基因敲除MDA-MB-231细胞系,乳腺癌研发福音
敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建
敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建黄晏军; 郑艺; 汤长宁; 刘金河; 刘杰麟【期刊名称】《《贵阳医学院学报》》【年(卷),期】2018(043)005【摘要】目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。
方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^(TM)核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。
结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。
结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。
【总页数】5页(P503-507)【作者】黄晏军; 郑艺; 汤长宁; 刘金河; 刘杰麟【作者单位】贵州医科大学免疫学教研室贵州贵阳 550004; 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳 550004【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.siRNA介导的Bmi-1基因沉默对乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭迁移的影响[J], 李海玉;武向梅;陈兴凤;李韵;樊建军;刘革力;宋方洲2.MTA2基因敲除抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和迁移能力 [J], 翁伟;徐元宏;宋晓菲3.BLNK基因慢病毒载体构建及其稳定表达的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的筛选 [J], 肖斌;庄玉格;侯贤德;刘萍;陈建芸;孙朝晖;李林海4.敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建 [J], 黄晏军;郑艺;汤长宁;刘金河;刘杰麟;;;;;;;;;5.SK-1基因敲除联合阿霉素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移 [J], 续旭;任树昱;辛翠燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Mortalin促进人乳腺癌细胞MDA-MB231的恶性进展
Ｍｏ ｒ ｔ ａ ｌ ｉ ｎ 促 进人乳腺癌 细胞 ＭＤ Ａ — ＭＢ ２ ３ １的恶性进展
金海 丹 ，周 宪春 ，张松 男 ，林 贞花 ，金铁 峰ｈ
（ 延边 大学 １ ．肿瘤研究所 ； ２ ．延边大学 附属医院 肿瘤科 ， 吉林 延吉 １ ３ ３ ０ ０ ２ ）
瘤发生发 展过程 中起到 了重要 的作用 ， 但 Ｍ ｏ ｒ ｔ ａ ｌ ｉ ｎ在乳腺 癌 的研究 较 少 。上皮一 间质 转 化 （ ｅ ｐ ｉ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ — ｍ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍ ａ ｌ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ — ｔ ｉ ｏ ｎ Ｅ ＭＴ ） 是肿瘤发生迁移 、 侵袭， 维持 干细胞 样特征 及抗 凋
后， 用 嘌呤霉素 （ １ ｍ ｇ ／ Ｌ ） 筛 选稳 定 表达 Ｍｏ ｒ ｔ ａ ｌ ｉ ｎ的靶 细胞 。
最 后 利 用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法 鉴 定 Ｍｏ ｒ ｔ ｌｉ ａ ｎ的表 达 情 况 。
２ ０ １ ５年 ６月 第３ ５ 卷 第６ 期
文 章 编 号 ：１ ０ ０ １ — ６ ３ ２ ５（ ２ ０ １ ５） ０ ６ ． ０ ８ ３ ３ — ０ ３
基 础 医学与 临床
Ｂａ ｓ ｉ ｃ＆ Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ５
中 图分 类 号 ： Ｒ ７ ３ ４ ． ２ ； Ｒ ７ ３ ０ ． ５
文 献标 志 码 ： Ａ
全球 每年有超过 １ ０ ０万乳腺 癌新发病 例 ， 转 移是其 难治
吸光度值 ， 并计算 细胞 生存 率 。 １ ． ２ ． ３ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ 检测 ： 将 Ｍ一 ２ ３ １ 及 Ｍ一 ２ ３ １ ／ Ｍｏ ｒ 细胞 以冷 Ｐ Ｂ Ｓ洗 ２次后提取总蛋 白 ； Ｂ Ｃ Ａ法测定 蛋 白浓度 ； ８ ％Ｓ Ｄ Ｓ聚 丙烯酰胺凝胶垂 直 电泳 进行 蛋 白分 离 ； 转至 Ｐ Ｖ Ｄ Ｆ膜上 ； 室 温下摇床 封闭 （ Ｔ Ｂ Ｓ Ｔ＋５ ％脱 脂奶 粉 ） ２ ｈ ； 加入一 抗 ； ４℃过
黄芩素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231_侵袭、迁移、上皮间充质转化的调控作用及其机制
黄芩素对人乳腺癌细胞系MDA -MB -231侵袭、迁移、上皮间充质转化的调控作用及其机制陈林1，2，梁秋果1，2，吉杨丹1，2，王恒1，21 黔南民族医学高等专科学校基础医学部，贵州都匀558013；2 黔南州天然产物与组分功效重点实验室摘要：目的 观察黄岑素对人乳腺癌细胞系MDA -MB -231的侵袭、迁移及上皮间充质转化（EMT ）的调控作用，探讨其可能作用机制。
方法 取对数生长期MDA -MB -231细胞分为一组、二组、三组及对照组，一组、二组、三组分别加入2.5、5、10 μmol /L 的黄岑素，对照组不做任何处理。
