实验一 质粒DNA的提取
质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，通过提取DNA可以进一步进行PCR扩增、基因克隆等实验。
本实验旨在提取质粒DNA，质粒DNA是存在于细菌细胞质中的环状DNA分子，具有重要的研究价值。
本文将详细介绍实验的步骤、原理以及结果分析。
材料与方法：1. 细菌培养液：选择含有目标质粒的细菌进行培养，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如LB培养基。
3. 细菌培养器具：如培养皿、离心管等。
4. DNA提取试剂盒：选择适合的DNA提取试剂盒，如酚/氯仿法或硅胶柱法。
5. 离心机：用于离心细菌培养液以获取细菌沉淀。
6. 紫外可见分光光度计：用于检测DNA的纯度和浓度。
实验步骤：1. 细菌培养：将含有目标质粒的细菌接种于LB培养基中，培养过夜，使细菌充分繁殖。
2. 收集细菌：将培养液离心，以12000转/分钟离心10分钟，将细菌沉淀收集。
3. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使细菌细胞裂解，释放DNA。
4. 蛋白质沉淀：加入酚/氯仿混合液，离心分离上层的DNA溶液和下层的蛋白质。
5. DNA沉淀：将DNA溶液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，轻轻倒置离心管，使DNA沉淀出来。
6. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余的盐和杂质。
7. DNA溶解：用适量的去离子水溶解DNA沉淀，得到纯净的DNA溶液。
8. DNA浓度检测：用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
结果与分析：通过实验，成功提取了质粒DNA，并进行了浓度检测。
根据实验结果，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，这对于后续的实验设计和操作非常重要。
此外，实验中还可以通过凝胶电泳等方法对提取的DNA进行进一步的分析，如确定DNA的大小和完整性。
结论：本实验成功提取了质粒DNA，并获得了纯净的DNA溶液。
通过浓度检测和进一步的分析，我们可以进一步了解DNA的特性和应用。
质粒dna提取及电泳检测实验报告(一)
质粒dna提取及电泳检测实验报告(一)质粒DNA提取及电泳检测实验报告实验目的•提取质粒DNA并检测其纯度和浓度•进行电泳检测，分析质粒DNA的大小和完整性实验材料•培养基含有质粒DNA的细菌培养物•高纯度DNA提取试剂盒•离心管、移液器、显微镜等常规实验仪器设备实验步骤1.收取 mL培养基含有细菌的培养物样品，放入离心管中。
2.将离心管置于高速离心机中，以12000 rpm离心5分钟，使细菌沉淀于离心管底部。
3.弃掉上清液，轻轻地加入合适的缓冲溶液悬浮沉淀的细菌细胞。
4.加入适量的裂解液使细菌细胞裂解，使质粒DNA释放到溶液中。
5.加入蛋白酶K进行蛋白质降解，使DNA更易提取。
6.加入冷乙醇混合液，沉淀DNA。
7.使用离心机离心，将沉淀的DNA分离出来。
8.用缓冲液洗涤提取的DNA，去除杂质。
9.使用专门的仪器或试剂盒检测提取的质粒DNA的浓度和纯度。
10.备取质粒DNA样品，进行电泳检测。
结果与分析•通过电泳检测，可以观察到质粒DNA的带状图案。
•根据带状图案的迁移距离，可以初步判断质粒DNA的大小。
•如果带状图案清晰且没有模糊的杂带，说明质粒DNA的完整性良好。
•通过测量提取的质粒DNA的浓度和纯度，可以进一步评估实验结果的可靠性。
结论•本实验成功提取并检测了质粒DNA，并通过电泳检测初步分析了其大小和完整性。
•经测量，质粒DNA的浓度和纯度符合实验要求。
•本实验结果可应用于后续实验或研究中，为进一步分析质粒DNA 的功能提供了基础。
实验注意事项•操作过程需严格遵守实验室安全规范，避免接触有毒或有害物质。
•仪器设备使用前需检查并确保正常工作。
•实验室内要保持清洁，避免污染样品。
•测量和记录数据时，要仔细操作，确保准确性和可重复性。
