生物化学实验
生物化学实验原理和方法

生物化学实验原理和方法
生物化学实验是研究生物体内化学反应的实验方法,主要用于研究生物体内分子结构、代谢途径、蛋白质结构和功能等方面的问题。
生物化学实验的基本原理是利用生物体内的生物分子(如蛋白质、核酸、酶等)进行化学反应或与其他物质相互作用,从而检测、分离或定量这些分子。
生物化学实验主要包括以下几个方面的原则和方法:
1. 分离与纯化:将某一特定生物分子从其他组分中分离出来,获得纯净的样品。
常用方法包括离心、电泳、柱层析、过滤等。
2. 分析与测定:对生物分子的含量、结构和性质进行定量或定性的研究。
常用方法包括分光光度法、荧光法、比色法、拉曼光谱等。
3. 酶反应:酶是生物体内催化生物化学反应的一类蛋白质,其活性与底物浓度、温度、pH值等因素有关。
通过测定底物转化率来研究酶的活性。
常见的酶反应方法有酶解反应、酶促进反应等。
4. 蛋白质分析:蛋白质是生物体内最为重要的分子之一,可以通过电泳、质谱、Western blot等方法进行分析,从而了解蛋白质的结构、含量和功能。
5. 核酸分析:核酸是生物体内遗传信息的主要载体,可以通过PCR、凝胶电泳、
Southern blot等方法进行分析,用于检测基因的突变、限制性片段长度多态性等。
以上是一些常用的生物化学实验原理和方法,实际的生物化学实验会根据具体的研究目的和问题而选择适合的方法和技术。
生物化学课内实践教学(3篇)

第1篇一、前言生物化学作为一门研究生物体内化学反应及其调控规律的学科,在生命科学领域具有极其重要的地位。
为了让学生更好地理解和掌握生物化学的理论知识,提高学生的实验技能和科学素养,我们开展了生物化学课内实践教学活动。
本文将对本次实践教学进行总结和分析。
二、实践内容1. 蛋白质鉴定实验(1)实验目的:掌握蛋白质的鉴定方法,了解蛋白质在生物体内的作用。
(2)实验原理:蛋白质具有特定的氨基酸序列,通过特定的化学反应,可以产生具有特定颜色的化合物,从而实现对蛋白质的鉴定。
(3)实验步骤:①制备蛋白质样品;②加入双缩脲试剂,观察颜色变化;③加入Folin-酚试剂,观察颜色变化;④计算蛋白质含量。
2. 酶活性测定实验(1)实验目的:掌握酶活性测定的方法,了解酶在生物体内的作用。
(2)实验原理:酶活性是指酶催化特定反应的能力,通过测定酶催化反应的速度,可以评估酶的活性。
(3)实验步骤:①制备酶反应体系;②测定酶催化反应的速度;③计算酶活性。
3. 核酸提取实验(1)实验目的:掌握核酸提取的方法,了解核酸在生物体内的作用。
(2)实验原理:核酸是生物体内的重要遗传物质,通过特定的方法可以将核酸从细胞中提取出来。
(3)实验步骤:①破碎细胞;②提取核酸;③检测核酸。
4. 脂质分离实验(1)实验目的:掌握脂质分离的方法,了解脂质在生物体内的作用。
(2)实验原理:脂质具有不同的极性,可以通过特定的方法将其分离。
(3)实验步骤:①制备脂质样品;②加入氯仿,观察分层现象;③分离脂质。
三、实践总结1. 通过本次实践教学,我们掌握了蛋白质、酶、核酸和脂质的鉴定、提取和分离方法,提高了我们的实验技能。
2. 在实验过程中,我们学会了如何设计实验方案、操作实验仪器和记录实验数据,为今后的科研工作打下了基础。
3. 通过实验,我们深入了解了生物体内化学反应及其调控规律,增强了我们对生物化学理论知识的理解。
四、实践反思1. 实验过程中,我们发现部分同学对实验原理掌握不牢固,导致实验结果不准确。
生物化学实验报告

生物化学实验报告实验目的,通过本次实验,掌握生物化学实验的基本方法和技能,了解生物化学实验的原理和应用,提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理,生物化学实验是利用生物化学原理和方法,对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器,本次实验所需材料包括,蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品;试剂,酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等;仪器,分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤:1. 蛋白质的定性实验,取少量蛋白质样品,加入蛋白质定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验,取少量核酸样品,加入核酸定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验,取少量酶样品,加入酶定性试剂,观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验,取少量碳水化合物样品,加入酚酞试剂,观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析,利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器,对生物分子进行定量分析。
实验结果分析,根据实验结果,可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析,从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论,通过本次实验,掌握了生物化学实验的基本方法和技能,了解了生物分子的定性和定量分析方法,提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义,生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节,通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解,为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中,我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法,还培养了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验,我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解,提高了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学实验报告

