实验二 线粒体超活染色技术及观察
实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
（2）学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。
小麦种子或黄豆幼根根尖。
2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
（2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
2、植物细胞液泡系的超活染色与观察：（1）用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗根尖（1-2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片中的1/3000中性红染液滴中，染色5-10分钟。
（2）吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
线粒体和液泡系的超活染色与观察(“观察”文档)共7张
(燥2)，实必验要者时用(可2牙再)签加用宽滴头双染在液自面)，己刀盖口上腔片盖颊玻把粘片膜初，处用稍生吸用的水力纸刮小吸取去麦上四皮或周细溢胞黄出，豆的将染刮幼液下，的苗置粘根显液微状尖镜物下(放约观入察1载。~玻2片c的m染液长滴)中小，染心色切10~一l5m纵in(注切意面不可，使染液干 (器3)材吸：去显染微液镜，、滴恒放一温滴入水R浴i载n锅ge、玻r液剪，片刀盖、中上镊盖内子玻、片的双，面1并刀/用片3镊、0子载0轻玻0轻片中地、下性盖压玻红盖片玻染、片表，液面使皿滴根、尖中吸压管，扁、，牙染利签于色、观吸5察水~。纸1。0min。 观 人察口动腔、 粘植 膜(物 上3活 皮) 细 细吸胞 胞去内 线线粒染粒 体体 的液、 超，液 活泡 染滴系 色的 与一形 观滴态 察、R数in量g与e分r布液；，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻 观(2)察实动验、者植用物牙活签细片宽胞头，内在线使自粒己体根口、腔尖液颊泡压粘系膜扁的处形稍，态用、利力数刮于量取与观上分皮察布细；胞。，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10~l5min(注意不可使染液干 燥(2)，用必双要面时刀(可4片再)把加进初滴生行染的液镜小)，麦检盖或。上黄盖豆玻幼片苗，根用尖吸(约水1纸~2吸cm去长四)小周心溢切出一的纵染切液面，，置放显入微载镜玻下片观中察内。的1/3000中性红染液滴中，染色5~10min。
观察动、植物活细置胞显内线微粒体镜、下液泡观系察的形。态、数量与分布；
线粒体和液泡系的超活染色与观察
人人口口腔 腔粘粘膜膜(上上3皮皮) 细细在胞胞低线线倍粒粒体体镜的的下超超活活，染染选色色与与择观观平察察展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
实验目的：1、掌握线粒体活体染色技术
2、观察和了解活细胞内线粒体的形态、结构与分布特点
实验材料：小鼠、解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯、双凹片、载玻片、盖玻片、胶头滴管、詹纳斯绿B溶液、Ringer溶液
实验原理：詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。
这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
持氧化状态（即有色状态——蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，
这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）
实验步骤：1、断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝组织。
选取边缘较薄的肝组织0.5cm³，放入小烧杯中，用Ringer溶液冲洗
去血污
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再
将肝组织块移入染液中，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上
面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易
被染色。
当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20~30min）
3、吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加
Ringer溶液0.5ml，用剪刀充分剪碎制悬液。
4、去上述细胞悬液滴片加盖玻片，高倍镜下观察
实验结果：肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色
分析与讨论：视野中除肝细胞外还有很多红细胞，红细胞比肝细胞小，且没被染上蓝绿色。
实验二-线粒体超活染色技术及观察PPT课件
• （4）染色10～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。
• （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。
• ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察
• （1）取载玻片于37℃恒温水浴：
• （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴
• （3）洋葱鳞茎内表皮 镊子撕取
• （4）染色10～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察．
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• 【实验用品】
• 材料：
• 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞
• 器材：
• 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、牙 签、吸水纸、洋葱
• ２、试剂：
• （1）Ringer溶液
• 氯化钠
0.85 g
• 氯化钾
0.25 g
• 氯化钙
0.03 g
• （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液：
• 称取0.5g詹纳斯绿Ｂ溶于5ml Ringer溶液中，稍加热(3040℃)溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
• 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应 选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质) 并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿Ｂ是活体染色 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ可 专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内 的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化 状态(即有色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞 质中,这些染料被还原为无色的色基。
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• 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同, 活体染 色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以 胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的. 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其 “电化学”特性与被染部分相互吸引被选择固定在 活细胞的某种结构中而显色。
实验二 线粒体超活染色技术及观察
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【实验方法】 １、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 （3）人口腔上皮细胞黏液 牙签刮取 （4）染色10～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。 （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。 ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 （3）洋葱鳞茎内表皮 镊子撕取 （4）染色10～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察． （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。
