_大豆根瘤菌剂载体的选择及最佳施用浓度筛选
大豆根瘤菌HH103菌株培养基的筛选与优化
大豆根瘤菌HH103菌株培养基的筛选与优化肖亦农;徐琼【摘要】Quick-growing soy bean rhizobium (Rhizobium fredii) HH103 was used as a tested strain, and adopted single factor nitrogen source utilization experiment and orthogonal design experiment to confirm the optimum medium and its formula. The results showed that the strain grew well on YMA, the optimum carbon source was sucrose, and the optimum nitrogen was yeast extract with the optimum medium formula as follows (in g/L) : sucrose 11, yeast extract 0.9, K2HPO40.5, MnSO4 0.005, CaCl2 0.1, KH2PO40.5, MgSO40.2, KNO30.77, (NH4)2HPO4 0. 33, FeCl3 0.005, andpH7.2.%以快生型大豆根瘤菌HH103菌株为供试菌株,采用单因素碳氮源利用试验和正交设计试验,确定最佳培养基及其配方.结果表明:该菌株在YMA中生长良好,最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为酵母膏,最佳培养基成分配方(g/L):蔗糖11,酵母膏0.9,K2HPO4 0.5,MnSO40.005,CaCl2 0.1,KH2PO4 0.5,MgSO40.2,KNO30.77,(NH4)2HPO4 0.33,FeCl3 0.005,pH 7.2.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2011(031)006【总页数】4页(P92-95)【关键词】大豆根瘤菌;培养基筛选;培养基优化;正交试验【作者】肖亦农;徐琼【作者单位】沈阳农业大学土地与环境学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学土地与环境学院,辽宁沈阳110866【正文语种】中文【中图分类】S182空气中约78%的氮气不能被植物直接利用，只有固氮微生物具有将氮气转化成氨的能力，人们称为生物固氮。
大豆根瘤菌剂应用技术培训
大豆根瘤菌剂土壤喷雾接种装置
根瘤菌剂容器
喷雾装置
根瘤菌产品使用方法之三 —— 种子包衣
种子包衣是将根瘤菌菌剂和粘着剂拌合后包在种子外面，然 后外面再拌上种子包衣材料，制成包衣种子。
常用的粘着剂有10%糖溶液、阿拉伯胶或40%羧甲基纤维素 溶液等。
使用液体根瘤菌剂拌种过程
1. 按照说明用量量取根瘤菌剂
2. 将根瘤菌剂倒入种子中
3. 将菌剂与种子拌匀
4. 混好后阴干
根瘤菌产品使用方法之一 —— 拌种
与种衣剂一起使用时则先拌种衣剂，待完全阴干后再 拌根瘤菌剂。
先包衣
再拌种根瘤菌
根瘤菌产品使用方法之二 —— 土壤接种
土壤接种是将根瘤菌剂喷/撒在垄沟内或种子下方3～5 cm处，这样种子萌发出幼根即可接触到菌剂，有利于 提高接种根瘤菌的占瘤率，增加固氮量。
4
4.7
19.2 15.7 44.3 0.38 0.60 2.59 3.19
5
5.0
23.7 19.8 52.6 0.44 0.85 3.86 3.95