生物化学实验报告生物化学是一门研究生命体系中化学成分和物质转换过程的科学,其实验研究对于揭示生命的本质、改善人类生命质量具有重要意义。
本文将以实验报告的形式,介绍一次生物化学实验的设计、过程和结果。
一、实验目的本次实验的目的旨在从多个方面探究某种生物化学物质的结构、性质及功能,以及探索该物质在生命体系中的作用。
具体的实验目标包括:1. 通过化学方法及相关仪器对该化合物的分子结构进行分析和测定;2. 对该化合物的氧化还原性进行测定,并探究其可能的氧化还原反应机制;3. 通过光谱分析、酶活性测定等方法,确定该化合物在生命体系中的作用及其机制;4. 总结实验结果,探讨该化合物在生物化学领域中的应用及前景。
二、实验步骤本次实验主要包括以下步骤:1. 提取目标化合物。
选用某一生物体组织作为原料,在适当的化学反应条件下,经过酶促反应、液液抽提、柱层析等步骤,旨在获得目标化合物的高纯度样品。
2. 分析结构。
使用核磁共振(NMR)、高效液相色谱(HPLC)、紫外可见光谱(UV-vis)等现代科学仪器和技术,对提取的化合物进行结构分析和测定,以揭示化合物分子结构,及其性质和可能的反应机制。
3. 氧化还原性测定。
利用常用的氧化还原滴定法,对化合物的氧化还原性进行测定,及探究其可能的氧化还原反应机制。
4. 酶活性测定。
通过对该化合物活性酶的特定底物的催化反应,测定其反应速率及相关动力学参数,以推测该化合物在生命体系中的作用方式及机制。
5. 总结实验结果。
根据所测得的实验数据和分析结果,对该化合物的结构、性质及功能进行总结,即探讨其在生物化学领域中的应用及未来前景。
三、实验结果及分析根据实验数据和分析结果,我们可以得出以下结论:1. 通过化学反应及柱层析等步骤,我们从生物体组织中获得了目标化合物,并通过核磁共振(NMR)等技术分析,揭示了化合物的结构;2. 通过常用的氧化还原滴定法,我们测定了化合物的氧化还原性,并推测了其可能的氧化还原反应机制;3. 通过酶活性测定等方法,我们推测了该化合物在生命体系中的作用机制及性质,具体表现为一定的生物活性及催化能力;4. 综合以上实验结果,我们总结了该化合物在生物化学领域中的应用前景,并探讨了可能的发展方向及挑战。
生物化学实验(整理版)

生物化学实验(整理版)一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能,提高实验技能。
3. 培养科学探究能力,提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作:了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项:严格按照实验步骤进行操作,注意实验安全,保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式:包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
2. 实验报告的要求:内容完整、条理清晰、数据准确、分析深入、讨论充分、结论明确。
五、实验拓展1. 结合实验内容,查阅相关文献,了解生物化学领域的最新研究进展。
2. 尝试设计新的实验方案,对生物化学现象进行深入探究。
3. 参加学术讲座、研讨会等活动,拓宽生物化学知识面。
生物化学实验(整理版)一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能,提高实验技能。
3. 培养科学探究能力,提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作:了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项:严格按照实验步骤进行操作,注意实验安全,保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式:包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
生物化学的实验技术有哪些

生物化学的实验技术有哪些生物化学是一门研究生物体化学组成和生命过程中化学变化的学科,实验技术在生物化学的研究中起着至关重要的作用。
以下为您介绍一些常见的生物化学实验技术。
一、分光光度法分光光度法是一种基于物质对光的吸收特性来定量分析物质浓度的方法。
在生物化学中,常用于测定蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度。
例如,通过测量蛋白质在 280nm 处的吸光度,可以估算蛋白质的浓度。
分光光度法操作简便、快速,且灵敏度较高。
二、电泳技术电泳是指带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象。
在生物化学中,常用的电泳技术有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳常用于分离和分析 DNA 片段,根据 DNA 片段的大小不同,在凝胶中移动的速度不同,从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳则常用于分离蛋白质,能够分辨分子量差异较小的蛋白质。
三、层析技术层析技术是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,从而实现分离的方法。
