体外抗菌实验-18

是以石炭酸为标准，在规定的试验条件下， 是以石炭酸为标准，在规定的试验条件下，作用 一定时间， 一定时间，将待测的化学消毒剂与石炭酸对伤寒沙门 菌或金黄色葡萄球菌的杀菌效力相比较， 菌或金黄色葡萄球菌的杀菌效力相比较， 所得杀菌 效力的比值。 效力的比值。
棋盘格法
是由于在试验时， 是由于在试验时，含两种不同浓度 药物的试管排列呈棋盘状而得名， 药物的试管排列呈棋盘状而得名， 用以 评价两种药物同时用不同浓度进行联合 试验时的抗菌活性。 试验时的抗菌活性。
琼脂扩散法agar diffusion test 琼脂扩散法
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散， 是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离， 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。 用强弱。 inhibition zones 1、滤纸片法 、 适用于新药的初筛试验。 适用于新药的初筛试验。 2．打孔法 ． 适于药物血浓度的监测。 适于药物血浓度的监测。 3．挖沟法 ． 适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验 菌的抗菌作用。 菌的抗菌作用。
• 方法： 方法：
取一定量的供试品药物以无菌生理盐水按比 例进行系列稀释， 例进行系列稀释，加入定量的稀释液于无菌平皿 再加入一定量的已熔化的、温度在55 中，再加入一定量的已熔化的、温度在 ℃左 右的琼脂培养基混匀，凝固后于37 培养24— 右的琼脂培养基混匀，凝固后于 ℃培养 48h,计数平板内菌落数。一般取菌落数在 计数平板内菌落数。 计数平板内菌落数 一般取菌落数在30— 300之间的平板进行计数，然后乘以稀释倍数即 之间的平板进行计数 之间的平板进行计数， 可得每毫克或每毫升供试药物中的活菌数。 可得每毫克或每毫升供试药物中的活菌数。
(三）应用范围 1 各种注射制剂 2 眼用及外伤用制剂 3植入剂 4 可吸收的止血剂 5 外科用敷料及器材
第二节 无菌制剂的无菌检查
（一）一般药品的无菌检查
一般药品的无菌检查法属于直接接种法， 一般药品的无菌检查法属于直接接种法，即 直接接种法 将检品按规定量直接分别接种于适宜需氧菌、 将检品按规定量直接分别接种于适宜需氧菌、厌 氧菌和真菌生长繁殖的一定量的培养基中， 氧菌和真菌生长繁殖的一定量的培养基中，同时 以同样的培养基作阳性对照试验 阳性对照试验。 以同样的培养基作阳性对照试验。 我国药典规定以金黄色葡萄球菌 我国药典规定以金黄色葡萄球菌CMCC(B) 金黄色葡萄球菌 26003、生袍梭状芽胞杆菌 、生袍梭状芽胞杆菌CMCC(B)64941、白 、 假丝酵母菌CMCC(F)98001作为需氧菌、厌氧 作为需氧菌、 假丝酵母菌 作为需氧菌 菌和真菌的阳性对照菌株。 菌和真菌的阳性对照菌株。
第四节 体外抗菌试验的影响因素
1．试验菌 ． 在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标 准菌株。 准菌株。 2．培养基 ． 培养基的质量须加控制。 培养基的质量须加控制。 3．抗菌药物 ． 药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的 结果，需要精确配制。 结果，需要精确配制。
第二十章 药物制剂的微生物学检查
药物制剂的微生物学检查
够使青霉素灭活的无菌青霉素酶溶液,然后再按一般方 够使青霉素灭活的无菌青霉素酶溶液 然后再按一般方 法进行无菌检查. 法进行无菌检查
(2)微孔滤膜法 微孔滤膜法 (3)稀释法 稀释法 (4)离心沉淀法 离心沉淀法
第三节 ------------口服药及外用药物的微生物学检查 口服药及外用药物的微生物学检查 1 2 3 概念 p334 应用范围 供试品 (1)供试品的一般要求 供试品的一般要求 (2)供试液 供试液
药物制剂的微生物学检查主要包括: 药物制剂的微生物学检查主要包括 规定灭菌药品----------无菌检验 无菌检验 规定灭菌药品 非规定灭菌药品-------微生物限度检查 非规定灭菌药品 微生物限度检查
第一节 无菌检查
• 一、无菌检查的概念及应用范围 （一）概念 p333 （二）无菌检查的基本原则 采用严格的无菌操作方法，将被检查的药品取一定量分别 接种于适合各种微生物生长的不同培养基中（通常为需 氧菌培养基、厌氧菌培养基和真菌培养基），置适宜温 度下培养一定时间后，观察有无微生物生长，以判断被 检药品是否合格。由于无菌检查是用部分样本的结果推 断整体的含菌情况，故被检药品的取样及程序必须按照 国家药典的规定进行。
我国规定的项目有： 我国规定的项目有：
细菌总数测定，霉菌总数测定。病原菌 大肠埃希 细菌总数测定，霉菌总数测定。病原菌(大肠埃希 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门菌和破伤 风梭菌)的检验和活螨的检验 的检验和活螨的检验等 风梭菌 的检验和活螨的检验等。
判断合格与否的标准是： 判断合格与否的标准是：
霉菌和酵母菌总数的测定： 霉菌和酵母菌总数的测定：
是考察供试药物中每克或每毫升所含的活霉菌 和酵母菌的总数，以判明检品被真菌污染的程度。 和酵母菌的总数，以判明检品被真菌污染的程度。 测定方法基本同细菌总数的测定方法。 测定方法基本同细菌总数的测定方法。 虎红培养基. 虎红培养基 25—28℃ 72h（也可在 、48、72h分别计数） 分别计数） （也可在24、 、 分别计数 选取菌落在5—50个范围内，乘以稀释倍数即可得单 个范围内， 选取菌落在 个范围内
