化学发光免疫检测
化学发光免疫分析
糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一 个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化 学发光相比，有效期长可以降低使用成本， 利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫 化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入 发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测 时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子 诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
coip实验原理 igg
coip实验原理 igg
COIP（化学发光免疫分析）实验是一种常用的免疫分析技术，用于检测体液中的特定抗体或抗原。
在COIP实验中，常用的检测物是IgG（免疫球蛋白G），它是一种重要的抗体，参与机体的免疫应答。
COIP实验的原理是基于化学发光技术和免疫学原理。
首先，样品中的IgG被特定的抗体捕获在固相载体上，然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗（常为抗人IgG的抗体），与被捕获的IgG结合形成复合物。
接着，加入化学发光底物，辣根过氧化物酶催化底物发生化学发光反应，产生光信号。
光信号的强度与样品中的IgG浓度成正比，通过光信号的检测和分析，可以确定样品中IgG的含量。
COIP实验具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，因此在临床诊断和科研领域得到广泛应用。
通过COIP实验可以快速、准确地检测体液中的IgG水平，有助于诊断和监测某些疾病，如自身免疫性疾病、感染性疾病等。
同时，COIP实验也被用于药物研发、生物学研究等领域。
总的来说，COIP实验是一种基于化学发光技术和免疫学原理的
免疫分析方法，可用于检测体液中的特定抗体或抗原，其中IgG的检测在临床诊断和科研中具有重要意义。
化学发光免疫检测操作流程
化学发光免疫检测操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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化学发光免疫分析
化学发光免疫分析的类型介绍更新：2012-05-16 12:26:51 | 来源：标签：化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型：（一）化学发光酶免疫测定化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。
经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。
以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。
应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒医学教|育网搜集整理。
（二）化学发光免疫测定化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。
吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。
用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件：1.能参与化学发光反应。
2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。
3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。
4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。
鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。
（三）微粒子化学发光免疫分析该免疫分析技术有两种方法：一是小分子抗原物质的测定采用竞争法；二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。
该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅1.0μm，这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便。
其反应基本过程：（1）竞争反应：用过量包被磁颗粒的抗体，与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育，其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式。
（2）双抗体夹心法：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式，即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。
（四）电化学发光免疫测定电化学发光免疫测定（ECLI）是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两个部分。
分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。
免疫化学发光法基本原理
免疫化学发光法基本原理免疫化学发光法是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过化学发光信号对反应进行指示。
以下是该方法的基本原理：1.抗原-抗体反应抗原-抗体反应是免疫化学发光法的基础。
抗原是指能够与抗体结合并形成复合物的特定物质。
当抗原与其对应的抗体结合时，会形成抗原-抗体复合物。
这种复合物的形成是特异性的，因此可以用来检测特定抗原的存在。
在免疫化学发光法中，抗原-抗体复合物的形成是后续化学发光反应的前提。
