小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基说明书pdf
小肠结肠炎耶尔森菌病
1、质粒酶切图谱分析； 2、以PCR为基础的分型方法，如： （1）随机扩增多态性分析 （2）扩增片段长度多态性分析（AFLP）技 术 3、核糖体分型 4、脉冲场凝胶电泳分析
六、毒力质粒 凡是对人类和动物具有致病性的小肠结 肠炎耶尔森菌都携带有一个大约70Kb质粒， 称作毒力质粒（pYV）。小肠结肠炎耶尔 森菌和假结核耶尔森菌一样，可用自凝试 验来可靠的确定其否存在70kb质粒以及 YadA蛋白的表达。如果试验阳性，用含有 MR-VP的培养基对该菌室温（25℃）和 37℃的平行培养物进行观察。结果表明： 在37℃培养24-48小时，试管底部的生长 凝集培养基保持清亮，相比之下，在室温
48个血清型： O:1,2a,3; O:10; O:2a,2b,3; O:11,23; O:3; O:11,24; O:4,32; O:12,25; O:4,33; O:12,26; O:5; O:14; O:5,27; O:15; O:6,30; O:16; O:6,31; O:16,29; O:7,8; O:17; O:8; O:18; O:9; O:19,8;
1、血清分型 三种致病的耶尔森菌种，除鼠疫耶尔森菌 不能用于血清分型外，小肠结肠炎耶尔森 菌和假结核耶尔森菌分离菌株的血清分型 适用于流行病学调查和菌株致病性的判断， 对于小肠结肠炎耶尔森菌来说血清分型是 最常用的方法，也是很有价值的方法。 目前，我国使用的48个血清型的“O”抗原， 是从国外引进的，它们的组成为：
化合物、不产气、产生尿素酶、30℃ 以下形成动力，35℃则无动力。 耶尔森菌的生化特征是在25～30℃ 之间的代谢活力要比35℃高，因此， 许多生化试验要求细菌低温培养。 既然小肠结肠炎耶尔森菌是一种肠 道致病菌，那么就应该注意和其它肠 道菌属的鉴定。
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(食品微生物学检验)
A.6.3 试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种,于26 ℃±1 ℃ 培 养 18h~24h,观 察 结 果。鸟 氨 酸 脱 羧 酶 阳 性 者 由 于 产 碱 ,培 养 基 呈 紫 色 。 阴 性 者 无 碱 性 产 物 ,但 因 葡 萄 糖 产 酸 而 使 培 养 基 变 为 黄 色 。 对 照 管 为 黄 色 。
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GB 4789.8—2016
A.3 改良 Y 培养基
A.3.1 成分
蛋白胨 氯化钠 乳糖 草酸钠 去氧胆酸钠 三号胆盐 丙酮酸钠 孟加拉红 水解酪蛋白 琼脂 蒸馏水
15.0g 5.0g 10.0g 2.0g 6.0g 5.0g 2.0g 40.0 mg 5.0g 17.0g 1000 mL
A.3.2 制法
1
4 检验程序 小 肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏 菌 检 验 程 序 见 图 1。
GB 4789.8—2016
图1 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序
5 操作步骤
5.1 增菌 以无菌操作取25g(或25 mL)样品放入含有225 mL 改良磷酸盐缓冲液增菌液的无菌均质杯或均
质袋内,以8000r/min均质1 min或拍击式均质器均质1 min。液体样品或粉末状样品,应振荡混匀。 均质后于26 ℃±1 ℃增菌48h~72h。增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定。 5.2 碱处理
2.0g
甘露醇
20.0g
氯化钠
1.0g
去氧胆酸钠
2.0g
硫酸镁
0.01g
琼脂
12.0g
蒸馏水
950 mL
校正 pH 至7.5±0.1,将基础培养基于121 ℃高压灭菌15 min,备用。
A.2.2 Irgasan(二 氯 苯 氧 氯 酚 ):可 用 95% 的 乙 醇 作 溶 剂,溶 解 二 苯 醚,配 成 0.4% 的 溶 液 来 替 代
小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基使用说明书
小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基使用说明书用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离和检测组分科玛嘉小肠结肠炎耶尔森氏菌基础培养基和增补剂各一瓶。
基础培养基：琼脂15.0 g/L 蛋白胨20.0 g/L 盐类 5.0 g/L 色素1.3 g/L 增补剂：0.1 g/LpH值7.0±0.2操作1、基础培养基：取瓶内干粉41.3 g溶于1000 mL去离子水的洁净三角瓶中，充分搅拌混匀。
也可根据需要按照41.3 g/L的比例扩大或缩小制备培养基的量。
2、加热至100℃，不停搅拌，使其完全溶解。
切勿加热超过100℃，切勿121℃高压灭菌。
若使用微波炉加热，应将培养基加热沸腾，立即移出，轻轻摇匀，再放入微波炉加热，观察小气泡变为大气泡，直至完全溶解即可。
切勿使培养基溢出。
3、增补剂：取增补剂0.1g溶于1mL去离子水中，（也可按照0.1g/L的比例扩大或缩小制备增补剂的量），搅拌均匀，使其完全溶解，将增补剂溶液过0.45um滤膜备用。
