线粒体复合体Ⅴ试剂盒说明书
血液线粒体DNA抽提试剂盒说明书
血液线粒体DNA抽提试剂盒说明书近几年,从有报告暗示糖尿病、阿尔茨海默病和线粒体DNA(mtDNA)变异有关开始,mtDNA分析变得盛行1),2),3),4)。
可是，想要抽提高纯度mtDNA，需要繁杂的操作和很多的时间，不适合以多样品处理为目的的研究。
目前进行的mtDNA分析，从细胞中抽提total DNA时，产物中含有微量mtDNA与大量基因组DNA。
mtDNA 抽提WB试剂盒可短时间从全血中容易的抽提出高纯度mtDNA，适合多样品处理。
〔特点〕Ⅰ. 简单操作，可短时间（约90分钟）抽提出mtDNA。
Ⅱ. 可从EDTA 处理血及肝素处理血中抽提出mtDNA。
Ⅲ. 抽提出的mtDNA混入了少量高纯度基因组DNA，可用于限制性内切酶处理或DNA扩增反应。
Ⅳ. 适合少量多样品的DNA扩增反应的预处理。
Ⅴ. 不使用苯酚、氯仿等有害剧毒溶剂。
〔内容〕1) Leukocyte Isolation Solution 5.0 ml 1支2) DNA Extraction SolutionⅠ 26.5 ml 1支3) DNA Extraction SolutionⅡ(A) 1.3 ml 1支4) DNA Extraction SolutionⅡ(B) 1.3 ml 1支5) DNA Extraction SolutionⅢ 1.9 ml 1支6) Sodium Iodide Solution 7.5 ml 1支7) Washing Solution 50.0 ml 1支〔储存方法〕2～10℃保存〔除试剂盒外，实验所必备的东西〕试剂1) 异丙醇（特级，Code 166–04836）12.5 ml2) TE缓冲液（基因工程学研究，Code 316–90025）适量器具1) 1.5 ml 微管（已灭菌）2) 涡流搅拌器3) 微量高速离心机（最大12,000×g）4) 减压干燥机〔使用方法〕(1) 将100μl的人类新鲜血液放入微管中*1。
线粒体膜通透性转换孔(mPTP)的检测
2.8 用 400µl 同时可用于流式检测的合适的缓冲液重悬细胞。
【注】：如果需要，也可进行进一步染色。如用标记的 Annexin V 检测磷酯酰丝氨酸易位(BB-4101 Anneexin V 细胞凋亡检测试剂盒)；用 PI 检测细胞活力；或者用 BBcellProbeTM M11 探针检测 线粒体活力等。注意整个过程均需避光操作。
【注】：① 用于加 Ca2+通透剂的对照样品的缓冲液必须含有 Ca2+； ② BBcellProbeTM CA1 探针加载时不能含有血清； ③ 细胞必须为单细胞悬液。
2.2 按照 500ul 每管将细胞悬液等分，每个样品等分成 3 份，并记录编号。
【注】：后续染色顺序：1 号管仅含 BBcellProbeTM CA1 探针，2 号管含 BBcellProbeTM CA1 探针和淬灭 剂，3 号管含 BBcellProbeTM CA1 探针，淬灭剂和通透剂，另外准备一管不加试剂的细胞样品 用于相应的仪器设置。
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咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235 400-8363-211
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
2、 细胞染色 2.1 将样品细胞制备成单细胞悬液，使其密度为 1×106 细胞/ml。
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒
产品号 BB-4104 BB-4105 BB-4106 BB-4107 BB-4108 BB-4112 BB-4123
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书
4
GMS10016.6 GMS10016.7 GMS10016.8 GMS10067.1 GMS10067.2 GMS10067.3 GMS10111.1 GMS10111.2 GMS10104.1 GMS10104.2
GMS10104.3
GMS10104.4
GMS10104.5
GMS10104.6
3． 移取
微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的 1 毫升比色杯
4． 加入
微升 GENMED 稀释液（Reagent C）
5． 放入分光光度仪，置零
6． 取出比色杯，加入
微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED
11．上下倾倒数次，混匀
12．放入分光光度仪，置零
13．取出比色杯，加入
微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED
反应工作液
14．即刻上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
15．即刻放入分光光度仪检测，此为样品读数（0 秒读数－60 秒读数），通常活性读数差值为正数
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS10014.2 v.A
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过测定纯化的可溶性完整线粒体样品 中的细胞色素 C 氧化酶的活性，即采用比色法测定受到细胞色素 C 氧化酶催化的氧化反应的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、 昆虫等）细胞色素 C 氧化酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
线粒体的染色方法(红色荧光)
2、 细胞染色 2.1 对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。 2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量 37℃预热的含探针工作液。于
生长状态下孵育 15 分钟～45 分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实 验优化）。
【注】: 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
技术支持： 产品技术问题可发邮件至 bestbio@ 咨询。 如果您有任何关于产品性能或者新应用和技术的建议，欢迎您随时联系我们。
产品简介： 贝博 TM BBcellProbeTM M11 线粒体染色试剂盒是利用 BBcellProbeTM M 系列探针进行线
粒体特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的 BBcellProbeTM M11 线粒体染色探针为红色荧光标 记的线粒体探针，具有 579/599nm 的最大激发/发射波长。本品适合双标实验，因其红色荧 光与其他的绿色荧光探针具有良好的分辨率。
虽然传统的线粒体荧光探针如 TMR 和罗丹明 123，也能很容易的聚集在功能线粒体上， 但是一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉，从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体 能量状态影响因子的实验中，使其应用大受限制，而 BBcellProbeTM M 系列探针不受线粒体 膜电位影响。
