高性能淀粉酶菌株的筛选及培养基优化进展[文献综述]
简答题 设计一个诱变筛选淀粉酶高产菌株的科研方案,并加以必要
简答题设计一个诱变筛选淀粉酶高产菌株的科研方案,
并加以必要
请设计一个实验方案自土壤中筛选能产淀粉酶的枯草芽孢杆菌并进行诱变育种选育高产突变株。
1、取样
选择含淀粉丰富的土壤为最佳
2、无菌水溶解
充分震荡
3、高温处理
60度的高温处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞
4、稀释涂平板
培养基用含淀粉的培养基配制
5、培养
培养1-3天后，观察。
6、初筛与纯化
挑取有降解圈的细菌单菌落，并在平板上纯化3次，然后4摄氏度斜面保存。
7、鉴定
参照《伯杰氏细菌手册》鉴定或者利用分子生物学手段鉴定，进一步确认是否为枯草芽孢杆菌。
8、复筛
测定其淀粉酶活，最后确定诱变出发菌株
9、诱变
选择合适诱变源，建议采用物理诱变和化学诱变相结合的复合诱变方式。
10、筛选
采用上述初筛和复筛方案进行诱变鉴定
11、遗传稳定性鉴定
筛选出的菌株，要经过多次传代之后，再进一步鉴定其产生淀粉酶的能力是否发生了变化。
如果产生了回复突变，则需要重复诱变筛选过程，直至到筛选出遗传稳定的高产菌株为止。
淀粉酶的研究进展[文献综述]
![淀粉酶的研究进展[文献综述]](https://img.taocdn.com/s3/m/8276295bc281e53a5802ff6b.png)
毕业论文文献综述生物工程淀粉酶的研究进展1. 淀粉酶简介淀粉酶是催化淀粉、糖原转化成葡萄糖、麦芽糖及其它低聚糖的一类酶的总称，广泛应用于淀粉工业、食品工业、医药、纺织、洗涤剂、青贮饲料、微生态制剂以及酿酒等行业[1]。
淀粉酶是最早用于工业化生产的酶，迄今为止仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一[2]。
不同种类的淀粉酶水解淀粉会生成不同的产物。
常见的淀粉酶可以分为以下几种：α-淀粉酶（EC3.2.l.1），也叫液化酶；β-淀粉酶（EC3.2.1.2）；葡萄糖淀粉酶（EC3，2.1.3），也叫γ -淀粉酶，简称糖化酶（缩写GA或G）：异淀粉酶（EC3.2.1.68）等[3]。
α-淀粉酶能随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，所得产物的还原性末端葡萄糖单位碳原子为α构型，同时该酶能使淀粉浆的粘度下降；β-淀粉酶是从淀粉的非还原性末端切下一分子的麦芽糖，其产物还原性末端葡萄糖单位碳原子为β构型；葡萄糖淀粉酶是从底物非还原末端依次水解α-l，4糖苷键和分支的α-1，6-糖苷键，生成葡萄糖。
异淀粉酶是只水解糖原或支链淀粉分支点的α-1，6糖苷键，切下侧枝链[5]。
对淀粉酶的分类和作用机制研究较多，可按来源、产物的旋光度、作用机制等进行分类。
但近年随着酶学性质的研究的发展，对酶的作用机制、方式等研究不断取得新成果，分类学问题出现许多难点。
我国在食品方面研究和应用的微生物酶估计有30多种[6]，其中淀粉酶有α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、异淀粉酶、普鲁兰酶、环糊精生成酶等。
2. 淀粉酶的生产2.1 淀粉酶的来源淀粉酶的来源很广泛，可以来自于植物、动物以及微生物。
大部分的淀粉酶存在于微生物中，微生物中主要的两种淀粉酶为α-淀粉酶及葡糖淀粉酶，此外，主要存在于植物中的β-淀粉酶也存在于少量微生物中。
α-淀粉酶可以从几种细菌、真菌和酵母中分离获得。
但是，由于细菌淀粉酶具有几个比较优良的特性，因此，细菌淀粉酶用的比较多，特别是淀粉液化芽孢杆菌已用于工业化生产[5]。
高产淀粉酶菌株筛选
高产淀粉酶菌株筛选淀粉酶是一种以淀粉为底物的酶，可以将淀粉水解为糊精、糊精、麦芽糊精等多种低聚糖。
淀粉酶在食品工业、酿造工业、纺织工业等领域有广泛的应用。
在淀粉酶生产过程中，高产酶菌株的选育十分重要。
本篇文章将介绍高产淀粉酶菌株筛选的相关知识和方法。
1. 筛选菌种在高产淀粉酶菌株筛选中，首先要选取一种基础菌株，并在培养基中加入抑制其他细菌生长的抗生素，以防止其它外来细菌的污染。
