第三章病毒感染的诊断与防治
病毒感染的检查方法与防治原则
埃可病毒( 埃可病毒(-) CPE(+)—风疹病毒( CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+) 埃可病毒(+)
(4)细胞代谢改变
细胞代谢变慢 pH变化减慢 pH变化减慢
2.病毒形态学鉴定
电子显微镜：设备、操作复杂， 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒 痘类病毒） 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 大病毒（ 对一般病毒检测意义不大 对一般病毒检测意义不大
腮腺炎病毒感染细胞
(3)干扰现象（interference） 干扰现象（interference）
风疹病毒＋ 风疹病毒＋胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 病毒增殖，CPE(
埃可病毒＋ 埃可病毒＋人胚肾细胞
病毒增殖，CPE(＋) 病毒增殖，CPE( CPE(CPE(-)—风疹病毒(+) 风疹病毒(
风疹病毒？ 风疹病毒？ ＋人胚肾细胞 埃可病毒
四、病毒感染的快速诊断
数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（ gM） 早期抗体检测（IgM）
（一）形态学检查
电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体
（二）病毒成分检测
1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术
2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序
3.病毒血清学鉴定
(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 免疫标记法（FIA、EIA、RIA） ——多种病毒鉴定 ——多种病毒鉴定 (3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno凝胶免疫扩散试验( immunodiffusion test) test) ——多种病毒鉴定 ——多种病毒鉴定
4.病毒分子生物学鉴定
病原生物学与免疫学基础教案
病原生物学与免疫学基础教案第一章：病原生物学概述1.1 病原生物学的定义和研究范围1.2 病原生物的分类和特点1.3 病原生物与宿主的关系1.4 病原生物的传播途径和控制策略第二章：细菌2.1 细菌的基本结构和特点2.2 细菌的分类和命名2.3 细菌的感染机制和致病因素2.4 细菌感染的诊断和治疗第三章：病毒3.1 病毒的基本结构和特点3.2 病毒的分类和命名3.3 病毒的感染机制和致病因素3.4 病毒感染的诊断和治疗第四章：真菌4.1 真菌的基本结构和特点4.2 真菌的分类和命名4.3 真菌的感染机制和致病因素4.4 真菌感染的诊断和治疗第五章：寄生虫5.1 寄生虫的基本结构和特点5.2 寄生虫的分类和命名5.3 寄生虫的感染机制和致病因素5.4 寄生虫感染的诊断和治疗第六章：免疫学基本概念6.1 免疫学的定义和重要性6.2 免疫系统的基本组成和功能6.3 抗原和抗体的概念及相互作用6.4 免疫应答的类型和调节机制第七章：细胞免疫7.1 细胞免疫的基本原理7.2 T细胞的分化和功能7.3 细胞毒性T细胞和辅助性T细胞的作用7.4 细胞免疫在疾病中的作用和应用第八章：体液免疫8.1 体液免疫的基本原理8.2 B细胞的分化和功能8.3 抗体的产生和多样性8.4 体液免疫在疾病中的作用和应用第九章：免疫缺陷性疾病9.1 免疫缺陷性疾病的基本概念9.2 先天性和获得性免疫缺陷疾病的类型9.3 免疫缺陷性疾病的原因和临床表现9.4 免疫缺陷性疾病的预防和治疗第十章：疫苗和免疫预防10.1 疫苗的基本概念和种类10.2 疫苗的免疫机制和效果评价10.3 疫苗的发展和使用10.4 疫苗安全和疫苗可预防的疾病第十一章：实验室诊断与应用11.1 病原生物学实验室的基本设备和操作11.2 细菌、病毒、真菌和寄生虫的实验室诊断方法11.3 免疫学实验室检测技术11.4 病原生物学实验室在疾病诊断和控制中的作用第十二章：抗感染药物及其应用12.1 抗感染药物的分类和作用机制12.2 抗生素、抗病毒药物、抗真菌药物的特点和应用12.3 抗感染药物的耐药性和防治策略12.4 抗感染药物的合理使用和药物管理第十三章：传染病流行学13.1 传染病的概念和基本特征13.2 传染病的传播途径和流行病学参数13.3 传染病流行的预测和控制策略13.4 传染病疫情监测和报告制度第十四章：生物安全和生物防护14.1 生物安全的基本概念和级别14.2 生物防护措施和设备14.3 实验室生物安全事故的预防和应对14.4 生物恐怖主义和生物武器的控制第十五章：病原生物学与免疫学的前沿进展15.1 病原生物学研究的新技术和方法15.2 免疫学研究的新发现和理论发展15.3 病原生物学与免疫学在临床应用中的新进展15.4 未来病原生物学与免疫学发展的趋势和挑战重点和难点解析重点：1. 病原生物学的定义、分类、特点以及与宿主关系。
病毒感染的检查方法与防治原则