参考文献（如果有的话，请列出相关参考资料）。
质粒dna提取实验报告
质粒dna提取实验报告实验目的：本实验旨在通过提取细菌质粒DNA，了解细菌质粒的结构、基因组成和使用纯度较高的质粒DNA的重要性，为后续分子生物学实验打下基础。
实验器材：- 细菌- LB液体培养基- 1.5mL微量离心管- 离心机- 动态温度水浴仪- 恒温振荡器- 超声波清洗器- 洁净平台和无菌技术用品- 始终细切割刀和取样刷- 蒸馏水、2% SDS、醋酸铵、90%乙醇、异丙醇和干燥机实验步骤：1. 制备细菌：在LB液体培养基中培养要提取质粒DNA的细菌，由于质粒DNA在对数生长期达到最高含量，因此在显微镜下观察到对数生长期的细菌时进行取样。
2. 细胞打破和溶解质粒：离心细胞，倒去培养基，加入10mL蒸馏水，用振荡器在4℃下以300rpm摇晃3小时。
然后沉淀细胞，在70℃下干燥30分钟。
随后加入150μL1%SDS和其他化学试剂混合物，使用至少15次的起始细切割刀切成绒毛状的颗粒，浸泡在低盐度醋酸铵中2小时以上。
3. 质粒DNA纯化：将浸泡了细菌绒毛颗粒的混合物离心，抽取上清液，将其加入2x体积的异丙醇与等体积的75%，然后用再生明胶抑制蛋白质在异丙醇中凝聚。
离心，除去异丙醇上清液，加入70%乙醇洗涤。
最后用干燥机吸干。
4. 质量分析：分析提取到的质粒DNA的浓度和纯度，使用分光光度计对其进行光谱分析，以检测质粒DNA的A260/A280比例和A260/A230比例。
通过比较纯度，然后将质粒DNA冻保存至-20℃或-80℃。
实验结论：本实验成功提取了细菌的质粒DNA，并进行了纯化和分析。
质粒DNA的提取和纯化是基于一系列物理和化学方法和技术的，实际操作中需要仔细操作，耐心等待，严格注意洁净操作，才能达到最佳的提取和纯化效果。
通过本实验，我进一步了解了在分子生物学和遗传学中质粒DNA的重要性，它可适用于多种研究项目和应用，例如质粒克隆、基因编辑、基因表达、和质粒蛋白质互作等。
实验一、质粒DNA的提取及检测实验报告
实验一、质粒DNA的提取及检测【实验目的】1、掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤2、掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术3、学会PCR操作的基本技术第一部分质粒DNA的提取一、实验原理：碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
在pH值介于～这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
二、仪器与试剂1、仪器恒温摇床、台式离心机2、试剂溶液I、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶、酚、氯仿三、实验步骤1、将2mL含相应抗生素（Amp:50μg/mL）的LB液体培养基加入到试管中，接入含pUC19质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。
2、取培养物倒入微量离心管中，4000r/min离心2min。
3、吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
4、将细菌沉淀悬浮于100μL溶液I中，充分混匀，室温放置10 min。
5、加200μL溶液Ⅱ（新鲜配制），盖紧管皿，混匀内容物，将离心管放冰上5min。
6、加入150μL溶液Ⅲ（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀。
冰上放置15min。
7、12000r/min，离心15min，将上清转至另一离心管中。
8、向上清中加入等体积酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min，离心5min，将上清转移到另一离心管中。
9、向上清加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10min。
12000r/min，离心5min。
质粒DNA的提取实验报告
