小鼠
小鼠
新生小鼠体重为1-1.5g，体长约2cm。 3日龄，小鼠的皮肤由红色转为白色，有毛色的仔畜可以看到颜色。 4-6日龄，小鼠双耳与皮肤分开耸立。 7-8日龄，小鼠四肢发育，能出窝走动，身上绒毛变白，体重达3-4g。 9-11日龄，能闻声，皮毛长得柔软如丝。 12-13日龄，仔鼠开眼，门齿萌出，开始食固体饲料。 2周龄，仔鼠到处活动，体重达5.5-6g。 3周龄，小鼠体重10-12g，可以离乳。 在4周龄时，成熟早的品系开始出现性周期。小鼠体重达16-18g。 在5周龄时，小鼠体重达22-24g。 在7周龄时，小鼠体重达26-30g，性成熟早的品系睾丸降至阴囊。 在10周龄时，小鼠体重达30-35g，可以配种。
小鼠胆小怕惊，性情温顺，一般不会主动攻击 人，但仍保持一些野生习性。 小鼠喜居光线暗淡的安静环境，昼伏夜动，在 晚上进食、交配、分娩，傍晚后1～2小时和黎 明前是活动高峰期。小鼠对外界环境反应敏感， 适应性差，怕强光或噪音刺激。 雄鼠好斗，性成熟的雄鼠在一起，易发生互斗 而咬伤。有刮毛现象。 小鼠喜欢啃咬，因小鼠属啮齿类动物，牙齿无 牙根，不停地生长。因此，小鼠靠啃咬磨牙来 抵消牙齿的不停生长。
对口渴敏感，水份在体内的周转期快，需 要供给小鼠充足的饮水。小鼠饮水量约为47ml／天。小鼠尿量小，一次排尿仅1-2滴， 且是高度浓缩的。尿液中含有较多的蛋白 质和肌氨酸酐。
食物中蛋白质含量要求高，对维生素缺乏 敏感
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
性成熟，体成熟。雌性35~50日龄，雄性45~60 日龄，适配时间为65~90日龄。 自主排卵，刺激性排卵 性周期： 雌鼠一年四季都有性的活动，性周 期4~5天，发情后2~3小可排卵，排卵可延长 至3~4天。 阴栓，妊娠期（20-22d），假妊娠 产后性周期（24h），哺乳期（18-23d） 生殖期（1年），每胎8-15只,1年6-10胎
常用实验动物生物学——鼠
免疫学研究
免疫缺陷小鼠 裸小鼠：T细胞缺失。可进行异体肿瘤移植。目前已
移植人体肿瘤达40种以上。
SCID小鼠：可将人的免疫组织或免疫细胞移植到小 鼠身上，使其具有人的部分免疫系统（SCID-hu小 鼠），用于研究人类免疫系统的发育过程，以及 免疫细胞的分化和功能研究。
口唇裂的发生率达20％。淋巴细胞性白血病发病 率为6％。
BALB/c：1913年获得小鼠白化株，经近亲繁 殖20代以上育成，毛色为白色。
乳腺肿瘤发生率低，但对致癌因子敏感。 肺癌发病率雌性26％，雄性29％。对放射 性照射极为敏感。
DBA：分为DBA/1和DBA/2两个品系，1977年 由美国实验动物中心引进，毛色均为浅灰 色。
三、小鼠在医学、生物学的应用
小鼠应用非常广泛，几乎涉及到医学、生物 学研究的各个领域，对其内容要熟悉。
药物评价和毒性试验
１、药物筛选试验：筛选试验多半从小鼠做起， 筛选各种药物对疾病有无防止作用，通过筛选获 得每个药物的疗效效果后，再用其他动物进一步 肯定。
２、毒性试验：如急性毒性试验、亚急性和慢性 试验。测定药物（或化学制剂）的LD50或药物致 癌性试验等常选用小鼠；
重１.5g，断乳时可达10-Fra bibliotek6g。成年体重20-40g。 喜黑暗，昼伏夜动。 喜欢群居，雄性好斗。 胆小怕惊，对环境反应敏感，适应性差，汗腺不
发达，怕热，高温容易中暑。
繁殖特性
发育迅速，性成熟早
小鼠出生后20日龄左右即可离乳，此时体重达 10-16g，稍加饲育即可用于实验及科研（18-22g）。 ６-７周龄性成熟。雌性35-50d、雄性45-60d便可 交配繁殖。配种最好在65-90日龄。 性周期短，繁殖力强
小鼠的主要生物学特性
小鼠的主要生物学特性一、生理学特性(一)动物学分类小鼠(mouse, Mus musculus)属脊椎动物门、哺乳纲、啮齿目、鼠科、鼷鼠属动物。