培养48 h 时采用划痕修复实验观察四组细胞迁移能力、采用Transwell 侵袭实验观察四组细胞侵袭能力，采用Western Blotting 法检测细胞EMT 标志物波形蛋白（vimentin ）及E -钙黏蛋白（E -cadherin ）、整合素αv 、β3、磷酸化黏着斑激酶（p -FAK ）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（整合素p -PI3K ）。
结果 与对照组相比，黄岑素组细胞迁移率降低、侵袭细胞数少，细胞E -cadherin 相对表达量高，vimentin 、整合素αv 、整合素β3、p -FAK 、p -PI3K 蛋白相对表达量低，且呈剂量依赖性（P 均<0.05）。
结论 黄芩素抑制MDA -MB -231细胞的侵袭、迁移及EMT 。
黄岑素可能通过抑制整合素αv 、整合素β3表达，进一步抑制p -FAK 、p -PI3K 蛋白表达，抑制MDA -MB -231的侵袭、迁移及EMT 。
关键词：黄芩素；乳腺癌；细胞侵袭；细胞迁移；上皮间质转化；波形蛋白；E -钙黏蛋白；整合素αv 、整合素β3；黏着斑激酶；磷脂酰肌醇3激酶doi ：10.3969/j.issn.1002-266X.2024.06.003中图分类号：R965.1 文献标志码：A 文章编号：1002-266X （2024）06-0010-04Regulatory effects of baicalein on invasion ， migration ， and EMT in human breast cancer cell line MDA -MB -231CHEN Lin 1， LIANG Qiuguo ， JI Yangdan ， WANG Heng1 Department of Basic Medicine ， Qiannan Medical College for Nationalities ， Duyun 558013， ChinaAbstract ： Objective To investigate the regulatory effects of baicalein on the invasion ， migration ， and epithelial -mesenchymal transition （EMT ） of human breast cancer cell line MDA -MB -231 and to explore its potential mechanism of action. Methods MDA -MB -231 cells in the logarithmic growth phase were divided into the Group 1， Group 2， Group 3， and Control group. Baicalein was added to cells in the Group 1， Group 2， and Group 3 at concentrations of 2.5， 5， and 10 μmol /L ， respectively ， while cells in the Control group were not treated. After 48 h of incubation ， Scratch repair experi‐ment was used to observe cell migration capacity ， Transwell invasion experiment was performed to assess cell invasion ca‐pacity ， and Western blotting was utilized to detect the expression levels of EMT markers including vimentin and E -cad‐herin ， as well as integrin αv ， integrin β3， phosphorylated focal adhesion kinase （p -FAK ）， and phosphorylated phosphati‐dylinositol -3 kinase （p -PI3K ） proteins. Results Compared with the control group ， the cell migration rate decreased ， the number of invading cells decreased ， the relative expression level of E -cadherin was higher ， and the relative expression levels of vimentin ， integrin αv ， integrin β3， p -FAK ， and p -PI3K protein were lower in the baicalein group ， with a dose -de‐pendant manner （all P <0.05）. Conclusions Baicalein inhibits the invasion ， migration ， and EMT of MDA -MB -231cells. Baicalein may inhibit the expression of integrin αv ， integrin β3， and further inhibit the expression of p -FAK and p -PI3K proteins ， thereby inhibiting the invasion ， migration ， and EMT of MDA -MB -231 cells.Key words ： baicalein; breast carcinoma; cell invasion; cell migration; epithelial -mesenchymal transition; vimentin;基金项目：黔南民族医学高等专科学校校基金（qnyz202013，qnyz202206）；黔南民族医学高等专科学教育教学科研基金项目（qnyzjx202205）；黔南民族医学高等专科学校大学生科技创新项目（qnyz202201）。