质粒DNA的提取一、实验方法碱裂解法抽提质粒DNA二、实验原理基于质粒DNA与染色体DNA变性与复性的差异。
三、实验步骤1）质粒提取1. 10,000g,1min离心收集1.5－5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中。
2. 加入100μl溶液1，振荡至彻底悬浮。
3. 加入200μl溶液2，立即轻柔颠倒离心管6次，使菌体充分裂解，随后将离心管冰上放置3分钟4. 加入150μl溶液3，立即温和颠倒离心管数次，冰上放置3分钟，10，000g离心10min。
5. 将步骤4的上清转移至新的离心管（尽量去除杂质），加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇混合均匀10，000g离心5min。
6. 将步骤5的上清转移至新的离心管，加入2倍体积的无水乙醇，室温放置5－10min，沉降DNA7. 10，000g离心10分钟,弃乙醇，保留沉淀，加入1ml 70％的乙醇洗涤沉淀，10，000g离心5分钟8. 倒掉乙醇溶液，用吸水纸吸净管壁上的水珠，室温蒸发痕量乙醇9. 加入适量含RNase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA2）质粒鉴定→琼脂糖凝胶电泳灌胶：胶中加入荧光染料(SYBR Green I)加样：质粒+上样缓冲液→混匀电泳结果观察：UV灯下四、实验结果五、实验分析裂解细胞中除含有质粒DNA外，还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质，因此用碱裂解法除去杂质1、防止DNA裂解：Solution 11）、所含糖增加溶液黏度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切作用降解2）、所含EDTA抑制酶活性2、溶解与变性：Solution21)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性2）离子型表面活性剂SDS可溶解膜蛋白3、沉降与复性：Solution31)质粒DNA复性2）在钾盐中，染色体DNA形成缠连的不溶性网状结构，和不稳定的大分子RNA以及变性的蛋白质和细菌碎片等一起沉淀预期结果为剩余质粒DNA4、琼脂糖凝胶电泳1）荧光染色染料分子可嵌入双链DNA分子配对碱基之间2）琼脂糖可起到电泳和分子筛的作用，因所带电荷、分子量大小和构型不同，泳动速度不同六、误差分析实验失败，本组实验出现4条带，3明1暗，明亮处应为DNA分子数最多的，为质粒DNA，质粒DNA前有较暗的两条带，推测其中一条为未复性质粒DNA，可能Solution2处变性过长，不易复性，或Solution3处时间过短，复性不充分。
生物学实验 质粒DNA的提取
实验8 质粒DNA的提取（碱裂解法）一、实验目的了解碱裂解法提取质粒的基本原理和主要应用，掌握碱裂解法提取质粒的实验方法和各种试剂在提取过程中的作用。
二、实验原理碱裂解法是利用细菌染色体DNA与质粒DNA结构的大小差异来分离质粒DNA的。
碱性（pH 12.0~12.5）条件可以破坏碱基配对，宿主和质粒DNA的碱基之间的氢键被破坏。
当条件恢复正常时（加入酸性试剂中和），共价闭合环状的质粒DNA会迅速准确地恢复配对，重新形成完全天然的超螺旋分子；而较大的细菌染色体DNA分子则难以复性，会交联形成不溶于水的线团结构，缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀下来，而质粒DNA则留在上清液中，用异丙醇沉淀、70 %乙醇洗涤即可获得质粒DNA。
三、仪器设备微量取液器（2 μL；20 μL；200 μL；1 000 μL），tip头，手掌型离心机，1.5 mL离心管, 恒温水浴，制冰机，超净工作台，恒温培养箱。
振荡器，离心机，金属浴，电泳仪，凝胶成像仪。
四、实验试剂（1）溶液Ⅰ：50 mmol/L葡萄糖；20 mmol/L Tris·HCl（pH = 8.0）；10 mmol/L EDTA（pH=8.0），高压蒸汽灭菌（121 ℃，0.105 Mpa）20 min。
4 ℃贮存。
（2）溶液Ⅱ（现用现配）：0.2 mol/L NaOH；1 g / L SDS。