另外，为了避免淀粉酶活性的干扰，还需要在培养基中加入淀粉水解产物。
2. 筛选培养基淀粉酶生产的细菌在不同类型的培养基中的生长情况也不同。
因此，在高产淀粉酶菌株筛选中，需要尝试不同成分和配比的培养基，找到最优的培养基。
3. 筛选条件在高产淀粉酶菌株筛选中，不同的发酵条件都会影响细菌的生长和淀粉酶的产生。
例如 pH 值、温度、搅拌速度、氧气供应等。
因此，需要优化发酵条件，使其最大化淀粉酶产量。
4. 淀粉酶活性测定确定淀粉酶的活性对于筛选高产淀粉酶菌株十分重要。
一般采用碘液滴定或 Fehling 精制法来测定淀粉酶活性，选择最高活性的菌株作为高产淀粉酶菌株。
微生物菌株的选择是筛选高产淀粉酶菌株的核心工作，可通过筛选自然环境中的菌株，或采用一些基因工程技术筛选出高产酶活的工业微生物菌株。
淀粉酶检测方法是评估筛选结果的一个关键步骤，目前主要有碘液滴定和Fehling 精制法两种方法，需要选择准确、温和、操作简便的方法测定淀粉酶活性。
高产淀粉酶菌株筛选的研究具有广泛的应用前景。
目前，在食品工业、酿造工业、制糖工业、制药工业、纺织工业等领域已经取得了较为显著的应用效果。
高产淀粉酶菌株的筛选研究不仅是实现淀粉酶生产工艺的自动化，还能生产高附加值的淀粉水解产品，提高资源利用效率。
总之，无论是在工业生产还是在科学研究方面，高产淀粉酶菌株筛选都扮演着重要的角色。
通过优化菌株选型，调整培养基成分和发酵条件，以及采用高效、准确的淀粉酶检测方法，可获得高产且高效的淀粉酶制剂，为产业生产和科学研究做出贡献。
实验六十淀粉酶产生菌株的筛选
实验六十淀粉酶产生菌株的筛选实验项目性质：设计性涉及的知识点：无菌技术、浓缩培养、纯种子分离、淀粉酶特性和酶活性测定。
计划学时：8学时一、实验目的1.掌握从环境中采集样本并从中分离纯化某些微生物的完整操作步骤。
2.巩固之前所学的微生物学实验技术。
3.掌握产酶微生物的筛选方法。
二、实验原理α-淀粉酶是一种液化淀粉酶。
其产生菌芽孢杆菌广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉的土壤样品中。
从自然界筛选菌株的具体方法大致可分为以下四个步骤：取样、增殖培养、纯种子分离和性能测定。
1、采样：即采集含菌的样品在收集含有细菌的样本之前，你应该调查和研究你打算筛选的微生物分布在哪里，然后你可以开始做各种具体的工作。
几乎所有种类的微生物都可以在土壤中找到，因此土壤可以说是微生物的基础。
在土壤中，细菌数量最多，其次是放线菌、第三种霉菌和酵母。
除土壤外，各种物体上都有相应的优势微生物。
例如，枯枝、腐叶、腐土和腐木中的纤维素分解细菌较多，厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中的淀粉分解细菌较多，水果和蜜饯表面的酵母较多；植物奶中含有较多的乳酸菌，油田和炼油厂附近的土壤中含有较多的石油分解菌。
2、增殖培养（又称丰富培养）增殖培养是在采集的土壤和其他含有细菌的样本中添加一些物质，并创造一些其他有利于待分离微生物生长的条件，以便能够分解和利用这些物质的微生物能够大量繁殖，以便我们从中分离出这些微生物。
因此，增殖培养实际上是选择性培养基的实际应用。
3、纯种分离在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。
通过上述的增殖培养只能说我们要分离的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必须进行纯种分离。
纯种分离的方法很多，主要有：平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。
4.业绩衡量分离得到纯种这只是选种工作的第一步。
所分得的纯种是否具有生产上所要求的性能，还必须要进行性能测定后才能决定取舍。
淀粉酶高产菌株的筛选及其酶活的测定
2010年第1期3月出版淀粉酶高产菌株的筛选及其酶活的测定Screening and activity determination of the higher activity amylase strain刘杰雄*陈号陆雯朱丽云（中国计量学院现代科技学院，杭州310018）*刘杰雄，男，1989年出生，中国计量学院现代科技学院生物工程专业在读生。
