糖苷酶的检测方法及临床应用
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)使用说明
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)使用说明货号：G8820规格：1g/5g级别：BR其他名称：α-D-葡萄糖苷酶;α-葡糖苷酶CAS号：9001-42-7提取来源：黑曲霉产品简介：α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase，EC 3.2.1.20）又被称为α-葡萄糖苷水解酶或葡萄糖基转移酶（GTase），是一种α-D-葡萄糖苷酶。
它可以从低聚糖类底物的非还原末端切开α-1,4-糖苷键释放出葡萄糖，或将游离的葡萄糖残基转移到另一糖类底物形成α-1,6-糖苷键，从而得到非发酵性的低聚糖。
α-葡萄糖苷酶来源广泛，在人体糖原的降解和动植物、微生物的糖类代谢方面具有重要的生理功能。
α-葡萄糖苷酶广泛应用于食品和发酵工业、化学工业以及医学应用等行业。
酶活定义：每小时产生1μg葡萄糖所需的酶量定义为一个α-葡萄糖苷酶活力单位。
酶活检测方法：参见QB2525-2001。
产品特性：酶活力：300000U/g最适作用温度：50℃，合适的作用温度：50-55℃。
最适作用pH：5.0，合适的作用pH：4.8-5.4。
外观：淡白色粉末或淡黄色液体，分子量约为68.5KD，无臭无味，溶于水，不溶于乙醚和乙醇。
用途：生化研究。
能水解葡萄糖苷(Glucoside)成葡萄糖和其他组成物质，是一种具有生物催化剂功能的蛋白质。
本产品的建议添加量为800U/g干物质，根据实际情况改变添加量。
抑制剂：铜、钛、钴等金属离子对本品有一定的影响。
铅、铝、锌等金属离子对本品有较强的抑制作用。
贮存：建议密封储藏于干燥、低温的环境中（≤25℃），最好在冷藏条件下（4-8℃）储藏。
25℃以下，液体可以储存3个月，保质期内酶活不会降低于产品标示的活力；4℃以下，可较长时间储存。
糖苷酶的异源表达及酶活表征
糖苷酶的异源表达及酶活表征专业：微生物学研究生：张鹏飞指导教师：王一丁摘要：目的及意义：在时代飞速发展，传统能源日益锐减且价格不断上涨、温室气体大量排放、以及全球气候变化的今天，新型可再生能源产业的兴起和发展迫在眉睫。
其中，以农、林业废弃物为主的木质纤维素成为最普遍、储量最丰富的可再生资源，它不仅可以用于畜牧养殖、制备生物燃料及食品添加剂，还应用于工业生产和医疗卫生行业。
木质纤维素的合理高效利用不仅能够缓解环境压力，还能够带动经济增长。
但是，木质纤维素自身的特性使得其很难彻底分解并充分利用。
主要原因如下：1）组成木质纤维素的纤维素、木质素和半纤维素之间紧密联系导致降解不彻底；2）纤维素降解发酵所需的酶产量过低，不能满足工业发展的大量需求；3）单一的糖苷酶降解效率较低。
因此，本研究旨在寻找多种高效糖苷酶，对其基因进行密码子优化和改造，以期产生可以大量表达且易于收集和纯化的目标蛋白，并对异源表达所获取的融合蛋白酶进行酶学性质表征。
以期达到对木质纤维素的高效利用。
材料方法：本文利用分子生物学方法构建目的蛋白的重组表达载体，采用大肠杆菌和毕赤酵母两种异源表达体系作为糖苷酶的异源表达宿主细胞，对几种不同来源的异源表达的糖苷酶进行过表达，以及运用DNS方法对酶的酶学性质进行了详细的表征（最适pH和温度、pH和热稳定性以及二价金属离子的影响）。
结果：目标蛋白在异源细胞中均成功表达。
三种纤维素酶（pJL-14、pJL-36、A10）、甘露聚糖酶（C6）和果胶酶（pJL-44）的最适反应pH值分别为：5.5、5、4、4和4，均偏弱酸性，在中性及弱碱性的环境中均比较稳定。
而最适反应温度及热稳定性存在差异：pJL-14、pJL-36的最适反应温度分别为45℃和40℃，35℃和30℃以下较为稳定；C6的最适反应温度为60℃，40℃以下比较稳定；A10的最适反应温度为80℃，60℃以下较为稳定；pJL-44最适反应温度为60℃，25℃以下稳定存在。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT法)产品技术要求利德曼
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT法）适用范围：本产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的含量。
1.1 规格试剂1（R1):2×45mL、试剂2（R2): 2×15mL；校准品（选配）：1×2mL；质控品（选配）：1×2mL。
1.2 组成试剂盒由试剂、质控品（选配）和校准品（选配）组成。
试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L。
试剂2(R2)：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dl。