小鼠来源于野生鼷鼠，从17世纪开始用于解剖学研究及动物实验。
20世纪初，小鼠被广泛用于遗传学、发生学和肿瘤学等学科领域的研究工作。
(二)一般特性新生小鼠赤裸无毛，全身为红色，闭眼，两耳与皮肤粘连，体重仅1.5g，体长20mm左右。
3日龄脐带脱落，开始长毛。
7～8日龄开始爬动，下门齿长出。
9～11日龄听觉发育齐全。
12～14日龄睁眼，长出上门齿，开始采食和饮水。
3周龄可离乳独立生活。
4周龄雌鼠阴腔张开。
5周龄，雄鼠睾丸降落至阴囊，开始生成精子。
成年小鼠体重随品系不同略有差别，体重为18～40g，体长为110mm左右。
小鼠寿命2～3年。
小鼠成熟早，繁殖力强，一般雌鼠35～50日龄，雄鼠45～60日龄性成熟。
雌鼠性周期4～5天，妊娠期19～21天，哺乳期20～22天，每胎产仔5～16只，年产6～10胎，生育期为1年。
小鼠交配后10～12h，雌鼠在阴道口形成1个白色的阴道栓，这是交配成功的标志。
(三)解剖学特点(1)齿式为2(门1/1，犬0/0，前臼0/0，臼齿3/3)＝16，门齿终身生长，需经常磨损来维持齿端的长度。
(2)小鼠无汗腺，尾部有4条明显的血管，两侧的静脉和腹侧的动脉比较明显，便于进行采血和静脉注射。
(3)小鼠胃容量小，成年小鼠胃容量为1～1.5ml，不耐饥饿，肠道较短，盲肠不发达，以谷物性饲料为主。
脾脏有明显造血功能，雄性脾脏大于雌性约50％。
(4)淋巴系统发达。
长骨骨髓终身具有造血功能。
(5)雌性为双角子宫。
乳腺发达，胸部3对，腹部2对，分布范围很广，可达胸部、腹部，甚至胸背部。
雄性幼年时睾丸藏于腹腔，性成熟后下降到阴囊。
(6)小鼠有褐色脂肪组织，在后背皮下左右肩胛骨之间分布比较明显。
二、行为学特性(1)小鼠性情温顺，易于抓捕，不会主动咬人。
非同窝雄性易斗，常咬伤背部和尾部。
小鼠大鼠实验动物生物学特性
6 dbdb小鼠
糖尿病小鼠,有单隐性突变基因引起。 表现型为１年龄时血糖浓度平均31、3mmol/L,雌
鼠无生殖能力。 临床症状:肥胖、高血压、蛋白尿、多尿,最后可
因酮尿而死亡。 常见品系有:C57BL/ksJ-db。
➢ C3H/HeJ-gld ,1984从Heston →Jax;gld 1号染色体上隐性基因,自身免疫病。
➢ C3H/A, ➢ C3Hf/H源自 ,低乳腺癌株小鼠。4、 C57BL
➢ 来源:1921年Little从lathrop 处得到动物,开始b×s,育成 数个近交系。
♀57 ×♂52→C57BL →1937 C57BL/6→1947→C57BL/6S
饲料消耗量少,一只成年小鼠得食料量为4～8克/天,饮水 量4～7毫升/天,排粪量1、4～2、8克/天,排尿量1～3毫升/天, 需要得饲养条件也较简单,因个体小,可节省饲养场地。
2、形似梭, 面部尖突,眼鲜红,耳耸立呈半圆形 3、乳头5对: 胸部3对、腹部1对、腹股沟1对。 4、毛色品型多: 白色,黑色,野生色,褐色,
➢ 血压就是117mmHg; ➢ SPFA 500-700天,寿命最
长达1200天。
5、 DBA
➢ 起源:1909年Little建立 →1930→(DBA/12)、DBA/1、 DBA/2、(DBA/212)→1947 Hummel→1948 Jax( ?+117)→1965→Hoffman, 1967→NIH,1986→IMLAS。
阴门变小,阴道 壁变薄
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3、体温和水调节能力差 对环境变化敏感
没有汗腺,仅耳、尾散热,饮水量4-7ml/d,怕热畏寒。
小鼠
小鼠，学名Musmusculus，在生物分类学上属脊椎动物门、哺乳动物纲、啮齿目、鼠科、鼷鼠属、小家鼠种。
野生小家鼠经过长期人工饲养和选择培育，已育成许多品种（品系）的小鼠，并广泛应用于生物学、医学、兽医学领域的研究、教学以及药品和生物制品的研制和检定工作。