效抑制 HIV gp120与 T 细胞 CD4 分子结合；新霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素，可作
3. 蛋白酶抑制剂：沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、替拉瑞韦、波普
瑞韦、西咪匹韦 4. 整合酶抑制剂：拉替拉韦、艾维雷韦
5. 神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦
医学微生物学（第9版）
二、干扰素和干扰素诱生剂
1. 干扰素（IFN）
具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于 HBV、HCV 人类疱疹病毒和乳头瘤病毒等感染的治疗。
用病毒复制中的调控因子，阻断 RNA 与蛋白质的结合，从而干扰病毒 RNA 的复制。
医学微生物学（第9版）
五、治疗性疫苗
是一种以治疗疾病为目的的新型疫苗，主要有 DNA 疫苗和抗原抗体复合物
第二节
病毒感染的特异性预防 prevention of viral infection
医学微生物学（第9版）
一、人工主动免疫常用生物制品
1. 灭活疫苗（inactivaed vaccine） 通过理化方法将具有毒力的病毒灭活后制成灭活疫苗，这种疫苗失去了感染
性但仍保留原病毒的抗原性，常用的有肾综合征出血热疫苗、狂犬病疫苗、甲型
炎病毒VP1结构蛋白、HBsAg及狂犬病病毒刺突糖蛋白等。
4. 基因工程疫苗（genetically engineering vaccine） 采用DNA重组技术，提取编码病毒保护性抗原基因，将其插入载体，并导入细
菌、酵母菌或哺乳动物细胞中表达、纯化后制成的疫苗。例如目前已广泛使用的重
医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检
原则：与细菌类似 •用于分离培养的标本： 采取采取急性期标本、使用抗生素处 理防细菌污染
无菌操作、低温保存、尽快送检
•血清学诊断的标本： 双份血清？
早期采集
标本的采集和送检六原则
无菌采集 采集合适的标本
采集双份血清
尽快送检 正确标记
❖ 种类：常用的传代细胞有HeLa（宫颈癌）细胞、KB（口 腔癌）细胞、HEp-2（喉癌）细胞、Vero（非洲绿猴肾） 细胞等。
❖ 特点及作用：由于传代细胞系能有规律地持续传代，容
易保存（-70℃~-196℃）且对某些病毒易感，因此，在
诊断、科研等非疫苗生产的项目中常被采用。目前广泛 用于病毒的实验室诊断工作，根据病毒对细胞的亲嗜性 ，选择敏感的细胞系使用传代细胞系
病毒1:100稀释
病毒1:1000稀释
中性红染色：活细胞呈红色，受病毒感染破坏的细胞不着色
三、病毒感染的诊断
1.病毒形态学检查 2.病毒成分（病毒蛋白和核酸）检查 3.病毒感染的血清学（病毒抗体）检查
❖ 标本类型？ 与细菌标本类似 ❖ 好的标本？ 正常无菌性体液 ❖ 标本内容物一般需要含有宿主细胞
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒的实验室诊断方法
动物接种
病 毒
鸡胚培养
分离培养方法（金标准）
检 细胞培 养 测 病毒成分检测
活细胞
血清学诊断
（一）病毒的分离培养
1.动物接种
❖ 最原始的病毒培养方法 多用于没有敏感细胞进行细胞培养的病毒 （乙肝、丙肝、丁肝、戊肝病毒等）
二倍体细胞培养(diploid cell culture )
艾滋病性病防治条例
艾滋病性病防治条例第一章总则第一条为预防和控制艾滋病、性病的发生、传播和蔓延，保护公众身心健康，根据有关法律、法规规定，结合本市实际，制定本条例。
第二条本条例适用于本市行政区域内的艾滋病、性病防治工作。
第三条本条例所称艾滋病，是指人类免疫缺陷病毒（艾滋病病毒）引起的获得性免疫缺陷综合征。
本条例所称性病，是指除艾滋病之外的淋病、梅毒、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、软下疳、生殖器疱疹、性病性淋巴肉芽肿以及国家规定的其他性传播疾病。
第四条艾滋病、性病防治实行属地管理，坚持预防为主、标本兼治、综合治理的原则。
第五条市、县（市、区）人民政府领导艾滋病防治工作，将其纳入国民经济和社会发展计划，所需防治经费列入本级财政预算。
第六条市卫生行政部门主管全市艾滋病、性病防治及其监督管理工作。
县（市、区）卫生行政部门主管本行政区域内的艾滋病、性病防治及其监督管理工作。
市、县（市、区）人民政府其他部门在各自的职责范围内做好艾滋病、性病防治工作。
第七条各级疾病预防控制机构、健康教育机构、卫生监督机构和医疗机构是艾滋病、性病防治的专业机构，在各自职责范围内做好艾滋病、性病防治工作。
第八条市、县（市、区）人民政府对在艾滋病、性病防治工作中做出显著成绩的单位和个人，给予表彰和奖励。
对因参与艾滋病、性病防治工作致病、致残、死亡的人员，按照有关规定给予补助、抚恤。
第二章预防与控制第九条市、县（市、区）人民政府及其有关部门应当对公民加强法制教育和社会公德教育，提倡文明健康的生活方式，有计划地开展艾滋病、性病防治知识宣传活动。
卫生、人口和计划生育、农业、民政等部门应当编写、印发适合农村地区的宣传材料，在农村开展多种形式的艾滋病、性病防治知识宣传活动。