收稿日期：2009-11-16LIU Jie-xiong *CHEN HaoLU Wen ZHU Li-yun（College of Modern Science Technology ，China JiLiang University ，Hangzhou 310018，China ）摘要为了筛选对于淀粉降解效果好的淀粉酶产生菌株，从浙江、山东等地富含淀粉的土壤样品中筛选出1株产淀粉酶活力较强的菌株BSJD10，结合菌落形态、生理生化指标和16S rDNA 序列分析，对其种群形态和个体形态进行观察和鉴定，确定BSJD10为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）。
关键词淀粉酶；枯草芽孢杆菌；鉴定Abstract To screen for the effects of starch degradation of amylase produced good strain.From the soil samples from Zhejiang ，Shandong and other places where rich in starch ，a strong amylase producing strain BSJD10were screened out ，with colony morphology ，physiological and biochemical indicators and 16S rDNA sequence analysis ，its population patterns and individual mor-phology were observed and identificated.Keywords amylase ；bacillus subtilis ；identification 淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制作业、淀粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶产生菌的筛选、培养与选育
功能微生物（淀粉酶产生菌）的筛选、培养与选育22100934 程雅楠摘要：以产淀粉酶细菌的筛选和选育为目标，通过培养基制备及灭菌、菌种的分离筛选与纯化、菌种的鉴定、培养条件的优化以及淀粉酶产生菌的紫外诱变育种等五个过程，并测定了诱变后菌株的16s序列，初步掌握了对某菌种进行筛选、选育及诱变的必需步骤。
关键词：产淀粉酶细菌筛选选育诱变育种淀粉酶是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一，为了提高淀粉酶的生产水平，首先通过淀粉培养基从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株，对菌株初步鉴定后进行紫外线诱变，筛选出产量高、性状优良的突变菌株。
淀粉酶主要来源于植物和微生物，并通过发酵完成生产，因此筛选出高产、稳定的淀粉酶产生菌是淀粉酶生产的尤为重要。
此次试验试图从土壤中分离出产淀粉酶的细菌，通过紫外线诱变育种等条件优化来得到高产、稳定的淀粉酶产生菌株。
以达到加深对菌种选育的认识、掌握紫外线诱变育种的原理和方法、掌握初步纯化淀粉酶的方法的实验目的。
1材料和方法1.1材料1.1.1 来源：南师大北区教学楼附近的土壤。
1.1..2培养基：淀粉培养基的配制①固体培养基膏 3g/L，蛋白胨 10g/L，NaCl 5g/L，可溶性淀粉2g/L，琼脂 20g/L，pH7.0～7.2。
②液体培养基：牛肉膏 3g/L，蛋白胨 10g/L，NaCl 5g/L，可溶性淀粉2g/L，琼脂 20g/L，pH7.0～7.2。
优化条件培养基配制：①淀粉3g/L，蛋白胨 10g/L，K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 1.5g， pH 4.0 。