一、一般特性1．体型小小鼠是哺乳动物中体型最小的动物，出生时体重仅1.5g，体长20mm左右，1.5月龄达18g～20g，供实验使用；2月龄达25g左右。
成年小鼠可达到30～40g，体长110mm左右，尾长和体长通常相等，雄性动物体型稍大。
由于体型小，适于操作和饲养；且占据空间少，适于大量生产。
2．生长期短、成熟早、繁殖力强小鼠出生时赤裸无毛，全身通红，两眼紧闭，两耳粘贴在皮肤上，嗅觉和味觉功能发育完全；3日龄脐带脱落，皮肤由红转白，有色鼠可呈淡淡的颜色，开始长毛和胡须；4～6日龄，双耳张耸立；7～8日龄，开始爬动，下门齿长出，此时被毛已相当浓密；9～11日龄，听觉发育完全，被毛长齐；12～14日龄，睁眼，上门齿长出，开始采食饮水；3周龄可离乳独立生活，雌鼠阴腔张开；25日龄雄鼠睾丸从腹腔降至阴囊，35日龄开始产生精子。
雌鼠一般在35～45日龄，雄鼠在45～60日龄性发育成熟。
雌鼠属全年多发情动物，发情周期为4～5天，妊娠期19～21天，哺乳期20～22天，有产后发情的特点，特别有利于繁殖生产，一次排卵10～20个，每胎产仔数8～15只，年产6～9胎，生育期为1年，寿命可达2～3年。
3．性情温顺，胆小怕惊，对环境反应敏感。
小鼠经过长期培育驯养，性情温顺，易于抓捕，一般不会咬人，但在哺乳期或雄鼠打架时，会出现咬人现象。
小鼠对外界环境的变化敏感，不耐冷热，对疾病抵抗力差，不耐强光和噪声。
4．小鼠喜黑暗安静环境，因门齿生长较快，需经常啃咬坚硬物品，习惯于昼伏夜动，其进食交配分娩多发生在夜间。
小鼠群养时，雌雄要分开，过分拥挤会抑制生殖能力，雄鼠群居时易发生斗殴。
小鼠
实验动物研究所
四、近交系小鼠
1. 我国常用近交系小鼠：
(1).DBA 小鼠: 最古老的近交系小鼠，外来引进品系，淡棕色，有DBA/1 和DBA/2两个亚系，目前常用的是DBA/2 DBA/l 小鼠的主要特性
①对实验室结核杆菌的易感性高，对鼠斑伤寒补体C5敏感；对鼠伤寒 沙门氏菌补体抗性较强； ②P1534肿瘤株的生长率为50%； ③老年雌鼠有乳腺癌的发生，经产母鼠的乳腺癌发病率为61.5%； ④对疟原虫感染有抵抗力； ⑤老龄雌鼠部份心脏有钙质沉着
实验动物研究所
2. 按特征和使用目的分类：
(3).按各种人类疾病需要培育： 心血管疾病小鼠--DBA等品系； 自身免疫性疾病小鼠--NZB/N、NZB×NZW等； 脑积水病小鼠--C57BL/KaLwN、B10、D2/nSnN等； 白内障小鼠--STAR/N等； 多尿症小鼠--STR/N、STRIN等； 疟疾小鼠--C58/LWN、DBA/1JN、C57L/N等；
实验动物研究所
2. 按特征和使用目的分类：
(4).供药物和代谢研究需要培育： 免疫球蛋白缺乏小鼠--CBA/N等； 胰岛素敏感小鼠--C57BR/CdJN等； 维生素K缺乏小鼠--CBA/CaHN等
(5).不同研究领域需要培育： 肿瘤研究：BALB/c、C57BL、C57BR等； 生理学研究：SWR、C3H、BALB/c、C57BL、C57BR等； 遗传学研究：C57BL等； 免疫研究：C3H、C57BL、DBA/2等
低癌株--C57BL/6N、C58、津白Ⅰ号。 诱发癌品系：乳腺癌小鼠--C3H、A品系；
胸腺癌小鼠--BALB/c、C57BR、R111等； 肺癌小鼠--BALB/c、C57BL、SWR、A等； 肝癌小鼠--C3H、C3He、C3Hf等； 白血病小鼠--C57BL、C58、AKR等； 卵巢癌小鼠--C3H等
小鼠
一、分类（Taxonomy ）Class：Mammalia纲（哺乳动物纲）；Order：Rodentia目（啮齿目）；Family：Muridae 科（鼠科）；Genus：Mus属（小鼠属）；Species：musculus种（小鼠种）概述：1、广泛地使用：在美国每年使用5千万只遗传上明确界定基因之近交系小鼠作为研究使用。