注：增补剂应现配现用，制备好的增补剂溶液在-20℃可保存15天。
4、把混匀后的增补剂加入到冷却至47℃±2℃的基础培养基中，轻轻摇动使其充分混匀，倾注平皿，使其凝固，晾干备用。
保存该成品平板在室温可保存一天或在冰箱内贮存1个月（2℃~8℃，避光）。
接种划线或涂布接种（冰箱内保存的平板使用前应恢复至室温），在30±1℃恒温条件下需氧培养24h~36h 。
结果性能及局限一些小肠结肠炎耶尔森氏菌在该培养基可能生长较弱。
一些较为罕见的非致病性耶尔森氏菌也可能会淡紫色菌落（伯氏耶尔森菌、莫氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、罗氏耶尔森氏菌等）。
最终鉴定为致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌需做附加试验。
贮存条件基础干粉贮存于15℃~30℃干燥环境中，增补剂贮存于2℃~8℃环境中，在有效期前使用。
污染处理使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃。
附：供体外诊断使用，产品须专业人员操作。
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(食品微生物学检验)
分 别 挑 取 5.3 中 的 可 疑 菌 落 3 个 ~5 个 ,分 别 接 种 于 改 良 克 氏 双 糖 铁 琼 脂 ,接 种 时 先 在 斜 面 划 线 ,再 于底层穿刺,26 ℃±1 ℃培养24h,将斜面和底部皆变黄且不产气的培养物做进一步的生化鉴定。
5.5 尿素酶试验和动力观察
用 接 种 环 挑 取 一 满 环 5.4 得 到 的 可 疑 培 养 物 ,接 种 到 尿 素 培 养 基 中 ,接 种 量 应 足 够 大 ,振 摇 几 秒 钟 , 26 ℃±1 ℃培养2h~4h。将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中,于26 ℃±1 ℃和 36 ℃±1 ℃培养24h。将在26 ℃有动力而36 ℃无动力的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板,进行 纯 化 培 养 ,用 纯 化 物 进 行 革 兰 氏 染 色 镜 检 和 生 化 试 验 。
除乳与乳制品外,其他食品的增菌液0.5 mL 与碱处理液4.5 mL 充分混合15s。
2
GB 4789.8—2016
5.3 分离
将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其 他 食 品 增 菌 液 分 别 接 种 于 CIN-1 琼 脂 平 板 和 改 良 Y 琼 脂 平板,26 ℃±1 ℃培养48h±2h。典型菌落在 CIN-1上为深红色中心,周围具有无色透明圈(红色牛 眼状菌落),菌落大小为1 mm~2 mm,在改良 Y 琼脂平板上为无色透明、不黏稠的菌落。
3 培养基和试剂
3.1 改良磷酸盐缓冲液:见 A.1。 3.2 CIN-1培养基(CepulodinIrgasanNovobiocinAgar):见 A.2。 3.3 改良 Y 培养基(AgarY,Modified):见 A.3。 3.4 改良克氏双糖培养基:见 A.4。 3.5 糖发酵管:见 A.5。 3.6 鸟氨酸脱羧酶试验培养基:见 A.6。 3.7 半固体琼脂:见 A.7。 3.8 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和 V-P 试验用]:见 A.8。 3.9 碱处理液:见 A.9。 3.10 尿素培养基:见 A.10。 3.11 营养琼脂:见 A.11。 3.12 小肠结肠炎耶尔森氏菌诊断血清。
《小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》编制说明
《食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》编制说明一、标准起草的基本情况2011年原卫生部（现国家卫生计生委）牵头组织开展食品卫生微生物学标准的修订工作，小肠结肠炎耶尔森氏菌的测定方法被列入修订。
本标准起草单位为江苏省疾病预防控制中心，起草人包括袁宝君、唐震、沈赟、庄凌、乔昕、王艳梅、巢国祥、徐勒、郑东宇。
二、标准的重要内容及主要修改情况（一）标准主要修改的内容1. 修改了标准的中文名称；2. 修改了典型菌落的形态描述；3. 删除了生化鉴定中的商品化名称；4. 修改了附录A。
（二）修改依据及说明1．修改了标准的中文名称按照食品安全国家标准编制的规范要求将标准的中文名称进行了修改，将原来的《食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》修改为《食品安全国家标准食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》。
2．修改了典型菌落的形态描述根据征求意见函中专家建议及结合2008版国标近几年的使用情况,在本次修订过程中增加了CIN-1琼脂平板的典型菌落形态描述，形态描述结合FDA BAM( 2007)及GB/T 4789.8-2008的描述方式由原来的“红色牛眼状菌落”修改为“深红色中心，周围具有无色透明圈（红色牛眼状菌落）,菌落大小为1-2mm”，通过对典型菌落形态的详细描述有利于国将“Vitek GNI 全自动微生物生化分析仪”修改为“生化鉴定试剂盒标使用者在分离该菌的过程中能够较易查找并发现目标菌，提高对本菌的检出率。
