紫外可见分光光度计的介绍及使用
紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc） 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况，包括测试样品、测 试波长、测试结果等，以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于 稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于 正常工作状态，以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量， 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序，释放计算机内存，或更新数据 处理软件。
紫外可见分光光度计使用方法说明书
紫外可见分光光度计使用方法说明书1. 简介紫外可见分光光度计是一种常用的实验室仪器，用于测量溶液或物质的吸光度。
本说明书将详细介绍紫外可见分光光度计的使用方法，以帮助用户正确操作和获取准确的测量结果。
2. 准备工作在使用紫外可见分光光度计之前，需要进行一些准备工作。
首先，确保光度计处于水平放置的状态，以保证测量结果的准确性。
其次，接通电源并打开光度计，待其预热一段时间后即可进行测量。
3. 选择测量波长根据实验需要，选择合适的测量波长。
紫外可见分光光度计通常具有多种波长选择，可以通过调节波长选择器来进行设置。
根据样品的吸收特性和实验要求，选择适当的波长进行测量。
4. 样品处理在进行测量前，将待测样品处理好。
样品处理的步骤通常包括：溶解样品、稀释样品以适应仪器的测量范围等。
确保样品的质量和纯度对测量结果的影响最小化。
5. 样品装载使用吸光度池装载待测样品。
首先用清洁的无水棉球或纸巾擦拭吸光度池的外部，以确保其干净无尘。
然后用吸管或移液器将样品吸取到吸光度池中，注意避免空气泡存在。
6. 执行测量将装有样品的吸光度池放置于仪器的样品室内，轻轻关闭样品室的盖子。
调节光度计的曝光时间和增益，确保测量结果的稳定和准确。
然后按下测量按钮，开始记录吸光度的数值。
7. 记录和分析数据测量结束后，将测得的吸光度数值记录下来，可以使用电子表格软件或实验记录本进行记录。
根据实验需求，对数据进行必要的处理和分析，如计算样品的浓度或比较不同样品的吸光度差异等。
8. 清洁和维护测量完成后，及时清洁吸光度池和其他仪器部件，避免残留对后续测量的干扰。
关闭光度计电源，并妥善保管仪器。
如发现任何故障或异常，请及时联系维修人员进行处理，切勿私自拆解仪器。
本说明书介绍了紫外可见分光光度计的使用方法，希望能够帮助用户正确操作仪器并获得准确的测量结果。
在实际操作中，请务必严格按照仪器说明书和实验要求进行操作，以确保实验的顺利进行和结果的可靠性。
紫外可见分光光度计 普析
紫外可见分光光度计普析紫外可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域的研究和实验中。
本文将从紫外可见分光光度计的原理、应用以及操作步骤等方面进行介绍。
一、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计是利用物质对紫外可见光的吸收特性进行定量分析的仪器。
根据光的波长范围，可分为紫外光区和可见光区两部分。
紫外光区的波长范围为200-400 nm，可见光区的波长范围为400-800 nm。
紫外可见分光光度计的工作原理是通过光源产生的光经过样品后，被光电二极管或光电倍增管接收，形成光谱图，再通过计算机进行数据处理和分析。
在分析过程中，样品溶液的吸收特性会使光强发生变化，根据吸光度与物质浓度之间的线性关系，可以通过测量吸光度来确定物质的浓度。
二、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计在科研和实验中有着广泛的应用。
以下是其中几个常见的应用领域：1. 生物化学分析：紫外可见分光光度计可用于蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度测定和纯度分析，如蛋白质含量的测定、核酸的纯度检测等。
2. 药物分析：紫外可见分光光度计可用于药物的含量测定、质量控制和稳定性研究，如药物溶液的吸光度测定、药物的光解动力学研究等。
3. 环境监测：紫外可见分光光度计可用于水质、大气和土壤等环境样品的污染物分析和监测，如水中重金属离子的测定、大气中挥发性有机物的测定等。
4. 食品安全检测：紫外可见分光光度计可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的检测，如食品中硝酸盐含量的测定、食品中防腐剂的测定等。
三、紫外可见分光光度计的操作步骤使用紫外可见分光光度计进行实验时，需要按照以下步骤进行操作：1. 打开仪器电源，并预热一段时间，使光源和光电二极管稳定工作。
2. 根据实验需要选择合适的光源和检测器，设置光的波长范围。
3. 取一定量的样品溶液，注入样品池中，并调节样品池的位置，使光线通过样品溶液。
紫外可见分光光度计范围
紫外可见分光光度计范围紫外可见分光光度计是一种常用的光谱分析仪器，用于测量物质在紫外可见光波段的吸收和透过性质。
它能够提供物质吸收光谱的信息，帮助我们了解物质的组成和结构。
本文将介绍紫外可见分光光度计的基本原理、应用范围以及其在科学研究和工业生产中的重要意义。
一、紫外可见分光光度计的基本原理紫外可见分光光度计的基本原理是利用物质对特定波长光的吸收和透过性质来测量其浓度或含量。
它通过光源产生的连续光束，经过样品后，被光电传感器接收并转换为电信号。
根据样品的吸收特性，我们可以得到样品的吸光度，从而推算出其浓度或含量。