2、DBA/２是由Clarence Cook Little于1900左右所开发出之第一个近交系小鼠，约在1 909年用于毛皮基因和肿瘤新生疾病的研究。
其它由Little所开发出的小鼠品系包括A，C BA，C3H，C57BL/６，和C57BL/10。
其它工作人员则开发出BALB/c品系小鼠。
3、远交系小白鼠（Outbred white or “Swiss”）或瑞士小白鼠是由Dr. Clara Lynch于19 20初期所培育出来的，和一般近亲品系一样常被使用。
4、小鼠第一个连结的系谱是在1910年代初期及1920年代后期间所开发出来的。
在1929年，Roscoe B. Jackson纪念实验室（Jackson Lab ）由Little设立了一个以研究哺乳动物遗传学为中心的实验室。
在1935年前，界定了小鼠基因11个部位。
大多数是毛皮颜色和眼睛颜色之基因。
最近则辨识了超过1000个基因部位。
以往小鼠的开发利用主要的进展主要包括组织兼容性的概念。
（大部份是由1980年诺贝尔医学奖得主Dr . George Snell 的努力所致。
他的工作主要是同源异基因品系（congenic strains）的开发）。
5、小鼠主要的优点a、基因特性明确b、提供大多数的近亲品系，同源异基因品系（congenic），及重组近亲品系c、体型小，允许大数量的使用d、可以无菌和无病原性的生产，以及可以有高生殖率的性能6、小鼠主要的缺点由于小鼠体型小，很难进行外科手术或获得大量的采样。
二、解剖及组织学1、外表前后脚掌各有5只脚趾；最具代表性的是前爪第一脚趾有一扁平的指甲。
小鼠解剖知识点总结
小鼠解剖知识点总结小鼠（Mus musculus）是一种常见的啮齿动物，也是实验室中常用的动物模型之一。
对小鼠的解剖学知识的掌握对于实验室工作者来说非常重要，因为对小鼠的解剖可以帮助科研人员更好地了解小鼠的内部结构和器官功能，从而为其实验研究提供更准确的数据和结果。
本文将总结小鼠解剖知识点，帮助读者更好地了解小鼠的内部结构和解剖特点。
一、小鼠的外部特征小鼠的头部呈圆锥形，眼鼻较突，触须发达，上颌略长于下颌，耳大而外露，耳垂圆圆的，四肢短小，尾巴较长。
小鼠的毛色一般为灰色或棕色，也有白色或黑色的个体。
在解剖时，我们可以根据这些外部特征来初步判断小鼠的品种、性别和年龄。
二、小鼠的骨骼系统1. 小鼠的颅骨小鼠的颅骨由颅底骨和颅顶骨构成，颅骨的形状因品种而异。
在解剖时，我们可以通过观察颅骨的形状和结构来初步判断小鼠的品种和年龄。
2. 小鼠的脊柱小鼠的脊柱由颈椎、胸椎、腰椎和尾椎组成，其中颈椎的数量为7，胸椎的数量为13，腰椎的数量为6，尾椎的数量为28-31。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的脊柱来了解其躯干的骨骼结构和解剖特点。
3. 小鼠的四肢骨骼小鼠的四肢骨骼包括肱骨、桡骨、骨和尺骨，其形态特征因品种而异。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的四肢骨骼来了解其四肢的骨骼结构和特点。
4. 小鼠的骨骼连结小鼠的骨骼连结主要是通过关节连接，以及肌腱和韧带的连接。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的骨骼连结来了解其骨骼系统的连结结构和功能。
三、小鼠的消化系统1. 小鼠的口腔小鼠的口腔由牙齿、舌头和颊粘膜组成，其中牙齿主要包括门齿、臼齿和犬齿。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的口腔结构来了解其牙齿的形态特征和生长情况。
2. 小鼠的食道小鼠的食道位于颈部，连接口腔和胃。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的食道来了解其食道的结构和功能。
