饲料中木质素含量的测定

时间：2014-03-05 11:47:59 来源：作者：

(一)原理

木质素(1ignin)构成覆盖在植物细胞壁纤维结晶上的包被或网状组织的高分子芳香族聚合物，又名木素。它在细胞壁内与纤维素、半纤维素结合成强有力的化学键，是一组对植物起支撑作用的化学官能团，也是基本上不能被动物消化吸收的有机物。

(二)测定

常规饲料分析方法中木质素分别存在于粗纤维及无氮浸出物的含量中，是由碳氢氧组成，但与碳水化合物的结构完全不同，测定方法有浓硫酸(72％)法、发烟盐酸(40％～42％)法、酶-硫酸水解法及酸性洗涤剂法等。因测定方法不同，凡在“木质素”前冠以状语者，系指在特定条件下测出的含量。如“浓硫酸木质素”、“胃蛋白酶水解木质素”、“发烟盐酸木质素”、“酸

性洗涤木质素”等。各自的内在质量均不同，无可比性。是一组极少能被动物消化的抗营养因子或称为“非营养性物质” (nonnutritional matter，NNM)。

木质素含量测定实验总结

一、结构性质木质素是由4种醇单体 (对香豆醇、松柏醇、5-羟基松柏醇、芥子醇)形成的一种复杂酚类聚合物,它是包围于管胞、导管及木纤维等纤维束细胞及厚壁细胞外并使这些细胞具有特定显色反应(加间苯三酚溶液一滴, 待片刻, 再加盐酸一滴, 即显红色)的物质。根据木质素的性质, 测定木质素的方法有直接浓酸水解分离测定法、光度法、红外光谱法、氧化还原反应滴定法等, 对花生壳的木质素采用氧化还原滴定法进行含量测定。二、反应原理木质素在醋酸的作用下,易溶于乙醇和乙醚的混合液,在硫酸介质中用重铬酸钾氧化为二氧化碳和水, 反应方程式如下: C 6H 10O 5+4K 2Cr 2O 7+16H 2SO 4= 4Cr 2(SO 4)3+4K 2SO 4+6CO 2 +21H 2O Cr 2O 72- + 14H + + 6I - 2 + 2Cr 3+ + 7H 2O Cr 3+为亮绿色 2S 2O 32- + I 2 4O 62- + 2I - 遇浓硫酸有红色针状晶体铬酸酐析出，对其加热则分解放出氧气，生成硫酸铬，使溶液的颜色由橙色变成绿色。稍溶于冷水，水溶液呈酸性，属强氧化剂过量的重铬酸钾用硫代硫酸钠回滴,淀粉KI 溶液为指示剂。其中加氯化钡溶液的作用是让溶出的木质素和硫酸钡(硫酸与氯化钡反应)一起沉淀。三、试剂准备 1. 1%醋酸（质量分数）：15mL ；1mL36%的乙酸，加水定容到36mL 2. V 乙醇：V 乙醚=1:1 : 20 mL ； 3. 72%硫酸：3 mL ；72%硫酸密度：1.634g/cm 3,98%硫酸密度：1.84 g/cm 3. 量取652mL98%硫酸加水定容到1000 mL ，即为72%硫酸。 4. 10%氯化钡（质量分数）：0.5 mL ；取1g 定容到10 mL. 5. 10%硫酸（质量分数）：10 mL ；10%硫酸密度：1.07 g/cm 3，量取593.4 mL98% 硫酸加水定容到1000 mL ，即为10%硫酸. 6. 0.025mol/L 重铬酸钾：10 mL ；先经过120℃烘干2小时，称取1.225g 加水定容到1000 mL ，避光，棕色瓶保存。 7. 20%KI(质量分数)：5 mL ；20g 加水到100 mL 8. 1%淀粉（质量分数）：1 mL ；1g 加水定容到100 mL

纤维素,木质素等的含量研究实验报告

纤维素、木质素等的含量研究木材化学的木素研究是研究木材及其内含物和树皮等组织的化学组成及其结构、性质、分布规律和利用途径的技术基础学科。以木材解剖学、有机化学和高分子化学为基础，也是木材科学的重要组成部分，它为林产化学加工提供了理论基础。木材的主要成分有木质素、纤维素、半纤维素和一些可溶性抽提物。纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖。不溶于水及一般有机溶剂。是植物细胞壁的主要成分。纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，占植物界碳含量的5 0%以上。木质素是由四种醇单体（对香豆醇、松柏醇、5-羟基松柏醇、芥子醇）形成的一种复杂酚类聚合物。木质素是构成植物细胞壁的成分之一，具有使细胞相连的作用。木质素是一种含许多负电集团的多环高分子有机物，对土壤中的高价金属离子有较强的亲和力。本次实验就是通过一些常用的化学方法对这些主要成分进行提取和定量测定，从而进行进一步的研究和分析。本次实验所用的原料为两种，分别是试样一麻杆上部（Ⅰ-10-9）、试样二木质板（Ⅱ-10-6）。原料都是按照GB2677.1标准准备的。该实验共分八个小实验，分别是试样的制备、水分的测定、灰分的测定、1%氢氧化钠溶液抽提物的测定、有机溶剂抽提物的测定、纤维素的测定、聚戊糖的测定、木素的测定。实验仪器和实验步骤及实验结果分述如下：一．试样的制备(木材原料磨粉) 1.使用工具：剥皮刀、手锯、标签纸、粉碎机、40目及60目标准铜丝网筛、具有磨砂玻璃塞的广口瓶2个 2.试样的采取：