二、紫外可见分光光度计的应用范围紫外可见分光光度计广泛应用于医药、化学、生物、环境科学等领域。
它可以用于测定药品的纯度和含量，监测水质和空气质量，分析生物样品中的成分等。
以下是几个具体的应用范例：1.药物分析：紫外可见分光光度计可用于测定药物的纯度、含量和稳定性。
通过测量药物在特定波长下的吸收光谱，我们可以判断药物的质量，并及时调整生产工艺，确保药品的安全性和有效性。
2.环境监测：紫外可见分光光度计可用于监测水体和大气中的污染物含量。
例如，我们可以通过测量水体中溶解有机物的吸光度来评估水质状况，或者通过测量大气中气体的吸光度来监测空气污染物的浓度。
3.生物分析：紫外可见分光光度计可用于测定生物样品中的蛋白质、核酸和其他生物分子的浓度。
通过测量这些分子在紫外可见光波段的吸收光谱，我们可以了解其结构和功能，并进一步研究生物过程和疾病机制。
4.食品安全：紫外可见分光光度计可用于检测食品中的添加剂、污染物和有害物质。
例如，我们可以通过测量食品中色素的吸光度来判断其是否合格，或者通过测量食品中残留农药的吸光度来评估其安全性。
三、紫外可见分光光度计的重要意义紫外可见分光光度计在科学研究和工业生产中具有重要的意义。
它不仅为我们提供了分析物质的工具，还为我们研究物质的性质和反应机制提供了重要的信息。
以下是紫外可见分光光度计的几个重要意义：1.质量控制：紫外可见分光光度计可以用于药品、食品、化妆品等产品的质量控制。
标题 紫外-可见分光光度计的正确使用方法
标题紫外-可见分光光度计的正确使用方法紫外-可见分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）是一种用于测量物质吸收和透过性的仪器。
正确的使用方法对于确保实验结果的准确性非常重要。
以下是紫外-可见分光光度计的正确使用方法的参考内容。
1. 仪器的准备：a. 检查光源和检测器：确保光源和检测器都处于正常工作状态，并没有损坏或需要更换的零件。
b. 清洁样品室：使用干净的棉纱或镜头纸轻轻擦拭样品室的玻璃表面，以确保获取准确的测量结果。
c. 预热：根据仪器的说明书，预热光度计至指定温度。
这个步骤通常需要一些时间，所以在进行实验前需要提前预热。
2. 样品的准备：a. 清洁样品：使用适当的方法和溶剂清洁或稀释样品，以确保最佳的光学透过性。
b. 样品的体积：添加合适量的样品到样品室中，以确保光路完全填充，并能够提供准确的测量结果。
如果样品室不完全填充或过于拥挤，可能会影响测量结果。
3. 校准：a. 参考空白：在测量目标物质之前，先进行空白测量。
在样品室中添加溶剂或介质，然后进行测量，并将其设置为参考光谱。
这样可以消除背景的干扰，使测量结果更加准确。
b. 波长校准：根据仪器的说明书，确定正确的波长校准，以确保获得准确的吸光度值。
这通常需要使用校准滤光片或标准样品来进行波长校准。
4. 测量操作：a. 设置波长：根据需要的波长，将仪器设置在对应的波长。
b. 吸光度的测量：在样品室中放置样品，并使用仪器进行吸光度测量。
等待仪器测量完成或按照仪器的指示进行测量。
c. 重复测量：进行至少三次重复测量，并计算平均值，以减小可能的误差。
5. 数据分析：a. 数据记录：记录测量结果和相应的实验条件，包括波长、样品浓度等信息。
b. 数据处理：使用适当的软件对数据进行处理，如绘制吸光度曲线、计算浓度或其他所需的数据处理操作。
6. 仪器的关机：a. 进行所需的数据保存或导出。
b. 关闭光度计，按照仪器的说明书进行正确的关机操作。
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见（UV-Visible）分光光度计是用于测量物质在紫外和可见光区域的吸收和透射特性的仪器。
以下是使用紫外可见分光光度计的一般步骤：
1. 打开紫外可见分光光度计的电源，并保证仪器充分预热。
2. 设置光源和检测器。
选择合适的波长范围（紫外或可见光谱），以及光源和检测器的位置。
3. 使用背景校准。
将空白试剂槽放入样品槽中（样品槽通常是一个透明的玻璃或石英池），然后选择背景校准选项。
这将记录光通过样品槽的基线吸收。
4. 准备样品。
将待测样品溶液放入样品槽中。
确保样品槽没有气泡或污渍，以免影响结果。
注意，为了比较样品结果，可以将每个样品的浓度保持相对一致。
5. 设置波长。
选择测量波长，并调整仪器以使其与待测样品的最大吸收光谱相匹配。
某些仪器还允许选择多个波长以进行多重波长读数。
6. 开始测量。
按下“开始”或“测量”按钮，仪器将测量样品吸收光谱。
读数时间通常很短，大约为几秒到几分钟不等。
7. 记录结果。
读取仪器显示屏上的吸收值，并将其记录下来。
注意，部分仪器可以直接将结果导出到计算机或打印机上。
8. 清洁和关闭仪器。
在使用完毕后，使用适当的清洁溶液清洁样品槽，以防止残留污渍。
最后，将仪器关闭。
需要根据具体仪器的操作手册来设置和操作紫外可见分光光度计，因为不同的仪器可能有不同的步骤和功能。
UV-3型紫外分光光度计的原理及应用
紫外分光光度计应用系统
样品测定
1.在定量分析窗口中，单击“测量方法” 输入测量点数和相应的波长值及K0，K1 值，即可完成标准曲线的建立。
样品测量
2.单击“样品测量”选项进入测 试界面。
3.将参比溶液放入光路并校满刻度
紫外分光光度计应用系统
样品测定
4.将待测样品放入多联池架中,样品走到光路，单击工具栏中“ ” 弹出“样品测试”窗口，测试完成后输入样品名称，单击“确认” 添加到样品测试列表中，单击“取消”放弃本次测量值。
紫外可见分光光度计
内容导览
1
UV-3紫外可见分光光度计基本介绍
2
紫外可见分光光度计应用系统简易操作
UV-3紫外可见分光光度计
是分析试验行业中重要的质量控制仪器 之一，是常规实验室的必备仪器。
波长范围宽 190-1100nm 特 点