6
5.3
25.4 22.3 55.9 0.47 0.99 5.02 5.03
7
4.7
16.9 15.3 45.1 0.42 0.51 1.84 2.37
世界主要大豆生产国：非常重视根瘤菌的应用
根瘤菌剂在国外主要大豆生产国应用十分普遍：美国、巴西、阿根 廷、加拿大、印度、新西兰、澳大利亚等主要大豆种植国，根瘤菌 接种面积占大豆种植面积的 50%～90%。巴西、阿根廷在大豆种 植过程中不施化学氮肥。美国仅在根瘤形成前施很少量的氮肥，以 供大豆前期使用。
大豆根瘤菌剂使用技术
大豆根瘤菌剂使用技术
根瘤菌剂是指以根瘤菌为生产菌种制成的微生物制剂产品，它能够固定空气中的氮元素，为宿主植物提供大量氮肥，从而达到减肥增产的目的。
一般在大豆播种时以拌种方式使用，也可以播种前沟施，具体操作方法和用量因品牌和菌剂类型不同而有所不同，需要按产品说明书进行操作。
1.拌种方法
（1）液体菌剂拌种
液体根瘤菌剂使用之前应先加入适量粘附剂，反复搅拌，使其完全溶解后将菌剂与大豆混合并搅拌均匀，一般每25ml液体根瘤菌剂与5kg大豆混合，于阴凉通风处将拌好的种子适当阴干后即可播种。
（2）固体菌剂拌种
常规用量(豆种:菌剂为10:1)。
拌种前，将配套的粘附剂倒入适量清水中，反复搅拌，使其完全溶解，然后倒入固体菌剂中搅拌混匀，调成糊状与大豆充分混合，使糊状菌剂均匀粘附在种子表面。
在阴凉通风处，将拌好的种子适当晾干后即可播种。
2.沟施方法
固体(及颗粒)菌剂与豆种混合后，由人工或播种机沟施；液体菌剂一般稀释200倍后（具体按说明书操作），喷洒于播种的沟穴内，液体菌剂还可以配合滴灌系统使用。
3.注意事项
（1）根瘤菌剂的有效成分是根瘤菌活细胞，可与其他生物肥料混合使用，但是不能与防治病害的农药一起使用。
（2）尽可能避免高温和阳光直射。
（3）如用于拌种，晾干后建议当天使用。
如用于沟施，要把菌剂撒在播种的沟中或穴内，不要等播完豆种，盖土后再撒在土壤表面。
不同氮肥施用量大豆根瘤菌拌种试验总结
Z i x u n t a i 豆科植物共生固氮是自然界中最强的生物固氮体系。
大豆从根瘤菌中得到的氮素营养可占其一生氮素营养的30%～70%。
大豆根瘤菌肥增产机理明确，在大豆播种前接种根瘤菌是国际公认的生物固氮技术。
推广大豆根瘤菌是促进大豆增产、提质、环保和可持续发展的实用技术，是一件利国利民的好事。
由于重迎茬面积大，大豆表现为根瘤少、病害多，产量一直徘徊不前。
因此在我县推广使用该技术意义重大。
大豆根瘤菌接种是一项增产节肥、投资少、收益大、简而易行的措施。
是降低大豆生产成本。
提高大豆产量的有效措施。
它对于大豆有两个方面的作用。
一是通过将空气中丰富的氮素资源转化为大豆可以直接利用的铵态氮，解决大豆的氮肥供应；二是根瘤菌分泌的酶，促进大豆的生长发育。
一、试验目的通过试验，检验大豆根瘤菌在不同地区的固氮效果，及其对大豆的增产效果的作用。
二、试验方法。
采用小区试验和生产田对比试验同步进行。
1、基本情况试验在呼玛县农业技术推广中心院内和福利院南地，生育期期间降雨量为461毫米。
生育期100天，有效积温2000℃。
土壤均为暗棕壤土。
地势平坦，土壤肥力中上等，土壤养分含量为有机质，速效氮162mg/kg，速效磷30mg/kg，速效钾129mg/kg。
前茬为大豆，60cm垄上双行精量点播。
采用品种昊江166、北豆23。
2、试验材料根瘤菌包衣剂：由哈尔滨华龙科技有限公司提供；用菌量225ml/垧供试材料：大豆：昊江166、北豆23号，公顷保苗40万株；播种量为100kg/垧。
化肥：尿素（含量46%），重过磷酸钙(含量46%),硫酸钾（含量50%）3、试验设计试验设3个处理，常规施肥无根瘤菌剂作对照，试验无重复。