• 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同, 活体染 色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以 胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的 . 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其 “电化学”特性与被染部分相互吸引被选择固定在 活细胞的某种结构中而显色。 • 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应 选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质) 并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿Ｂ是活体染色 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ可 专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内 的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化 状态(即有色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞 质中,这些染料被还原为无色的色基。
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【注意事项】 1、显微镜的使用 2、掌握好詹纳斯绿Ｂ染色时间 3、实验结束后，注意清理实验用具 【作业】 1、绘出人口腔上皮细胞和洋葱鳞茎内表皮 细胞示线粒体的形态与分布 • 2、分析染色时间对结果影响。
实验二线粒体和液泡系的超活体染色课件
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、 发育和分布；
2 ．了解细胞和细胞器的超活体染色的原理和相关 技术 。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
线粒体和液泡系
线粒体是细胞内一种重要细胞器，主要功能是进行氧 化磷酸化，合成ATP，为细胞生命活动提供直接能量，是 细胞进行呼吸作用的场所。此外与细胞中氧自由基的生成、 细胞凋亡、细胞信号转导、细胞内多种离子的跨膜转运及 电解质稳态平衡的调控有关。线粒体的形态、大小、数量、 分布在不同细胞中和细胞的不同生理状况下变化很大，具 有多形性、易变性、运动性和适应性等特点。 （1）形态：线状和颗粒状最常见，也可呈哑铃状、环状与 枝状；
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
四、实验方法
（二） 绿豆幼根干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
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一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告
细胞生物学实验报告题目：小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察姓名：刘恋学号：201000140049 系年级：10级生科2班一、【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告 山东大学
科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
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【实验用品】 实验用品】 材料： 材料： 人口腔上皮细胞、 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞 器材： 器材： 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、牙 吸水纸、 签、吸水纸、洋葱 试剂： ２、试剂： （1）Ringer溶液 ） 溶液 0.85 g 氯化钠 氯化钾 0.25 g 0.03 g 氯化钙 詹纳斯绿Ｂ （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液： ） 詹纳斯绿 溶液： 称取0.5g詹纳斯绿Ｂ溶于 詹纳斯绿Ｂ 溶液中， 称取 詹纳斯绿 溶于5ml Ringer溶液中，稍加热 溶液中 稍加热(3040℃)溶解，用滤纸过滤后，即为 原液。 溶解， 原液。 ℃ 溶解 用滤纸过滤后，即为1%原液 原液加入49mlRinger溶液，即得 溶液， 工作液， 取1ml1%原液加入 原液加入 溶液 即得1/5000工作液， 工作液 将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用， 将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用，以保持充分的氧 化能力。 化能力。
Байду номын сангаас
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【实验方法】 实验方法】 １、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于 ℃恒温水浴： ）取载玻片于37℃恒温水浴： 詹纳斯绿Ｂ （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 ） 詹纳斯绿 滴 （3）人口腔上皮细胞黏液 ） 牙签刮取 （4）染色 ～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， ）染色10～ ，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。 显微镜下观察。 个细胞中线粒体数目， （5）计数 个细胞中线粒体数目，得出平均值。 ）计数50个细胞中线粒体数目 得出平均值。 ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于 ℃恒温水浴： ）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 ） 詹纳斯绿Ｂ 滴 詹纳斯绿 （3）洋葱鳞茎内表皮 ） 镊子撕取 溶液１ （4）染色 ～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ ）染色10～ ，吸去染液， 溶液 盖上盖玻片，显微镜下观察． 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察． 个细胞中线粒体数目， （5）计数 个细胞中线粒体数目，得出平均值 ）计数50个细胞中线粒体数目 得出平均值。
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【注意事项】 注意事项】 1、显微镜的使用 、 2、掌握好詹纳斯绿Ｂ染色时间 、掌握好詹纳斯绿Ｂ 3、实验结束后，注意清理实验用具 、实验结束后， 作业】 【作业】 1、绘出人口腔上皮细胞和洋葱鳞茎内表皮 、 细胞示线粒体的形态与分布 • 2、分析染色时间对结果影响。 、分析染色时间对结果影响。
• 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同 活体染 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同, 色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以 色可分为体内活染与体外活染两类 体内活染是以 胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固 胶体状的染料溶液注入动植物体内 染料的胶粒固 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的. 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的 体外活染又称超活染色， 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染， 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其 电化学” “电化学”特性与被染部分相互吸引被选择固定在 活细胞的某种结构中而显色。 活细胞的某种结构中而显色。 • 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用 一般应 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应 选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质 易溶于类脂质) 选择那些无毒或毒性小的碱性染料 易溶于类脂质 并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿 詹纳斯绿Ｂ 并配成较稀的溶液来使用 詹纳斯绿Ｂ是活体染色 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ可 专一性地对对线粒体进行活染， 专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内 的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化 的细胞色素氧化酶系的作用 使染料始终保持氧化 状态(即有色状态 呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞 即有色状态),呈蓝绿色 状态 即有色状态 呈蓝绿色 而线粒体周围的细胞 质中,这些染料被还原为无色的色基 这些染料被还原为无色的色基。 质中 这些染料被还原为无色的色基。
实验2 实验 线粒体超活染色技术及观察分析 【实验目的】 实验目的】 学习线粒体的超活染色技术； 学习线粒体的超活染色技术；观察动植物 活细胞内线粒体的形态数量与分布。 活细胞内线粒体的形态数量与分布。 【实验原理】 实验原理】 活体染色是指对生活有机体的细胞或组 织能着色但又无毒害的一种染色方法.其目的 织能着色但又无毒害的一种染色方法 其目的 是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞 是显示生活细胞内的某些结构 而不影响细胞 的生命活动和产生任何理化变化以致引起细 胞死亡.活染技术可用来研究生活状态下的细 胞死亡 活染技术可用来研究生活状态下的细 胞形态结构和生理、病理状态。 胞形态结构和生理、病理状态。