灵敏度高 功能强大
UV-3紫外可见分光光度计
分光光度法分析的原理
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作（标准曲线的建立）
3.单击“标准样品”选项进入标样 测试界面.
4.将参比溶液放入光路，点击工具栏B 图标校满刻度。
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作（标准曲线的建立）
5.将待测标准样品放入多联池架中
6.将待测标样走到光路中，单击“启动”按钮弹出 “标准样品测试”窗口，测试完成后输入标准样品 浓度和样品名称，单击“确认”添加到结果测试列 表中，单击“取消”放弃本次测量。
7.重复步骤6 完成所有标样测试，标准 曲线建立完成.
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作（标准曲线的建立）
8.在“拟合参数”中记录K0，K1值。 如图1 9.单击“拟合曲线”选项可查看到建立 的标准曲线和拟合方程，图二示
紫外可见分光光度计的介绍及使用
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在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。 在concertration中键入标准浓度单位。
3. Instrument
可编辑ppt
33
4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
可法可以开始测量： ❖ 使用菜单方式
选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 ❖ 使用按钮方式 ：按按钮 开始测量 ❖ 如果要终止扫描按按钮 。
可编辑ppt
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二光度扫描
开始 方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
打印数据
可编辑ppt
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开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
可编辑ppt
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具体操作程序
Method:
1. general: Measurement测量方式选择Photometry（光度 计测量）
2. Quantitation定量参数设置页面：
可编辑ppt
可编辑ppt
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8 选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此 时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。
9 关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的 power。
三 注意事项
1. 开机预热15分钟左右。 2. 测定时应注意：
❖ 参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收 池，材料和规格一致。
物质对光的选择性吸收－溶液对光的作用
溶液对光的作用示意图
光吸收遵循朗伯-比尔定律：
A lg T lg I 0 bc
I
A lg T lg I 0 abc
I
I0 入射光辐射强度 I 透射光辐射强度
T 透射比
a吸光系数
ε摩尔吸光系数
溶液对光吸收过程
溶液对光吸收示意图
3. Instrument
4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
5 吸光度自动校零 在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品 光路中分别放入空白样品。按按钮 进行吸光度校零。
6 在wavelength中设定扫描的最大吸收波长， 7 放入标样，选中第一个标样，点measure依次测定完成
基线校正
❖ 用户基线校正方法：可将scan speed 设小一些；进行样 品扫描时，可设大一些。 将空白样品分别放入样品室的 参比光路和样品光路。按按钮
❖ 系统基线校正方法。 使用空气作为参比和样品。按按钮 出对话框见图，选 择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。
测量
有两种方法可以开始测量： ❖ 使用菜单方式
❖ 使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触 窗口。
❖ 已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能 加热，以免引起光程长度上的改变。
3. 测量条件的选择： ❖ 选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,
为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波 长的入射光。
❖ 控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸 光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时,测量的准确度较高.