采取同一产地，同一树种的原木3-4根，标明原木的的树种、树龄、产地、砍伐年月、外观品级等，用剥皮刀将所取得的原木表皮全都剥净。用手锯在每根原木箱部，腰部底部，各锯2-3块或厚约2-3cm原木，风干后，切成小薄片，充分混合，按四分法取得均匀样品约500g。然后置入粉碎机中磨至全部能通过40目筛的细末。过筛，截取能通40目筛但不能通过60目筛的部分细末，风干，贮于具有磨砂玻璃筛的广口瓶中，留供分析使用。最终准备两个试样的粉末，分别将对应试样的广口瓶贴上标签：试样一（Ⅰ-10-9）、试样二（Ⅱ-10-6）。二．水分的测定（干燥法GB2677.2—81） 1.仪器设备：带有温度调节器的恒温烘箱、干燥器、扁形称量瓶6个、分析天平。 2.实验步骤：精确称取1g（准确称量至0.0001g）粉碎试样一和试样二，分别放置于洁净的已烘干并恒重的扁形称量瓶中，置于烘箱中，于105±3℃烘干4小时，之后取出将称量瓶移入干燥器中，冷却半小时后称重，再移入烘箱，继续烘干1小时，冷却称重。如此重复施行，直至恒重为止。根据实验步骤平行做3次，得到3份数据，取其算术平均值作为测定结果，要求准确到小数点后第二位，三次测定计算值间误差不应超过0.20%。 3.实验数据记录： 4.实验结果计算：

乳酸(LA)含量检测试剂盒说明书微量法

乳酸（LA）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC2235 规格：100T/48S 产品内容：提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存。提取液二：液体8mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体34μL×1支，4℃保存。临用前按试剂二（V）：蒸馏水（V）=10μL：450μL的比例配制试剂二溶液，现用现配。试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加入4mL蒸馏水充分溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存一周。试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加4mL蒸馏水充分溶解，4℃保存一周。试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前每瓶加入3mL蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存一周。试剂六：液体2mL×1瓶，4℃保存。标准品：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.04mL蒸馏水配成100μmol/mL的标准溶液。显色液的配制：临用前根据用量按照试剂三（V）：试剂四（V）=1：1的比例充分混匀，现配现用。产品说明：乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH 还原MTT生成紫色物质，在570nm处有特征吸收峰。 2 自备实验用品及仪器：天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏水。

乳酸含量的测定

乳酸的测定—中和滴定法应用范围：本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。方法原理：供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。试剂： 1. 水（新沸放置至室温） 2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L） 3. 硫酸滴定液（0.5mol/L） 4. 酚酞指示液 5. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液 6. 乙醇 7.基准邻苯二甲酸氢钾 8.基准无水碳酸钠试样制备： 1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。 C(NaOH)=m/0.2042*(V1-V2) M——邻苯二甲酸氢钾的质量；V1——氢氧化钠的消耗量；V2——空白贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。 2.酸滴定液（1 mol/L）配制：取硫酸30mL，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。每1mL硫酸滴定液（1mol/L）相当于53.00mg的无水碳酸钠。根据本液消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。 C(1/2H2SO4)= m/0.053*(V1-V2) M——无水碳酸钠的质量；V1——硫酸的消耗量；V2——空白 3. 酚酞指示液取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解。 4. 溴甲酚绿混合指示液取0.1% 甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀，即得。

木质素(Lignin )含量试剂盒说明书

货号: MS2636 规格：100管/96样木质素（Lignin ）含量试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义: 木质素是构成植物细胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇构成的一类物质，存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间，起抗压作用。测定原理: 木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰，280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。自备实验用品及仪器：天平、40目筛，玻璃试管、烧杯、离心机，恒温水浴锅、封口膜、烘箱、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸，浓硫酸。试剂组成和配制：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体100mL×1瓶，4℃保存。样品处理：样品80℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，称取约2mg（记为W）于10mL玻璃试管中（务必用玻璃试管，不可用Ep管）计算公式：第1页，共2页

标准曲线：y = 0.0347x+0.0068，R2=0.9889 Lignin（mg/g干重）= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反总×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50 V反总：反应总体积：1.02mL；W：样本质量，g；T：稀释倍数注意事项： 1.试剂一有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。 2.加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。 3.试剂三具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱子操作。 4.取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度，试剂三的用量可调整，保证吸光值在0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。第2页，共2页

