总可溶性酚和木质素含量的测定
木素中酚羟基和总羟基的定量测定
任务名称：木素中酚羟基和总羟基的定量测定引言木素是一类存在于植物细胞壁中的天然高分子化合物，它的主要组成部分是木质素。
木质素是由苯丙基醇类化合物聚合而成的大分子聚合物，其中包含了酚羟基和其他羟基。
对木素中酚羟基和总羟基的定量测定可以帮助我们了解植物的细胞壁的化学组成和性质，对于材料科学、生物学、农业等领域具有重要意义。
二级标题：酚羟基和总羟基的定义和特性酚羟基的定义和特性酚羟基是指木质素分子中的苯环上带有一个羟基的基团。
羟基是一个氧原子连着一个氢原子的基团，它具有亲水性和反应活性。
在木素中，酚羟基的数量和分布情况会影响木素的性质和功能。
总羟基的定义和特性总羟基是指木质素分子中所有带有羟基的基团的总和。
它包括了酚羟基以及其他可能存在的羟基，比如苯环上的多个羟基基团。
总羟基的数量可以反映木素的羟基含量，并间接反映出木素的分子结构和化学性质。
二级标题：酚羟基和总羟基的定量测定方法一般原理酚羟基和总羟基的定量测定可以采用化学分析方法或光谱分析方法。
化学分析方法常用的是滴定法，光谱分析方法常用的是紫外-可见光谱法和红外光谱法。
这些方法都是通过测定木素样品中的羟基与特定试剂或光源的反应来进行定量测定。
滴定法滴定法是通过向木素样品中滴加标准溶液来测定其中羟基的含量。
常用的滴定试剂有氢氧化钠溶液、硫酸、碘酸钾溶液等。
这些试剂与羟基发生反应后，可以产生有色物质或反应产物，通过测定溶液颜色的变化或者标定曲线，就可以得到样品中羟基的含量。
光谱法光谱法是通过测定木素样品在紫外或红外光谱区域的吸收或发射来测定其中羟基的含量。
紫外-可见光谱法常用的波长范围是200-800纳米，可以通过样品吸收或发射的光信号来确定羟基的浓度。
红外光谱法则是通过测定木素样品在红外光谱区域的吸收或发射的频率来确定羟基的含量。
二级标题：酚羟基和总羟基的应用和意义材料科学木质素是一种重要的材料，在材料科学领域有广泛的应用。
对木素中酚羟基和总羟基的定量测定可以帮助我们了解木质素的分子结构和化学性质，从而为材料的设计和制备提供依据。
饲料中木质素含量的测定
饲料中木质素含量的测定
时间：2014-03-05 11:47:59 来源：作者：
(一)原理
木质素(1ignin)构成覆盖在植物细胞壁纤维结晶上的包被或网状组织的高分子芳香族聚合物，又名木素。
它在细胞壁内与纤维素、半纤维素结合成强有力的化学键，是一组对植物起支撑作用的化学官能团，也是基本上不能被动物消化吸收的有机物。
(二)测定
常规饲料分析方法中木质素分别存在于粗纤维及无氮浸出物的含量中，是由碳氢氧组成，但与碳水化合物的结构完全不同，测定方法有浓硫酸(72％)法、发烟盐酸(40％～42％)法、酶-硫酸水解法及酸性洗涤剂法等。
因测定方法不同，凡在“木质素”前冠以状语者，系指在特定条件下测出的含量。
如“浓硫酸木质素”、“胃蛋白酶水解木质素”、“发烟盐酸木质素”、“酸
性洗涤木质素”等。
各自的内在质量均不同，无可比性。
是一组极少能被动物消化的抗营养因子或称为“非营养性物质” (nonnutritional matter，NNM)。
云杉、桉木原本木质素和分离木质素中酚羟基含量的测定研究
云杉、桉木原本木质素和分离木质素中酚羟基含量的测定研究
云杉和桉木是两种常见的木材材料，它们的木质素和分离木质素中的酚羟基含量的测定研究可以用于了解这两种木材的化学性质和应用潜力。
木质素是木材主要的非糖类聚合物，由苯丙烯类化合物聚合而成，是木材中的主要成分之一。
酚羟基是木质素分子中的一个主要官能团，具有重要的化学反应性质。
测定木质素和分离木质素中酚羟基含量有助于了解木材的结构特征、生理性质和加工性能等方面的信息。
测定木质素和分离木质素中酚羟基含量通常采用以下几种方法：
1. 元素分析法：该方法通过测定样品中的含氧量来间接估算酚羟基的含量。
首先通过元素分析仪测定样品中的总氧含量，然后根据木质素的化学结构和已知的氧含量，计算出酚羟基的含量。
2. 紫外-可见光谱法：木质素和分离木质素中的酚羟基会吸收
一定范围内的紫外-可见光，可以通过测定吸光度来间接估算
酚羟基的含量。
该方法需要制备样品的溶液或提取物，然后使用紫外-可见光谱仪测量其吸光度，最后使用标准曲线或计算
公式将吸光度转化为酚羟基的含量。
3. 气相色谱法：木质素和分离木质素中的酚羟基可以通过衍生化反应转化为易于气相色谱分析的产物，然后使用气相色谱仪测定其峰面积或峰高来估算酚羟基的含量。