EphrinA2基因促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的初步研究
EphrinA2基因促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的初步研究史钟;郁肖夫;王晓稼【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2015(44)9【摘要】目的在MDA-MB-231人乳腺癌细胞系中过表达EphrinA2基因,研究其对肿瘤细胞迁移能力的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法用脂质体法将EphrinA2真核表达质粒转染至MDA-MB-231细胞中,用Western blot法检测转染前后细胞中EphrinA2、E-Cadherin及p27/Kip1蛋白的表达;并用细胞疏散、细胞划痕及Transwell小室试验检测转染前后细胞迁移能力的变化;用Rac1抑制剂NSC23766抑制Rac1活性后用细胞划痕试验检测细胞迁移能力变化.结果转染EphrinA2后的细胞迁移能力更强,并且呈现出E-Cadherin及p27/Kip1蛋白表达下降;用NSC23766抑制Rac1活性能抑制EphrinA2介导的细胞迁移.结论EphrinA2能促进MDA-MB-231乳腺癌细胞的迁移,其机制可能与E-Cadherin和p27/Kip1蛋白下调及Rac1活性抑制有关.【总页数】6页(P67-72)【作者】史钟;郁肖夫;王晓稼【作者单位】310022 杭州,浙江省肿瘤医院化疗中心;310022 杭州,浙江省肿瘤医院放疗科;310022 杭州,浙江省肿瘤医院化疗中心【正文语种】中文【中图分类】R73-3【相关文献】1.丙戊酸钠上调NM23H1基因的表达来抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的细胞迁移 [J], 李高峰;钱淘来;李桂生;杨春旭;2.埃兹蛋白对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移能力影响的初步实验研究 [J], 何菁;夏添松;王水3.雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化影响的初步研究 [J], 周艳;陈莉;明佳;唐鹏;张毅;杨新华;姜军4.刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制研究[J], 梁睿; 翟溯澜; 吕梦雨; 蒋艳婷; 韦翠萍; 郭冷秋5.RNAi技术敲减乳腺癌MDA-MB-231细胞SIRT2基因的研究 [J], 张舟; 邓小冲; 章骏; 夏振华; 房林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
伊班膦酸钠对人乳腺癌细胞系MDA—MB-231、MDA—MB-453的体外生长
伊班膦酸钠对人乳腺癌细胞系MDA—MB-231、MDA—MB-
453的体外生长
伊班膦酸钠是一种有效的治疗骨转移的药物，其另一个重要的应用领域就是治疗乳腺癌。
在体外实验中，伊班膦酸钠能够抑制MDA—MB-231和MDA—MB-453细胞系的生长。
MDA—MB-231和MDA—MB-453细胞系都是一种三阴性乳腺癌细胞系，其没有表达雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2（HER2）受体，因此难以通过内分泌治疗和靶向治疗来治疗。
在伊班膦酸钠的作用下，这些细胞系的增殖能力显著降低，细胞增殖曲线明显下降。
此外，伊班膦酸钠还能够诱导MDA—MB-231和MDA—MB-453细胞的凋亡。
通过检测细胞的DNA片段化程度和细胞形态的改变，可以发现伊班膦酸钠处理后，这些细胞系死亡比例增加，凋亡率明显上升。
伊班膦酸钠可能通过多个途径来抑制乳腺癌细胞系的生长。
一方面，伊班膦酸钠能够抑制骨吸收和骨髓内的肿瘤微环境，从而减少乳腺癌细胞的生长和迁移。
另一方面，伊班膦酸钠还能够抑制乳腺癌细胞的凋亡抗原Bcl-2，促进凋亡信号通路的激活。
综合来看，伊班膦酸钠在乳腺癌治疗中具有广泛的潜在应用价值，特别是在治疗三阴性乳腺癌方面。
需要更多的临床和基础研究来评估伊班膦酸钠与传统化疗、内分泌治疗和靶向治疗的联合应用，进一步确定其在乳腺癌治疗中的作用和机制。
用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建
用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建王珂;谢四梅;何建军;任予;夏海滨;张新伟【摘要】Objective To investigate the apoptosis-inducing effect of honokiol on human non-Hodgkin lymphoma Raji cells and the possible mechanism. Methods Raji cells were treated with different concentrations of honokiol, and the proliferation of the cells was detected using MTT assay. Flow cytometry was employed to analyze the cell cycle changes and apoptosis of honokiol-treated cells. Caspase 8 activity in the cells was measured by caspase 8 kit, and RT-PCR was used to detect the expression of apoptosis-related genes Bcl-2, Bad, and Bax. Results Honokiol