常见的层析技术有凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析根据分子大小进行分离,大分子先流出,小分子后流出。
离子交换层析基于分子所带电荷的不同来分离物质。
亲和层析则利用生物分子之间的特异性亲和力进行分离,具有很高的选择性。
四、离心技术离心是利用离心机旋转产生的离心力,使不同密度、大小的颗粒分离的技术。
在生物化学实验中,常用于分离细胞器、细胞组分、蛋白质复合物等。
差速离心通过逐渐提高离心速度,分步沉淀不同大小的颗粒。
密度梯度离心则是在离心管中形成密度梯度,使不同密度的颗粒在相应的密度区带中沉降,从而实现分离。
五、PCR 技术(聚合酶链式反应)PCR 技术是一种用于扩增特定 DNA 片段的分子生物学技术。
通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程,使 DNA 片段呈指数级扩增。
PCR 技术在基因诊断、基因克隆、基因突变检测等方面有着广泛的应用。
六、酶联免疫吸附测定(ELISA)ELISA 是一种利用抗原抗体特异性结合进行检测的技术。
常见的生物化学实验方法

常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段,广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法,根据分子的化学性质和大小差异,将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱(GC)、液相色谱(LC)和薄层色谱(TLC)等。
在生物化学实验中,色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如,气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物,液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异,将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中,电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如,聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量,SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱(TOF-MS)和液相色谱质谱联用(LC-MS)等。
在生物化学实验中,质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如,利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定,通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图,确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合,从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中,核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如,Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数,Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
大学生物化学实验报告

一、实验名称:蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的:1. 了解凝胶层析法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
三、实验原理:凝胶层析法是一种利用凝胶作为固定相,通过分子大小不同的物质在凝胶孔径中的移动速度差异来实现分离的方法。
在凝胶层析中,大分子物质不能进入凝胶内部的孔径,而小分子物质可以进入孔径,从而在洗脱过程中,大分子物质先流出,小分子物质后流出。
通过测量不同分子量蛋白质的洗脱体积,可以计算出其分子量。
四、实验材料与试剂:1. 凝胶层析柱(直径1.5cm,长30cm)2. 凝胶(聚丙烯酰胺凝胶)3. 蛋白质样品(已知分子量)4. 标准样品(已知分子量)5. 洗脱液(Tris-HCl缓冲液)6. 显色剂(考马斯亮蓝G-250)7. 移液器8. 旋转混匀器9. 分光光度计五、实验步骤:1. 准备凝胶层析柱:将凝胶倒入层析柱中,用洗脱液充分浸泡凝胶,直至凝胶膨胀并固定在层析柱中。
2. 准备样品:将蛋白质样品和标准样品分别稀释至适当浓度。
3. 加样:将蛋白质样品和标准样品分别加入凝胶层析柱中,用洗脱液洗脱,收集不同洗脱体积的洗脱液。
4. 显色:将收集到的洗脱液加入考马斯亮蓝G-250显色剂,室温下显色10分钟。
5. 测量:用分光光度计测定显色液在595nm处的吸光度值。
6. 数据处理:以标准样品的分子量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
根据蛋白质样品的吸光度值,从标准曲线上查得蛋白质的分子量。
六、实验结果:(此处插入实验数据表格,包括标准样品和蛋白质样品的分子量、洗脱体积、吸光度值等)七、实验分析:通过凝胶层析法,成功分离了蛋白质样品,并测定了其分子量。
实验结果表明,蛋白质样品的分子量与标准样品的分子量相符,说明实验操作正确。
八、讨论与心得:1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离方法,可用于测定蛋白质的分子量。
2. 在实验过程中,要注意凝胶层析柱的制备、样品的加入和洗脱液的收集等操作步骤,以保证实验结果的准确性。
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3.用白明胶(也是一种蛋白)做上述实验,结果如何?