3. 删除了生化鉴定中的商品化名称或全自动微生物生化鉴定系统删除“4.11 API 20E生化鉴定试剂盒或VITEK GNI+生化鉴定卡”。
传统的微生物鉴定主要参考《伯杰式细菌鉴定手册》和《真菌鉴定手册》，鉴定过程繁琐耗时长，容易出错，对经验要求非常高。
商品化的自动微生物系统有效地解决了这个问题，目前自动微生物鉴定系统从原理上包括以下几种：1)基于表型的鉴定方法；2)基于基因型的鉴定方法； 3)基于蛋白的鉴定方法；三类方法各有优缺点，理论上不冲突，应该互为补充，基于系统生化仍是国际上微生物鉴定的金标准，所以本标准仍然将基于表型的鉴定方法之一的系统生化鉴定作为微生物鉴定的确证方法。
小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基说明书
广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：860288778876产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基英文名称：Chromogenic Yersinia Enterocolitica Agar【产品编号与包装规格】产品编号产品类型包装规格CRM017干粉1000mL/瓶SR0770冻干配套试剂10支/盒【产品用途】用于致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测与鉴别。
【检验原理】蛋白胨提供氮源、维生素、生长因子；盐类可维持均衡的渗透压，琼脂是培养基凝固剂；抑制剂（配套试剂）抑制杂菌的生长，混合色素与对应的酶发生特异反应，水解底物，释放显色基团，使致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌形成紫红色菌落，非致病性显金属蓝色或受抑制。
称取本品干粉30.4g，加入蒸馏水或纯化水1000mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，冷却至50℃备用。
每100mL 培养基基础添加1支配套试剂(SR0770)，混合均匀后倾注无菌培养皿。
【性能特点】该显色培养基能够区分致病性与非致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌，致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌显淡紫色，非致病性显金属蓝色或受抑制。
一些较为罕见的非致病耶尔森氏菌（如：克氏耶尔森氏菌Y.kristensenii ）、一些未能全部抑制的气单胞菌（如：兽生气单胞菌A.bestiarum 、嗜矿泉气单胞菌A.eucrenophila 等）、沙雷氏菌（液化沙雷氏菌S.liquefaciens、变形斑沙雷氏菌S.proteamaculans ）等菌株，也可能出现紫红色菌落。
最终鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌需做附加试验。
【质量控制】下列质控菌株接种待测试培养基，26±1℃，48h 结果如下：广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：************-8619************8602************88778876贮存于2~8℃，避光、干燥处；保质期见产品标签。
出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法
出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法1.适用范围本方法适用于出口冷冻和生鲜的猪肉、猪舌、鸡肉、虾和虾仁中耶氏菌检验，其他食品可参照使用。
2.培养基2.1.改良的磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠8.23g；磷酸二氢钠(含1个结晶水) 1.20g；氯化钠 5.00g；山梨醇10.00g；胆盐(3号) 1.50g；蒸馏水1000mL；将前三种成分溶于水中，再加入后两种成分，溶解后调至pH7.6，分装于500mL广口玻璃瓶内，每瓶225mL，高压灭菌121℃15min。
2.2.改良的酵母浸汁-孟加拉红肉汤(modified yeast extract-rose bengal broth)2.2.1.基础液磷酸二氢钾0.508g；磷酸氢二钠11.21g；酵母浸汁 5.00g；氯化钠 1.00g；硫酸镁(含7个结晶水) 0.01g；蒸馏水770mL；将上述各成分溶于蒸馏水中，加热使之完全溶解，调至pH8.0，121℃高压灭菌15min。
2.2.2. 40g/L山梨糖水溶液：100.00mL。
2.2.3. 10g/L丙酮酸钠水溶液：100.00mL。
2.2.4. 4g/L孟加拉红水溶液：10.00mL。
2.2.2，2.2.3溶液流通蒸汽加热0.5h灭菌，2.2.4溶液过滤除菌，将灭菌过的此三种溶液加到灭菌、冷却的基础液中，调至最终pH为8.0，以无菌操作分装于18mm×180mm灭菌的试管中，每管8mL，4℃冰箱保存备用。
2.3.含吐温80的麦康凯琼脂蛋白胨12.00g；月示蛋白胨(proteose peptone) 3.00g；乳糖10.00g；胆盐(3号) 1.50g；氯化钠 5.00g；吐温80(Tween 80) 10.00g；氯化钙(无水) 0.20g；中性红0.03g；结晶紫0.001g；琼脂18.00g；蒸馏水1000mL；将琼脂于800mL蒸馏水中加热溶化，以50mL蒸馏水将吐温80稀释，再将其他各成分(指示剂除外)加入150mL蒸馏水中，加热使之完全溶解。