饲料学实验指导

1 实验一、二青贮饲料的加工调制与质量鉴定（一）实验目的青贮饲料是一种保存青绿饲料的简单而又安全的方法，通过学习，掌握调制青贮饲料的基本方法。（二）实验原理青贮是将新鲜的青饲料切碎，装入青贮窖或青贮塔内，通过封埋措施，造成缺氧条件。利用乳酸菌的发酵产生乳酸，使其积累到青贮物中的PH值下降到3.8-4.0时，青贮物中的微生物被抑制，从而达到了长时间保存青绿饲料的营养价值的目的。（三）原料及器材新鲜或经凋萎1-2天的青绿饲料，麸皮，刀，大玻璃罐，塑料膜，细绳，搪瓷盘。（四）鉴定用仪器及试剂 1、滴瓶、烧杯、吸管、玻棒、粗试管、滤纸、白瓷比色盘。 2、甲基红指示剂称取0.1克甲基红溶于60毫升95%的乙醇中，用蒸馏水稀释至250毫升。 3、溴甲酚绿指示剂称取0.1克溴甲酚绿溶于7.15毫升0.02N氢氧化钠溶液中，用蒸馏水稀释至250毫升。 4、混合指示剂按容量的比例，取甲基红指示剂溶液1份，与溴甲酚绿指示剂溶液1.5份，配成混合指示剂。 5、盐酸、酒精、乙醚混合液比重1.19的盐酸，95%的酒精，分析纯乙醚，按1?3?1比例混合。 6、硝酸3%硝酸银、盐酸（1?3）、10%氯化钡。（五）操作步骤： 1．切碎：将原料切成1-１.5cm长的小段，在搪瓷盘内用麸皮拌好，混匀。 2．装填：将拌好的原料装入玻璃罐内，一层一层的依次装填，直到凸出玻

璃罐为止。边装边压实，先压周边，后压中间，以防原料中有空气，影响青贮。３.密封：在装满压实的大玻璃罐上，用塑料膜盖住，并用细绳扎紧。４.管护：将装好的饲料编号保存，青贮40-60天即可。（六）青贮饲料的品质鉴定可分为感官鉴定与实验室鉴定 1．感官鉴定法根据气味、颜色、质地三方面来评定。 (１)气味品质上等的青贮饲料具有方向味、弱酸味和面包味（4分）。品质中等的香味淡，具有强烈的醋酸味（3分）。品质低劣的有腐烂味、浓丁酸味、臭味（1-2分）。（2）颜色品质良好的青贮饲料呈青绿色（3分）。品质中等的呈黄绿色、暗绿色、褐色（2分）。品质低劣的呈黑色或墨绿色（1分）。（3）质地品质良好的青贮饲料质地柔软，略带湿润、叶脉明显、结构完整（2分）。品质中等的柔软，稍干或水分稍多（1分）。品质低劣的质地松散干燥或黏结成块，有腐烂（0分）。 2．实验室鉴定法（1）青贮饲料酸度测定法（即PH值测定）①从被测青贮饲料中取样，切短在400毫升烧杯中装入半杯，注入蒸馏水或经煮沸的水浸没青贮料，不断地用玻璃棒搅拌15-20分钟，用滤纸过滤。②取滤液2毫升放入白瓷比色盘内，加入2-3滴混合指示剂，用玻璃棒搅拌，观察盘内浸出液颜色变化，判断出近似的PH值，借以评定青贮饲料的品质。 PH值范围指示剂颜色评分 3.8- 4.4 红→红紫 3 4.6- 5.2 紫→乌暗紫蓝 2 5.4- 6.0 蓝绿→绿 1 （2）青贮饲料的含氨量测定在粗试管中加2毫升盐酸酒精乙醚混合液，将被测的青贮料样品固定在试管塞铁丝尖端的弯钩上，使其距试液面约2厘米，如有氨存在时，在被测青贮饲料近旁会出现白色雾状，表明有氯化铵生成，青贮饲料已腐败变质。

纤维素、半纤维素、木质素测定

原理采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理: 植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。试剂的配制中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2?2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7?10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和 10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）； 1N 硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；中性洗涤纤维测定准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100ml中性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。煮沸完毕后，取下直筒烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的已知重量的玻璃坩埚中进行过滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗玻璃坩埚与残渣，直洗至滤液呈中性为止。用20ml丙酮冲洗二次，抽滤。将玻璃坩埚置于105℃烘箱中烘2h后，在干燥器中冷却30 min称重，直称至恒重。酸性洗涤纤维测定准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100 ml酸性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。趁热用已知重量的玻璃坩埚抽滤，并用沸水反复冲洗玻璃坩埚及残渣至滤液呈中性为止。用少量丙酮冲洗残渣至抽下的丙酮液呈无色为止，并抽净丙酮。将玻璃坩埚置于105℃烘箱中烘2h后，在干燥器中冷却30 min称重，直称至恒重。 ?酸性洗涤木质素和酸不溶灰分（AIA）测定?????? 将酸性洗涤纤维加入72%硫酸，在20℃消化 3h后过滤，并冲洗至中性。消化过程中溶解部分为纤维素，不溶解的残渣为酸性洗涤木质素和酸不溶灰分，将残渣烘干并灼烧灰化后即可得出酸性洗涤木质素和酸不溶灰分的含量。结果计算中性洗涤纤维含量的计算：NDF（%）=（W1－W2）/ W×100 式中： W1—玻璃坩埚和NDF重（gW2—玻璃坩埚重（g） W—试样重（g）酸性洗涤纤维含量的计算：ADF（%）=（G1－G2）/G×100 式中： G1—玻璃坩埚和ADF重（g） G2—玻璃坩埚重（g） W—试样重（g）半纤维素含量的计算：半纤维素（%）=NDF（%）－ADF（%）纤维素含量的计算：纤维素=ADF（%）－经72%硫酸处理后的残渣（%）

