(3)--提取分离方法
多糖的提取分离方法
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素
(1)硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用。实验证明，提取时加入硼砂，产品的质量会好些。
(2)石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但PH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质量和产率。
其他成分理化性质：皂苷（saponin）粗品为白色粉末，m.p.210～220℃。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解后获得两种苷元（白桦酯醇、槐花二醇）及糖（糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯）。白桦酯醇（betulin）无色针晶，m.p215～217℃,能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、三氯甲烷、苯等；难溶于石油醚。槐花二醇（Sophoradiol）无色针晶，m.p219～220℃或224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇，难溶于水。芦丁和槲皮素结构式如下所示。
（2）方法二（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加沸水200ml，用加热磁力搅拌器加热煮沸30min，趁热抽滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。
（3）方法三（醇提取法）取槐米20g，置于250ml圆底烧瓶中，加乙醇150ml加热回流1小时，趁热抽滤。滤渣再加乙醇150ml回流1小时，合并乙醇提取液，放冷，析出絮状沉淀，过滤，滤液浓缩至约50ml，放置过夜，滤液析出结晶。母液继续浓缩一半，放置又析出结晶，合并结晶。用乙醚30~50ml分次洗去脂溶性成分（油脂、叶绿素等），再用丙酮10ml洗涤一次，称重，计算得率。
4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁和槲皮素
(四)实验药材仪器与试剂
第17章 制剂分析概论-知识点3制剂中常见附加剂的干扰与排除
符合质量标 准的原料药
赋形剂、稀释剂 稳定剂、防腐剂、着色剂
不同制剂
原料药的分析通常只需要考虑药物的理化性质 药物制剂的分析除了要考虑药物的理化性质， 还要考虑附加成分的干扰，及排除干扰的方法。
一、片剂附加成分的干扰与排除
片剂是药物与辅料均匀混合后压制 而成的片状或异形片状的固体制剂
原料药溶解于注射用水（油）中，配制成一定浓度 的溶液，再经过滤、灌封、灭菌等工艺制成
各种附加成分 pH值调节剂：酸，碱
保证稳定性 减少刺激性
渗透压调节剂：氯化钠
增溶剂：钙盐，苯甲酸苄酯
抗氧剂：亚硫酸钠等 止痛剂：苯甲醇（防腐剂） （一） 抗氧剂的干扰与排除 抑菌剂：三氯叔丁醇，苯酚 （二） 溶剂油的干扰与排除
Mg2 HClO 4 g.HAc Mg HClO 4
1. 提取分离法 样品有机溶剂硬药脂物酸溶镁解蒸分干离
排除干扰 2. 加入掩蔽剂 硬脂酸镁 草酸 g.HAc MgC2O4
的方法
硬脂酸镁 酒石酸 g.HAc
3. 改用其它方法 硬脂酸镁无紫外吸收 UV法
1. 干扰配位滴定法
测定结果偏高
Mg2 EDTA-2Na EDTA Mg 2Na pH≥9.7
1. 选用合适的pH 排除干扰
pH＜9 Mg2+不与EDTA反应 pH＞12 Mg2+ Mg(OH)2
的方法 2. 加入掩蔽剂 酒石酸 pH 6~7.5
2. 干扰非水碱量法
测定结果偏高
排除干扰的方法： 改用其它方法测定，HPLC
（二） 溶剂油的干扰与排除
脂溶性药物，如甾体激素类用植物油做溶剂 油中杂质甾醇、三萜类有UV吸收
天然药物化学实验报告(槲皮素的提取与鉴别)
17 玻璃漏斗