（3）溶液Ⅲ（pH 4.8）：每100 mL溶液中含5 mol/L乙酸钾60 mL；冰乙酸11.5 mL；H2O 28.5 mL。
（4）RNase（10 mg / mL），LB液体培养基，氨苄青霉素，异丙醇，70 %（V / V）乙醇，无菌水。
五、实验方法（1）分装3 mL LB液体培养基和3 μL氨苄青霉素（50 mg/mL）于15 mL玻璃试管中。
（2）用灭菌牙签挑取一白色单克隆，放入玻璃管内，置37 ℃恒温摇床中以200转/min培养，至OD600=2.0。
实验一-碱裂解法提取质粒DNA
实验一-碱裂解法提取质粒DNA
碱裂解法是一种常用的质粒DNA提取方法。
下面是进行碱裂
解法提取质粒DNA的实验步骤：
1. 培养细胞：选择所需的质粒含有目标基因的细菌，如大肠杆菌等，并在适当的培养基中培养细菌，使其达到对数生长期。
2. 收集细菌：将培养好的细菌菌液转移到离心管中，并进行离心，以沉淀细菌。
3. 溶解细菌：加入一定浓度的碱液（例如0.2N NaOH）使细
菌溶解。
通常使用细菌菌液总量的1/5体积的碱液，并轻轻摇
晃混合。
4. 添加中和液：将等体积的中和液（例如3M乙酸酸化乙酸钠
溶液）加入到溶解好的细菌溶液中，并迅速而轻轻地混合。
5. 离心：将混合液进行离心，以除去沉淀的细菌残渣和碱液。
6. 提取DNA：将上一步离心得到的上清液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，并轻轻摇晃，使DNA沉淀。
7. 沉淀DNA：进行高速离心，使DNA沉淀。
8. 弃去上清液：弃去上清液，保留沉淀的DNA。
9. 洗涤DNA：使用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除残留的盐类和碱液。
10. 干燥DNA：使用洗涤干净的乙醇或空气干燥DNA沉淀。
11. 溶解DNA：用适当的缓冲液（如TE缓冲液）溶解DNA。
12. 储存DNA：将溶解好的DNA储存于适当的温度和条件下，用于后续实验。
质粒DNA提取+电泳+质粒酶切实验报告
实验一：质粒DNA提取+琼脂糖凝胶电泳*实验目的：1.掌握质粒DNA提取的基本原理和方法2.掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法*实验原理：1.DNA提取原理1）DNA提取要求：①保证DNA一级结构的完整性；②排除其他分子的污染，使其纯度尽可能提高。
2）DNA样品来源：①培养细胞；②组织样本；③血液样本。
3）主要试剂和材料及仪器：试剂和材料：RNA酶A、细胞悬浮液（Buffer P1)、细菌裂解液（Buffer P2）、中和液（Buffer P3）、漂洗液PW1、漂洗液PW2、洗脱液、质粒DNA吸附柱、滤液收集管仪器：微量移液器、台式微量高速离心机、电泳仪、水平电泳槽、紫外透射仪或凝胶成像系统。
2.电泳原理：1）概念：电泳是指带电粒子在电场中向电势降低的方向移动的现象，移动速度与粒子大小及所带电荷多少有关。
在一定pH条件下，核酸及蛋白质等生物分子呈带电状态，可以进行电泳分析。
2）迁移方向：DNA由负极向正极迁移3）影响目标物迁移速率的因素：分子大小、构象、凝胶浓度、琼脂糖种类、电泳缓冲液、嵌入染料的存在和使用电压等。
4）荧光强度（得率）：荧光的强度是同DNA片段的大小或数量成正比的。
5）琼脂糖凝胶电泳原理：(1)关于电泳技术:电泳常用于分离和纯化那些分子大小电荷性状或分个构象有所不同的生物大分子一尤其是蛋白质和核酸。
正因为如此，电泳已成为生物化学和分子生物学中应用最为广泛的技术之一，其中在分子生物学实验中最为常用的是琼脂糖凝胶电泳。
琼脂糖是一种海藻多糖，琼脂糖胶分离范围很大，但其分辨率却相对较低。
通过改变琼脂糖凝胶的浓度,应用标准的电泳技术可以分离200到50,000 bp大小的DNA片断。
一般琼脂糖胶浓度在0.5%到4%之间，琼脂糖凝胶浓度越大,凝胶就越硬。
较高浓度的琼脂糖胶有利于较小的DNA片断分离,而较低浓度的琼脂糖胶则可以分离较大的DNA片断。
(2)琼脂糖凝胶电泳条带的观察:通过观察示踪染料的迁移距离可以判断DNA的迁移距离。