乳酸测定方法

乳酸的测定：对羟基联苯比色法（参照高庆，2005） 1.材料、试剂与仪器无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。主要溶液： ①钨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制； ②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至100ml； ③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于100ml 的L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于4℃冰箱，可使用一个月； ④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂，溶于50ml 蒸馏水中，加L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至100ml，混匀后保存于4℃冰箱。

⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL 加蒸馏水稀释至50mL。 ⑥乳酸标准应用液(200μg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。在冰箱中可保存数天。主要仪器： UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。 2. 方法青贮浸提液样品预处理取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。标准曲线的制作 ①用200Lg/mL乳酸应用标准液同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。

木质素检测

木质素检测木质素又称作木素，是自然界唯一能够提供可再生芳基化合物的非石油资源，为第二大天然高分子材料。根据结构单元不同，可将木质素分为三种类型：愈创木基木质素（guaiacyl lignin，G-木质素）、紫丁香基木质素（syringyl lignin，S-木质素）和对羟基苯基木质素（hydroxy-phenyl lignin，H-木质素）。木质素主要源于工业纸浆的副废物，制浆工业每年产生5000万吨左右的木质素副产品。但迄今为止，超过95%的木质素扔直接排入江河或者浓缩后烧掉，很少得到高效利用。随着人类对环境污染和资源危机等问题的不断深入，木质素作为天然高分子所具有的可再生性、可降解性等性质日益受到重视。中心以广泛应用于木质素研究的热解-气相色谱-质谱分析技术为基础，通过不断改良优化测试方法，发展了一种四甲基氢氧化铵-裂解-气相色谱-质谱分析技术（TMAH-Py-GC-MS）。科标化工分析检测中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会（CMA）实验室认证认可，能出具权威的第三方检测报告。木质素含量检测(甲基化裂解色谱质谱分析法) 一、实验原理四甲基氢氧化铵-裂解-气相色谱-质谱分析技术通过对裂解产物中的羟基、氨基、羧基等基团原位甲基化，有效地克服常规裂解分析法因产生不稳定中间体、高沸点和强极性产物而难于进入色谱系统获得有效分离的缺点，拓宽了分析范围，降低了GC柱温，缩短了分析时间，进而对木质素及其结构单元进行定量分析。二、仪器和试剂 ①裂解器（又称裂解色谱装置）：管式炉裂解器。 ②台式色谱质谱联用仪（70eV，带数据库）。 ③毛细管色谱柱，色谱柱为DB-5MS，其长30m、内径0.25mm、膜厚0.25μm的石英毛细管柱。 ④甲基化试剂：四甲基氢氧化胺甲醇溶液（10g/100mL）。三、试验方法将样品和甲基化试剂（四甲基氢氧化铵甲醇溶液）混合，加热，用不锈钢小工具压磨试样，使试样能溶于四甲基氢氧化铵中，取析出的伴有四甲基氢氧化铵的细小颗粒，裂解温度550℃，进行裂解色谱质谱联用分析。

