洁净室浮游菌的测试方法
浮游菌测试操作规程
1.主题内容和适用范围本规程规定了公司洁净室（区）中浮游菌的测试条件，测试方法及控制标准。
本规程适用于公司洁净室（区）浮游菌的测定和洁净度等级的验证。
2.相关文件《药品生产质量管理规范》 2010年版《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》 GB/T16293—20103.术语3.1洁净室（区）对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用，均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
3.2洁净工作台一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。
3.3菌落细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
3.4浮游菌用本规程提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
3.5浮游菌浓度单位体积空气中含浮游菌菌落的多少，以计数浓度表示，单位是个/m3或个/L 。
3.6静态测试洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
3.7动态测试洁净室(区)已处于正常生产壮态下进行的测试。
4.职责中心化验室微生物限度检查室人员负责浮游菌的定期检测工作。
5.质量标准6.材料与设备6.1设备浮游菌采样器、净化工作台、恒温培养箱、烘箱、高压蒸汽灭菌器、放大镜、显微镜、电冰箱、菌落计数器。
6.2用具培养皿（平皿）：?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
钢精锅：10000ml。
三角瓶：300ml。
天平、称样纸、勺。
此外还需要棉塞、牛皮纸、线绳、微波炉、玻璃棒、海棉擦、毛刷等用具。
6.3空白培养皿的准备6.3.1包扎取洁净、干燥的培养皿用牛皮纸或专用包皮布包严扎紧待灭。
6.3.2灭菌灭菌采用湿热灭菌法。
条件：、121℃，20min。
灭菌时要注意按照操作规程操作高压蒸汽灭菌器。
洁净室浮游菌检测标准操作规程
洁净室浮游菌检测标准操作规程⒈目的：建立浮游菌检测的标准操作程序，用以规范员工的检测操作。
⒉范围：适用于公司内部生产洁净区内的浮游菌检测工作⒊责任：生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行负责。
⒋检测依据：G B/T16293—1996（医药工业洁净室浮游菌的测试方法）。
⒌内容：5.1 器具与材料5.1.1 浮游菌采样器5.1.2 真空抽气泵5.1.3 培养皿5.1.4 普通肉汤培养基5.1.5 恒温培养箱5.2 测试步骤5.2.1 测试前，仪器、培养皿表面必须严格消毒。
5.2.1.1 采样品在进入被测前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。
5.2.1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。
5.2.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，于用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。
5.2.1.4 采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。
如用消毒剂对采样管的及外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。
5.2.1.5 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。
5.2.2 采样程序5.2.2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5分钟，并调好流量、转盘转速。
5.2.2.2 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。
5.2.2.3 置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵、转动定时器，根据采样量设定采样时间。
5.2.3 培养全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
在30～35℃培养箱中培养，时间不少于48小时。
每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定 3只培养皿作对照培养。
5.2.4 菌落计数5.2.4.1 用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，看是否有遗漏。
洁净室浮游菌的测试方法
洁净室浮游菌的测试方法洁净室中的浮游菌可通过空气采样和表面采样来进行测试。
下面将介绍一些常用的测试方法。
1.空气采样：空气采样是评估洁净室中浮游菌水平的一种常用方法。
主要有以下几种常用的空气采样方法。
（1）活菌采样：活菌采样主要用于测定空气中活菌的浓度。
一种常用的方法是将空气通过特定尺寸的孔径孔板进行采样，然后使用营养培养基将采样得到的微生物进行培养和计数。
（2）非活菌采样：非活菌采样主要用于测定空气中非活菌的浓度。