广播、电视、报刊等新闻媒体应当无偿开展艾滋病、性病防治知识的宣传，定期播放或者刊登有关的公益性广告。
第十条教育部门应当将预防艾滋病、性病和青春期性健康知识纳入初级中学、普通高级中学和中等职业学校、高等学校的健康教育计划。
第三章病毒
（四） 装配：
装配是病毒核酸和病毒蛋白质在宿主细 胞内合成子代病毒粒子的过程。 大多数DNA病毒的装配是在细胞核中进 行（痘病毒等除外），大多数RNA病毒 在细胞质中进行；有被膜的病毒从细胞 中获得被膜。
（五） 释放：
释放是病毒粒子从感染细胞内转移到外 界的过程。方式一般有两种： （1） 没有被膜的DNA或RNA病毒，在 装配完成后合成溶解细胞壁的酶，以裂 解寄主细胞的方式使子代病毒一齐释放， 如：T4等。释放量一般在100---100000个 左右。病毒可反复感染周围细胞，从而 使寄主出现空斑、枯斑或其它症状。 （2） 有被膜的病毒以出芽方式释放，多 为动物病毒，如流感病毒，疱疹病毒等。 (3)植物病毒依靠胞间连丝在细胞间扩散。
二、温和噬菌体和溶源性细菌：
如大肠杆菌入噬菌体只是将其DNA整合在寄主细胞的 核酸分子中，并随寄主细胞的分裂而分配到子细胞中， 这种噬菌体称为温和噬菌体，又把整合在寄主染色体 上的噬菌体或病毒核酸称为原（前）噬菌体或原（前） 病毒，而含有原噬菌体的细菌称为溶源性细菌。 溶源细菌对同源噬菌体有免疫性，即从一种溶源菌中 释放的噬菌体不感染同一种溶源菌。因此要测定溶源 菌中的噬菌体必须在溶源菌平板上同时加入敏感的非 溶源性指示菌。 温和性噬菌体一般用括号（）表示，写在寄主细菌菌 株号的后面。如E、coliK12（入），表示入噬菌体是 一种温和噬菌体，寄生在大肠杆菌K12菌株细胞内。 细菌溶源化和非溶源化主要取决于温和噬菌体的CI基 因。若CI突变则会裂解细菌细胞。
（三） 生物合成：
病毒的生物合成包括核酸复制和蛋白质合成两 部分。大部分DNA病毒在宿主细胞核内合成 DNA，在细胞质内合成蛋白质，绝大部分RNA 病毒其RNA和蛋白质都在细胞质中，也有少数 例外情况。 有些病毒的生物合成必须依靠另一种病毒的 帮助，如腺病毒卫星病毒，尽管它也有自己的 DNA，但不能单独在寄主细胞内增殖，只有与 腺病毒一起存在时才能在核中自由复制。腺病 毒又称助长病毒，病毒卫星病毒又称缺损病毒。
艾滋病防治条例（2019年修订）
艾滋病防治条例（2019年修订）文章属性•【制定机关】国务院•【公布日期】2019.03.02•【文号】中华人民共和国国务院令第709号•【施行日期】2019.03.02•【效力等级】行政法规•【时效性】现行有效•【主题分类】艾滋病防控正文艾滋病防治条例（2006年1月29日中华人民共和国国务院令第457号公布根据2019年3月2日《国务院关于修改部分行政法规的决定》修订）第一章总则第一条为了预防、控制艾滋病的发生与流行，保障人体健康和公共卫生，根据传染病防治法，制定本条例。
第二条艾滋病防治工作坚持预防为主、防治结合的方针，建立政府组织领导、部门各负其责、全社会共同参与的机制，加强宣传教育，采取行为干预和关怀救助等措施，实行综合防治。
第三条任何单位和个人不得歧视艾滋病病毒感染者、艾滋病病人及其家属。
艾滋病病毒感染者、艾滋病病人及其家属享有的婚姻、就业、就医、入学等合法权益受法律保护。
第四条县级以上人民政府统一领导艾滋病防治工作，建立健全艾滋病防治工作协调机制和工作责任制，对有关部门承担的艾滋病防治工作进行考核、监督。
县级以上人民政府有关部门按照职责分工负责艾滋病防治及其监督管理工作。
第五条国务院卫生主管部门会同国务院其他有关部门制定国家艾滋病防治规划；县级以上地方人民政府依照本条例规定和国家艾滋病防治规划，制定并组织实施本行政区域的艾滋病防治行动计划。
第六条国家鼓励和支持工会、共产主义青年团、妇女联合会、红十字会等团体协助各级人民政府开展艾滋病防治工作。
居民委员会和村民委员会应当协助地方各级人民政府和政府有关部门开展有关艾滋病防治的法律、法规、政策和知识的宣传教育，发展有关艾滋病防治的公益事业，做好艾滋病防治工作。
第七条各级人民政府和政府有关部门应当采取措施，鼓励和支持有关组织和个人依照本条例规定以及国家艾滋病防治规划和艾滋病防治行动计划的要求，参与艾滋病防治工作，对艾滋病防治工作提供捐赠，对有易感染艾滋病病毒危险行为的人群进行行为干预，对艾滋病病毒感染者、艾滋病病人及其家属提供关怀和救助。
病毒基本性状、感染与免疫、诊断与防治【共58张PPT】
• 病毒体形态结构
• 对脂溶剂敏感性
二、病毒分组
• DNA病毒
• RNA病毒
• DNA 和RNA 逆转录病毒
• 嗜肝DNA病毒科（Hepadnasviridae） • 逆转录病毒科（ Retroviridae ）
三、亚病毒
1. 类病毒（Viroids）
• 很小 (250～400nt) ，杆状 RNA 分子，有二级结构
– 装配（assembly） – 成熟（maturation） – 释放（ release ）
1. 吸附和穿入
• 接触→结合→特异性吸附（病毒配体位点与细胞膜特异受体结合）
融合 --- 包膜病毒
• 穿入
胞饮 --- 无包膜病毒
HIV
2. 脱壳