乳酸含量测定

在Tris-Hcl-水合肼缓冲液中（pH＝9.2），利用乳酸在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在的条件下,由乳酸脱氢酶(L-LDH)催化生成丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。，利用NADH 是一种强荧光物质,而NAD+则无荧光的性质，通过测定NADH 在340nm 处吸光度的变化率，可得出酶促反应速度，并制得标准曲线，样品中的乳酸可由标准曲线求得。由于酶促反应的专属性,可以避免试样中众多共存组分的干扰,减少繁杂的预处理过程。L-乳酸脱氢酶催化反应为可逆反应，且反应平衡偏向于丙酮酸转化为乳酸。因此，为了保证反应平衡偏向于正方向,需加水合肼截获丙酮酸而生成丙酮酸腙,以减少丙酮酸的积累,加快酶促反应的速度。而水合肼对乳酸脱氢酶又有抑制作用，过量的水合肼反而会降低酶促反应速度。反应溶液的pH 值会影响酶的稳定性，酶活性部位中重要基团的解离状态，酶－底物复合物以及底物的解离状态，从而影响酶促反应速度。最适pH 值为9.2。最适温度为37℃。发现Ni2+、Mn2+、Cu2+、Cr3+、Co2+对酶促反应速度有抑制作用根据米氏方程,1/v～1/c 为直线关系,因此用双倒数作图法所绘1/v～1/c 线作为测定乳酸的标准曲线, 线性范围较宽： 1.2 ×10-4～ 2.0 ×10-3mol/L 。步骤： 1. 配制50ml的甘氨酸缓冲液：甘氨酸3.75g,硫酸肼 2.6g.,E D T A?2 N a 0.1 g，加适量去离子水用10 mol/ L N aO H 溶液调整p H 至9.3,再加去离子水至50 ml 2. 配制5ml2.1mol/l的硫酸铵溶液，吸取0.8ml置于乳酸脱氢酶中进行稀释 3. 称量NAD 0.01658g（663.4）溶于5ml蒸馏水瓶中（5mM），4℃保存至少可用2周 4.在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同浓度的乳酸锂，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，以乳酸锂浓度为横坐标，A340为纵坐标绘制标准曲线 4. 在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同时间段的进行适当稀释的发酵液，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，利用标准曲线得出稀释后的发酵的乳酸根含量

木质素的测定方法研究进展_苏同福

第41卷　第3期河南农业大学学报V o l .41　N o .32007年 6月 J o u r n a l o f H e n a n A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y J u n .　 2007 收稿日期:2006-11-24 基金项目:国家烟草专卖局资助项目(110200302007) 作者简介:苏同福(1970-),男,河南滑县人,讲师,博士研究生,主要从事烟草化学方面的研究;通讯作者:宫长荣. 文章编号:1000-2340(2007)03-0356-07 木质素的测定方法研究进展苏同福1 ,高玉珍1 ,刘　霞1 ,周　斌2 ,宫长荣 1 (1.河南农业大学,河南郑州450002;2.黄河中心医院药剂科,河南郑州450003) 摘要:对木质素的制备、总量的测定及其结构和分子量的测定等进行了综述,并分析了这些测定方法存在的问题,指出了将太赫兹技术应用于木质素测定的前景.关键词:木质素;降解;太赫兹中图分类号:Q 539;O 636.2 文献标识码:A R e v i e wo f D e t e r m i n a t i o no f L i g n i n S UT o n g -f u 1 ,G A OY u -z h e n 1 ,L I UX i a 1 ,Z H O UB i n 2 ,G O N GC h a n g -r o n g 1 (1.H e n a n A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,Z h e n g z h o u 450002,C h i n a ;2.P h a r m a c y o f y e l l o wR i v e r C e n t r a l H o s p i t a l ,Z h e n g z h o u 450003,C h i n a ) A b s t r a c t :T e s t i n g m e t h o d s f o r t o t a l l i g n i n ,p r e p a r a t i o n o f l i g n i n ,s t r u c t u r e s a n d m o l e c u l a r w e i g h t ,a r e i n t r o d u c e d i n t h i s a r t i c l e .P r o b l e m s e x i s t i n g i n t h e s e t e s t i n g m e t h o d s a r e a n a l y s e d a n d t h e p r o s p e c t s o f t h e t e r a h e r t z t e c h n o l o g y a p p l i c a t i o n t o l i g n i n a n a l y s i s a r e p o i n t e d o u t .K e y w o r d s :l i g n i n ;d e c o m p o s e ;t e r a h e r t z 木质素,又称为木素,广泛地存在于木材与禾本植物体内,通常认为是植物体在次生代谢合成的,在植物体内具有机械支持、防止生物降解、输送水分等功能.木质素的化学组成是苯丙烷类物质(包括对羟基苯丙烷、邻—甲氧基苯丙烷以及4—羟基—3,5—二甲氧基苯丙烷),是一种三维网状的天然高分子物质,热值高,含量仅次于纤维素.尽管如此,木质素还没有得到广泛地应用,但随着石油和煤炭资源的短缺和价格的上升,以及人们对环境污染的关注,使得天然高分子材料转化和利用的研究得到了高度重视.目前木质素得到广泛关注的原因一是木质素具有高热值,具有苯环结构,通过改性或者化学修饰可以广泛地为工业利用,转化为生物柴油,是可再生的能源和资源;另一方面是木质素对人体和动物基本上无毒,可广泛用于食品工业,以减少消化道疾病的发生,同时,某些木质素类低聚物可能还具有抗癌、抗肿瘤等 [1～3] 功效.然而,由于木质素结构的复杂性,目前人们对于木质素的生物活性与结构、功能之间的关系还了解得不十分深刻,因此加强对木质素结构的研究,具有重要的理论意义和现实意义.对木质素的结构分析是建立在K L A S O N 提出松柏醇脱氢机理基础之上,后来这种理论被F R E N D E N B E R G [4] 所证实.鉴于木质素结构的复杂性,用脱氢氧化理论来解释木质素结构单元是有局限性的,但这并不妨碍用该方法分析木质素的实用性. 1　木质素的制备木质素在植物体内常与纤维素或半纤维素以化学键的形式结合在一起,这造成了对木质素分离和提取的困难.但经过人们多年的研究,已找到多种分离提取木质素的方法,并对木质素进行分析, 提出了40多种模型[5] .对于木质素分离提取的方法,大致可分为两大类 [6] :一类是木质素以外的成 DOI :10.16445/j .cn ki .1000-2340.2007.03.026