这种方法需要在样
品处理过程中使用酰化试剂或醚化试剂对酚羟基进行衍生化处理。
以上是常用的几种方法，当然也可以根据研究的需要选择其他适用的方法。
最终的目的是获得云杉和桉木木质素和分离木质素中酚羟基含量的定量数据，为材料特性和应用研究提供基础数据支持。
木质素的测定方法
木质素的测定方法
木质素的测定方法有很多种，以下是常用的几种方法：
1. 元素分析：使用元素分析仪测定木质素中的碳、氢、氧等元素的含量，从而间接测定木质素的含量。
2. 紫外-可见吸收光谱：木质素在紫外-可见光波段有一定的吸收特性，可以利用紫外-可见分光光度计测定木质素溶液的吸光度，然后通过标准曲线计算木质素的含量。
3. 高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）：利用高效液相色谱仪分离并检测木质素化合物，根据各个组分的峰面积或峰高，计算木质素的含量。
4. 核磁共振（NMR）：利用核磁共振技术对木质素分子进行结构分析，并可以通过积分谱计算出木质素的含量。
5. 毛细管电泳：通过毛细管电泳技术对木质素化合物进行分离和检测，根据各个组分的峰面积或峰高，计算木质素的含量。
需要注意的是，不同的测定方法适用于不同类型的木质素化合物，选择合适的方法需要根据具体的研究需求和样品特点进行评估。
木素中酚羟基和总羟基的定量测定
木素中酚羟基和总羟基的定量测定简介木素是一类常见的天然产物，广泛存在于植物细胞壁中。
它的结构包含酚羟基和总羟基，这些官能团对于木素的性质和应用起着重要作用。
准确测定木素中酚羟基和总羟基的含量对于研究木素的性质和应用具有重要意义。
本文将介绍一种常用的方法，即通过化学反应将酚羟基和总羟基转化为可定量测定的产物，并使用分析仪器对其进行检测。
该方法具有灵敏度高、准确度高、操作简便等优点。
实验步骤1. 样品制备首先需要从样品中提取木素，并将其转化为可测定的形式。
以下是一种常用的方法：•将样品粉碎成细粉。
•将细粉加入抽提溶剂（如乙酸乙酯）中，在适当温度下进行抽提。
•将抽提液过滤，去除杂质。
•使用旋转蒸发仪将溶剂蒸发，得到木素提取物。
2. 酚羟基和总羟基的转化为了方便测定，需要将酚羟基和总羟基转化为可定量测定的产物。
以下是一种常用的方法：•将木素提取物溶解在适当的溶剂中（如氢氧化钠溶液）。
•加入适量的试剂（如硝酸钠），进行化学反应。
•根据反应条件，控制反应时间和温度。
•反应结束后，通过过滤或其他方法去除产生的沉淀。
3. 反应产物的测定得到可测定的产物后，可以使用分析仪器对其进行测定。
以下是一种常用的方法：•使用紫外可见分光光度计或高效液相色谱仪等仪器进行测定。
•根据反应产物的特征吸收峰或色谱峰，确定所需测定的酚羟基或总羟基含量。
•通过与已知浓度标准溶液比较，计算样品中酚羟基或总羟基的含量。
结果分析经过上述步骤，我们可以得到样品中酚羟基和总羟基的含量。
这些数据对于研究木素的性质和应用具有重要意义。
通过对不同样品的测定，可以比较它们之间的差异，进一步了解木素的特性。
通过调整反应条件和使用不同的试剂，我们还可以对酚羟基和总羟基进行选择性测定。
这有助于进一步研究木素中不同官能团的分布和含量，从而深入理解其结构和功能。
结论通过上述方法，我们可以准确测定木素中酚羟基和总羟基的含量。
这种方法具有灵敏度高、准确度高、操作简便等优点，适用于对木素进行定量分析。
木质素含量测定
3.1.2.2木质素含量测定用紫外分光光度法测定木质素含量，10天幼苗木质素提取方法，参照Syros等方法[153,154]并略作修改。
如下：1．0.5g鲜样用95%的乙醇研磨成匀浆，4500rpm离心10 min后收集沉淀。
2．用95%乙醇冲洗沉淀3次，再用乙醇：正已烷=1:1（V/V）冲洗3次，收集沉淀并干燥。
3．干燥物用0.5 ml 25%溴乙酰(冰乙酸配置)溶解，70℃水浴加塞保温30 min，然后加0.9 ml 2 mol/L NaOH终止反应，加5 ml冰乙酸和0.1 ml 7.5 mol/L盐酸羟胺,混匀后；4．4500rpm离心5 min，吸取上清液0.1 ml，加3.0 ml冰乙酸稀释5．测定A280nm，以A280nm·mg protein-1表示木质素的含量。
成熟植株与幼苗含量不同，提取及处理方法不同：1．剪取拟南芥的主茎，用液氮速冻处理后冷冻干燥（过夜），将样品研磨成粉（<20目）。
