柱的稳定性。
2. 安全操作2.1 实验室准备在使用凝胶填料凝胶色谱柱前，确保实验室器材完整、清洁，并检查色谱柱是否完好无损。
2.2 操作前准备在操作凝胶填料凝胶色谱柱前，采取以下预防措施：•佩戴实验室安全眼镜和手套；•确保色谱仪和其他相关设备的连接稳固；•准备好实验材料和试剂，确保其纯度和质量；•检查色谱柱是否已经充分平衡。
2.3 样品处理在样品处理时，需要注意以下事项：•遵循相关实验室操作规程，避免接触有害物质；•样品处理过程中，注意避免温度和湿度的极端变化，以免对凝胶填料产生不利影响；•样品处理后，确保液相色谱柱表面干净，没有残留物。
2.4 色谱柱装配和操作在进行色谱柱装配和操作时，需要注意以下事项：•色谱柱装配前，仔细阅读和理解相关操作手册，确保正确安装；•操作过程中，避免使用过大的压力，以免对凝胶填料造成破坏；•遵守色谱柱的使用限制，避免超过推荐的最高压力和流量。
2.5 操作后处理在操作结束后，需要进行适当的柱后处理：•柱后处理方法包括清洗、平衡和存储；•根据实验室具体情况和要求，选择合适的柱后处理方法；•柱后处理方法的选择应遵循色谱柱供应商的建议和要求。
3. 保养规程为了保持凝胶填料凝胶色谱柱的稳定性和延长使用寿命，需要定期进行保养。
3.1 柱前准备在进行保养前，需要进行柱前准备工作：•仔细查看柱后处理方法，了解柱前准备工作的具体要求；•清洗色谱柱外部表面，确保干净无尘；•根据实验室的要求，检查和更换色谱柱的连接器、垫圈等附件。
3.2 柱后处理柱后处理是保养凝胶填料凝胶色谱柱的重要步骤：•依据实验情况和需要，选择合适的柱后处理方法；•清洗色谱柱，使用适当的溶剂和方法，去除残留的样品和杂质；•均匀平衡色谱柱，以保证凝胶填料的稳定性和柱效；•注意避免对色谱柱施加过大的压力，以免导致柱损坏。
色谱柱的使用和维护方法及操作规程
色谱柱的使用和维护方法及操作规程色谱是一种分别分析手段，分别是核心，因此担负分别作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
当然，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
1、避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
2、应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然，流动相使用前必需经脱气和过滤处理。
3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
4、选择使用适合的流动相（尤其是pH），以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解，压力上升是需要更换预柱的信号。
5、避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
6、常常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50～75ml。
7、避开使用高粘度的溶剂作为流动相；假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在试验完毕柱子冲洗干净。
8、进样样品要提纯。
9、严格掌控进样量，不要超载。
10、每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱，好用洗脱本领强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。
当接受盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。
高效液相色谱柱的正确使用 液相色谱操作规程
高效液相色谱柱的正确使用液相色谱操作规程色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
关于色谱柱的安装、维护、保色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
关于色谱柱的安装、维护、保存以及由色谱柱导致的这样那样的色谱故障也是一门学问。
高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱，过滤流动相和样品，净化样品，避免过高的柱压，注意温度和酸碱度，正确及时的冲洗等。
1.加装保护柱保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。
尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染,因此,加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。
保护柱填料应与分析柱一致,粒径可较分析柱大。
保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(5～1次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。
2.过滤流动相和样品流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。
当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。
所配制的样品试液在注入流路系统前均要经.45μm(.22μm则更好)孔径滤膜过滤。
要注意区分水系和油系,二者不可混用,以防止滤膜溶解而造成污染。
装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换,以避免滤器因过载而起不到过滤作用。
液相色谱仪色谱柱保护柱如何使用 液相色谱操作规程
液相色谱仪色谱柱保护柱如何使用液相色谱操作规程色谱柱是液相色谱中紧要的一个构成部分。
众所周知，色谱是一种分别、分析手段，分别是其核心，而色谱柱担负的就是其分别作用，可以说，色谱柱就是液相色谱仪的心脏。
保护柱则是为了降低分析柱受污染程度，延长分析柱使用寿命的紧要构成部分。
如何使用保护柱1、专柱专用，避开保护柱成为不同项目间的交叉污染源。
2、适时更换保护柱。
当峰的理论塔板数下降15%，或是柱压上升15%，或是关键分别度下降15%时，都应当适时更换保护柱。
3、不慎发生强污染时，可以将分析柱卸下，单独冲洗保护柱，可以使污染物更快的从保护柱中流出。
但是不行超声清洗保护柱，以免损伤柱芯。
保护柱使用注意事项：1、独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面平滑，尽量削减死体积以降低柱外展宽效应。