微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析

微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析摘要：通过比较分析羟基联苯比色法、EDTA定钙法、乳酸脱氢酶法3种检测方法的准确性、简便性、经济性，找到适合于测定微生物发酵饲料中乳酸含量的方法。试验结果表明，乳酸脱氢酶法检测的准确性最好、迅速，但成本高；EDTA 定钙法检测虽然简便、迅速，但准确性最差；羟基联苯比色法检测效果居中，较为准确和方便。因此，乳酸脱氢酶法适合于高精度、高效率的检测；EDTA定钙法适合于迅速简便、精度要求不高的检测；羟基联苯比色法可作为企业或科研单位精度要求不高的常规检测。关键词：发酵饲料；乳酸；羟基联苯比色法；EDTA定钙法；乳酸脱氢酶法Comparative Analysis of Analytical Methods of Lactic Acid Content in Microbial Fermentation Feeds Abstract: To find a method that was used to measure the lactic acid content in microbial fermentation feeds, the accuracy, convenient and economy of hydroxybiphenol colorimetry method, EDTA titration method and lactic ac? id dehydrogenase method were contrasted in this study. The results showed that the accuracy of the test result was best and rapid using the lactic acid dehydrogenase method, but the cost was higher. The test of EDTA titration meth? od was simple and rapid, but the accuracy was worst. The test results of hydroxybiphenol colorimetry method was preferably, the methods had good specificity and convenient. Consequently, lactic acid dehydrogenase method was fit for the tests require high precision and high efficiency. The EDTA titration method was fit for the tests require simple and rapid, but the accuracy didn t ask for much. The hydroxybiphenol colorimetry method was used for rou?

乳酸的测定——EDTA滴定乳酸钙法

乳酸的测定 ——EDTA滴定乳酸钙法 1实验原理 1.1 乙二胺四乙酸（简称EDTA，常用H4Y表示）难溶于水，通常使用其二钠盐配制标准溶液。标定EDTA溶液常用的基准物有Zn、ZnO、CaCO3、Bi、Cu、MgSO4·7H2O、Hg、Ni、Pb等。通常选用其中与被测组分相同的物质作基准物，这样滴定条件较一致。 EDTA溶液若用于测定石灰石或白云石中CaO、MgO的含量，则宜用CaCO3为基准物。首先可加HCl溶液与之作用，其反应如下： CaCO3+2HCl═CaCl2+H2O+CO2↑ 然后把溶液转移到容量瓶中并稀释，制成钙标准溶液。吸取一定量钙标准溶液，调节酸度至pH≥12，用钙指示剂作指示剂以EDTA滴定至溶液从酒红色变为纯蓝色，即为终点，其变色原理如下：钙指示剂（常以H2Ind表示）在溶液中按下式电离： H3Ind═2H++HInd2- 在pH≥12溶液中，HInd2-与Ca2+离子形成比较稳定的络离子，反应如下： HInd2-+Ca2+═CaInd-+H+ 纯蓝色酒红色所以在钙标准溶液中加入钙指示剂，溶液呈酒红色，当用EDTA溶液滴定时，由于EDTA与Ca2+离子形成比CaInd-络离子更稳定的络离子CaY2-，因此在滴定终点附近，CaInd-络离子不断转化为较稳定的CaY2-络离子，而钙指示剂则被游离了出来，其反应可表示如下： CaInd-+H2Y2-═CaY2-+ HInd2-+H2O

酒红色无色纯蓝色由于CaY2-离子无色，所以到达终点时溶液由酒红色变成纯蓝色。用此法测定钙，若Mg2+离子共存（在调节溶液酸度为pH≥12时，Mg2+离子将形成Mg(OH)2沉淀），此共存的少量Mg2+离子不仅不干扰钙的测定，而且会使终点比Ca2+离子单独存在时更敏锐。当Ca2+、Mg2+离子共存时，终点由酒红色变到纯蓝色，当Ca2+离子单独存在时则由酒红色变紫蓝色，所以测定单独存在的Ca2+离子时，常常加入少量Mg2+离子溶液。滴定至终点后蓝色很快又返回至紫红色又称终点回头。此现象是由钙镁盐类的悬浮性颗粒所致，影响测定。存在这样情况，可加盐酸酸化，便可除去碱度，后用NaOH溶液中和。 2器皿和试剂酸式滴定管；乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2Na2O8.2H2O)，CaCO3，镁溶液（溶解1g MgSO4·7H2O于水中，稀释至200mL），NaOH溶液（20%溶液），盐酸溶液（1+1）钙指示剂（固体指示剂） 3实验步骤 3.1 0.05mol·L-1EDTA溶液的配制：准确称取乙二胺四乙酸二钠18.612g，溶解于500-600mL水中，稀释至1L，如混浊，应过滤，转移至1000mL细口瓶中，摇匀。 3.2 以CaCO3为基准物标定EDTA溶液 3.2.1 0.05mol·L-1钙标准溶液的配制：置CaCO3基准物于称量瓶中，在110 C干燥2小时，冷却后，准确称取1.25-1.30g 碳酸钙于150mL烧杯中，盖上表面皿，加水润湿，再从杯嘴边逐滴加入数毫升HCl