一种常用的方法是使用培养基进样器或高效气溶胶采样器收集空气中的微生物，然后将采样得到的样品在培养基上培养并进行计数。
2.表面采样：表面采样是评估洁净室工作台、墙壁和设备等表面的浮游菌水平的一种有效方法。
主要有以下几种常用的表面采样方法。
（1）接触板法：接触板法是将含有营养培养基的培养皿直接接触在洁净室表面上，通过培养皿中的培养基来收集和培养细菌。
可选择不同尺寸和材质的培养皿根据需要进行采样。
（2）方向摸拭法：方向摸拭法是使用含有缓冲液的棉签或消毒纱布，在洁净室表面上进行摸拭，然后将摸拭得到的物质悬浮在缓冲液中，进行培养和计数。
（3）负压采集法：负压采集法是使用带有过滤器的特殊采样装置，通过空气流动将洁净室表面的微生物收集到过滤器上。
然后将过滤器在培养基上进行培养和计数。
除了以上的测试方法，还可以根据需要采用分子生物学方法，如PCR 和测序等，对洁净室中的浮游菌进行进一步的分析和鉴定。
在进行测量之前，需要注意以下几点：1.选择适当的采样点，涉及产品质量的关键区域应优先考虑。
2.在进行采样之前，确保洁净室和采样装置已经进行了必要的清洁和消毒处理，以避免任何外界污染。
3.根据洁净室等级和要求，选择合适的采样方法和采样时间。
4.采集样品后，尽快将样品送到实验室进行分析，以避免样品污染和测试结果的偏差。
通过以上的测试方法，可以有效地评估洁净室中浮游菌的水平，为洁净室的运行和管理提供科学依据。
2023年洁净室浮游菌检测标准操作规程
2023年洁净室浮游菌检测标准操作规程一、目的和适用范围本操作规程旨在规范2023年洁净室浮游菌检测工作，确保洁净室环境的安全性和稳定性。
适用于所有需要进行洁净室浮游菌检测的场所。
二、术语定义1. 洁净室：指用于控制空气污染、温度、湿度、噪声、颗粒物和微生物等环境要素，以达到一定洁净度要求，并具有一定空调性能的房间或特定空间。
2. 浮游菌：指悬浮于空气中的单个或团簇状的微生物，包括真菌、细菌等。
3. 计数器：指用于测定洁净室中浮游菌数量的仪器。
三、设备及试剂准备1. 计数器：应选择符合国家标准且检定合格的计数器进行测定。
2. 静电脱落采样器：确保其表面清洁，按照操作说明进行正确的操作。
3. 无菌纱布：对测定区域进行必要的清洁。
4. 75%酒精及脱脂纸：用于清洁样品采集器具和操作台面。
5. Luria-Bertani (LB) 培养基：用于样品的培养。
6. 培养基平板：准备好对浮游菌进行培养的装有LB培养基的平板。
四、操作步骤1. 准备工作：a. 仔细阅读计数器和静电脱落采样器的使用说明并熟悉操作要领。
b. 检查计数器和静电脱落采样器的状态，确保其正常工作。
c. 对操作台面进行清洁消毒，使用75%酒精和脱脂纸擦拭干净。
d. 打开无菌纱布包装，用清洁的无菌纱布擦拭测定区域。
2. 浮游菌采样：a. 根据洁净室设计和布局特点，选择合适的采样位置。
b. 将静电脱落采样器置于测定区域，按照使用说明进行操作，采样时间一般为15分钟。
c. 采样结束后，将采样头部分放入培养基平板中进行培养。
3. 培养和读数：a. 将培养基平板置于恒温培养箱中，在合适的温度下培养。
b. 培养时间一般为24-48小时，根据需要可以进行更长时间的培养。
c. 培养结束后，使用计数器进行读数，记录浮游菌的数量。
4. 结果分析：a. 比对采样位置和读数结果，根据国家标准对洁净室的空气洁净度等级进行评判。
b. 对高浓度的浮游菌污染区域进行排查，找出可能的污染源，并制定相应的改进措施。
医药工业洁净室区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法
ICSC 10中华人民共和国国家标准GB/T 16292~16294—1996医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法Test method for airborne particles, airborne microbeand settling microbe in clean room(area)of the pharmaceutical industry1996-04-10发布1996-10-01实施国家技术监督局发布目次GB/T 16292—1996 医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法GB/T 16293—1996 医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法GB/T 16294—1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法GB/T 16292—1996前言本标准等效采用美国联邦标准FS-209E—1992《洁净室和洁净区内空气浮游粒子洁净等级》，并参考JGJ 71—90《洁净室施工及验收规范》制定的。
悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室（区）空气洁净度的主要指标。
本标准用悬浮粒子的测试来评价洁净室（区）空气中的尘粒数。
医药工业洁净室（区）的悬浮粒子测试方法，应采用本标准。
本标准从生效之日起，废止YY/T 0141—93。
本标准的附录A是标准的附录。
本标准的附录B是提示的附录。
本标准由国家医药管理局提出并归口。
本标准起草单位：上海医药管理局药品测试所。
本标准主要起草人：纪炜、徐进庆、沈建华。