小区顺序排列，每个处理6行，行长30米，行距65cm，垄上播双行，5月10日播种施肥，播前精细整地，机械精量播种。
其它田间管理按垄三栽培技术规程操作。
处理1、施肥量为：尿素30kg/公顷、磷酸二铵100kg/公顷,硫酸钾50kg/公顷。
大豆根瘤菌应用技术
大豆根瘤菌应用技术作者：张再峰金重明来源：《农民致富之友》2010年第22期豆科植物共生固氮是自然界中最强的生物固氮体系。
大豆从根瘤菌中得到的氮素营养可占其一生氮素营养的30～70%。
大豆根瘤菌肥增产机理明确，在大豆播种前接种根瘤菌是国际公认的生物固氮技术。
推广大豆根瘤菌是促进大豆增产、提质、环保和可持续发展的实用技术，是一件利国利民的好事。
一、根瘤菌的作用1、固氮作用大豆根瘤菌以大豆光合作用产物为能源，将空气中的氮素转变成大豆生长发育所需要的营养元素，根瘤菌与大豆是共生固氮的关系，开始大豆根瘤菌固氮很少，到开花至鼓粒初期是大豆根瘤菌固氮的高峰，以后由于豆粒发育消耗了大量植株光合产物，限制了对根瘤菌养分的供应，根瘤菌逐渐衰老，固氮能力下降。
大豆根瘤菌在大豆生长中起着非常重要的作用。
大豆一生需要氮肥60%左右是大豆根瘤菌提供的，其余的由土壤和肥料提供。
而大豆籽粒中的氮素，根瘤菌提供80%左右，土壤和肥料中的氮素大部分供给大豆根、茎、叶的生长。
2、增产作用大豆应用根瘤菌，可以使大豆产量提高10%以上，同时大豆的蛋白质提高2%、粗脂肪含量提高1—2%，每亩净收入增加40—50元。
经过施用根瘤菌增加了根瘤菌的数量和重量，提高了大豆固氮能力。
表现出大豆生长旺盛，产量增加。
2008年9月由东北农业大学等5个单位的专家对大豆应用根瘤菌剂示范项目进行田间鉴评。
结果表明：大豆应用根瘤菌剂拌种，株高、植株干重分别增加了4～12cm、7～27克，单株根瘤数明显增加。
3、减少氮肥施用量大豆根瘤菌在固氮之前，植株生长需要一定的氮素，但施氮过多会抑制根瘤菌生长，从而影响根瘤菌固氮能力，影响产量，所以在施根瘤菌条件下应施多少氮肥，使作物既不缺氮，又不出现氮素过剩。
科研站以前做了这方面的研究，认为接种根瘤菌后，施纯氮1kg左右大豆增产最多，根据我们现在施肥水平施入根瘤菌可节省2kg左右的尿素。
二、技术要点1、选择合适的大豆根瘤菌品种采集大豆生产区的主要土壤类型，进行土壤、根瘤菌匹配试验，筛选活性强、效果好、适应当地土壤和气候的大豆根瘤菌品种。
大豆根瘤菌应用技术
大豆根瘤菌应用技术
大豆生产中使用根瘤菌是一项成熟的、广泛使用的技术，能够大幅度地提高大豆生长期中的自身固氮能力，供给充足的氮素，供大豆生产所需。
大豆根瘤菌有液体、固体两种剂型。
固体型根瘤菌采用拌种或土施方式应用。
液体型根瘤菌采用浸种方式使用。
也可以在种子包衣时加入大豆根瘤菌剂，但是要注意包衣剂和根瘤菌剂之间应相互匹配，不能因种衣剂药效抑制根瘤菌的活性。
一、增产增效情况
根据大田示范结果，大豆应用根瘤菌，可以使大豆产量提高10%以上，同时大豆的蛋白质含量提高2%、粗脂肪含量提高1～2%，每亩净收入增加40～50元。
二、技术要点
1、选择合适的大豆根瘤菌品种采集大豆生产区的主要土壤类型，进行土壤、根瘤菌匹配试验，筛选活性强、效果好、适应当地土壤和气候的大豆根瘤菌品种。
2、采用适宜的施用方法根据大豆根瘤菌的剂型，固体菌剂采用拌种或造粒后随大豆种子、肥料穴施；液体菌剂采用
浸种方式使用。
也可以在种子包衣时加入大豆根瘤菌菌剂，但是要注意包衣剂和根瘤菌剂之间应相互匹配，不能因种衣剂药效抑制根瘤菌的活性。
3、合理用量菌剂拌种时每亩用量0.5千克，菌剂造粒
后随大豆种子、肥料穴施时每亩用量1～2千克；液体菌剂浸种时用量0.5千克；种子包衣时用量根据包衣剂要求的用量。
大豆根瘤菌是一种活的微生物制剂，在储藏、运输、使用过程中，要避免温度过高或者过低；同时不能与杀菌剂类农药混用。