2．称取10~15 mg样品放入20 ml带刻度试管，加入10 ml去离子水，在65℃烘箱加热1 h，每隔10 min振荡一次。
3．每个样品用GF/A玻璃纤维滤纸过滤，残渣依次用水、乙醇、丙酮、乙醚各漂洗3次，每次1~2分钟。
4.将滤纸置于20 ml闪烁瓶（不加盖）内，在70℃烘箱中加热过夜。
5.在每个闪烁瓶中加入2.5 ml 25%溴乙酰-乙酸溶液，置于50℃烘箱加热2 h （加盖），不时摇动。
6．预备50 ml容量瓶，加入10 ml 2 mol/L NaOH溶液及12 ml冰乙酸。
7．将样品置于冰箱冷却后转移入容量瓶，用冰乙酸漂洗滤纸后定容至50 ml。
静置1 h（最好过夜）。
8．测量280 nm处吸光率。
木质素的含量按公式3.1计算：Abs Lignin%= (Abs×liters×100% )/(W sample×A standard)式中，Lignin%为木质素的含量，Abs为样品溶液在280nm处吸光率，liters为样品溶液定容时的体积(L)，Wsample为样品的绝干重量(g)，Astandard为拟南芥木质素标准吸光率，Astandard=17.2。
木质素含量的测定
试剂 蒸馏水
-2-
邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
高氯酸，浓硫酸
产品说明书
使用方法：
使用注意事项： 试剂 A 有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。 加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人生伤害。 试剂 C 具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱子操作。 正式测定之前可选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。
注意事项： 1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。 2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，
避免开盖时试剂损失。 3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并
三、 Lignin 含量计算公式 标准曲线：y = 0.02776x+0.0068，R2=0.9889 Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0068)÷0.02776×V 反总×10-3÷W×T
= 0.0735×(ΔA-0.0068) ÷W×T
2、 按下表加样。加样表（以 1000ul 体系为例）
单位：
空白管
测定管
样本（mg）
5
试剂 A（ul）
1000
1000
高氯酸（ul）
40
40
于 10mL 玻璃试管中，用封口膜密封，充分混匀，80℃水浴 40min，每
木质素成分的测定原理
木质素成分的测定原理在进行木质素成分的测定之前，我们需要先了解木质素的基本构成及特性。
木质素是一类水不溶性的天然有机化合物，主要存在于植物细胞壁中。
它是植物体内的第二大有机成分，仅次于纤维素。
木质素是由苯丙基醇类化合物聚合而成，其主要特点是具有高度芳香性和稳定性。
在自然环境中，它在植物体内起到支撑植物结构、抵抗细菌、真菌和昆虫侵袭的作用。
木质素有多种不同结构的衍生物，主要包括纤维素和非纤维素类木质素。
纤维素是由葡萄糖分子聚合而成，是主要的结构性成分。
非纤维素类木质素则是由苯丙基醇衍生物形成的，主要是由苯丙素、桥酮、羟基苯丙素等组成。
在测定木质素成分时，可以采用多种方法，常见的方法有纤维素分析、酸碱法分析、气相色谱法和质谱法等。
纤维素分析是通过分解纤维素来进行测定的。
首先，将纤维素样品经过一系列的预处理，去除非纤维素类木质素等杂质。
然后，用浓烷酸或浓碱溶液进行纤维素的水解，得到葡萄糖。
最后，通过测定葡萄糖的含量，计算出纤维素的含量。
这种方法需要耗费较多的时间和试剂，但可以较准确地测定纤维素的含量。
酸碱法分析是根据纤维素和非纤维素类木质素对酸碱溶液的反应性差异进行测定的。
首先，将样品分别与酸和碱进行处理，得到酸洗液和碱洗液。
然后，通过测定洗液中木质素的含量，并与样品的总质量进行比较，计算出木质素的含量。