--病毒在细胞内必须脱去衣壳，其核酸方可在宿主细胞中发挥指令作用 --多数病毒在穿入时已在细胞的溶酶体酶作用下脱壳并释放出病毒的基因组 --少数病毒的脱壳过程较复杂。这些病毒往往是在脱衣壳前，病毒的酶已在起转录 mRNA的作用
目录
• 病毒的基本性状
–第一部分 病毒形态、结构和基因组特点
–第二部分 病毒的增殖 –第三部分 病毒的分类
• 病毒感染与免疫
• 病毒感染的实验室诊断与防治原则
一、病毒的增殖特点
• 必须中活细胞中进行 • 敏感细胞
• 增殖方式为自我复制（self replication）
二、病毒的复制（Replication of viruses）
3. 核衣壳（Nucleocapsid）的对称形式
核衣壳：核心+衣壳
•螺旋对称型（Helical Symmetry）
•二十面体立体对称型（ Icosahedral Symmetry ）
(7)病毒的实验室诊断与防治
• 二倍体细胞培养(Diploid cell cultune)
• 原代细胞只能传2-3代细胞就退化，在多数细胞 退化时，少数细胞能继续传下来，且保持染色体 数为二倍体，称为二倍体细胞。二倍体细胞生长 迅速，并可传50代保持二倍体特征，通常是胚胎 组织的成纤维细胞。
• 二倍体细胞一经建立，应尽早将细胞悬 浮于10%二甲基亚砜中，大量分装安瓿 贮存于液氮（-196℃ ）内，做为“种 子”，供以后传代用。目前多用二倍体 细胞系制备病毒疫苗，也用于病毒的实 验室诊断工作。
• （一）尽早采取
• 在发病初期（急性期）采取，较易检出 病毒，越迟阳性率越低。
• （二）部位适宜
• 由感染部位采取，如呼吸道感染采取鼻 咽洗漱液或咯痰；肠道感染采取粪便； 脑内感染采取脑脊液；皮肤感染采取病 灶组织；有病毒血症时采取血液。
• （三）冷藏速送
• 病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得 检材应尽快送检。若距离实验室较远，应 将检材放入装有冰块或干冰的容器内送检。 污染检材，如鼻咽分泌液、粪便等应加入 青霉素、链霉素或庆大毒素等，以免杂菌 污染细胞或鸡胚，而影响病毒分离。
• 原代细胞培养(Primary cell culture)
• 用胰蛋白酶将人胚（或动物）组织分散成单细胞， 加一定培养液，37℃孵育1-2天后逐渐在培养瓶 底部长成单层细胞，如人胚肾细胞、兔肾细胞。 原代细胞均为二倍体细胞，可用于产生病毒疫苗， 如兔肾细胞生产风疹疫苗，鸡成纤维细胞产生麻 疹疫苗，猴肾细胞生产脊髓灰质炎疫苗。因原代 细胞不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。
• 含轮状病毒的粪便标本经热变性处理，点 到膜上，使用轮状病毒体外转录的放射标 记探针做斑点杂交，敏感性高于ELISA （酶联免疫吸附剂测定enzyme linked immunosorbent assay ）。肠道病毒也可 用互补的DNA探针做斑点杂交。
病毒感染机制及防治
病毒感染机制及防治病毒感染是一种广泛存在的健康问题，它可以带来不可预估的后果和风险。
为了有效地控制这一问题，我们需要深入了解病毒感染的机制和预防措施。
本文将介绍病毒感染的机制及其防治方法。
一、病毒的感染机制病毒感染的机制可以分为三个主要步骤：吸附、侵入和复制。
1. 吸附病毒首先必须接触到宿主细胞才能感染其它细胞。
病毒通过细胞表面的受体识别结构（例如糖蛋白、蛋白质），选择性地附着在宿主细胞上。
2. 侵入一旦附着在宿主细胞上，病毒通过细胞膜和鬼门关，使病毒RNA或DNA进入细胞的质膜，在宿主细胞内形成核仁和原代体。
随着时间的推移，它逐渐变成病毒颗粒，这些颗粒可以释放到其它细胞或宿主体内。
3. 复制当病毒从宿主细胞中爆发时，它会释放大量新的病毒颗粒。
这些颗粒可以侵入周围的细胞，再次演化病毒，以至于形成繁殖链。
二、防治病毒感染目前，防治病毒感染的方法主要有以下几种。
1. 医学预防：接种疫苗疫苗是预防感染的最有效方法之一，接种疫苗可以使人们产生对细菌感染的免疫力，并减少或消除对其它细胞的侵袭和复制。
一些疫苗已被开发出来，用于预防流感、医院病毒、水痘、白喉、肝炎等疾病。
2. 食品预防：健康饮食人们可以通过保持良好的饮食习惯来提高免疫力。
研究表明，维生素C、维生素D、维生素E和锌等微量元素能够增强人体的免疫力，同时蛋白质和热量足够的食品能够给予人体充足的能量和营养。
3. 生活习惯：注意个人卫生人们可以通过保持良好的个人卫生来预防一些感染病。
通过妥善洗手、及时消毒、避免人群密集场合、避免借用他人的个人用品等方式，有效地控制了疾病的传播。
4. 医疗治疗：药物治疗当感染已经发生时，可能需要进行药物治疗。
病毒感染的治疗很困难，无法使用抗生素，因此可以使用抗病毒药物来控制症状和复制过程。
但是需要注意，抗病毒药物的使用应在专业人士的指导下进行，因为失当的药物使用可能会引起更严重的并发症。
结语在日常生活中，我们需要加强对病毒感染的预防和控制。
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染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况
的调查，在临床诊断上较少使用。
2021/3/3
2.补体结合试验 (complement fixation
test,CF test)