木质素含量检测试剂盒说明书可见分光光度法

木质素含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。货号：BC4200 规格：50T/48S 产品内容：试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存。标准品：粉剂×1支，200mg木质素（纯度50%，木质素含量25mg），4℃保存。用高氯酸定容至1mL，充分混匀溶解，配成25mg/mL的标准液。使用前混匀。产品说明：木质素是构成植物细胞壁的成分之一，具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁，为次生壁主要成分。木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰，280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸馏水。操作步骤：一、样品处理：样品80℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，称取约5mg于1.5mL EP管中。二、测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至280nm，冰乙酸调零。 2、操作表：在1.5mL离心管中依次加入下列试剂：测定管标准管空白管样品（mg）5-- 试剂一（μL）500500500

高氯酸（μL）20-20 标准液（μL）-20- 封口膜密封，充分混匀。于80℃水浴锅水浴40min，进行乙酰化。每隔10min震荡一次，然后自然冷却。试剂二（μL）500500500 充分混匀后于常温8000g离心10min，取上清。上清液（μL）202020 冰乙酸（μL）980980980 测定280nm下的吸光值A，记为A测定管、A空白管、A标准管，计算△A=A测定管-A空白管、△A标准=A标准管-A空白管。三、木质素含量计算： C标准=C原液×V标准÷V乙酰化×V上清÷V检测=0.0098mg/mL 木质素（mg/g）=△A÷（△A标准÷C标准）×V检测÷（W×V上清÷V乙酰化） =0.3×△A÷△A标准÷W C标准：标准液在最终检测体系中的浓度，0.0196mg/mL；C原液：标准液浓度，25mg/mL；V标准：加入的标准液的体积，0.012mL；V乙酰化：乙酰化反应体积，0.612mL；V上清：上清液体积，0.012mL；V检测：检测反应总体积，0.6mL；W：样本质量，g。注意事项： 1、试剂一有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。 2、加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。 3、冰乙酸具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱内操作。 4、取上清加冰乙酸步骤根据自己样品乙酰化程度，冰乙酸的用量可调整，保证△A在0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。

总可溶性酚和木质素含量的测定

总可溶性酚和木质素含量的测定 1. 试剂配制 ①80%甲醇：400 mL 甲醇，用蒸馏水定容至500 mL ② 1 N Folin-酚试剂（Folin and Ciocalteau's Phenol reagent) ③ 1 mol/L Na2CO3：称取105.99 g Na2CO3，蒸馏水溶解并定容至1000 mL ④邻苯二酚 ⑤ 2 N HCl：83.3 mL浓HCl，蒸馏水定容至500 mL ⑥ 1:10比例的巯基乙酸和2 N HCl混合液：30 mL巯基乙酸（硫代乙醇酸），溶于300 mL 2 N HCl ⑦0.5 N NaOH：20.0 g NaOH，用蒸馏水溶解并定容至1000 mL ⑧浓HCl（12 mol/L） 2. 测定方法酚类物质含量测定：分别在接种前(0 h)和接种后的1、3、5、7 d采集水稻的第3、4片叶，在-80℃下保存备用，用以测定总可溶性酚和木质素的含量。参照Rodrigues等（2005）的方法。0.1 g水稻叶片置于预冷研钵中，加入液氮研成粉末，转移到2 mL离心管中，加入1.5 mL的80%甲醇。用锡纸包裹Eppendorf管，防止光氧化，在25℃下，用摇床150 rpm振荡过夜。提取物在12000 rpm下离心10 min，上清液转移到1.5 mL离心管中，在-20℃下保存，用于总可溶性酚含量的测定。沉淀在-20℃下保存，用于木质素含量的测定。 ⑴总可溶性酚含量的测定参考Folin-Ciocaileu比色法 ①取上清液（甲醇提取物）150 μL，加入150 μL 1 N Folin-酚试剂（Folin and Ciocalteu's Phenol reagent)，摇匀，室温下保持5 min。接着加入200 μL的1 mol/L Na2CO3溶液，摇匀，在室温下保持10 min。向混合物加入1 mL双蒸水，摇匀，室温下（在暗处）保持1 h。混合物在725 nm(或765 nm)下比色，测定吸光度。用邻苯二酚（或没食子酸或原儿茶酸）做标准曲线，单位为μg·g-1 FW（或mg·kg-1 FW）。 ②标准曲线的制备准确称取邻苯二酚（M=110.11）0.05 g，蒸馏水溶剂并定容至50 mL，得1 mg/mL 邻苯二酚贮备液，吸取2.5 mL定容至50 mL得50 μg/mL邻苯二酚标准液。