3. 小鼠的胃小鼠的胃位于腹部，具有前胃、中胃和后胃三部分。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的胃来了解其胃的结构和功能。
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骨髓间充质干细胞对大鼠急性肾损伤的保护作用刘源邢淑华*（徐州医学院药理学教研室江苏徐州221004）【摘要】目的：观察外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)对庆大霉素诱导的大鼠急性肾损伤是否具有治疗作用，并探讨其机制。
方法：建立庆大霉素腹腔注射大鼠急性肾损伤模型。
SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、MSCs 治疗组、生理盐水组，于建模后4d处死大鼠，检测血尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)水平，HE染色观察肾组织病理变化，免疫印迹及RT-PCR检测肾组织肝细胞生长因子（HGF）水平。
结果：模型组大鼠的BUN及Scr均显著高于正常对照组，肾小管损伤严重；而MSCs 治疗组大鼠的BUN及Scr水平较生理盐水组显著降低，肾小管损伤病理明显减轻。
此外，结果显示肝细胞生长因子（HGF）在MSCs治疗组肾组织内表达明显高于生理盐水组。
结论：MSCs输注可促进庆大霉素所致急性肾小管损伤的修复，其作用机制可能是通过上调肾组织中肝细胞细胞生长因子的表达。
【关键词】骨髓间充质干细胞；庆大霉素；急性肾损伤；肝细胞生长因子Role of bone marrow mesenchymal stem cells in the recovery of acute renal injury LIU Yuan, XING Shuhua. Department of Phamarcology, Xuzhou Medical College, Xuzhou Jiangsu, 221009Abstract Objective To investigate whether the exogenous mesenchymal stem cells can promote the recovery of acute renal injury induced by gentamycin sulphate and to explore its possible mechanism. Methods Acute renal injury rat model was established by intraperitoneal injection of gentamycin sulphate. SD rats were randomly divided into four groups which were normal control group, acute renal injury group, MSCs injection group and saline group. The changes of rat renal function and pathology were observed four days after the model established. The expression of hepatocyte growth factor in kidney were examined by western blot and RT-PCR. Results The levels of BUN and Scr in model group and saline infusion