中华人民共和国国家标准医药工业洁净室（区）悬浮粒子的Test method for airborne particles in cleanroom (area) of the pharmaceutical industry1 范围本标准规定了医药工业洁净室（区）中悬浮粒子的测试方法和悬浮粒子而言的空气洁净度的评定。
本标准适用于医药工业洁净（区）中悬浮粒子洁净度的监测和洁净度等级的验证。
浮游菌测定操作规程
目的：对不同洁净区环境浮游菌进行监测并规范管理以确保生产环境符合GMP的要求，依据《中国药典》2020年版及《药品生产质量管理规范》等法规，制定本规程。
适用范围：适用于生产车间、检验部洁净室（区）的浮游菌监测和洁净度等级的确认。
依据：《中国药典》2020年版四部通则9205《药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》《药品生产质量管理规范》（2010年修订）《药品生产质量管理规范》（2010年修订）附录GB/T 16293—2010《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》责任：质量部（检验）检验员负责监测；质量部（质监）质监员负责监督；内容：1. 所用的仪器、设备和培养基:浮游菌采样器、培养皿、培养基、生化培养箱。
2. 培养皿制备：2.1 培养皿的处理：将培养皿置于121℃湿热法灭菌20分钟或180℃干热灭菌至少2小时（或取一次性培养皿）。
2.2 胰酪大豆胨琼脂培养基培养皿的制备：根据监测点的个数，领用所需培养基的量，将培养基置于100℃水浴加热至熔化（注意：时刻观察水浴锅的水量，防止水烧干，导致玻璃炸裂，发生意外），冷却至45℃（不能急速冷却，将水浴锅设置45℃左右，使其自然冷却，以免发生意外）。
在微生物检查室内，用剪刀将培养基瓶口打开，将瓶口放在点燃的酒精灯外焰，旋转360°，目的使瓶口周围处于无菌状态，将培养皿盖打开1/3后，将培养基注入培养皿中，每皿约15ml～20ml，(注意：培养基应均匀铺开，不得有气泡)。
倒好后马上盖上培养皿盖，使其自然凝固，以备用。
2.3 胰胳大豆胨琼脂培养皿的预培养：将制备好的培养皿，倒置于30℃～35℃的生化培养箱内，预培养2天，若培养基平皿上无菌落生长，即可供使用。
2.4 培养皿的盛装、存放：预培养结束后，用不锈钢桶在培养箱内，将培养皿装好（11～14个／桶），并保证桶上的小孔保持关闭，将平皿置冰箱内，2-8℃保存，并在七日内用毕（使用前检查有无干裂等情况）。
洁净室浮游菌测试操作规程
洁净室浮游菌测试操作规程一、实验前准备1.准备必要设备和试剂，包括洁净室采样器、空气费氏培养皿、洁净无菌办公用品、评价菌种等。
2.检查设备是否正常工作，保证无菌和完好。
3.准备洁净室进出口空气流速仪，测量室内外空气流速是否符合要求。
二、样品采集1.样品采集前，应对操作人员进行培训，确保操作规程的正确执行。
2.在采样器上固定好无菌采样头，确保不受外界微生物的污染。
3.将采样器插入室内适当位置，保持采样头不与其他物体接触。
4.开始采样后，保持采样器连续运行一定时间，通常为15-30分钟，以保证采样量足够。
5.每次测试至少采集3个位置的样品，并记录位置信息。
三、菌落计数1.采样结束后，将采样器取出并标记样品编号和采样时间等信息。
2.使用洁净的工具将采样头从采样器上取下，放入含有适量无菌溶液的容器中。
注意避免非洁净区域的污染。
3.搅拌均匀后，取出一定体积的样品液体，分别接种在凝胶平板上。
4.将接种的凝胶平板置于适宜的温度和湿度下，进行培养。
培养条件需符合相应的标准。
5.按照标准时间进行培养，一般为48小时。
6.在培养结束后，使用显微镜对培养平板上的菌落进行观察，记录菌落的数量和特征。
7.使用专业的计数器对菌落进行计数，每个培养平板至少进行三次计数，保证结果的准确性。
四、数据分析和结果报告1.统计每个采样点和不同采样时间的菌落计数，计算出平均值和标准偏差。
2.根据相关的标准和要求，对测试结果进行评估和分析。
3.生成报告，包括测试日期、采样时间和位置、菌落计数结果、评价和建议等信息。
4.将测试结果及时上报给相关部门，以便采取必要的控制和改进措施。
五、实验结束后1.实验结束后，清洗和消毒测试设备，确保无菌。
2.整理并保存好测试数据和相关记录，以备后续分析和参考。
3.定期检查和维护测试设备，保持其正常工作状态。
总结：洁净室浮游菌测试操作规程的严格执行对于保证测试结果的准确性和可靠性至关重要。
操作人员应严格遵守规程，进行必要的培训和操作指导，以确保测试过程中不受任何干扰和污染。
浮游菌检测操作规程
1.目得建立浮游菌检测操作规程,规范人员操作，保证洁净环境能达到洁净要求。
2.范围本规程适用于本公司洁净室(区)中浮游菌得监测.3.依据YＹ0033-200０《无菌医疗器具生产管理规范》、GB/T16293－２010《医药工业洁净室（区)浮游菌得测试方法》4.职责品管部负责洁净室(区)中浮游菌得监测。
5.浮游菌测试步骤5、1测试前仪器、培养皿表面应严格消毒5、１、1采样器进入被测房间前先用消毒房间得消毒剂灭菌，用于100及洁净室得采样器宜预先放在被测房间内.5、1、２用消毒剂擦拭培养皿得外表面。
５、１、3采样前,先用消毒剂清洗采样器得顶盖、转盘以及罩子得内表面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子得内壁与转盘。
5、1、4采样口及采样管，使用前必须高温霉菌，如用消毒剂对采样管得外壁及内壁进行消毒时,应将管中残留液倒掉并晾干。
5、1、５采样人员应穿戴与被测洁净区域相应得工作服,在转盘上放入或调换培养皿前,双手用消毒剂消毒或无菌手套操作。