三、适宜区域和范围
在我国的黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古以及黄淮海的大豆主产区，均可广泛使用大豆根瘤菌。
2002～2004年，在辽宁、吉林、黑龙江和内蒙古的大豆生产区示范推广800万亩，取得很好效果，应用前景广阔。
工艺方法——大豆根瘤菌接种及配套施肥技术
工艺方法——大豆根瘤菌接种及配套施肥技术工艺简介大豆根瘤菌是能与豆科植物共生形成根瘤，并进行生物固氮的一类革兰氏阴性杆菌。
通过接种大豆根瘤菌及科学合理施肥，能够增强根瘤菌共生固氮能力，提高产量、改善品质、培肥地力。
一、大豆根瘤菌剂要求选用取得农业农村部肥料登记的大豆根瘤菌剂产品，产品质量符合《农用微生物菌剂（GB20287-2006）》要求，已按《根瘤菌生产菌株质量评价技术规范（NY/T1735-2009）》完成质量评价，在保质期内、包装完好。
二、接种方式（一）拌种适用于现拌现用的小规模种植农户。
1、拌种剂量及时间根据播种量，按大豆根瘤菌剂产品说明书确定用量。
应在大豆播种前12小时内进行根瘤菌拌种作业。
2、拌种器械根据用种量和当地生产条件，使用干净的盆、桶、袋子等容器或拌种机械进行拌种。
拌种容器或机械进行过农药种衣剂作业的，应用水清洗3次以上。
3、拌种作业拌种地点应在阴凉处，避免阳光直射。
将适量根瘤菌剂与大豆种子混合，轻轻搅拌至所有种子表面都附着根瘤菌剂，种子阴干后播种。
拌种时应避免碰破种皮。
（二）喷施适用于使用带喷施设备播种机具的种植农户。
1、菌液配制根据喷施面积和大豆根瘤菌剂产品说明书确定根瘤菌剂和水的用量。
使用自来水配制菌液时，提前将自来水接入容器静置1-2天。
将根瘤菌剂加入水中，搅拌均匀后即可使用。
喷施菌液应现用现配。
2、喷施设备用喷施设备在大豆播种时将根瘤菌液喷洒在大豆种子表面及周围土壤。
使用过抑菌或灭活作用药剂的喷施设备，应用清水将容器、管路和喷头清洗3次以上。
3、喷施作业喷施作业前应检查喷施设备的压力部件、控制部件、喷头和接口，保证喷施设备正常运行。
喷施时，作业人员应注意观察喷头是否堵塞、各接口是否有滴漏现象，发现问题及时排除。
（三）种子包衣适用于种子企业对大豆种子包衣操作。
1、包衣剂要求包衣剂所用材料应对根瘤菌、大豆植株、人畜和环境无毒无害，并能保证包衣1个月后每粒大豆种子根瘤菌存活数量在1×104以上。
大豆根瘤菌接种技术
大豆根瘤菌接种技术大豆是一种重要的农作物，在全球范围内广泛种植。
为了提高大豆的产量和品质，大豆根瘤菌接种技术逐渐受到重视。
根瘤菌能够与大豆植株形成共生关系，将空气中的氮气转化为植物可利用的氮素，从而减少化肥的使用，降低生产成本，同时还有利于环境保护。
下面就来详细介绍一下大豆根瘤菌接种技术。
一、根瘤菌的作用及特点根瘤菌是一类能够与豆科植物共生形成根瘤并固定空气中氮气的细菌。
当大豆种子萌发后，根瘤菌会侵入大豆的根部，刺激根部形成根瘤。
在根瘤内，根瘤菌将氮气转化为氨，然后提供给大豆植株使用。
根瘤菌具有特异性，不同的大豆品种可能需要不同种类的根瘤菌与之匹配，才能达到最佳的共生效果。
此外，根瘤菌的存活和繁殖需要适宜的环境条件，如温度、湿度、酸碱度等。
二、大豆根瘤菌接种的时机1、种子接种在播种前，将根瘤菌剂与大豆种子充分混合，使每粒种子表面都能沾上根瘤菌。
这种方法操作简单，易于推广。
2、土壤接种在播种前，将根瘤菌剂均匀撒施在土壤表面，然后通过耕翻等措施将其混入土壤中。
这种方法适用于土壤中根瘤菌数量较少的情况。
一般来说，春季播种的大豆在播种前 1-2 天进行接种；夏季播种的大豆在当天接种效果较好。
三、大豆根瘤菌接种的方法1、液体接种法将根瘤菌剂稀释成一定浓度的菌液，然后将种子浸泡在菌液中一段时间，使种子充分吸收根瘤菌。