第十九章 药物的体外抗菌试验
药物的体外抗菌试验 antimicrobial test in vitro
药物的体外抗菌试验是在体外测定微生物对 药物敏感程度的试验， 药物敏感程度的试验，
已广泛地应用于科研、生产和临床。 已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌药物的 筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、药物含量的测 筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、 药物血浓度测定、指导临床用药的药敏试验等。 定、药物血浓度测定、指导临床用药的药敏试验等。
活菌计数法
是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌， 是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌， 作用一定时间后，取样进行活菌计数， 作用一定时间后，取样进行活菌计数，从存活的微生 物数计算出药物对微生物的致死率。 物数计算出药物对微生物的致死率。
石炭酸系数（又称酚系数） 石炭酸系数（又称酚系数）
2．抗菌药物或含防腐剂药物的无菌检查 ．
如果被检药品具有抗菌作用， 如果被检药品具有抗菌作用，阳性对照管及试验 管均可能不长菌。 管均可能不长菌。因此在进行无菌检查前必须采用一 些方法除去药物本身的抗菌作用，然后再依上述方法 些方法除去药物本身的抗菌作用， 进行无菌检查。 进行无菌检查。
(1)加入灭活剂 加入灭活剂:e.g. 在青霉素的无菌检查时 加入足 在青霉素的无菌检查时,加入足 加入灭活剂
口服药及外用药中微生物总量须低于规定限量外， 口服药及外用药中微生物总量须低于规定限量外， 并须在口服药物每克或每毫升中不得含有大肠埃希菌 口服药物每克或每毫升中不得含有大肠埃希菌、 并须在口服药物每克或每毫升中不得含有大肠埃希菌、 沙门菌； 沙门菌；外用药物每克或每毫升中不得含有铜绿假单 胞菌、金黄色葡萄球菌和破伤风梭菌， 胞菌、金黄色葡萄球菌和破伤风梭菌，此外均不得检 出活螨。 出活螨。
第三节
联合抗菌试验
在药学上作中， 在药学上作中，常需检查两种抗菌药物 在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不 值或不同离子溶液的相互影响。 同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强 值或不同离子溶液的相互影响 药物抗菌作用的为协同 协同(synergism)；减弱药 药物抗菌作用的为协同 ； 物作用的为拮抗 拮抗(antagonism)；相互无影响的 物作用的为拮抗 ； 为无关(indjfference)；作用为二者之和的为累 无关 ；作用为二者之和的为累 加(addition)。 。
• 然后分别按不同的需要条件培养一定时 如需氧菌、 间,如需氧菌、厌氧菌在 如需氧菌 厌氧菌在30—35℃培养 天, ℃培养5天 真菌在20—25℃培养 天.观察结果时 阳 观察结果时,阳 真菌在 ℃培养7天 观察结果时 性对照必须长菌,才能判定供试品是否合 性对照必须长菌 才能判定供试品是否合 格;若阳性对照管不长菌 说明该药物可能 若阳性对照管不长菌,说明该药物可能 若阳性对照管不长菌 有抗菌作用或是油剂等特殊制剂,还应考 有抗菌作用或是油剂等特殊制剂 还应考 虑实验条件的合用性. 虑实验条件的合用性
细菌总数的测定: 细菌总数的测定
是了解被检药品在单位重量或体积(每克 是了解被检药品在单位重量或体积 每克 或每毫升)内所含有的活菌数 内所含有的活菌数(实际是需氧菌 或每毫升 内所含有的活菌数 实际是需氧菌 的活菌数)， 的活菌数 ，以判断供试药物被细菌污染的程 度，是对该药品整个生产过程的卫生学总评 价的一个重要依据。 价的一个重要依据。 方法:琼脂倾注平皿法 方法 琼脂倾注平皿法
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法色serial dilution test 连续稀释法色
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 和最低杀 可用于测定药物的最低抑菌浓度 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培 菌浓度 。可以用液体培养基， 养基。 养基。 1．液体培养基连续稀释法 (见下图 ． 见下图) 见下图 2．固体培养基连续稀释法 ． 分平板法和斜面 法。
抗菌试验包括抑菌试验和杀菌试验。 抗菌试验包括抑菌试验和杀菌试验。
抑菌：即抑制微生物的生长繁殖， 生物， 抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物， 在药物除去后微生物又能生长. 在药物除去后微生物又能生长 杀菌： 生物，当药物除去后， 杀菌：即能杀死微 生物，当药物除去后，微生 物也不 能再生长繁殖。 能再生长繁殖。
（二）特殊药品的无菌检查法
如果阳性对照管不长菌， 如果阳性对照管不长菌，则必须进行特殊处 理后方可按照一般药品的无菌检查法进行。 理后方可按照一般药品的无菌检查法进行。来自1．油类药物的无菌检查 ．
一般油剂因与常规培养基不混溶， 一般油剂因与常规培养基不混溶，药品中的 吐温(聚山梨酯 微生物不易生长，所以一般可采用吐温 聚山梨酯) 微生物不易生长，所以一般可采用吐温 聚山梨酯 培养基，其余同一般药品无菌检查法。 培养基，其余同一般药品无菌检查法。