②淀粉3g/L，蛋白胨 10g/L， K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 1.5g， pH 7.2 。
碳源培养基：①淀粉 3g，蛋白胨 10g，K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 1.5g，去离子水 1000mL pH 7.2。
高产淀粉酶菌株筛选
淀粉酶产生菌的富集培养
①样品采集 用无菌锥形瓶，在栽有土豆的菜园里，从不同的采样点采取土样约 15g 。 （注意应采取距地表2-3cm以下的土样） ②制备土壤稀释液 称取土样 l0g ，放入盛 90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇 20min ，使土样与水充分混合，将菌分散，即为稀释 10-1 的土壤悬液。取 1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从 此试管中吸取lml加入另一盛有 9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推 制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液。 ③涂布平板 取9个筛选培养基，用记号笔在培养皿底部注明稀释度，每种稀释度标记 3 皿，然后用无菌吸管分别由 10-2 、 10-3 、 10-4 、 10-5 、10-6 五 管土壤稀释液中 各吸取0.1ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置，用无菌涂布棒在 培养基表面轻轻地涂满整个平面，室温下静置5-10min。 ④培养 将平板倒置在37℃温箱中培养48h。
引起污染。
培养基的制备
④加塞 培养基分装完毕，在试管口或三角烧瓶口塞上棉塞，以阻止外界 微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 ⑤灭菌 121℃，20min ⑥搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至 50℃左右，将试管口端搁置在玻棒或其 它合适高度的器具上，斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 ⑦倒平板 将灭菌后的培养基冷却到55～60℃倒平板。（倒平板的方法是右手
二
原理
土壤是微生物生活的大本营，是寻 找有重要应用潜力的微生物主要的菌源。 因此本实验选择从土壤中分离出淀粉酶 高产的菌种，再进行纯培养。主要运用 富集培养技术，稀释涂布平板法和平板 划线分离法及无菌操作技术获得我们所 需要的产淀粉酶菌种。淀粉酶作用于淀 粉时，打开了淀粉分子的糖苷键，从而 使淀粉失去粘性，同时使其失去了与碘 的显色反应能力，不再与碘结合，从而 形成透明圈。产淀粉酶菌株在选择培养 基上培养后，会水解淀粉形成水解圈， 加碘液染色后，水解圈尤为明显。
高产淀粉酶菌株的分离及发酵工艺改良
ｓ ａ ｓｅ ｉｕ ｒ ａ Ａ ６８ （ ｓｅｇｌｓｏ ｚｅ ，ａ ｄｔｅｏ ｔ ｕ ｒ ｎ ｓｕ ｔｎｉ ４ Ｃ，ａ ｄｔｅｐ ａ ｅｏ ｔ ｉ ｉ Ａ ｐ ｒ ｌ ｓｏ ｚｅＱ ９ ． Ａ ｐｒ ｌ ｒ ａ） ｎ ｐｉ ｍ ｆ ｍｅｔ ｉ ａｏ ｓ ０ｏ ｒｎ ｓ ｇｌ ｙ ｉｕ ｙ ｈ ｍ ｅ ｔ ｉ ｎ Ｈ ｖ ｕ ｆ ｈ ｌ
高产淀粉 酶菌株 的分 离及发 酵工艺 改 良
王宏强 ，夏 明 ，蒋水姣 ，姜 宇翔 ，李 明智
（ 浙江 中医药大学 药学院 ，浙江 杭 州 ３０５） １０ ３ 摘要 ：从 自然界 中筛选 高产淀粉酶菌株 ，为＿业生产淀粉酶提供储备菌株。利用淀粉水解圈直径与菌落的直径比和单 Ｔ 糖 含量为指标 ，筛选 高产淀粉酶的菌株 ，运用 均匀试验设计 ，结合 Ｄ Ｓ数据处理软件分析 ，从温度 和 ｐ Ｐ Ｈ值两方面 改 良并优化发 酵条件 ，提 高菌株产酶 能力。结果表 明 ，经筛选后 得到 的产淀粉 酶菌株 为米 曲霉 Ｑ ９ ． （ ｓｅｇｌｓ Ａ ６８ Ａ ｐ ｒｉｕ ｌ ｏｙａ） ｒｚｅ ，最佳发酵条件为 ：温度 ４ ０℃，培养基 ｐ Ｈ值 ４０ ．。由其发酵所得的淀粉酶最适反应温度为 ５ ５℃，最适作用 ｐ Ｈ 值 ５０ ．，同时测得酶活力为 ３ ０ ／ Ｌ ０Ｕｍ 。 ９ 关键词 ：淀粉酶 ；筛选 ；发酵 ；产酶能力