这种方法接种效果较好，但操作相对复杂。
2、固体接种法将根瘤菌剂与一定量的细土、泥炭或蛭石等载体混合均匀，制成固体菌剂。
然后将固体菌剂与种子直接混合，使种子表面沾上菌剂。
这种方法操作简单，成本较低。
四、大豆根瘤菌接种的注意事项1、选择合适的根瘤菌剂要根据当地的土壤条件、大豆品种以及种植季节等因素，选择合适的根瘤菌剂。
同时，要选择质量可靠、活菌数量高的菌剂产品。
2、严格按照说明书操作不同的根瘤菌剂使用方法和剂量可能有所不同，一定要严格按照说明书的要求进行操作，避免因操作不当影响接种效果。
3、避免与杀菌剂、杀虫剂同时使用杀菌剂和杀虫剂可能会杀死根瘤菌，影响接种效果。
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Abstract： In order to screen the carrier that was more appropriate for the absorption of rhizobia，improving yield and quality of inoculated soybean，and screen the best soybean rhizobia bacterial concentration at levels of quality carrier，three carriers absorbed different soybean rhizobia bacterial concentration with seed dressing were performed according to the biomass，nodular rate and yields of soybean plant by soil pot experiments． The results showed that different carriers and inoculating soybean rhizobia could improve the biomass and nodular rate of soybean plant． Peat and vermiculite were used as carriers of rhizobia could remarkably promote the growth of soybean plant and enhance dry matter accumulation； thus the lasting effect of nodular was the longest，followed by vermiculite and liquid． Low level bacterial concentration could remarkably increased soybean yield and quality with peat and vermiculite as carriers，however the opposite when used liquid as carriers． In conclusion，in view of the cost，peat was more appropriate for soybean rhizobia，and the best bacterial concentration was 1． 4 × 108 cells·mL －1 ． Key words： Soybean rhizobia； Nodulation； Carrier
摘 要： 为筛选出适宜根瘤菌吸附且能促进大豆生长、提高产量的优质载体，并且在优质载体的条件下，筛选出大豆