校准品：冻干品，含NAG：（100～200）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。
质控品：冻干品，含NAG：（5～25）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。
2.1 外观液体双试剂：R1：无色澄清液体；R2：无色或淡黄色液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色液体。
质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。
2.2 装量:不得低于标示体积。
2.3 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至Inner standard。
＜1.5ABS ( 1cm；340nm；37℃)。
2.4 空白吸光度： A（空白）2.5 灵敏度：浓度为100IU/L时，吸光度变化△A/min＞0.01 ABS。
2.6 线性：测定结果在(0,200]IU/L范围内r≥0.996；测定结果(5,200] IU/L 时相对偏差应≤15%，测定结果(0,5] IU/L时绝对偏差应<0.75 IU/L。
2.7 精密度：用（5～12）IU/L和（15～25）IU/L的样本各重复检测10次，其变异系数CV<5%。
2.8 批间差：取三个批号试剂，分别测定浓度接近正常值上限的样本，每个批号测3次，不同批号之间测定结果的相对极差应<10%。
α-L-岩藻糖苷酶的研究进展及临床应用
α-L-岩藻糖苷酶的研究进展及临床应用吴曼丹【摘要】α-L-岩藻糖苷酶(AFU)是一种溶酶体酸性水解酶,分类名为α-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶(EC3.2.1.51),参与含α-L-岩藻糖的糖脂、糖蛋白、糖苷等糖复合物的水解.AFU广泛分布于人体细胞及体液中,其中以肝肾组织含量较高.AFU在血清或组织中活性的改变与肿瘤的发生具有显著相关性,是肝细胞癌、胰腺癌、结直肠癌等肿瘤的诊断、疗效和预后的重要监测指标.%The acid α-L-fucosidase( AFU ) is usually found as a soluble component of lysosomes, the systematic name is α-L-fucosidase( EC3.2.1.51 ).It is involved in the hydrolytic degradation of fucose-con-taining molecules.AFU distributes in human tissues and body fluids, especially high concentration is seen in the liver and kidney.Alterations in the activity of AFU in serum or tissue have been observed in cancer.AFU is a significant index for the diagnosis,therapeutic effect and prognosis of hepatocellular carcinoma,pancreatic adenocarcinoma, and colon adenocarcinoma.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2013(019)009【总页数】3页(P1578-1580)【关键词】α-L-岩藻糖苷酶;肿瘤;诊断【作者】吴曼丹【作者单位】广州军区武汉总医院检验科,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】R446;R73α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)是一种溶酶体外切糖苷酶，最早发现于细胞溶酶体中，主要参与含岩藻糖的糖类复合物的水解。
全液体试剂测定尿中N-乙酰氨基葡萄糖苷酶
ABC 底物的连续监测法在临床上已有使用] 但该试
剂多为干粉形式 #复溶时为了使底物彻底溶解 # 通常 需几个小时以上时间 # 操作较为繁琐 $ 在反应体系中 加入一定量的增溶剂和稳定剂的液体型 gAgRABC 连 续 监 测 法 试 剂 盒 #gAgRABC 的 溶 解 度 最 大 可 至
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行回收试验 ! 回收率分别为 CLCHMb "\\HDb "\MHSb # 平均回收率为 \\HSb!
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作 者 简 介 & 周 午 琼 # 女 #DS 岁 # 毕 业 于 温主管检验师 # 从事生化检验工作 !