2.化学发光化学发光是指某些化学物质在某些条件下吸收能量后，从基态跃迁到激发态，再从激发态回到基态时释放出光子的过程。
在免疫化学发光法中，化学发光信号被用来指示抗原-抗体反应的存在。
通常使用具有高化学发光效率的化合物作为标记物，例如吖啶酯类、荧光素类等。
这些标记物与抗体结合后，在特定条件下会被酶或化学物质催化发光。
3.信号放大为了提高化学发光信号的强度，通常会采用信号放大的方法。
信号放大可以通过增加反应体系的酶或化学物质的浓度来实现，也可以通过采用信号放大器等电子设备来实现。
例如，在免疫化学发光法中，可以将碱性磷酸酶标记在抗体上，然后将底物溶液中的荧光素磷酸酯转化为具有高化学发光效率的荧光素。
由于碱性磷酸酶可以催化荧光素的生成，从而放大了化学发光信号。
4.特异性检测免疫化学发光法的一个重要特点是能够特异性地检测目标抗原。
这得益于抗原-抗体反应的特异性。
当目标抗原存在时，只有与其对应的抗体才会与之结合并形成抗原-抗体复合物，从而引发后续的化学发光反应。
因此，通过检测化学发光信号，可以确定目标抗原的存在与否。
5.总结免疫化学发光法是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过使用具有高化学发光效率的化合物作为标记物，结合信号放大技术，从而实现抗原-抗体反应的特异性检测。
化学发光免疫分析
3
在血循环中，约99.5%的T3与TBG结合，但T3与TBG的亲和力明显低于T4；T3不与TBPA结合
参考范围：0.58—1.62 ug/dL 临床意义： T3升高：⑴见于甲状腺功能亢进的病人，轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化较T4明显，适合轻型甲亢、早期甲亢和亚临床甲亢以及甲亢治疗后复发的诊断；T3型甲亢仅有T3和FT3升高； ⑵与T4一样，T3亦受TBG变化影响，但受影响程度不及T4。 T3降低： ⑴仅于较重甲状腺功能减退的病人，T3和T4均下降，轻型甲减T3不一定下降； ⑵重症全身性疾病状态或慢性病变可导致T3下降，多见于慢性肾功能不全、慢性心功能不全、糖尿病、心梗等疾病的患者。
参考范围：5.0—14.5ug/dl（CENTAUR） 临床意义： T4升高：⑴见于甲状腺功能亢进的病人，但轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化未如T3明显； ⑵凡引起TBG升高的因素均可使T4升高，如妊娠、应用雌激素、葡萄胎、淋巴瘤、血卟啉病等；⑶药物如胺碘酮、含碘造影剂、β受体阻断剂、奋乃近、海洛因等 T4降低： ⑴见于甲状腺功能减退的病人，轻型甲减、亚临床甲减的变化较T3明显； ⑵缺碘性甲状腺肿可见T4降低或在正常低限，而T3正常； ⑶肾病综合征、肝功能衰竭、遗传性TBG缺陷症、肢端肥大症、重症全身性疾病状态等；⑷以及应用糖皮质激素、雄激素、生长激素、苯妥英钠等药物
血清FT3和FT4降低： ⑴甲减病人两者皆下降，但轻型甲减、甲减初期多以FT4下降为主；⑵低T3综合征仅有FT3下降； ⑶某些药物，如苯妥英钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。
临床意义：
T3、T4均升高：高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。 T4升高，T3正常或下降：家族性白蛋白异常性高T4血症；胰高血糖素瘤；药物普萘洛尔、胺碘酮、胆囊造影剂；全身性疾病、精神性疾病；苯丙胺成瘾；T4型甲亢、甲亢伴T4转换T3障碍。 T4正常，T3升高：T3型甲亢；甲减用T3或者其他甲状腺激素制剂替代治疗后 T4正常，T3下降：患有全身性疾病时；5’单脱碘酶活性下降；血皮质醇升高的各种情况；营养不良综合征。 T4下降、T3升高：医源性甲亢；甲状腺功能正常病人服用甲状腺激素制剂。 T4下降，T3正常：轻至中度甲减；碘缺乏；苯妥英钠、卡马西平。 T3和T4均下降：中至重度甲减；重症全身性疾病；低TBG血症；大剂量使用水杨酸制剂
化学发光免疫分析原理
化学发光免疫分析原理
化学发光免疫分析是一种常用的生物分析技术，其原理是利用化学发光反应检测目标分析物。
该技术主要应用于生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域。
化学发光免疫分析的步骤如下：
1. 样品处理：将待测样品进行处理，通常包括样品的稀释、蛋白质提取、核酸提取等步骤，以满足后续分析的要求。
2. 特异性结合：将待测样品与特异性抗体结合，这是化学发光免疫分析的关键步骤。
特异性抗体能够与目标分析物结合，形成抗原-抗体复合物。
3. 化学发光：在抗原-抗体复合物形成后，加入一种化学发光底物，底物与复合物发生化学反应，生成激发态分子或产生紫外、可见光等发光物质。
4. 光学检测：利用光学检测系统，测量发光信号的强度或荧光信号的荧光强度。
一般情况下，强度与待测样品中目标分析物的含量成正比。
化学发光免疫分析的优点是灵敏度高、特异性强，且能够同时分析多个目标分析物。
它在临床诊断中广泛应用，例如检测某些疾病标志物、药物浓度和病原微生物等。
此外，化学发光免疫分析还可用于药物研发中的蛋白质相互作用研究、基因表达分析等。
总之，化学发光免疫分析是一种重要的生物分析技术，通过特异性抗体与荧光底物的配对应用，实现对目标分析物的定量检测，具有灵敏度高、特异性强和多重分析的优势。
免疫法和化学发光法
免疫法和化学发光法免疫法是一种利用生物学技术测定生物样本中特定分子的方法。
这种方法主要利用生物分子（例如抗原、抗体、酶等）之间的特异性反应来检测生物样本中的目标分子。
免疫法被广泛用于检测临床样本中的疾病标志物、药物、毒素、微生物等物质，以及在环境、食品、水质等领域中的检测。
在免疫法中，典型的方法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光、免疫胶体金等。
这些方法中，ELISA被广泛使用，具有高灵敏度和特异性的优点。
它的基本原理是用酶标记的标记抗体与目标抗原结合，并通过酶的反应来测定目标抗原的存在。
此外，Western blot方法常用于检测抗体对蛋白质的结合，包括特异性抗体和糖蛋白成分的检测。
免疫荧光、免疫胶体金等方法也被广泛使用于病毒、微生物等的检测中。
化学发光法是一种利用光化学反应测定物质浓度的方法。
这种方法主要是利用特定化学反应发出光，且光的强度与检测物质的浓度成正比。
化学发光法的优点在于具有极高的灵敏度和特异性，适合于测定低浓度的分子、微生物等物质。