根瘤菌液的最佳使用浓度，通过 3 种载体吸附不同浓度根瘤菌液拌种大豆盆栽播种后，对大豆的生物量、结瘤及产量
的对比发现： 不同载体介入、大豆接入根瘤菌后均对大豆的生物量及结瘤产生一定的促进作用。根瘤菌以草炭和蛭
图 1 以不同载体接入根瘤菌大豆的生物量变化趋势 Fig． 1 The tendency of biomass of soybean inoculated rhizobia with different carriers
2． 2 不同载体及根瘤菌处理大豆根瘤数变化 由图 2 可看出，不同载体和根瘤菌均可促进大
本文的研究目的是筛选出适宜根瘤菌吸附且 接种大豆 能 促 进 大 豆 生 长、提 高 产 量 的 优 质 载 体，
收稿日期： 2013-10-11 基金项目： 国家“十二五”科技支撑计划（ 2012BAD14B06） ； 现代农业产业技术体系（ CAＲS-004） ； 黑龙江省自然科学基金（ C201104） ； 哈尔
技术不成熟、质量不过关等问题限制了根瘤菌剂的 产业化和大面积推广应用。其中，菌种质量的高低 一直是影响其应用效果的一个突出问题； 载体也是 大豆根瘤 菌 肥 料 质 量 控 制 的 一 个 关 键 因 素［6］。 作 为根瘤菌的载体很多，如草炭、蛭石、珍珠岩、煤炭、 草炭、膨润 土 和 高 岭 土 等。 草 炭、蛭 石 由 于 其 营 养 与 pH 适中，表面积比较大和吸附性好，有利于根瘤 菌的存活及菌剂保存，是理想的载体［7-9］。另外，草 炭和蛭石等 资 源 丰 富，价 格 低 廉，适 合 于 在 根 瘤 菌 剂生产中应用推广，已成为当代根瘤菌类肥料的主 要类型。
出，不同载体根瘤菌处理结瘤能力表现为草炭强于 蛭石，液体的最低； 同一载体不同根瘤菌液浓度对 大豆结瘤 能 力 的 影 响 各 异，以 草 炭 和 蛭 石 为 载 体， 较小的根瘤菌液浓度（ 2 OD、1． 4 OD） 产瘤高于较高 的根瘤菌液浓度（ 5 OD、10 OD） ，而液体载体较高的 根瘤菌液浓度产瘤高于较低根瘤菌液浓度。
（ 1． Soybean Ｒesearch Institute，Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences，Harbin 150086，China； 2． Information Center of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences，Harbin 150086，China； 3． Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences，Harbin 150086，China）
第 33 卷 第 2 期 2014 年 4 月
大豆科学 SOYBEAN SCIENCE
Vol． 33 No． 2 Apr． 2014
大豆根瘤菌剂载体的选择及最佳施用浓度筛选
刘庆莉1 ，王金生1 ，刘丽君1 ，林蔚刚1 ，王红蕾2 ，张俐俐3 ，吴俊江1
（ 1． 黑龙江省农业科学院 大豆研究所，黑龙江 哈尔滨 150086； 2． 黑龙江省农业科学院 信息中心，黑龙江 哈尔滨 150086； 3． 黑龙江省农业科学 院，黑龙江 哈尔滨 150086）
豆结瘤，各生育时期均高于对照处理。以草炭为载
体的各处理根瘤数增长最快的生长阶段出现在大 豆花期至结荚期； 以液体为载体的各处理根瘤数增 长最快的生长阶段出现在苗期至花期； 而以蛭石为
2期
刘庆莉等： 大豆根瘤菌剂载体的选择及最佳施用浓度筛选
209