• 用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病 人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病 毒的内部抗原，同种异型间常有交叉， 故特异性较中和试验低。但CF抗体出 现较早，消失较快，故CF阳性可作为 近期感染的指标。
2021/3/3
三、病毒感染的血清学诊断
•
原理是用已知病毒抗原来检测病
人血清中有无相应抗体，故须待病人感 染后体内产生抗体时才能检出。
•
另外，在采取临床标本及病人血
清应注意病程，必须采取患者急性期血
清与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学
试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高
出4
2021/3/3
1.中和试验(neutralizing test,NT test)
2021/3/3
• 病毒 +毒 +特异性抗体 +鸡RBC=不凝集
•
（血凝抑制试验）
2021/3/3
四、病毒感染的快速诊断
•
是病毒在活体内或细胞培养中被特异性
抗体中和而失去感染性的一种试验。
•
中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)
是作用于病毒表面抗原 (衣壳或包膜) 的抗体，
同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而
且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一
定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感
2021/3/3
• 2.鸡胚培养 • 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化
9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同， 将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿 囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。
2021/3/3
2021/3/3
2021/3/3
• 3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞 培养 (cellculture)法
胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)， 具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞 的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测 定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有 相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA， HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。
2021/3/3
• 3.干扰现象(interference) • 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其
• 3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和 病后2～3w内各取1份血清，以便对比双 份血清抗体效价的动态变化。
2021/3/3
二、病毒的分离与鉴定
• (一)
• 1.动物接种 • 是最原始的病毒培养方法，根据病毒
种类不同，选择敏感动物及适宜接种部 位，如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可 接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔 角膜或皮内。
2021/3/3
3.血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test, HI test)
• 具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等 的红细胞，称血凝现象。这种现象能被 相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相 应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面 的HA与红细胞的结合。本试验简易、 经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型 脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调