18
研钵
19 胶头滴管
20 薄层板
21 展开缸
22
紫外光谱 仪
23
熔点测定 仪
24 真空泵1个 1个 1个 1个 1个 1个
1个
1个 2条 1个 1个 1个 1个 1个 1张 1个 1套 1个 10个
1个
1台
1台
1台
1台
型号
IM-B2002
GG-17 1000ml GG-17 1000ml
（3）紫外光谱：槲皮素在 375nm 和 255nm 有两个吸收峰，分别属
(A
环)电子跃迁和
(B 环)电子跃迁，分别对应两个生色团组成：375nm
吸收带由肉桂酰生色团产生，为 I 带；250nm 吸收带由苯甲酰生色团产生， 为 II 带，将紫外光下的图谱与标准图谱对照； 实验记录:
八、结果与分析
（一）实验结果： 1、产率：实验所用槐米粗品300g,所得槲皮素晶体4.12g。 产率%=4.12g/300g*100%=1.373% 2、熔点：利用显微熔点测定仪测得最后结果如下： 理论熔点：313.7℃ 所测熔点：312.9℃~314.0℃ 3、薄层色谱：利用薄层色谱法鉴定实验所得产品的纯度如下图：
2、由产量和产率知，我们所得的槲皮素产率偏低，由于浸泡液中基本没有 再析出结晶，而且槲皮素粗品不少，所以产率低的原因是在槲皮素重结晶的过程 中，我们使用大烧杯，使许多产物粘烧杯壁上，造成大量损失。
3、和另外两组相比，我们的的产品纯度更好一些，他们采用的是加入氢氧 化钠提取，而我们直接采用的蒸煮法，所以碱提取会影响产品的纯度； 实验记录：第一天，领取药材以及实验仪器；
第二天，药材粉碎及其蒸煮三次，过滤，滤液静置； 第三天，抽滤，滤液装入饮料瓶，滤渣放入烧杯，烧杯放入烘箱烘干，
天然药物化学复习思考题
羟基蒽醌与0.5％醋酸镁的醇溶液反应形成的配合物具有一定的颜色
★呈色条件：在母核上至少有一个a-OH
当羟基位置不同，生成的配合物颜色也不同：
★根据与醋酸镁形成的配合物颜色，可用于羟基的定位
母核上只有1个a-OH 配合物为橙色
每个苯环上各有一个，并另有一个间位酚羟基时为橙红至红色
⑥芳香族苷﹥脂肪族苷
5、植物体内苷常与其对应的水解酶共存，所以提取提取原生苷时，必须设法抑制或破坏酶的活性。杀酶保苷的常用方法有哪些？
破坏或抑制植物体内酶的方法：
①采集新鲜材料——迅速加热干燥——冷冻保存
②加入一定量的碳酸钙
③用甲醇、乙醇或沸水提取，避免与酸或碱接触
若提取原存于植物中的原生苷，须抑制或破坏酶的活性，同时尽量避免与酸或碱接触，以免苷类水解
③两个α-酚羟基:
a)1，8二羟基，两个羰基峰，
一个正常峰，1678～1661cm-1，
一个缔合峰，1626～1616cm-1，差值40～57cm-1
b)1，4或1，5二羟基，只有一个缔合峰，1645～1608cm-1
④3个或4个α-酚羟基:
4 ’或7，1%AlCl3/MeOH显黄色并有荧光
变浅：邻二OH
无变化：3-OH、5-OH
铝络合物稳定性：
3-OH>5-OH>邻二-OH
2、无色亚甲蓝显色试验
检识苯醌、萘醌——区别于蒽醌
3、与活性次甲基试剂反应 （Kesting-Craven法）
苯醌、萘醌——区别于蒽醌
★ 醌环上有未取代的位置时在碱性条件下与含亚甲基试剂醇溶液反应
如果醌环上有取代基，速度减慢或不发生反应
生药学：生药的化学组成及其分类
3、按物质的药物价值分类 有效成分（effective constituent）——有治病作用、 有药理作用的成分（活性成分，active constituent； 有生物活性）（主成分main constituent） 无效成分（inert constituent）——无显著治疗作用 或生物活性（树脂、色素、无机盐等）
2ATP
2ADP
O P 2O5H 2
单萜
O
P 2O5H 2
三萜类 甾体
倍半萜类 二萜类
O
P 2O5H 2
NADPH
O
P 2O5H 2
反式角鲨烯
类胡萝卜素
萜类、甾类
(三)莽草酸途径(shikimic acid pathway)
此途径由莽草酸通过苯丙氨酸，生成桂皮酸， 再由桂皮酸生成各种苯丙素类化合物。现也被称为 桂皮酸途径 。