载体的各处理根瘤数各生育时期变化较为平稳，载 体的不 同 保 菌 能 力 可 能 是 产 生 这 种 现 象 的 原 因。 草炭的保菌能力最强，在大豆生长发育的后期仍保 有大量富有活力的根瘤菌以结瘤，液体的保菌能力 最差只能在大豆生长前期产生强烈的影响，而蛭石 的保菌能力则相对比较稳定居中。从图 2 还可以看
关键词： 大豆根瘤菌； 结瘤； 载体
中图分类号： S565． 1
文献标识码： A
文章编号： 1000-9841（ 2014） 02-0207-04
Chosen of Soybean Ｒhizobia Carrier and Screening of the Best Concentration
LIU Qing-li1 ，WANG Jin-sheng1 ，LIU Li-jun1 ，LIN Wei-gang1 ，WANG Hong-lei2 ，ZHANG Li-li3 ，WU Jun-jiang1
1． 3 测定项目与方法 分别于大 豆 期、花 期、结 荚 期、鼓 粒 期 取 样。
每次取样时，将 整 株 大 豆 用 清 水 冲 洗 干 净，将 植 株 分为地上、根和根瘤 3 部分，分别测定鲜重、干重和 根瘤数。并于成熟期对其产量构成因子进行测定 分析。 1． 4 数据分析
采用 Excel 2003 作图并应用 DPS 7． 5 进行方差 分析和显著性检验。
滨市科技创新人才研究专项资金（ 2013ＲFXYJ043） 。 第一作者简介： 刘庆莉（ 1971-） ，女，技师，主要从事大豆耕作与栽培研究。E-mail： liuqingli1971@ 126． com。 通讯作者： 吴俊江（ 1970-） ，男，博士，研究员，主要从事大豆耕作与栽培研究。E-mail： nkywujj@ 163． com。
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大豆科学
2期
并且在使用优质载体的条件下，筛选出大豆根瘤菌 液的最佳使用浓度，为根瘤菌肥的研发和使用提供 参考和帮助。
1 材料与方法
1． 1 材料 蛭石除去杂质、过筛、灭菌； 草炭除去杂质，用
NaOH 调 pH 为中性，灭菌； 供试菌株 001-1 为加拿 大优势菌株。对照药剂为由黑龙江华龙生物科技 有限公司生产的“富思德”根瘤菌液剂。 1． 2 试验设计
将根瘤 菌 接 入 YMA 固 体 平 板 培 养 基 活 化 培 养，再 转 入 YMA 液 体 培 养 基，置 于 转 速 120 r·min － 1 、温度 28℃ 的摇床中培养，测定根瘤菌悬浮 液的 光 密 度 值 （ OD600 ，1 OD 大 约 含 有 108 菌 细 胞·mL － 1 ） 。试验共设置 5 个根瘤菌液浓度处理，根 瘤菌悬浮液的光密度值分别为 0（ 培养基对照，YMA 液体培养基） ，1． 4，2，5 和 10 OD600 ，将 5 个不同浓度 的根瘤菌 液 分 别 与 干 燥、粉 碎 过 筛 且 灭 菌 的 草 炭、 蛭石及 清 水 （ 液 体 ） 进 行 混 拌，即 菌 液 ∶ 载 体 = 1 /3∶ 4，拌入 0． 05% 钼酸铵。混拌后精选无病、饱满 的大豆种子用 95% 的乙醇表面灭菌后再与之混拌， 阴干后盆栽播种。以不含根瘤菌液的清水混拌的 大豆作为 对 照，即 清 水 对 照。 采 用 随 机 区 组 排 列， 每盆留苗 3 株，3 次重复。
施用根瘤菌菌剂能促进大豆结瘤，有效提高豆 科植物的产 量，减 少 生 产 中 的 化 肥 使 用 量，降 低 生 产成本，而且可以提高土壤肥力，同时，由于根瘤菌 剂耐污染能力强［1］，还可以减少因长期使用化肥对 环境的破 坏［2-3］，对 无 公 害 大 豆 生 产 以 及 降 低 农 民 投人，保护环境等具有十分重要的作用［4-5］。因 此 引起了人们的极大兴趣和广泛关注，已成为豆科植 物增产的主要研究方向。