significantly inhibited the growth of Raji cells in a time- and dose-dependent manner, with IC50 concentration of 17.53, 12.61, and 7.4 μg/ml at 12, 24, 48 h, respectively. Flow cytometry revealed cell cycle arrest atG0/G1 phase following honokiol treatment. The apoptosis rates of Raji cells treated with 7.5 and 15 μg/ml honokiol were significantly higher than that of the control cells [(18.24+2.53)%, (28.44±2.48)% vs (4.84±1.15)%,P<0.01]. Caspase 8 activity in Raji cells was significantly enhanced by honokiol (P<0.05). The mRNA expression of the apoptosis-promoting gene Bad was significantly increased following honokiol treatment (P<0.01), while the expressions of Bcl-2 and Bax remained unchanged. Conclusion Honokiol can induce apoptosis in Raji cells possibly in relation to enhancement of caspase 8 activity and Bad gene expression.%目的构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系以建立可用于活体成像的三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型.方法采用磷酸钙共沉淀的方法构建表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,体外感染MDA-MB-231细胞,经G418筛选得到稳定细胞系后,通过活体成像评价感染后细胞表达荧光素酶的情况,并通过MTT法、transwell肿瘤侵袭模型、细胞划痕实验等评价细胞的增殖、侵袭及转移能力是否改变；此外将细胞接种至雌性BALB/c-nu//nu裸小鼠的右侧第2对乳房垫内,构建乳腺癌原位肿瘤模型.利用活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况,并通过冰冻切片、HE染色评价细胞系在活体内的稳定性及成瘤能力.结果成功构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的MDA-MB-231细胞系,荧光素酶的活性达到每细胞9689 photons/s,慢病毒的整合没有改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力；成功建立了乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型.结论 (1)慢病毒以其高效稳定的感染率,应作为标记荧光素酶基因的首选载体；(2)带有荧光素酶的MDA-MB-231细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到,这将为人三阴性乳腺癌转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供一个直观、方便及灵敏的平台；(3)荧光素酶和荧光蛋白基因双标记优于单标记.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2011(031)011【总页数】7页(P1812-1818)【关键词】活体生物发光成像;MDA-MB-231细胞;三阴性乳腺癌;裸鼠;移植瘤模型【作者】王珂;谢四梅;何建军;任予;夏海滨;张新伟【作者单位】西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;陕西师范大学基因治疗实验室,陕西西安710062;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R737.9三阴性乳腺癌（TNBC）是指雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2（HER-2）均阴性表达的乳腺癌。
KDM3A沉默对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和侵袭能力的影响
January 2021Vol.41 No.12021年 1月 第41卷第1期基础医学与临床Basic & Clinical Medicine文章编号：1001-6325 ( 2021 ) 01-0033-05研究论文KDM 3A 沉默对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和侵袭能力的影响张天瑞1,高文怡1,姚 娟2*收稿日期：2020-08-06 修回日期：2020-11-05基信项目：国家自然科学基金(81960339,81660305)*通信作者(corresponding author ) :yaoj324@ (1.新疆医科大学，新疆乌鲁木齐830000； 2.新疆医科大学第一附属医院影像中心，新疆乌鲁木齐830000)摘要：目的探讨siRNA 介导的KDM 3A 基因沉默对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭的影响。
方法构建KDM3A 基因特异性siRNA 慢病毒载体。