早在十六世纪Paracelsus这个人就想到 生药中一定有一个有效的物质在里面，即 arcanum（奥秘，精华）。他曾用提取、蒸 馏、升华等方法极力想拿到这个arcanum, 也 就是有效成分。
二、生药的药效是多种成分共同起作用的结果 1、协同作用（synergism） 阿片的镇痛作用比阿片中所含有的吗啡单独用药的镇 痛作用强得多； 洋地黄叶的强心作用也比其中所含洋地黄毒苷 （digitoxin）单独用药的强心作用强得多。
三、研究或学习掌握有效成分的意义 1、有助于了解生药的药效和阐明生药的治病 机理 阿片——吗啡（镇痛） ——罂粟碱（解痉） 2、有助于进行生药的质量控制 3、有助于进行优良品种的选育 附子中higenamine含量仅为百万分之六 4、有助于进行新药的研制、开发
有机物的十种分离提纯方法
有机物的十种分离提纯方法一、过滤1、原理：根据固体的溶解度不同，将不溶性固体从溶液中分离出来的方法。
2、条件：一种固体不溶，一种固体可溶。
3、范围：适用于不溶固体和液体的分离。
4、仪器：漏斗、铁架台、烧杯、玻璃棒、滤纸5、注意：一贴二低三靠；对于有些溶液温度下降，会有晶体析出，应该趁热过滤。
6、列举：草酸钙中混有醋酸钙：加水溶解，过滤除去醋酸钙溶液。
二、洗气1、原理：利用气体的溶解性或者化学性质不同，将混合气体分离开来的方法。
2、条件：一种气体不溶或不反应，一种气体可溶或可反应。
3、范围：适合于混合气体的分离。
4、仪器：洗气瓶、导管5、注意：不要引进新的气体杂质，最后能够产生被提纯的气体。
6、列举：甲烷中混有乙烯：将混合气体通过溴的四氯化碳溶液，洗去乙烯。
三、蒸发1、原理：把可溶性固体从溶剂中分离出来的方法。
2、条件：固体可溶3、范围：适合于把可溶性固体从溶剂中分离出来。
4、仪器：铁架台、蒸发皿、酒精灯、玻璃棒5、注意：玻璃棒作用；溶剂易挥发或易燃烧，采用水浴加热。
6、列举：从醋酸钠溶液中提取醋酸钠：蒸发溶液，使醋酸钠析出。
四、结晶1、原理：通过蒸发溶剂或者降低温度使溶质的溶解度变小，从而使晶体析出的方法。
2、条件：固体的溶解度小或者固体的溶解度随温度升高变化较大。
3、范围：固体的溶解度小一般用蒸发结晶法；固体的溶解度随温度升高变化较大，一般用冷却结晶法或者重结晶法。
4、仪器：过滤、蒸发仪器。
5、注意：基本环节：溶解—蒸发浓缩—趁热过滤—冷却结晶—洗涤干燥6、列举：苯甲酸钠中混有氯化钠：加水溶解，蒸发浓缩，冷却结晶，就可以除去氯化钠。
五、分液1、原理：把互不相溶的液体分离开来的方法。
2、条件：液体互不相溶3、范围：适合于互不相溶的液体分离。
4、仪器：分液漏斗、烧杯5、注意：分液漏斗的基本操作6、列举：己烷中混有己烯：加入酸性高锰酸钾溶液，振荡后用分液漏斗分离。
六、萃取1、原理：利用溶质在互不相溶的溶剂中溶解度的不同，选择萃取剂将溶质从一种溶剂中转移到另一种溶剂中的方法。
中药活性成分的分离与提取技术
中药活性成分的分离与提取技术中药是中华民族传统文化的瑰宝。
中药中含有众多活性成分，这些活性成分可以治疗多种疾病，并且对人体无害。
因此，中药成为世界上最具有价值的药物资源之一。
但是，中药中的活性成分往往含量低，稳定性差，成分复杂，提取困难，制约了中药的临床应用和开发利用。
因此，中药活性成分的分离与提取技术非常重要。
一、中药活性成分的分类中药活性成分是指中药中能够对人体产生药理作用的化学物质，主要包括：1.生物碱：如哌嗪和雪莲碱等。
2.多糖类：如枸杞多糖和灵芝多糖等。
3.黄酮类：如芍药苷和三七素等。
4.挥发油：如薄荷醇和桉叶油等。
5.鞣质：如栀子酸和丹参酮等。
二、中药活性成分的提取方法中药活性成分的提取方法分为化学方法、物理方法和生物方法三类。
1.化学方法：化学方法是指采用化学反应进行提取的方法，包括溶剂提取、水提取、微波提取、超临界流体提取和扩展床等方法。
(1)溶剂提取：选择一种适当的溶剂，将中药活性成分提取出来。
但溶剂提取的过程会破坏中药的结构，导致提取率较低。
(2)水提取：水提取是指利用水对中药进行提取。
(3)微波提取：微波提取是指利用微波加热的原理，使溶剂和中药活性成分之间发生物理、化学反应，使活性成分得到提取。
(4)超临界流体提取：超临界流体提取是指利用临界点以上的气体或液体作为提取剂，将中药活性成分提取出来。