group were much higher than those in the normal control group. While comparing with those in saline group, the levels of BUN and Scr in the MSCs injection group were much lower. At the same time, expression of growth factors HGF were obviously higher in MSCs-treated kidneys. Conclusions Bone marrow mesenchymal stem cells can promote the recovery of acute renal tubular epithelial cells damage caused by Gentamycin Sulphate.The mechanism may partly depend on up-regulating the excretion of hepatocyte growth factor in renal mieroenvironment.Key words: mesenchymal stem cells, gentamycin sulphate, acute kidney injury, hepatocyte growth factor前言急性肾小管坏死(ATN)是急性肾功能衰竭(ARF)最主要的病因，是临床危重症之一。
而药物可直接导致肾小管坏死，如中成药，抗肿瘤药，抗菌药物等均可能导致肾损伤；其中，氨基糖苷类抗生素是诱发药源性肾损伤的最常见因素，而庆大霉素作为治疗革兰氏阴性菌感染有效的氨基糖苷类抗生素应用广泛。
因此，其对肾脏的毒性作用和导致急性肾小管坏死、急性肾衰竭的可能性不容忽视。
目前对包括药物所致的急性肾衰竭的治疗方法主要是替代治疗，其机制仅是维持机体内环境的稳定，被动的等待肾小管上皮细胞自身再生的修复。
因此，有待研究新的方法以主动促进ARF时肾小管的修复。
近年来，干细胞疗法在急慢性肾脏病治疗中的应用日益受到关注。
研究证实[1,2]干细胞移植能够明显改善肾小管损伤且有利于肾功能恢复。
目前研究较多的是来源于骨髓的间充质干细胞，该细胞在体内可分化为肾小管上皮细胞，可分泌肝细胞生长因子(HGF)以促进肾发育和急性肾损伤后肾小管重建[3-6]。
由于MSCs 具有易于获取、体外增殖能力强且性能稳定、低免疫原性等特点，使其在再生医学的应用中具有突出的优势[7]。
目前在动物和临床研究中，应用MSCs治疗一些损伤性、慢性、先天性、或免疫排斥性疾病都取得了很好的效果[8-11]。
鉴于MSCs的具有重要的临床应用潜能，本文旨在研究MSCs对庆大霉素诱导的大鼠急性肾损伤的治疗作用，并探讨其作用机制，深化对干细胞可塑性的认识，并为肾损伤的防治提供新的研究思路。
作者单位：221009 徐州，徐州医学院药理学教研室通讯作者：邢淑华，Email：xingshuhua@1.材料和方法1. 1动物分组健康SD大鼠40只，购自徐州医学院实验动物中心；其中雄性16只，重(100 ± 50) g，作为骨髓间充质干细胞移植的供鼠；雌性24只，重(230 ± 30) g，用于实验模型制作。
随机分为4组，每组6只大鼠：（1）正常对照组(N)、（2）ATN模型组(M)、（3）MSCs治疗组（模型+MSCs）、（4）生理盐水组(模型+生理盐水)。
1. 2MSCs 的分离和培养取健康成年SD大鼠(150 g左右)，颈椎脱臼处死，75%的乙醇浸泡5 min，无菌条件下分离双侧胫骨和股骨，剪除一侧骨骺端暴露骨髓腔，用注射器吸取2 ml培养液反复冲出骨髓腔内的细胞，接着通过200目的钢丝网，制成单细胞悬液。