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实验一 质粒DNA的提取 一、原理
采用碱变性发抽提取质粒DNA。该法是基于染色体DNA与质粒DNA的 变性预复性的差异而达到分离目的的。在PH大于12的碱性条件下，染色 体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开变性。质粒DNA的大部分氢键也断 裂，但超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当以 pH5.2的乙酸钠高盐缓冲液调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复到 原来的构型，保存在溶液中。而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状 结构。通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物 等一起沉淀下来而被除去。 二、方法
盖，激烈振荡，并加入固体Tris摇匀调pH(一般100ml苯酚约加l克固体
Tris)分层后测上层水相pH至7.6一8.0。从分液漏斗中放出下层酚相于
棕色瓶中，并加一定体积0.1mol／L Tris-HCI(pH8．o)覆盖在酚相上，
置4℃冰箱贮存备用。酚是一种强腐蚀剂，能引起腐蚀性损伤，操作时
应戴上眼镜和手套。如果皮肤上溅上了酚，应用大量水冲洗或用肥皂水
冲洗。酚在空气极易氧化变红，要随时加盖，也可加入抗氧化剂o．
1％8一羟基喹啉及o．2％β—巯基乙醇。
5．无水乙醇
置-20℃冰箱中保存备用
6．70％乙醇
置-20℃冰箱中保存备用
7．核糖核酸酶(10mg／ml)
配制方法：称取l0mg核糖核酸酶A(RNaseA，美国SIGMA或中科院上海
生物化学研究所东风试剂厂)。于灭菌的微离心管内，加1 ml 100mmol
EDTA,0.1mol/L NaOH,0.5%SDS)
配制方法：
NaOH O.4 g
SDS 0.5 g
加80mlTE缓冲液溶解。加TE缓冲液定容至lOOml.
3．3.0mol／1醋酸钠溶液(pH5.2)
配制方法：醋酸钠 24.6g
用70ml重蒸水溶解，再用冰乙酸大约调pH至5.2,加重蒸水定容至
100ml。
1. 挑取一环在LB固体培养基平板上生长的含PUC57质粒的大肠杆 菌，接在含有100μg/ml氨苄青霉素（Amp）的LB液体培养基 （5ml/15ml试管）中，37℃震摇培养过夜。
2. 将1.5ml菌液加入微离心管中，14000r/min，离心10秒，其取上 清液。反复数次，收集全部菌体。
3. 倾去上清，滤纸吸干。 4. 加30μlTE缓冲液（10mmol/L Tris—HCl,1mmol/L
过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须进行洗涤或重沉淀。
乙醇沉淀DNA．一般采用低温条件，这是由于在低温条件下．分子
运动大大减少，DNA易于聚合而沉淀。为了使质粒DNA能充分沉淀，一般
保存时间总是过长的，同时也要视样品的体积而异，在微量离心管中的
样品要比40毫升离心管中DNA样品的量少，冷却就较迅速。大量提取DNA
时，目前习惯上常采用如下几种方法：
保存在家用冰箱结冰盒内 过夜
保存在-2℃亡冰箱内
过夜
保存在-70℃冰箱内
30mm～2h
放置干冰中（约-20℃）
30min
放置干冰加酒精中(约-70℃) 16mm
放置在液氮缸中液氮的气相内，不可以浸在液氮中(温度在-198℃ 左右)5～15min。
除了用乙醇外还可用1倍体积丙醇(相当于2倍体积乙醇)使DNA沉 淀。用异丙醇的好处是要求离心的液体体积小，但异丙醇挥发性不如乙 醇，最终除区其残留部分的难度更大。 此外，异丙醇能促使蔗糖、氯化钠等溶质与DNA一起沉淀，在-70℃时， 更易发生，所以一 般以乙醇沉淀为宜，除非要求液体体积很小。
EDTA,pH8.0）,振荡起菌体。 5. 加30μlTENS溶液（10mmol/L Tris—HCl, pH8.0，1mmol/L
EDTA,0.1mol/L NaOH,0.5%SDS）,震荡10秒至溶液变粘稠。 6. 加150μl 3.0mol/LnaAC,震荡3—5S，14000r/min，离心3分钟，