CIN-1培养基基础
CIN-1培养基基础CIN-1培养基基础CIN-1Medium用途：用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性分离和培养。
（GB/T4789.8-2008和ISO标准）原理：胰胨和酵母浸膏提供氮源和微量元素；甘露醇为可发酵糖；去氧胆酸钠和结晶紫抑制革兰氏阳性菌；中性红是pH指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
配方（每升）：胰胨20.0g酵母浸膏 2.0g甘露醇20.0g氯化钠 1.0g去氧胆酸钠2.0g硫酸镁（MgSO4.7H2O）0.01g中性红0.03g结晶紫0.001g琼脂12.0g最终pH7.5±0.2使用方法：1、称取本品57g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。
2、冷却至80℃左右，每100ml基础培养基加入配套试剂A1支（SR0250）（试剂A：0.04%二苯醚1ml）,充分混匀。
冷至45℃左右时，加入配套试剂B1支（SR0250）（试剂B：0.25mg新生霉素、1.5mg头孢菌素和0.1g氯化锶，用1ml无菌生理盐水溶解），混合后倾注平板。
3、将增菌后的改良磷酸盐缓冲液划线接种于CIN-1培养基上，26℃培养48h.4、挑取培养基上红色牛眼状菌落，进一步的鉴定。
质量控制：质控菌株接种后26℃培养48h，结果如下：菌名菌号生长率菌落特征小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC（B）52204 ≥70% 菌落圆形、红色，边缘透明，中央色深，呈牛眼状。
大肠埃希氏菌ATCC25922 -- 圆形、粉色、边缘胆汁沉淀。
粪肠球菌ATCC29212 ≤0.01%贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
贮存期三年。
规格：250g参考文献:1. GB/T4789.8-2008中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验2. GB/T4789.8-2003中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验3. GB/T4789.28-2003中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验染色法,培养基和试剂4.ISO10273-2003Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuff s-----Horizontalmethodforthedetectionofpresumptivepathog enicYersiniaenterocolitica。
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小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基使用说明书
用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离和检测
组分
科玛嘉小肠结肠炎耶尔森氏菌基础培养基和增补剂各一瓶。
基础培养基：琼脂15.0 g/L 蛋白胨20.0 g/L 盐类 5.0 g/L 色素1.3 g/L 增补剂：0.1 g/L
pH值7.0±0.2
操作
1、基础培养基：取瓶内干粉41.3 g溶于1000 mL去离子水的洁净三角瓶
中，充分搅拌混匀。
也可根据需要按照41.3 g/L的比例扩大或缩小制备
培养基的量。
2、加热至100℃，不停搅拌，使其完全溶解。
切勿加热超过100℃，切勿
121℃高压灭菌。
若使用微波炉加热，应将培养基加热沸腾，立即移出，
轻轻摇匀，再放入微波炉加热，观察小气泡变为大气泡，直至完全溶解
即可。
切勿使培养基溢出。
3、增补剂：取增补剂0.1g溶于1mL去离子水中，（也可按照0.1g/L的比
例扩大或缩小制备增补剂的量），搅拌均匀，使其完全溶解，将增补剂溶
液过0.45um滤膜备用。
注：增补剂应现配现用，制备好的增补剂溶液在
-20℃可保存15天。
4、把混匀后的增补剂加入到冷却至47℃±2℃的基础培养基中，轻轻摇动
使其充分混匀，倾注平皿，使其凝固，晾干备用。
保存该成品平板在室温可保存一天或在冰箱内贮存1个月（2℃~8℃，避光）。
接种
划线或涂布接种（冰箱内保存的平板使用前应恢复至室温），在30±1℃恒温条件下需氧培养24h~36h 。
结果
性能及局限
一些小肠结肠炎耶尔森氏菌在该培养基可能生长较弱。
一些较为罕见的非致病性耶尔森氏菌也可能会淡紫色菌落（伯氏耶尔森菌、莫氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、罗氏耶尔森氏菌等）。
最终鉴定为致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌需做附加试验。
贮存条件
基础干粉贮存于15℃~30℃干燥环境中，增补剂贮存于2℃~8℃环境中，在有效期前使用。
污染处理
使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃。
附：供体外诊断使用，产品须专业人员操作。