感染MDA-MB-231细胞，实时荧光定量PCR 检测乳腺癌细胞转染siRNA-KDM3A 的效率；CCK-8法检测细胞增殖；Westem blot 检测细胞凋亡；Transwell 小室法检测细胞侵袭。
结果在 MDA-MB-231 细胞中，相对于 NC 组，KDM3A-sh1、KDM3A-sh2、KDM3A-sh3 组中 KDM3A 基因的 mRNA 表达均下调；KDM3A-sh2组基因敲低效率最高;mRNA 相对表达量降低了 80. 1%(P <0.01)；沉默KDM 3A 基因后，MDA-MB-231 细胞增殖能力减弱，凋亡率升高(P <0. 05)，侵袭能力下降(P <0. 01)。
结论siRNA 介导的KDM 3A 沉默能抑制乳腺 癌细胞的增殖、侵袭，并促进细胞凋亡。
关键词：KDM3A ；基因沉默;乳腺癌;增殖;凋亡中图分类号:R34文献标志码：AEffects of KDM 3A silencing on the apoptosisand invasion of human breast cancer cell line MDA-MB-231ZHANG Tian-rui 1 , GAO Wen-yi 1 , YAO Juan 2*(1. Xinjiang Medical University , Urumqi 830000； 2. Imaging Center , Department of Radiology, the First Affiliated Hospital ,Xinjiang Medical U Diversity , Urumqi 830000, China)Abstract : Objective To investigate the effect of siRNA mediated KDM 3A gene silencing on cell proliferation andapoptosis of breast cancer cell line MDA-MB-231. Methods Constructed a KDM 3A gene-specific siRNA lentiviral vector to infect breast cancer MDA-MB-231 cells ， and detected the efficiency of breast cancer cells transfected withsiRNA-KDM3A by the real-time fluorescent quantitative PCR. CCK-8 method was used to detect cell proliferation ， Western blot was used to test cell apoptosis and Transwell method was used to detect cell invasion. Results Compared with the control group ， the expression of KDM3A mRNA was down-regulated in KDM3A-sh1， KDM3A-sh2 andKDM3A-sh3 cells ， and the most efficient interference RNA was KDM3A-sh2， with the expression of mRNA de creased by 80. 1%( P <0. 01). After silencing KDM 3A , the proliferation of MDA-MB-231 cells decreased , the apop tosis rate increased ( P <0.05) , and the invasion ability decreased ( P <0.01). Conclusions siRNA -mediated KDM 3A gene silencing inhibits proliferation and invasion of breast cancer cells and promotes their apoptosis.Key words : KDM3A ； gene silencing ； breast cancer ； proliferation ； apoptosis34基础医学与临床Basic&Clinical Medicine2021.41(1)乳腺癌（breast cancer）是全世界女性最常见的恶性肿瘤［1］。
乳腺癌细胞MDA-MB-231诱导破骨细胞成熟方法研究
第24卷3期 2018年5月天津医科大学学报Journal of Tianjin Medical University Vol. 24, No. 3May 2018205文章编号1006-8147(2018)03-0205-04乳腺癌细胞MDA-MB-231诱导破骨细胞成熟方法研究论著王硕(天津医科大学肿瘤医院生物化学与分子生物学研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市“肿瘤防治”重 点实验室，天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，乳腺癌防治教育部重点实验室，天津300060)摘要目的:探索乳腺癌细胞诱导小鼠骨髓源性破骨细胞成熟最佳条件。
方法:采用贴壁分选法和贴壁前加入15ng/mL巨噬细 胞集落刺激因子（M-CSF)贴壁分选法分离得到小鼠骨髓单核细胞。
两种分选方法得到的小鼠骨髓单核细胞用30ng/mLM-CSF 处理3d后，分别均分为两组，一组用50ng/mL核因子！B受体活化因子配体(；A<KL)，30ng/mLM-CSF和20%MDA-MB-231 细胞上清处理 7d;另一组用 50ng/mL;A<KL 和 30ng/mLM-CSF 处理 2d 后再用 50ng/mL;A<KL，30ng/mLM-CSF 和 20> MDA-MB-231细胞上清处理7d，T;A P染色，统计分析TRAP阳性细胞数和直径大小。