BBcellProbeTM M 系列线粒体探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色 标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，贝博还可以提供绿色、蓝色、橙色等颜色的染色
BBcellProbeTM M 系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的线粒体体进行选择性染色 的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记线粒体，包含标记线粒体的弱巯基反应性
的氯甲基官能团。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。可有效
线粒体 裂解液
技术背景
线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富 的细胞色素氧化酶系统、细胞凋亡相关蛋白和独立的核外 DNA。通过线粒体溶解，可以进行相关蛋白的独 立分析。
产品内容
GENMED 裂解液（Reagent A） 产品说明书
毫升 1份
保存方式
保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS12055 v.A
GENMED 裂解液 VI：线粒体裂解液产品说明书（中文版）
主要用途
GENMED 裂解液 VI：线粒体裂解液是一种旨在通过非离子性化学裂解处理，使线粒体膜结构破坏而获得 线粒体内的活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。 其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）的内容物预制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、 古生物、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
1
8． 转移到 1.5 毫升离心管
9． 放进微型台式离心机离心 2 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
10．小心移取上清液到新的
毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统
11．若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里
12．继续进行下列操作：
操作一、可溶性线粒体蛋白电泳
2． （选择步骤）如果线粒体样品不是颗粒状态，而是液体状态且容积过大，置入 4℃超速离心机离心 20
分钟，离心速度为 10000g
3． （选择步骤）小心抽去上清液
4． 加入
微升 GENMED 裂解液（Reagent A）到线粒体颗粒样品中
全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书中文版
全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书（中文版）主要用途全血线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过化学溶解纯化血白细胞、物理或化学破膜及离心处理获得线粒体，然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种动物血细胞中的线粒体核酸成分处理。
用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR 分析等。
产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶污染，萃取纯度和产量皆高。
技术背景线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的最重要的课题之一。
线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。
线粒体DNA的分离和定量以及突变分析是研究中必不可少的。
产品内容溶血液（Reagent A）毫升清理液（Reagent B）毫升裂解液（Reagent C）毫升净化液（Reagent D）毫升强化液（Reagent E）毫升保存液（Reagent F）毫升破膜液（Reagent G）毫升去干扰液（Reagent H）微升酶解液（Reagent I）微升萃取液（Reagent J）毫升浓缩液（Reagent K）毫升助沉液（Reagent L）微升沉淀液（Reagent M）毫升纯化液（Reagent N）毫升缓冲液（Reagent O）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（Reagent D）、去干扰液（Reagent H）、酶解液（Reagent I）、萃取液（Reagent J）和助沉液（Reagent L）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于核酸操作的容器15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备的容器50毫升锥形离心管：用于血细胞处理的容器涡旋震荡仪：用于混匀4℃微型台式离心机：用于沉淀细胞和核酸4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞58℃恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤一、白细胞分离实验开始前，室温预热血溶液（Reagent A），同时4℃预冷清理液（Reagent B）。
普利莱基因技术线粒体提取试剂盒说明书
升级版线粒体提取试剂盒C0010描述：线粒体制备试剂盒(Mitochondria Isolation Kit)用于从组织或培养细胞中分离线粒体和细胞胞浆成分。
加入分离溶液，匀浆破碎组织细胞，经过数次800g和12000g离心，在60分钟内即可分离出完整的线粒体和胞浆成分。
制备的线粒体具有很高的生物学活性，可进行各种功能研究如酶学测定，更可用于Western Blot、2D-胶、线粒体蛋白或DNA提取、蛋白质组学等研究。
严格按照说明操作，总是能制备获得高纯度线粒体。
一篇方法学研究论文发现，用普利莱试剂盒制备线粒体的得率、活性、纯度优于蔗糖密度梯度离心法和Invotrogen/Pierce线粒体提取试剂盒方法。
适用：从组织、培养细胞制备高纯度线粒体，同时分离细胞胞浆成分。
组成：Mito Solution100ml for50次制备200ml for100次制备储存：−20ºC12个月有效操作步骤：以下所有操作均在4ºC进行1.组织匀浆：100~200mg新鲜组织如肝、脑、肾、心肌等，剪为0.5cm2碎块放入小容量玻璃匀浆器内。
估计组织块总体积。
加入1.5ml冰预冷的Mito Solution。
用间隙严紧的研杵上下研磨组织20次。
培养细胞匀浆：800×g5min离心收集细胞。
单次提取需2-5×107个细胞。
加入1.5ml冰预冷Mito Solution 重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，用间隙严密的研杵研磨细胞30次。
2.将匀浆液转移到离心管中，800×g，4ºC离心5min。
（胞核、膜碎片、未裂解细胞等在管底，弃去）3.收集上清液并转移到新的离心管。
再次800×g离心5min at4ºC，弃沉淀。
4.将上清液转移到新的离心管。
10,000×g离心10min4ºC。
线粒体沉淀在管底。
离心后的上清含胞浆成分，可收集用于对照实验。
纯化线粒体呼吸控制率RCR定量检测试剂盒产品说明书