② 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜， 可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融 合细胞。
③ 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养 细胞中形成胞浆或核内的包涵体。
2021/3/3
2021/3/3
病毒培养时出现的CPE
• 2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) • 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细
• 是将离体活组织块或分散的组织细胞 加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定 中的最常用的基本方法。
2021/3/3
2021/3/3
病毒在培养细胞中增殖的指标
1. 细胞的变化
① 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变， 称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、 聚集、坏死、溶解或脱落等。
第三章病毒感染的诊断与防治
第一节 病毒感染的诊断
常用的病毒学诊断方法包括： 病毒的分离鉴定 病毒的血清学检查 病毒蛋白和核酸的检测
2021/3/3
一、标本的采取与送检
• 应注意下列原则：
• 1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易 受污染的标本，要进行病毒分离培养时， 应使用抗生素。
• 2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低 温保存并尽快送检。
2021/3/3
• 2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法 • 该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞
发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍 的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观 察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能 感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计 算出50%组织细胞感染量（ 50%tissue culture infectious dose,TCID50)。
他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰 在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹 病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它 能干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的 增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。
2021/3/3
• 4.细胞代谢的改变 • 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH
值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后 发生了变化。这种培养环境的生化改变 也可作为判断病毒增殖的指标。
2021/3/3
(二) 病毒的数量与感染性测定
• 1.蚀斑测定
• 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释 的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再 覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞 培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单 层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 ( 如中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏 的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个 蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成 单位 (plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染 性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。