这种方法简单易行，但由于木质素的结构多样性，不同类型的木质素对酸碱溶液的反应性也不完全相同，因此对不同类型的木质素可能存在一定的测定误差。
气相色谱法是通过将样品中的木质素分离出来，并通过气相色谱仪进行测定的。
首先，将样品提取得到木质素的混合物。
然后，使用气相色谱法将这些木质素成分进行分离，并通过检测器进行检测。
根据不同木质素成分的保留时间和峰面积，可以计算出各个成分的含量。
这种方法需要仪器设备的支持，对操作人员的技术要求较高，但可以同时测定多种木质素成分，并具有较高的准确性和灵敏度。
质谱法是通过用质谱仪对样品进行分析来测定木质素成分的。
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总可溶性酚和木质素含量的测定
1. 试剂配制
①80%甲醇：400 mL 甲醇，用蒸馏水定容至500 mL
② 1 N Folin-酚试剂（Folin and Ciocalteau's Phenol reagent)
③1 mol/L Na2CO3：称取105.99 g Na2CO3，蒸馏水溶解并定容至1000 mL
④邻苯二酚
⑤ 2 N HCl：83.3 mL浓HCl，蒸馏水定容至500 mL
⑥ 1:10比例的巯基乙酸和2 N HCl混合液：30 mL巯基乙酸（硫代乙醇酸），溶于300 mL 2 N HCl
⑦0.5 N NaOH：20.0 g NaOH，用蒸馏水溶解并定容至1000 mL
⑧浓HCl（12 mol/L）
2. 测定方法
酚类物质含量测定：分别在接种前(0 h)和接种后的1、3、5、7 d采集水稻的第3、4片叶，在-80℃下保存备用，用以测定总可溶性酚和木质素的含量。
参照Rodrigues等（2005）的方法。
0.1 g水稻叶片置于预冷研钵中，加入液氮研成粉末，转移到2 mL离心管中，加入1.5 mL的80%甲醇。
用锡纸包裹Eppendorf管，防止光氧化，在25℃下，用摇床150 rpm振荡过夜。
提取物在12000 rpm下离心10 min，上清液转移到1.5 mL离心管中，在-20℃下保存，用于总可溶性酚含量的测定。
沉淀在-20℃下保存，用于木质素含量的测定。
⑴总可溶性酚含量的测定
参考Folin-Ciocaileu比色法
①取上清液（甲醇提取物）150 μL，加入150 μL 1 N Folin-酚试剂（Folin and Ciocalteu's Phenol reagent)，摇匀，室温下保持5 min。
接着加入200 μL的1 mol/L Na2CO3溶液，摇匀，在室温下保持10 min。
向混合物加入1 mL双蒸水，摇匀，室温下（在暗处）保持1 h。
混合物在725 nm(或765 nm)下比色，测定吸光度。
用邻苯二酚（或没食子酸或原儿茶酸）做标准曲线，单位为μg·g-1 FW（或mg·kg-1 FW）。
②标准曲线的制备
准确称取邻苯二酚（M=110.11）0.05 g，蒸馏水溶剂并定容至50 mL，得1 mg/mL 邻苯二酚贮备液，吸取2.5 mL定容至50 mL得50 μg/mL邻苯二酚标准液。
⑵木质素含量的测定
向提取总可溶性酚得到的沉淀加入1.5 mL双蒸水，涡旋摇匀，在离心力为12, 000 g下离心5 min，丢弃上清液，将沉淀在65℃下干燥过夜。
将1.5 mL的1:10比例的巯基乙酸和2 N HCl混合液加入到干燥的沉淀中。
轻轻摇匀，沸水浴4 h后，立即置于冰水中冷却，4℃下保持10 min。
混合物在离心力为12, 000 g下离心10 min，丢弃上清液。
沉淀用1.5 mL双蒸水冲洗，接着在离心力为10,000 g 下离心10 min，离心后丢弃上清液。
沉淀用1.5 mL的0.5 N NaOH溶液重新悬浮，混合物在室温下用摇床(150 rpm)振荡过夜。
混合物在离心力为10,000 g下离心10 min，上清液转移到新的Ependorfg管中。
向上清液加入200 μL浓HCl，将Ependorf管在4℃下保持4h，使木质素-巯基乙酸衍生物（LTGA）充分沉淀。
接着在离心力为10,000 g下离心10 min，丢弃上清液，用2 mL 0.5 N NaOH溶解橙棕色沉淀。
在280 nm下测定溶液吸光度，用木质素标准品(Lignin alkali 2-hydroxypropyl ether)（Sigma-Aldrich, USA）作标准曲线，浓度单位用mg·kg-1 FW表示。