2、卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时应自行标注，并依照标注方从来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。
3、直接填装的短柱型保护柱，显现柱压上升或峰型变差时，可不接分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
4、卡套式保护柱，柱芯替换时，注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配，同时不易旋拧过紧，以防滑丝。
5、保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影响。
6、相像一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接分析柱使用。
使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命，但选择合适的保护柱更加紧要，选择或使用不当也可能带来截然相反的效果高效液相色谱仪分析样品的预处理高效液相色谱仪分析样品的种类繁多，物理形态广泛，构成及其浓度多而杂多变，对分析结果的干扰因素很多，为达到分析目的，样品要进行有效的预处理。
一、样品预处理的紧要性：1、样品预处理所用时间宏大于色谱分别时间。
2、消耗大量的溶剂和其它化学品，占分析消耗总成本最大。
3、样品预处理是试验的重复性和精准性最差的环节，是影响试验结果好坏的紧要因素。
色谱柱的使用操作规程是
色谱柱的使用操作规程是色谱柱是色谱分析中非常重要的工具，正确的使用操作规程可以确保色谱柱的寿命和分析结果的准确性。
以下是一份详细的色谱柱使用操作规程，共计1200字。
1. 色谱柱保存和准备1.1 色谱柱的保存：色谱柱通常由玻璃或者金属制成，应当避免与湿气、灰尘以及高温的环境接触。
保存时，应当将色谱柱放置在干燥、清洁且温度适宜的地方。
避免长时间曝光于阳光下。
储存条件的稳定性对于保持色谱柱的性能至关重要。
1.2 色谱柱的检查：在使用色谱柱之前，应当对其进行检查，确保柱身无破损、裂纹或者污染。
同时，应当检查色谱柱的规格和批号是否与实验所需完全匹配。
1.3 色谱柱的条件适应：某些色谱柱在使用之前需要进行条件适应。
一般的做法是，在使用之前进行几个小时的溶剂通过柱操作，以确保色谱柱的平衡状态，并且清除可能影响分析结果的残留物。
2. 连接色谱柱2.1 连接前准备工作：在连接色谱柱之前，应当确保色谱仪的泵和检测器已经打开，工作正常。
同时，应当确保带压装样器、流量计、接头等设备已经准备就绪。
2.2 连接色谱柱：先将附近日期较长的色谱柱拆下来，再将新的色谱柱连接上。
连接时，要注意使用适当的扭力，防止柱子变形或者破裂。
2.3 采用适当的接头：连接色谱柱时，要使用适当的接头和密封件，确保无泄露、无死角，以及良好的稳定性。
3. 柱子的清洗3.1 色谱柱的初始化：在首次使用某个新的色谱柱之前，必须进行初始化。
一般的做法是通过注入溶剂来清洗色谱柱，直到溶剂的出图稳定为止。
3.2 溶剂的选择：在清洗色谱柱时，应选择与待测样品相同的溶剂或者相似的溶剂，以确保能够有效清除之前的样品残留物，并且不影响下一个样品的分析。
3.3 清洗的步骤：一般的清洗步骤包括预洗、洗脱和再平衡。
预洗时，可以使用较强的溶剂，如甲醇或者乙醇，以清除可能附着在色谱柱上的杂质。
洗脱时，可以使用更强的溶剂进行清洗，如乙腈或者丙酮。
再平衡时，可以使用溶剂与待测样品相同的溶剂，以使色谱柱恢复到平衡状态。
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【分享】色谱柱使用操作规程-sop
1.目的： 建立色谱柱使用操作规程.
2.范围：适用于仪器分析（HPLC、GC）前对检测条件适用性的确认和HPLC分析结束后对的色谱柱的清洗。
3.责任：QC检验员对本标准实施负责.
4.内容：
4.1. 系统适用性试验的定义：按SOP项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
4.1.1.色谱柱的理论板数（n）:
n=5.54(tR/Wh/2)2
TR—保留时间，min；
Wh/2—半峰宽高度。
4.1.2.分离度：
tR2—为相邻两峰中后一峰的保留时间；
tR1—为相邻两峰中前一峰的保留时间；
W2及W1—为此相邻两峰的峰宽。
4.1.3.重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％。
4.1.4.拖尾因子：
W0.05h--为0.05峰高处的峰宽；
d1—为峰极大至峰前沿之间的距离；
除另有规定外，T应在0.95—1.05之间。
4.2步骤：
4.2.1.按具体分析方法操作，用流动相走基线约40分钟（正常流速），待基线平稳。
4.1.
5.基线平稳后，按要求进系统适用性溶液或对照溶液分析，记录色谱图，进行评估，符合要求后，待测样品。
4.1.6.进样品溶液，记录结果。
4.1.7.测试完毕后，清洗约30min，一般流速为正常测样流速的1至1.5倍，冲洗约40min。
走空白，按1000积分无任何杂质显示。
当所测样品杂质在30min 后出峰时，走空白时间约为60min。
如果有杂质显示，继续清洗
至合格为至，并作相应记录。
4.2.
5.色谱柱的贮存：
4.2.
5.1.防止缓冲溶液和三次水溶液流动相产生微生物，应做到流动相用多少配进多少。
含三次水流动相的有效期为3天，不含三次水的流动相的有效期为7天.
4.2.
5.2.尽可能将色谱柱贮存于100％有机溶剂中（如：最好用乙腈，其次甲醇），避免在缓冲溶液中保存。
4.2.
5.3.使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15-20倍体积的不含缓冲剂的同种三次水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱（含不小于5%有机溶剂），后换成100%有机溶剂贮存。
4.3管路的清洗：周期为一月，特殊情况除外（当柱压比正常情况下高30kgf时应立即清洗）.
4.3.1清洗方法：
4.3.1.1色谱清洗完毕后，将色谱柱取下，将泵与检测器直接连接，先用5%HNO3,流速2.0ml/min清洗,压力明显降低为至10kgf以下，时间约1小时.
4.3.1.2再用100%三次水流速2.0ml/min清洗,将管路中酸清洗干净为至，时间约30min.
4.3.1.3最后用100%甲醇2.0ml/min清洗,时间约1小时.
4.4 有关说明：将纯化水进行三次蒸馏后，过滤所到三次水.。