5、1、6采样仪器经消毒后先不放入培养皿,开启浮游菌采样器，使仪器中得残余消毒剂蒸发，时间不少于5min,并检查流量并根据采样量调整设定采样时间.5、１、7关闭浮游菌采样器，放入培养皿，盖上盖子。
5、1、8置采样口于采样点后，开启浮游菌采样器进行采样。
５、2培养5、2、１全部采样结束后,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
5、2、２采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TＳA）配制得培养皿经采样后,在30℃—35℃培养箱中培养,时间不少于2d;采用沙氏培养基(SDA)配制得培养皿经采样后，在2０℃—2５℃培养箱中培养，时间不少于5d。
５、2、3每批培养基应有对照试验，检验培养基本身就是否污染。
可每批选定３只培养皿作对照培养。
5、3菌落计数5、３、1用肉眼对培养皿上所有得菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5-1０倍放大镜检查,就是否遗漏.5、3、2若平板上有2个或2个以上得菌落重叠，可分辨时仍可以2个或２个以上菌落计数。
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1目的：
本文规定了洁净室中浮游菌的测试方法。
以达到对其空气洁净度的评定。
2范围：
适用于洁净区中浮游菌的监测和对洁净区等级的验证。
3检测仪器：
浮游菌采样器、真空抽气泵、高压消毒锅、恒温培养箱。
4.检测依据：
GB/T 16293—2010医药工业洁净室浮游菌的测试方法。
5. 测试前的准备：
5.1洁净室的温度应控制在18℃～26℃，相对湿度应控制在45％～65％之间。
5.2风速或压差的测试应符合要求。
5.3 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
5.4 对单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少10min后开始。
5.5 对非单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。
5.6 采样点数目，见表1。
表1 最少采样点数目
编写：胡帆第1版，第0次修订
洁净室浮游菌的测试方法审核：王冬梅发布日期：年月日批准：梁灏方实施日期：年月日
≥200～＜400 80 20 6 6
≥400＜1000 160 40 13 13
≥1000～＜2000 400 100 32 32 ≥2000 800 200 63 63
注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积；对单向流洁净室，指的是房间面积。
5.7 对100级洁净区可在离操作处30cm处设测点，对每10000级工作区可在工作面处设测点。
5.8 采样点的布置
洁净室(区)采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏。
下列采样点的图示可作参考。
洁净棚(层流罩)，洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置：
.1 水平单向流
编写：胡帆第1版，第0次修订
洁净室浮游菌的测试方法审核：王冬梅发布日期：年月日批准：梁灏方实施日期：年月日
2 垂直单向流
5.9 最小采样量，见表：
洁净度级别采样量L/次
100级10000
1000级500
10000级100
300000级100
注：每次采样点一般采样一次。
5.10 采样注意事项：
5.10.1 工作区测点离地面0.8～1.5m左右。
5.10.2 送风口测点位置离开送风面30cm左右。
5.10.3 对单向流或送风口，采样器采样管口应正对气流方向。
对非单向流，采样
管口向上。
5.10.4 布置采样点时，至少应尽量避开尘埃较集中的回风口。
5.10.5 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。
6.操作要求：
6.1 测试前测试仪器表面先用消毒剂消毒采样器的内、外面，采样口及采样管使用前必须高温灭菌。
6.2 采样者应穿戴与被测洁净区相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前双手应消毒。
6.3 开动真空泵抽气，不少于5min,并调好流量和转盘转速。
6.4 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙。
6.5 置采样口于采样点，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。
6.6 全部采样结束后，将培养皿倒置于30℃～35℃的培养箱中培养不少于48h。
6.7 每批选三只培养皿作为对照试验，以鉴别培养基本身是否有污染。
6.8 菌落计数，严防遗漏。
7.结果计算和判断：
7.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
7.2 每个测点浮游菌平均浓度计算：
菌落数
平均浓度（个/m3）＝————
采样量
7.3每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定的评定标准中关于细菌浓度的界限。
7.4 若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准，则必须对该区域先行消毒，然后重新采样两次，两次测试结果必须合格。