在化学发光法中，常用的方法包括荧光素氧化物酶发光法（luminol法）、鲁米诺发光法（luciferin-luciferase法）、电化学发光法等。
这些方法中，luminol法被广泛使用，用于检测过氧化物酶、铁、镁等物质的存在。
在luminol法中，用过氧化氢作为试剂将luminol氧化，发生光反应产生荧光。
此外，luciferin-luciferase法也被广泛使用于检测生物样本中ATP、细胞浓度等物质的存在，它利用了luciferin和luciferase之间的化学反应产生光的原理。
总的来说，免疫法和化学发光法是一种高度敏感、特异性强且可靠的分析方法，在临床医学、环境监测、食品安全等多个领域有广泛的应用前景。
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三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
Ru
N
N
N
O O
N
O
O
电化学发光反应原理
这一过程可在电极表面周而复始地进行， 产生许多光子，使光信号增强
底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3]、三丙胺(TPA)
电化学发光
代表仪器：罗氏e601、e411
进口全自动化学发光仪
仪器型号
生产厂家 反应原理 标记物
包被方式 测试速度
记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。
吖啶酯
CH3
N+
- HO2
CO
O
CH3 N
O CO O
R R
CH3 N
O CO O
+ CO2+ 光
吖啶酯发光
代表仪器：拜耳公司的ACS180 西门子的ADVIA Centaur 雅培的ARCHITECT
异鲁米诺发光
原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更 快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯 在缓冲液不稳定、易水解的缺点
发光机制
测试速度
CL-2000i
ALP+AMPPD
240T/H
Autolumo A2000
HRP
200T/H
MAGLUMI 4000 ABEI+NaOH、H2O2
IS 1200
HRP
240T/H 120T/H
AutolumiS 2000 ABEI+NaOH、H2O2 220T/H
长光华医 博奥塞斯
EVERESYS A1800 Axceed 260
cobas® e601 ARCHITECT® Unicel® i 2000 SR DxI800
罗氏 电化学发光
雅培
化学发光微 粒子
贝克曼
微粒子酶促 化学发光
LIAISON
索灵 磁性微粒子 化学发光
三联吡啶钌 直接发光
吖啶酯衍生 物
直接发光
金刚烷
AMPPD AKP，酶促发 光
异鲁米诺衍 生物ABEI 直接发光
HRP
辣根过氧化物酶 常用的底物为鲁米诺或其衍生物
碱性磷酸酶 常用的底物为AMPPD和4-MUP
ALP
1. 酶促化学发光
鲁米诺在碱性缓冲液中被HRP催化发生氧化反应
鲁米诺
H2O2 /OH — HRP
+N2 + H2O + 光
1. 酶促化学发光
AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子， 其有2～30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在 15min时其强度达到高峰，15～60min内光强度保持相对稳定
delay 2.5s
delay 0.1s
+ NaOH
+ H2O2
激发底物1
激发底物2
发光
异鲁米诺发光
代表仪器：瑞典索灵公司的LIAISON、新产业MAGLUMI 2000/4000
电化学发光
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质 • 特点：①反应在电极进行；
②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
ADVIA Centaur
西门子 固相磁粉化 学发光
吖啶酯,直接 发光
链霉亲和素 －生物素间 接包被
170T/H
磁珠包被 200T/H
常规单克隆 磁性微粒子 磁性微粒子
Ag/Ab包被 包被技术
包被技术
400T/H
180T/H
240T/H
国产全自动化学发光仪
企业 迈瑞 安图 新产业 迈克 威高
仪器型号
吖啶酯 鲁米诺衍生物
180T/H 180T/H
测试项目数 20 65 95 17 42
34 35
测试题与讨论
1. 酶促化学发光是发光底物经
的降解作用而
发出光,常用的酶有：
和
。
2. 雅培ARCHITET i2000采用
标记的标记
分子，专利的
衍生物，具有更高的发光效
率以及稳定性。
1. 酶促化学发光
代表仪器：迈瑞CL-2000i、安图Autolumo A2000
2. 直接化学发光
不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质
1 反应迅速
2 背景低
3 信比高
吖啶酯化学发光
• 吖啶酯在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见， 特点 • 发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标
AMPPD
ALP /OH —
O O OCH3
光
OHPO4 2—
反应原理图
1. 酶促化学发光
利用酶对发光底物催化作用而直接发光， 通过光强度的测定而直接进行定量。
1. 酶促化学发光
• 特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的 稳定性不如直接化学发光好。
• 代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS 2、 DXI800
化学发光免疫检测
1
学习目标
1. 化学发光检测的分类及原理 2. 了解常见进口、国产全自动化学发光仪检测原理
化学发光免疫检测分类
辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（ALP）
01
酶促化学发光
02
吖啶酯发光 异鲁米诺发光
直接化学发光
电化学发光
1. 酶促化学发光
酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光,常用的酶HRP和ALP