ｐ ｏ ｃ ｉｎ ｂｙ ａ ｌｉ ｇ ｕｎｆ ｒ ｅ ｐｅ ｍｅ ａ ｄ ｓｇ ｗｉｈ ｒ ｄｕ ｔｏ ｐｐｙ ｎ ｉｏ ｍ ｘ ｒ ｎｔ ｉ ｌ ｅ ｉｎ ｔ ＤＰＳ ｔｔｓｉａ ｎａｙ ｉ ｓ ｆｗａ ｅＴｈ ｒ ｓ ｌｓ ｈｏ ｓａ ｉｔｃ ｌａ ｌｓｓ ｏｔ ｒ ． ｅ ｅ ｕ ｔ ｓ ｗ ｔａ ｔ ｃ ｏ ｅ ｈ ｔ ｈｅ ｈ ｓ ｎ
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毕业论文文献综述生物工程高性能淀粉酶菌株的筛选及培养基优化进展1 前言淀粉酶( amylase，EC 3. 2. 1. 1)以淀粉或糖原为底物,是能够催化淀粉水解转化成葡萄糖、麦芽糖及其它低聚糖的一群酶的总称。
它能从分子内部水解α- 1, 4- 糖苷键, 广泛存在于动物、植物和微生物中。
如今淀粉酶在酶市场销售中占据了约25％的比例，应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织、石油开采等行业。
由于该酶是一种有内切活性的淀粉酶, 可在中性pH 条件下将淀粉水解为糊精、寡糖、麦芽糖和葡萄糖等, 从而使黏稠的淀粉糊很快失去黏性而液化, 碘的呈色反应很快消失, 故又称为淀粉液化酶[1，2]。
此外它也可作为促消化剂运用于食品[3]、医药工业．淀粉酶的巨大潜力使其在当今社会中需求量日益提高．因此，如何获得高产量、高活性的淀粉酶显得至关重要。
2 淀粉酶生产菌株的筛选2.1 初筛将在土壤中收集得到的菌株划线接种在淀粉培养基平皿上培养2～4 d，采用革兰氏碘液染色，在菌落周围有透明圈产生证明为产淀粉酶。
用游标卡尺分别测量透明圈直径和菌落直径，根据两者比值大小初步确定酶活性的高低。
[4]但应保存所有产淀粉酶的菌株以用来复筛，因为同一菌株在不同的培养基以及不同的培养条件下产酶的情况可能不同。
在平皿上生长和在发酵液中培养也可能会有很大的差别。
2.1 复筛在淀粉酶生产菌株筛选的过程中，最关键的是其产物，也就是淀粉酶的酶活的检测。
由于测定原理和底物性质的不同，淀粉酶的测定方法已经超过200种以上。
[5]这些方法可以归纳为两类：天然淀粉底物方法和（分子组成）确定的底物方法。
以天然淀粉底物为底物的测定方法，如淀粉分解法、糖化法和色素淀粉法等。
由于天然淀粉分子结构的不确定，故不同植物来源的淀粉和不同批号的淀粉，其分子结构和化学性质不尽相同，因此难以达到方法学标准化，测定误差较大。
[6]目前除碘·淀粉法和DNS外，这类方法已被淘汰。
使用（分子组成）确定的淀粉酶底物和辅助酶与指示酶组成的淀粉酶测定系统，可以改进酶反应的化学计量关系，能更好地控制和保持酶水解条件的一致性。
这些底物有小分子寡聚糖（含3-7个葡萄糖单位）和对·硝基苯酚·糖苷等。
其中，麦芽戊糖和麦芽四糖是极好的淀粉酶底物，试剂稳定，水解产物确定，化学计量关系明确。
目前市售试剂盒就有好几种。
但是就价钱来讲，较为昂贵。
2.2.1 DNS法测定酶活[7]利用3，5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定还原糖含量来反映淀粉酶活力是目前较常采用的方法。
一般的实验过程是：在1%淀粉溶液中加入一定量的酶液，37℃水浴5min，加DNS沸浴5min，在470nm比色，用麦芽糖同步作标准曲线，用单位时间内转化麦芽糖的量表示酶活性：麦芽糖mg·5min-1·g-1。
该方法测试所用试剂易得，溶液有效期长，同一批次测试精确度高。
但相关文献在工作波长、培养pH值、培养时间和显色时间等测试条件上差异较大[8-10]，这些差异会直接影响同种测试方法所得酶活力之间的可比性。
而且在灭活剂的选择上，一般的有机灭活剂或者酸碱都会相应的影响到DNS的显色反应。
不同批次的DNS也会造成测得的酶活的变化，实验可重复性差。