结果：50ng/mL;A<KL，30ng/mLM- CSF和20%MDA-MB-231细胞条件培养基诱导，细胞发生炎症反应；50ng/mL;A<KL和30ng/mlM-CSF处理2d后，50ng/ mL;A<KL，30ng/mLM-CSF和20%MDA-MB-231细胞条件培养基能够诱导出成熟的破骨细胞；相比直接贴壁分选，贴壁前 加入15ng/mLM-CSF贴壁分选能够分选出更多具有活力的前体破骨细胞。
结论:诱导破骨细胞分化最佳条件为：贴壁前加入 15ng/mLM-CSF 处理 24h，30ng/mLM-CSF 处理 3d 后，用50ng/mL;A<KL 和 30ng/mLM-CSF 处理 2d，再用 50ng/mL ;A<KL，30ng/mLM-CSF 和 20%MDA-MB-231 细胞条件培养基诱导 7d。
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MDA-MB-231细胞系是从一名51岁的白种女性转移性乳腺癌的胸腔积液建立的人乳腺细胞系。
该上皮细胞系是医学研究实验室中使用最广泛的乳腺癌细胞系之一，特别是涉及CRISPR/Cas9基因敲除的那些。
由于缺乏ER和PR表达以及HER2扩增，该细胞系最初被归类为“基础”乳腺癌细胞系。
然而，由于它表现出claudin-3和claudinin-4的下调，Ki-67增殖标记物的低表达，与上皮-间质转化有关的标记物的富集，因此现在被认为属于claudin-低分子亚型。
以及与乳腺癌干细胞（CSC）相关的特征的表达，例如CD44 + CD24- /低表型。
这就是为什么许多研究一直专注于基因编辑
MDA-MB-231细胞系的原因。
应用：
1. CRISPR / Cas9诱变使靶向MDA-MB-231细胞的推定癌症依赖性无效。
癌细胞需要表达某些基因的表达，这些基因编码肿瘤生长所必需的蛋白质。
沉默这些基因的表达或阻断蛋白质的活性可以触发细胞死亡和持久的肿瘤消退。
因此，识别和表征癌症依赖性是临床前癌症研究的关键目标。
MELK被认为是多种癌症类型的癌症依赖性和推定药物靶标，其中之一是MDA-MB-231细胞系。
MELK在乳腺癌细胞中过表达，与患者预后不良有关。
此外，据报道，使用RNAi 敲低MDA-MB-231细胞中的MELK可阻止癌细胞增殖并触发细胞周期停滞或有丝分裂灾难。
研究人员设计了针对MELK的七个指导RNA（gRNA），并将每个指导RNA 克隆到一个表达GFP的载体中，并将该指南转导到了三个表达Cas9细胞系中：三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231据报道会上瘾。
MELK表达。
对过表达的MDA-MB-231细胞中MELK蛋白水平的蛋白质印迹分析证实，CRISPR系统可有效消除MELK表达。
2.β1整合素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖和细胞信号传导的不同影响
为了探索β1整合素的功能意义，研究人员通过基于CRISPR/Cas9的方法建立了β1-KOMDA-MB-231细胞。
进行蛋白质的印迹和FACS分析以确认
MDA-MB-231细胞系中β1的有效敲除。
令人惊讶地，β1的表达对细胞增殖表现出相反的作用。
这些效应取决于细胞密度，当在稀疏条件下培养细胞时，它们显示出细胞增殖的上调，而在稠密条件下，则表明细胞生长的下调。
与野生型细胞相比，KO MDA-MB-231细胞中ERK的磷酸化水平在稀疏培养条件下始终被抑制，而在致密培养条件下始终被上调。
KO MDA-MB-231细胞中EGFR的磷酸化水平增加。
相比之下，MDA-MB-231 KO细胞中AKT的磷酸化水平降低。
在MDA-MB-231敲除细胞中，集落和肿瘤形成的能力均被显着抑制，这表明β1在肿瘤发生的细胞存活信号转导中起重要作用。
在Res细胞中拯救了KO细胞
中的这些异常表型。
综上所述，这些结果清楚地表明了β1在癌细胞中的独特作用：抑制细胞生长和促进细胞存活，这可能有所启发。
3.敲低BCL2L12导致MDA-MB-231乳腺癌细胞中的顺铂耐药
发现基因BCL2L12在正常乳腺组织中高表达，并且与乳腺癌患者的良好预后相关。
研究人员报道，在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，顺铂处理后，BCL2L12的mRNA水平及其转录变异体BCL2L12A可能被上调。
BCL2L12和BCL2L12A 的组合大大抑制了顺铂诱导的细胞凋亡。
相反，每种蛋白质的异位表达促进顺铂
诱导的细胞凋亡。
这些结果表明，BCL2L12和BCL2L12A的表达降低或缺失可能有助于乳腺癌患者的顺铂耐药性。
此外，我们发现顺铂诱导的β-catenin的下调在BCL2L12-和BCL2L12A敲除的MDA-MB-231细胞中被部分抑制，这表明这两种蛋白的敲低可能稳定顺铂诱导的细胞凋亡中的β-catenin。
简而言之，我们提出BCL2L12和BCL2L12A可能在顺铂诱导的MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡中起重要作用。
基因敲除切割效率不仅可以让人具有生成人糖基化谱和建立调控记录的能力，而且具有多种优势，是一种特别有吸引力的重组蛋白表达系统。
首先，它在谷氨酸上羧基化，在酪氨酸上硫酸化。
第二，操作简单，通过瞬时基因表达可以快速产
生重组蛋白。
第三，可用于稳定的重组蛋白生产。
一些研究人员利用基因敲除切割效率系统产生基因编辑细胞系，对GLUL基因组位点进行靶向测序，产生产生产生EPO的稳转细胞系，并发现重组促红细胞生成素在人体内稳定表达的机制。
根据科研需求，结合靶基因的情况进行基因稳转敲除方案设计。
方案1：小片段基因敲除方案，gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。
方案2：移码基因敲除方案，gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。
方案3：大片段基因敲除方案，将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。
Reference:
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