生物质中纤维素、半纤维素和木质素含量的测定

生物质中纤维素、半纤维素和木质素含量的测定一实验目的 1.掌握生物质中主要化学成分含量的经典分析方法和原理。 2.了解纤维素、半纤维素以及木质素这三种主要化学成分在生物质热裂解中的作用。二实验原理植物的主要化学成分是纤维素、半纤维素和木质素这三部分。它们是构成植物细胞壁的主要组分。其中，纤维素组成微细纤维，构成纤维细胞壁的网状骨架，而半纤维素和木质素是填充在纤维和微细纤维之间的“粘合剂”和“填充剂”。 1.纤维素生物质粉末在加热的情况下用醋酸和硝酸的混合液处理，在这种情况下，细胞间的物质被溶解，纤维素也分解成单个的纤维，木质素、半纤维素和其它的物质也被除去。淀粉、多缩戊糖和其它物质受到了水解。用水洗涤除去杂质以后，纤维素在硫酸存在下被重铬酸钾氧化成二氧化碳和水。 C6H10O5 + 4K2Cr2O7 + 16H2SO4 = 6CO2 + 4Cr2(SO4)3 + 4K2SO4 + 21H2O 过剩的重铬酸钾用硫酸亚铁铵溶液滴定，再用硫酸亚铁铵滴定同量的但是未与纤维素反应的重铬酸钾，根据差值可以求得纤维素的含量。 K2Cr2O7 + 6FeSO4+ 7H2SO4 = 3 Fe2(SO4)3 + Cr2(SO4)3 + K2SO4 + 7H2O 2.半纤维素用沸腾的80％硝酸钙溶液使淀粉溶解，同时将干扰测定半纤维素的溶于水的其它碳水化合物除掉。将沉淀用蒸馏水冲洗以后，用较高浓度的盐酸，大大缩短半纤维素的水解时间，水解得到的糖溶液，稀释到一定体积，用氢氧化钠溶液中和，其中的总糖量用铜碘法测定。铜碘法原理：半纤维素水解后生成的糖在碱性环境和加热的情况下将二价铜还原成一价

纤维素_木质素_半纤维素含量的测定-用

纤维素含量测定所需试剂：醋酸和硝酸混合液( 体积比1 ： 1 )、蒸馏水、硫酸和重铬酸钾的混合液（硫酸的质量分数为1 0 ％；重铬酸钾的浓度为0 .1 mol ／L）、质量分数为20%碘化钾、0.2mol/L硫代硫酸钠所需仪器：离心机、刻度试管、刻度离心管、烘箱、三角瓶、滴定管步骤： 1 ．1 .1预处理称取0.10g 玉米秸秆于刻度试管( 容量为 1 5 ml )中，加人醋酸和硝酸混合液( 体积比1 ：1 ) 5 ml ，盖上盖于沸水浴中加热3 0 mi n ，全部转至塑料刻度离心管( 容量为5 0 ml )中，加蒸馏水稀释至4 5 ml刻度线，冷却后以8000转每分的转速离心1 5mi n ，去除上清液，再加蒸馏水至4 5 ml刻度线然后离心去上清夜，以同样的方法再洗两次后于烘箱8 0℃烘干。 1 ．1 ．2测定取烘干样加入混合液( 溶液中硫酸的质量分数为1 0 ％；重铬酸钾的浓度为0 .1 mol ／L)1 0 ml ，摇匀后沸水浴1 5 mi n ，全部转入干净的三角瓶中冷却后滴定。加入质量分数为2 0 ％KI 溶液5 ml ，用0 .2 mo l ／L 的硫代硫酸钠滴定至溶液刚显蓝色且半分钟内不变色，另作一未加秸秆的空白。纤维素含量按下式计算： X = k ( a —b ) ／( n ×2 4 ) 式中：“ 2 4 ”为1 mo l C 6 H 10 O5 相当于硫代硫酸钠的摩尔数；k 为硫代硫酸钠浓度，mo l ／L；a 为空白滴定所耗硫代硫酸钠体积，ml ；b 为溶液滴定所耗硫代硫酸钠体积，ml ；n 为稻壳质量，g 。参考文献：王金主, 王元秀, 李峰, 高艳华, 徐军庆, 袁建国. 玉米秸秆中纤维素、半纤维素和木质素的测定[J]. 山东食品发酵, 2010,(03) 半纤维素含量的测定所需试剂：质量分数为8 0％硝酸钙溶液、蒸馏水、2 mo l／L 的HC I、酚酞、NaOH、葡萄糖溶液、DNS（3，5 一二硝基水杨酸）所需仪器：