(5)扩展床：扩展床是以石油醚为溶剂，通过混合时的扩大比表面积，增加溶剂和中药之间的接触面积，从而提高提取率。
2.物理方法：物理方法是指利用物理作用对中药进行提取，包括超声波、磁场和电场等。
(1)超声波提取：利用超声波产生的高频震动，快速打破细胞壁，加速活性成分的释放。
(2)磁场提取：利用磁场的作用，将中药活性成分的离子进行输运和分离。
(3)电场提取：利用电场的作用，将中药活性成分进行电泳分离。
3.生物方法：生物方法是指利用酶、微生物等生物体对中药进行提取。
(1)酶法：利用酶对中药进行分解，将中药活性成分提取出来。
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（1）下列各组溶剂，按极性大小排列，正确的是（ ）
A. 水＞丙酮＞甲醇
B. 乙醇＞乙酸乙酯＞乙醚
C. 乙醇＞甲醇＞乙酸乙酯
D. 丙酮＞乙醇＞甲醇
[答案]B
（2）两相溶剂萃取法的原理是利用混合物中各成分在两相溶剂中的（ ）
A. 比重不同
B. 分配系数不同
C. 分离系数不同
D. 介电常数不同
[答案] B
（3）纸色谱的色谱行为是（ ）
A. 化合物极性大 Rf 值小
B. 化合物酸性大 Rf 值大
C. 化合物极性小 Rf 值小
D. 化合物溶解度大 Rf 值小
[答案]A
（4）通常要应用碱性氧化铝色谱分离，而硅胶色谱一般不适合分离的化合物为
（ ）。 A. 香豆素类化合物
B. 黄酮类化合物
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Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
（C）
（B） （A）
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C. 生物碱类化合物
D. 三萜类化合物
[答案]C
（5）连续回流提取法所用的仪器名称是（ ）
A. 水蒸气整流器
B. 薄膜蒸发器
C. 液滴逆流分配器
D. 索氏提取器
[答案]D
（6）Sephadex LH-20 的分离原理是（ ）。
A. 吸附
B. 离子交换
C. 分配比
D. 分子筛
[答案]D
（7）不宜用离子交换树脂法分离的成分（ ）。
HO
A.
HO O O HO
OO
O
OO
B.
C.
[答案] 化合物 A、B、C 的极性存在差异，化合物 A 结构中含有糖基，极性最大；
化合物 B 结构中含有邻二酚羟基，极性次之；化合物 C 结构中没有极性官能团，
故极性最小。因此可利用这三个化合物极性的差异选择硅胶吸附柱色谱进行分离
硅胶柱色谱 乙酸乙酯洗脱 分别收集回收溶剂
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OH O O CH3 OH OH
OH O O CH3 OH
CH2OH O OHO OH OH
4. 简答题
O
OA
O
O
C
OH
HO
O
OH OH
OH O
B
O
O HO
O
OH OH
OH OH
O
D
（1）化合物 A、B、C 结构如下，请设计分离方案将这三个化合物分开。
O O
A. 生物碱 B. 生物碱盐 C. 强心苷 D. 有机酸
[答案]C
2. 判断题
（1）大孔吸附树脂法分离皂苷，以乙醇-水为洗脱剂时，乙醇的比例增大，洗
脱能力增强。 [答案]√
（）
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（2）Sephadex LH-20 的分离原理主要是分子筛和正相分配色谱。 （ ） [答案]× 3. 分析比较 （1）用聚酰胺柱色谱分离下列化合物 A～D，以不同浓度的甲醇进行洗脱，其 出柱先后顺序为( )→( )→( )→( )。 [答案] C→A→D→B （2）用硅胶柱色谱分离下列化合物 A～D，以 CHCl3-CH3OH 作洗脱溶剂，则 出柱的先后顺序为( )→( )→( )→( )。 [答案] D→B→A→C （3）用 Sephadex LH-20 柱色谱分离下列化合物 A～D，以甲醇进行洗脱，其出 柱先后顺序为( )→( )→( )→( )。 [答案] C→A→D→B