(二)双缩尿反应
1.取少许结晶尿素放在干燥试管中,微火加热,尿素熔化并形成双缩尿,释出之氨可用红色石蕊试纸检测。至试管内有白色固体出现,停止加热,冷却。然后加10%NaOH溶液1ml摇匀,再加2滴1%CuSO4溶液,混匀,观察有无紫色出现。
6.尿素:如颗粒较粗,最好研成细粉末状。
7. 10%NaOH溶液:10gNaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml。
8.浓硝酸:比重1.42
9. 1%硫酸铜溶液:硫酸铜1g溶于蒸馏水,稀释至100ml。
10.硫酸铵晶体:如颗粒太大,最好研碎。
11.饱和硫酸铵溶液:蒸馏水100ml,加硫酸铵至饱和。
12. 95%乙醇
纱布过滤,滤液备用。
主要内容
1.过氧化氢酶实验:
取试管4支,按下表加入试剂:
管号
2%H2O2
(ml)
新鲜猪肝糜
(g)
煮熟肝糜
(g)
生马铃薯
(g)
熟马铃薯
(g)
1
2
3
4
3
3
3
3
0.5
-
-
-
-
0.5
-
-
-
-
1
-
-
-ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
-
1
加完,观察有无气泡产生,特别注意肝糜周围和马铃薯周围。
2.过氧化物酶实验:
取试管4支,按下表编号加入试剂:
取蛋白质溶液1ml,加晶体NaCl少许(加速沉淀并使沉淀完全),待溶解后再加入95%乙醇2ml混匀,观察有无沉淀析出。
(七)重金属沉淀蛋白质
取试管2支各加入蛋白质溶液2ml,一管内滴加2~3%醋酸铅(或AgNO3),另一管内滴加1%硫酸铜溶液至有沉淀析出。
(八)生物碱沉淀蛋白质
取试管2支各加入2ml蛋白质溶液及1%醋酸溶液4~5滴,向一管中加5%鞣酸溶液数滴,另一管中加入饱和苦味酸溶液数滴,观察结果。
(五)蛋白质盐析作用
1.取蛋白质溶液5ml于试管,再加入等量饱和硫酸铵溶液(此时硫酸铵的浓度为50%饱和),微微摇动试管,使溶液混合后静置数分钟,球蛋白即析出(如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵)。
2.将上述混合溶液过滤,滤液中加入硫酸铵粉末,至不再溶解,析出的为清蛋白,再加水稀释,观察沉淀是否溶解。
(六)酒精沉淀蛋白质
取4支试管,各加1mlBenedict试剂,混合均匀后,分别加4滴2%葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及1%淀粉溶液,摇动均匀,将各试管同时放入沸水浴中加热2~3分钟,然后取出放在试管架上冷却,注意观察试管中溶液颜色变化,是否有红色沉淀生成。
2、蔗糖水解
取2支试管,编号后,分别加1ml2%蔗糖和1~2ml蒸馏水,向甲管中加3~5滴2%硫酸溶液,乙管中加3~5滴蒸馏水,混合均匀,然后将两支试管同时放入沸水浴中加热10~15分钟,取出两支试管放在试管架上冷却,甲管用10%NaOH溶液中和至中性。再向甲乙管中各加1mlBenedict试剂,摇动均匀,将两支试管同时放入沸水浴中加热2~3分钟,观察甲、乙两管中颜色的变化,说明什么问题。
管号
1%焦性没食子酸
2%H2O2
蒸馏水
白菜梗提取液
煮沸的白菜梗提取液
1
2
3
4
2ml
2ml
2ml
2ml
2滴
-
2滴
2滴
2ml
-
-
-
-
2ml
2ml
-
-
-
-
2ml
摇匀后,观察并记录各管颜色变化和沉淀情况。
实验六维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
还原型维生素c(抗坏血酸)能还原染料2,6—二氯酚靛酚(Dichlorophenolindo pheno1一DCPIP).本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中,2,6—二氯酚靛酚呈红色,还原后变为无色。因此.当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时,维生素C尚未全部被氧化前,则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以,当溶液从无色转变成微红色时即表示溶液中的维生索C刚刚全部被氧化,此时即为滴定终点。如无其他杂质干扰.样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
2. 1%苯酚溶液:苯酚1ml,加蒸馏水稀释至100ml。
3. 1%白明胶液:1g白明胶溶于少量热水,完全溶解后稀释至100ml。
4.米伦(Millon)试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(比重1.42),水浴加温助溶,溶解后加二倍体积蒸馏水,混匀,静置澄清,取上清液备用。此试剂可长期保存。
5. 0.5%茚三酮溶液:0.5g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。
3、淀粉与碘的作用
取一支试管加10滴1%淀粉溶液和1滴0.1%碘液,溶液立即出现蓝色,将试管放入沸水浴中加热5~10分钟,观察有何现象发生,然后取出试管,放置冷却,又有何变化。
4、淀粉的水解
取1个小烧杯加10ml1%淀粉溶液和8滴浓盐酸,沸水浴中加热,每隔2~5分钟取出1小滴淀粉水解液在白瓷板上,滴1滴0.1%碘液,注意观察其颜色的变化,直到无蓝色出现为止。冷却后,向小烧杯中逐滴加入20%NaOH溶液至弱碱性为止,此时,取出1ml淀粉水解液于1支试管中,1支试管加1ml1%淀粉溶液,在此2支试管中分别加入Benedict试剂,摇动均匀后,将2支试管同时放入水浴中加热2~5分钟,观察颜色变化,说明什么?