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）50毫升IV态底物液（Reagent B）400微升III态底物液（Reagent C）400微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入2.5毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入20微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时变化）6．持续记录1分钟后，注射加入20微升IV态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降8．继续注射加入20微升III态底物液（Reagent C）（注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III 态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注IV态底物液（Reagent B）和III态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
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货号：MS3304 规格：100管/48样
线粒体复合体Ⅴ试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
线粒体复合体Ⅴ又称F
1F
-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体
中，由F1和F0两个亚单位组成。
该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。
此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。
复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
测定原理：
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：100mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：80mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：2 mL×1瓶，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂五：8mL×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；
试剂七：粉剂×1瓶, 4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；
试剂八：粉剂×1瓶, 4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；
试剂九：液体10mL×1 瓶，室温保存。
定磷试剂的配制：按H
2
O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂应为浅黄色。
若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染（请根据需要，用多少配多少）。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
①准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或
研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅴ（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入800uL试剂二和8uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率
20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅴ酶活性测定。
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测定步骤：
-A对照管。
每个测定管设一个对照管。
复合体Ⅴ活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
标准条件下测定的回归方程为y = 1.274x + 0.004；x为标准品浓度（mmol/L），y为A值。
1、组织中复合体Ⅴ活性的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min/mg prot）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反总×106]÷(V样×Cpr) ÷T =62.8× (ΔA-0.004) ÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /g 鲜重）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反总×106]÷(W× V样÷V 样总) ÷T =50.7× (ΔA-0.004) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /104 cell）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反总×106]÷(500×V样÷V 样总) ÷T=0.101× (ΔA-0.004)
V反总：反应体系总体积，1.2×10-4 L； V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，0.808 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.637x + 0.004；x为标准品浓度（mmol/L），y为A值。
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /mg prot）=[(ΔA-0.004) ÷0.637×V反总×106]÷(V样×Cpr) ÷T
=125.6× (ΔA-0.004) ÷Cpr
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此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /g 鲜重）=[(ΔA-0.004)÷0.637×V反总×106]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=101.5× (ΔA-0.004) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /104 cell）=[(ΔA-0.004)÷0.637×V反总×106]÷(500×V样÷V 样总) ÷T
=0.203× (ΔA-0.004)
V反总：反应体系总体积，1.2×10-4 L； V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，0.808 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
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