纯净的酚使用时不需要重蒸。市售的酚一般为红色或黄色结晶体，使用
之前必须重蒸，除去能引起DNA和RNA断裂和聚合的杂质。将苯酚置于
65℃水浴中溶解，重新进行蒸馏，当温度升至183℃时，开始收集在若
干个棕色瓶中。纯酚和重蒸酚都应贮存在-20℃使用前取一瓶重蒸酚于
分液漏斗中，加入等体积的lmol／L Tris-HCI(pH8.0)缓冲液，立即加
／pH5.0的NaAC溶液(完全溶解)，即为10mg／ml RNase，为了破坏脱氧
核糖核酸酶(DNase，置80℃水浴中10min或100℃水浴2 min，然后置一
20℃(或家用冰箱的冰格内)保存。
四、材料
1．菌种： 大肠杆菌(pUC57) 2．培养基 LB液体培养基 精解蛋白胨 3g 酵母浸出粉 1.5g 氯化钠 3 g 葡萄糖 0.6g
2．在基因操作实验中．保存或提取DNA过程中，一般都采用TE缓冲 液，而不选用其它 的缓冲液。虽然很多缓冲系统．如磷酸盐缓冲系统，硼酸系统都符合细 胞内环境的生理范围，可以作为DNA的保存液，但在某些实验中，这些 缓冲对会影响实验。如在转化实验中，要用到Ca+，如果川磷酸盐缓冲
液，磷酸根将与Ca2+产生Ca(PO4+沉淀；在各种工具酶反应时，不同的 酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高盐离子浓度，有的则 要求低盐浓度，采用Tris—HCI缓冲系统，不存在金属离子的干扰作 用；作中的EDTA是二价离子 Mg2+、Ca2+等的螯合剂，可降低系统中的这些离子浓度，而这些离产是 脱氧核糖核酸酶的辅 助因子，所以EDTA可以抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用。
三、试剂 1．TE缓冲液(10mmol/L Tris—HCl,1mmol/L EDTA,pH8.0) 配制方法：
Tris
1.211g
EDTA.Na 0.037g
用800ml重蒸水溶解，用分析纯盐酸调整pH至8.0，加重蒸水定容至
1000ml。
2．TENS溶液：(10mmol/L Tris—HCl, pH8.0，1mmol/L
沉淀细胞碎片及染色体DNA。 7. 上清液转移至另一微离心管中，甲等体积胞和酚，混匀，
12000r/min,离心2分钟。 8. 上层水相转移至另一位离心管，加2倍量冷水乙醇，
14000r/min，离心20分钟。 9．倾去乙醇，加入7o％冷乙醇淋洗。 10．倾去乙醇，滤纸吸于，真空抽吸2～3分钟。 lI．加人50μlTE缓冲液，溶解DNA。 12，加入1μl核糖核酸酶(10mg／m1)，14000r/min,离心2s，使核糖核 酸酶与管底液体混匀。 13．37℃水浴30min。 14．样品放一20℃冰箱保存备用。
化和带水的办法是将酚重蒸，除去氧化的部分，再用Tris—HCl缓冲液
饱和，使酚不至于夺去DNA中的水，带走部分DNA。饱和酚中加上8一羟
基硅啉及巯基乙醇，防止酚氧化，还是弱的螫合剂．可抑制DNase。由
于有颜色．溶解在酚中后，使酚带上
颜色，便于酚相与水相的分肉，酚饱和后，表面盖上一层Tris水溶液，
合沉淀，一般实验中，用2倍体积
的无水乙醇与DNA相混合。使乙醇的最终含量占67％左右。由此可预
见，也可用95％乙醇
沉淀DNA，但是用95％乙醇使总体积增大．而DNA在醇溶液中总有一定程
度的溶解。因而
DNA损失也增大，影响收率。
乙醇沉淀DNA溶液时，DNA溶液中应该有一定的盐浓度，中和DNA表
面电荷。如果溶液中盐浓度太低，要加NaAC或NaCl至最终浓度O.1一
1．质粒DNA提取的方法很多，有碱变性法、羟基磷灰石柱层析法、 溴化乙锭一氯化铯 梯度超离心法等。本次实验是一种小量快速提取法。小量快速提取法也 有多种，但基本原理 和步骤是一致的．包括下述步骤：(1)裂解菌体细胞；(2)质粒和染色体 DNA的分离；(3)除去蛋白质。RNA及其他影响限制性酶活性的细胞成 分；(4)除去提玑过程中使用的去垢剂、盐 等。
O.25mol／l在pH 8左右的DNA溶液中，DNA分子带负电荷，加一定浓度的
NaAC或NaCl使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电