Instrument仪器参数设置页面
❖ Data mode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止 范围一般为190-800，狭缝值一般为2
❖ Light一般选择“Auto”
Monitor显示页面
Processing数据处理页面
Report报告结果页面
样品名设置，备注信息及文件名输入
选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 ❖ 使用按钮方式 ：按按钮 开始测量 ❖ 如果要终止扫描按按钮 。
二光度扫描
开始
方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
打印数据 开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
具体操作程序
Method:
1. general: Measurement测量方式选择Photometry（光度 计测量）
2. Quantitation定量参数设置页面：
在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校 准。在concertration中键入标准浓度单位。
紫外可见分光光 度计
主要内容
1 仪器构成及原理
2 分光光度计的使用 • 波长扫描 • 定量测定
3 注意事项
一 仪器原理
紫外可见吸收光谱主要产生于分子价电子在 能级间的跃迁。利用一定频率的紫外--可见光照 射被分析的物质，引起分子中价电子的跃迁，它 将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的 特征。
的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部 件和作用是：
①入射狭缝——限制杂散光进入。 ②色散元件——即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分 解为单色光。 ③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来 自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。
④出射狭缝——只让特定波长的光射出单色器。
3. 吸收池 玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；石英— —适用于紫外和可见光区
测量参数设置
1 在[Edit]菜单中选择[Method…]选项，或按按钮。出现下列 窗口。
General:总体设置页面
❖ Measurement测量: Wavelength scan 波长扫描 Time scan 时间扫描 Photometry 定波长测量
❖ Operator操作者: 输入操作者的姓名 ❖ Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。 ❖ Use Sample Table使用样品表:选择是否使用样品表。 ❖ Comments备注:填写一些备注信息。 ❖ [Load]按钮:用于装载原来保存的方法文件。 ❖ [Save]按钮:保存当前的设置参数。 ❖ [Save As]按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件。
❖ 选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若 样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反 之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。
4. 用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。 5. 正确登记，将仪器及实验台擦干净。
测试题
1. 分光光度计由哪几部分组成？设计其光路图。 2. 紫外可见分光光度计对光源的要求是什么？ 一般
偏离朗伯比尔定律的原因-化学因素
❖ 朗伯-比尔定律的假设条件一： 入射光为单色光。
❖ 朗伯-比尔定律的假设条件之二： 吸收粒子是独立的，彼此之间无相互作用。比尔定律适用于 稀溶液。
❖ 吸光组分的化学变化： 吸光组分的缔合、离解，互变异构，络合物的逐级形成，以 及与溶剂的相互作用等，都将导致偏离比耳定律。
2 运行UV Solution软件。软件将自动配置计算机的串行口 （RS 232 Port）见图
仪器在初始化过程中进行如下自检工作：
❖ ROM检测 ❖ RAM检测 ❖ 波长步进电机运转检测 ❖ 氘灯点亮检测 ❖ 钨灯点亮检测 ❖ 仪器波长校正
3 仪器主机开始初始化。见图
4 仪器主机初始化完毕，进入工作状态。
采用哪几种光源，各光源的波长范围是什么？ 3. 比色皿一般由什么材料制成？有哪几种规格？做
实验时，你是如何选择比色杯的规格及材料的？
4. 为什么测定时使用参比池？参比溶液怎么 选择？
5. 在进行波长扫描与光度测定时需要设置哪 些参数？
组成
组成：光源、单色器，狭缝、样品池、检测器
1．光源： ①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区 内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用 寿命长，价格低。 钨灯——可见光区 320～2500nm 氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm
2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源
4．检测器：将光信号转变为电信号的装置 ❖ 光电管 ❖ 光电倍增管 ❖ 二极管阵列检测器 5．记录装置：讯号处理和显示系统
二 波长扫描
开始
方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
打印数据 开始测量
启动UV Solution软件
1. 打开仪器主机电源。用鼠标点击Windows开始菜单中的 [Hitachi Applications]选项中的[UV Solutions 2.0] 选项。 或者直接在桌面上双击UV Solution图标。