将骨髓细胞接种于含有10%胎牛血清的L-DMEM培养液的培养瓶中，置于37 ℃、饱和湿度的5%，CO2培养箱中培养，待细胞长到80%融合时消化、传代，扩增培养，通过多次传代对细胞进行纯化。
取3代大鼠MSCs，用胰蛋白酶消化后收集，生理盐水重悬成1×106个细胞/ml 的细胞悬液，采用台盼兰拒染法检查细胞活力在95%以上，备用于细胞移植。
1. 3ATN模型的建立SD大鼠在接受注射前12h至注射后8h禁饮。
腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100mg／(kg·d)，连续7d，实验结束后处死大鼠。
1. 4MSCs移植MSCs移植治疗组大鼠在腹腔注射庆大霉素后，立即开始MSCs移植，经尾静脉注入MSCs 悬液(细胞数为1×106)，生理盐水组，使用无菌生理盐水代替MSCs。
注射完毕，压迫止血。
正常对照组和ATN模型组不注射MSCs。
1. 5标本的采集及检测MSCs移植后第4天，将大鼠以10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，开胸，腹主动脉采血，生化试剂盒检测血尿素氮（BUN）和肌酐(Scr)水平；取部分肾脏新鲜组织冻存于液氮中，以待提取蛋白和RNA：其余组织以4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片。
1. 6 Western blot检测大鼠HGF 以下操作均在冰水浴中进行：从液氮中取出标本，称取每只大鼠标本100mg，加入1mlRAPI裂解液冰上裂解后超声匀浆，用恒温冷冻离心机( 4 ℃，12000 r/min )离心10 min，取上清，用EP管分装，作好标志。
置于- 80 ℃冰箱储存备用。
取等量蛋白的样品，进行聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE) 分离后，用湿转法电泳转膜，封闭液室温封闭2 h，然后加入1:200的HGF多克隆抗体，4 ℃过夜。
Washing buffer洗膜3次，每次5 min，加入二抗室温反应2 h，Washing buffer洗膜5次，每次3 min。
以NBT/BClP显色，结果以图像处理仪分析。
每个实验重复做3次( n= 3)。
1. 7 RT-PCR检测HGF mRNA 采用Trizol法提取新鲜冰冻组织RNA，按照试剂盒说明书进行。
取2μgRNA，按TIANGEN逆转录试剂盒的说明行逆转录。
所用因子的引物序列及扩增产物长度见表1。
PCR反应条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性45 s，62 ℃(GAPDH)、54 ℃(HGF)退火30 s，72 ℃延伸60 s，最后72 ℃延伸5 min。
GAPDH和HGF的循环数分别为33、35。
上述产物经2％琼脂糖凝胶电泳(100 V)后，在紫外光照下观察摄片，用计算机图像分析仪扫描分析，测定各条带的信号面积和灰度，然后以同一样品的GAPDH信号值作校正。
mRNA=(HGF信号面积的灰度值)/(GAPDH信号面积的灰度值)。
每个实验重复做3次( n= 3) 。
表1 引物序列及扩增长度项目正义反义长度HGF GAGGCGAGGAGAAACGCAAAC ATCCACGACCAGGAACAATGAC 423bp GAPDH ATGGAAGAAGAAATCGCCGC ACACGCAGCTCGTTGTAGAA 269bp 1. 8统计学处理采用SPSS 16.0 统计软件，数据以x± s 表示，采用t检验进行组间比较，P< 0.05表示差异有统计学意义。
2.结果2. 1MSCs形态学观察经体外培养后，相差显微镜下可见大量大鼠MSCs细胞，荧光显微镜下观察显示所有MSCs呈梭形，边缘清晰整齐，贴壁生长，呈成纤维细胞形态生长，呈旋涡状(图1)。