2.2.2 碘·淀粉法测定酶活[11]碘·淀粉法又称碘量法，该种方法的基本原理是淀粉与碘反应，生成了一种包合物(碘分子被包在了淀粉分子的螺旋结构中了），这种新的物质改变了吸收光的性能而变了色。
而在淀粉酶存在的情况下，淀粉被分解，就可以根据吸光度变化测定出淀粉的水解情况，进而推算出酶活。
[12]一般的实验过程是：在在1%淀粉溶液中加入一定量的酶液，37℃水浴15min，加碘应用液，在660nm比色，用淀粉标准液同步做标准曲线。
碘·淀粉法的酶活表示为：在37℃,15min 水解淀粉5mg为1个单位。
但淀粉遇碘酒究竟显什么颜色，取决于该淀粉中直链淀粉与支链淀粉的比例，不同批次的淀粉可能比例不同，故该方法重复性不好，而且酶反应线性差，测定范围窄，高单位时往往误差较大。
尽管碘量法因底物难以标准化，反应不成零级反应等缺点而被认为不是理想方法，但因其简单、快速、灵敏和价廉而在国内应用较广。
2.2.3 试剂盒检测法[13]因为试剂盒检测法相比于前面两种方法较为昂贵，在生物实验室或者大规模检测时，一般很少使用试剂盒检测法。
试剂盒检测一般用于临床检测血液或者尿液中淀粉酶的含量。
该方法基本原理是利用α-淀粉酶水解2-氯-4-硝基苯酚麦芽三糖（CNPG3）生成2-氯-对硝基苯酚，在405nm处吸光度的增加速率与样品中的α-淀粉酶的活力成正比。
3 培养基优化3.1 常用的培养基优化设计方法通常优化发酵培养基的方法是单次单因子法和正交试验设计法。
采用单次单因子法时，只是讨论一种因素的影响，由于考察因素间经常存在交互作用，使得该方法并非总能获得最佳的优化条件。
[14]正交试验设计则注重如何科学合理地安排试验，可同时考虑几种因素，寻找最佳因素水平组合，但它不能在给出的整个区域上找到因素和响应值之间的一个明确的函数表达式即回归方程，从而无法找到整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值。
因此，人们期望找到一种，而响应面分析方法则是一种试验次数少、周期短，求得的回归方程精度高、能研究几种因素间交互作用的回归分析方法，因此在培养基优化上应用最为广泛。
[15] 3.2 响应面分析方法的具体步骤3.2.1 确定主要因素确定要考察的过程中的关键因素，即研究范围内主要影响发酵过程和产品产量的重要因素。
如果预先不知道哪些是重要因素，可以通过极差试验或Plackett- Burman 试验来确定这些因素。
3.2.2 确定中心试验点响应面拟合方程只在考察的紧接邻域里才充分近似真实情形，在其他区域拟合方程与被近似的函数方程毫无相似之处，几乎无意义。
所以，要先逼近最佳值区域后才能建立有效的响应面拟合方程。
可以通过做单因素试验或由菌种的特性和发酵工艺来确定因素水平的范围。
最陡爬坡法以实验值变化的梯度方向为爬坡方向, 根据各因素效应值的大小确定变化步长,能快速、经济地逼近最佳值区域【6】。
3.2.3 确定试验点采用适当的试验设计，确定实验的试验点，试验设计强调试验点要尽量减少总的实验次数。
试验点确定之后，按随机性原则对每个实验点进行实验，获得一定的数据，以便于进行统计分析。
3.2.4 数据分析用适当的统计分析方法和计算机程序，对实验数据进行分析，由分析得来的结果将用于下一步的过程优化，常用的统计分析软件有SAS、SPSS等。
3.2.5 寻取最优值为确定各因素的最佳取值，可以利用SAS软件进行岭脊分析[16]，通过岭脊分析后，得出回归模型存在最大值点，以及相应的各种单因素的含量。
最后再用验证试验测定的淀粉酶酶活与模型的最大值点进行比较，证实该模型是否具有有效性。
4 结论从大量文献中可以看出，在菌株筛选时，一般用比较碘液水解圈直径与菌落直径比值（D/d）的方法初步认定淀粉酶活。
复筛时，较为常见的是碘·淀粉法和DNS法，通过测定复筛时各菌株的酶活来确定最佳的菌株。
而在培养基优化方面，是在单次因子法和Plackett-Burman 试验的基础上，采用响应面分析，通过建立模型以及预计理论最大酶活值的方法，确定最终的优化方案。
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