新鲜猪肝糜
试管1.5×15cm(×4
吸管5ml(×1)、2ml(×4)
天平
水浴锅
剪刀
白菜梗
棉花或纱布
胶头滴管
研钵
漏斗Φ8cm(×1)
试剂
1. 2%过氧化氢溶液
2. 1%焦性没食子酸水溶液:焦性没食子酸1g,溶于100ml蒸馏水。
3.白菜梗提取液:白菜梗约5g切成细块,置研钵内,加蒸馏水约15ml,研磨成浆,经棉花或
2.另取一只试管,加蛋白液10滴,再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴,混匀,是否出现紫玫瑰色。
注意硫酸铜不能多加,否则产生深蓝色的干扰络离子。
(三)黄色反应
于一试管内,置蛋白溶液10滴及浓硝酸3~4滴,加热,冷却后再加入10%NaOH溶液5滴,观察颜色变化。
(四)茚三酮反应
取1ml蛋白溶液置于试管中,加2滴茚三酮试剂,加热至沸,即有蓝紫色出现。注意此反应必须在pH5~7进行。
沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色,说明核糖的存在。
3.磷酸:取一支试管,加水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热,观察溶液是否变成兰色,说明磷酸是否存在。
实验四糖的化学性质
淀粉和蔗糖缺乏自由醛基(苷羟基)无还原性。但在酸的作用下,淀粉和蔗糖很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖,使之具有还原性。淀粉溶液遇碘呈蓝色。
2. RNA组份鉴定:取上述RNA约0.5g,加10%硫酸溶液5ml,加热至沸1~2分钟,将RNA水解。
1.嘌呤碱:取水解液2ml加入浓氨水2ml,然后加入约1ml5%硝酸银溶液,观察有无嘌呤碱
的银化合物沉淀。
2.核糖:取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放
实验二双缩尿法测定蛋白质浓度
具有两个或者两个以上肽键的化合物皆有双缩尿反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,故可用双缩脲法测定蛋白质的含量(借助分光光度计可减小误差)。
实验一蛋白质的颜色反应与沉淀反应
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应。不同蛋白质所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦可不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白物质的定量测定的依据。
2.样品测定:取未知浓度的蛋白质3.0nl置试管内,加入双缩尿试剂2.0ml,混匀,测定540nm的吸光度,对照标准曲线求得未知液蛋白质浓度。
实验三酵母核糖核酸(RNA)的分离及组份鉴定
酵母核酸中RNA的含量较多,DNA少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙
醇使其沉淀,由此即可得到粗RNA制品。用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
仪器
容量瓶10ml(×6)
试管1.5×15cm(×8)
吸管5ml(×3)、2ml(×1)
721分光光度计
试剂
1.双缩尿试剂:将0.1750gCuSO4·5H2O溶于约15ml蒸馏水,置于100ml容量瓶,加入30ml浓氨水、30ml冰冷的蒸馏水和20ml饱和氢氧化钠溶液,摇匀,室温放置1~2小时,再加蒸馏水至刻度,摇匀备用。
13.结晶氯化钠
14. 2~3%醋酸铅(或AgNO3):2~3g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。
15. 5%鞣酸溶液:5g鞣酸溶于蒸馏水并稀释至100ml
16.饱和苦味酸溶液
17.1%醋酸溶液:冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。
主要内容
(一)米伦氏反应
1.用苯酚实验:取1%苯酚溶液1ml于试管中,加米伦氏剂约0.5ml,小心加热溶液即出现玫瑰红色。
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组份。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组份的存在。
实验材料与仪器
干酵母粉(市售)
鲜酵母
PH试纸
天平
烧杯100ml(×1)
量筒50 ml(×1)、10 ml(×1)
抽滤瓶500 ml(×1)、布氏漏斗Φ10cm(×1)