! !" ! 基因是本组菌株对 ! 内酰胺类抗生素耐药的重要 原因之一 $ 质粒介导的 BitI 酶主要由肠杆菌科细菌如阴 沟肠杆菌产生 ] 具有比 -Gl 更广的水解底物谱 ] 能 有效水解三代头孢菌素类 % 单环类及头霉素类抗生 素 ]且不受酶抑制剂所抑制 $ 携带编码 BitI 酶基因 质粒具有快速复制和可转移性的特点 ] 可导致耐药 性广泛传播 ]给临床治疗带来极大困难 $ 由于质粒型
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序1.摘要N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测主要用于肾脏疾病、肝硬化和慢性活动性肝炎的诊断。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测尿液中NAG的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定NAG浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）试剂盒采用的是速率法。
5.原理26N---O---β−+−→−DN NAG-H-氨基葡萄糖苷乙酰硫代吡啶甲基巯基吡啶氨基葡萄糖-甲基-乙酰62--2--N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)催化底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解产生6-甲基-2-巯基吡啶(MPT)和N-乙酰-氨基葡萄糖，MPT在340nm附近有吸收峰，所以，可以通过监测340nm附近的吸光度变化值计算样本中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：柠檬酸缓冲液、Tris6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华公司提供的K校准因子对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：上海科华公司提供的生化质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
乙酰氨基葡萄糖苷酶,富氨酸氨基肽酶
乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG酶）和富氨酸氨基肽酶（PAP酶）是两种在生物学和医学研究中广泛应用的酶。
它们分别在不同的生物过程中发挥作用，具有重要的生物学意义。
本文将分别介绍这两种酶的结构、功能和应用。
一、乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG酶）1. 结构：NAG酶是一种醣苷酶，在多种生物体和组织中都有分布。
其主要结构特征是由四个亚基组成的四聚体，每个亚基都含有一个活性中心。
2. 功能：NAG酶主要作用于水解乙酰氨基葡萄糖苷，是细胞壁合成中的重要酶。
在细胞分裂和生长过程中，NAG酶也起着重要作用。
NAG 酶还参与炎症反应和免疫调节。
3. 应用：NAG酶在医学诊断和疾病治疗中有重要应用价值。
它可以作为肾脏疾病的生物标志物，用于评估肾功能。
NAG酶还可以作为药物靶点，在药物研发中具有潜在的应用前景。
二、富氨酸氨基肽酶（PAP酶）1. 结构：PAP酶是一种蛋白酶，具有复杂的结构。
它在多种生物体中都有表达，在细胞内外都有活性。
2. 功能：PAP酶在蛋白质降解和代谢过程中扮演着重要角色。
它能够水解富氨酸肽，促进蛋白质降解和代谢产物的释放。
PAP酶还参与一些重要的细胞信号传导通路，对细胞生长和分化具有调控作用。
3. 应用：PAP酶在医学和生物技术领域有广泛应用。
它可用于蛋白质合成和降解的研究，有助于解析细胞内蛋白质代谢的机制。
PAP酶还可以作为肿瘤标志物，在肿瘤诊断和治疗中具有潜在的应用价值。
乙酰氨基葡萄糖苷酶和富氨酸氨基肽酶是两种具有重要生物学功能和应用价值的酶。
对它们的深入研究不仅有助于揭示生物体内重要的生物过程和生理功能，还有助于为医学诊断和疾病治疗提供新的思路和方法。
希望本文能够帮助读者更深入地了解这两种酶的特点和应用前景。
乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG酶）和富氨酸氨基肽酶（PAP酶）是两种在生物学和医学研究中广泛应用的酶。
它们分别在不同的生物过程中发挥作用，具有重要的生物学意义。
本文将深入探讨这两种酶的结构与功能，并探索它们在医学和生物技术领域的应用前景。
现代生物化工中酶工程技术研究与应用
现代生物化工中酶工程技术研究与应用发布时间：2023-03-22T05:25:58.679Z 来源：《科技新时代》2023年第1月1期作者：刘捷穆圣文孙明广[导读] 在现代生物化工的发展过程中，酶工程是重要组成部分，已广泛应用于食品、医药、轻工业、畜牧业、环保、刑侦等领域，一般用于其中的预防、工艺和甄别检测等刘捷穆圣文孙明广身份证号码：37030219931103****身份证号码：37030419941024****身份证号码：37292819900118****摘要：在现代生物化工的发展过程中，酶工程是重要组成部分，已广泛应用于食品、医药、轻工业、畜牧业、环保、刑侦等领域，一般用于其中的预防、工艺和甄别检测等。
关键词：现代生物化工；酶技术；酶工程引言酶工程又被称为蛋白质工程学，主要服务于人类生产及其他目的。
具体来讲，酶工程是指工业上有目的的设置一定的反应器和反应条件，利用酶的催化功能，在一定条件下催化化学反应，生产人类需要的产品或服务于其他目的的一门应用技术。
酶工程的研究内容众多，如酶制剂的制备、酶的修饰改造等。
生物酶由有机物体的活细胞孕育而来，可对生物机体内的生物反应产生催化作用。
通常情况下，可从以下几个方面总结生物酶的特点。
①具有较高的催化效率。
相较于其他类型的催化剂，酶往往具有更高的催化效率，能够高出107～1020倍左右。
②具有明显的专一性特征。
其他催化剂能够对多种化合物的反应进行催化，而生物酶则只能够对一种化合物的反应进行催化。
③具有较为温和的反应条件，能够调控酶的催化过程。
但由于其属于蛋白质范畴，温度、pH值等因素会在很大程度上产生干扰作用，导致生物酶活性减弱，缺乏良好的稳定性。
1酶工程技术在生物化工行业应用中遇到的问题目前，酶工程技术在酶工程技术的发展相对来说还不够成熟，所以在部分前期的应用中，避免不了会出现一些亟待解决的问题。
首先，在新产品的应用中，缺少科学性及创造性。
虽然酶工程技术在酶工程技术领域的应用较普遍，但是很多技术成果都是借鉴而来的，并不是依靠自身的创新发明得到的，对新产品的研发资金投入力度不够，人力和物力的匮乏使生物制药的发展受到限制。