谷丙转氨酶的测定原理
血清谷丙转氨酶活性的测定改良赖氏法
血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要避免溶血？
血清谷—丙转氨酶活性的测定（改良赖氏法）
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掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。
【目的要求】
熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。
了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为一般临床化验室推广。
二是比色测定法，如：金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 法）和赖氏法（Reitman-Frankel法）。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全相同。不同之处在于作用时间：King法60min ，Mohun法和 Reiman法30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是：每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的定义条件代入国际单位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系：1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。
血清谷丙转氨酶标准曲线
血清谷丙转氨酶标准曲线血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）是一种存在于细胞质中的酶，主要存在于肝脏、肾脏和心肌等组织中。
血清谷丙转氨酶的检测可以帮助医生判断肝脏功能是否正常，对于诊断肝脏疾病具有重要的临床意义。
而血清谷丙转氨酶的标准曲线则是进行血清谷丙转氨酶测定的重要参考依据之一。
一、实验原理。
血清谷丙转氨酶标准曲线实验是通过将不同浓度的血清谷丙转氨酶标准品加入到反应系统中，测定其对应的吸光值，然后根据吸光值与血清谷丙转氨酶浓度的关系绘制出标准曲线。
通过标准曲线可以准确地计算出待测样本中血清谷丙转氨酶的浓度，从而判断肝脏功能的健康状况。
二、实验步骤。
1. 准备工作，将实验所需的试剂和仪器准备齐全，并按照实验要求进行预处理。
2. 标准曲线制备，依次取一系列不同浓度的血清谷丙转氨酶标准品，加入到反应系统中，然后测定其吸光值。
3. 数据处理，将实验得到的吸光值与标准品的浓度进行对应，然后绘制标准曲线。
4. 标准曲线验证，使用已知浓度的血清谷丙转氨酶标准品进行实验，验证标准曲线的准确性。
5. 待测样本测定，将待测样本加入到反应系统中，测定其吸光值，并利用标准曲线计算出样本中血清谷丙转氨酶的浓度。
三、实验注意事项。
1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免操作失误导致实验结果不准确。
2. 实验室操作要注意个人防护，避免接触有害化学品。
3. 实验中使用的试剂和仪器要保持干净整洁，确保实验结果的准确性。
4. 实验结束后要及时清理实验台面和仪器，做好实验室卫生。
四、实验结果分析。
通过血清谷丙转氨酶标准曲线实验，我们可以得到待测样本中血清谷丙转氨酶的浓度，进而判断肝脏功能的健康状况。
标准曲线的制备和验证是保证实验结果准确性的重要步骤，实验中需要严格按照操作规程进行，确保实验结果的可靠性。
总之，血清谷丙转氨酶标准曲线实验对于肝脏功能的评估具有重要的临床意义，正确的实验操作和准确的数据处理是保证实验结果准确性的关键。
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
实验
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
一. 实验目的
1.掌握金氏法测定血清谷丙转氨酶活性的原理 2.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义 3.熟悉实验操作及注意事项，进一步掌握标准曲线
的绘制以及酶活性单位的计算
二. 相关理论知识
酶（enzyme）？
由活细胞合成的能够催化特定化学反 应的蛋白质、RNA或其复合体，绝大 多数酶的化学本质是蛋白质。
0.4 mol/L NaOH溶液
5.0
5.0
混匀，于10 min后30 min内在520nm处比色，以对照管调零，读取测定管吸光度值。
注意事项
1 、加样的时候平行加样，减少操作误差，使得结果更加精 确。 2 、标准丙酮酸溶液的加样一定要准确，减小实验结果误差。 3 、 酶的活力测定与温度、时间影响很大，因此反应要严格 控制温度和掌握时间。 4 、试剂盘中试剂与移液管要专管专用，防止交叉污染。 5、 标准曲线制备及酶活性测定需要在同一台仪器上测定吸 光度。
★6、 样品为小牛血清，参考值：0~1个活性单位
五.实验结果
1.原始数据
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
试管编号 A
23456
测定管
测定人：
波长：
时间：
五.实验结果
2.计算 1）标准曲线绘制
用坐标纸绘制标准曲线； 标明名称、操作人、时间、仪器型号。
操作人： 仪器型号： 波长： 时间：
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
共同点：原理、试剂、操作步骤和作用温度相同。 不同点：在于活性单位定义和标准曲线绘制方法不 同，因此测定结果的单位数值不同。
三.实验原理 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性原理
血清谷丙转氨酶测定设计实验
03 实验材料
CHAPTER
实验动物
健康成年小鼠
用于正常血清谷丙转氨酶水平的测定 。
肝损伤小鼠模型
通过给予一定剂量的化学物质或病毒 ，建立肝损伤模型，用于测定血清谷 丙转氨酶水平。
试剂和器材
血清采集管和分离胶
用于小鼠血清的采集和分离。
谷丙转氨酶试剂盒
血清谷丙转氨酶测定设计实验
• 实验目的 • 实验原理 • 实验材料 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
目录
CONTENTS
01 实验目的
CHAPTER
了解血清谷丙转氨酶测定的意义
• 谷丙转氨酶（Alanine Aminotransferase，简称ALT） 是肝细胞内的一种重要酶类，当 肝细胞受损时，ALT会释放到血 液中，导致血清ALT水平升高。 通过测定血清ALT水平，可以反 映肝细胞损伤的程度，对于肝脏 疾病的诊断、治疗和预后评估具 有重要意义。
数据分析
根据实验目的和数据结果，进行数 据分析，得出结论。
03
02
数据整理
将记录的数据进行整理，计算平均 值、标准差等统计指标。
结果报告
撰写实验报告，将实验结果和结论 呈现出来。
04
05 结果分析
CHAPTER
正常值范围
正常值范围
根据不同年龄和性别，血清谷丙转氨酶的正常值范围有所差异。通常，成人男性正常值为5-40 U/L，成人女性正 常值为5-35 U/L。
临床意义
结合受试者的临床资料，我们对谷丙转氨酶活性的变化进行了临床解释和评估。
对实验的评价与建议
实验优缺点
01
在本次实验中，我们总结出了实验的优点和不足之处。
血清谷丙转氨酶
室温放置 30分钟， 分钟， 分钟
调零点。 测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。 值 ， 蒸馏水调零点
计 算
（ODA-ODB） ） （ODs-ODs＇） ＇） X = X （待测样品丙酮酸含量） 待测样品丙酮酸含量）
=
50ug/ml × 0.1 ml
（ODA-ODB） ）
×5 ODs-ODs＇） （ODs-ODs＇）
2、绘制标准曲线，（要求规范作图） 、绘制标准曲线，（要求规范作图） ，（要求规范作图 3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位 、通过方法一的 ，在标准曲线中，
注意事项
NaOH液时 液时， 操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速度 加入，并且边加边摇匀加快时则a 加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二 酸引起的发色增强。 酸引起的发色增强。 本实验中各试剂加量都需要准确， 本实验中各试剂加量都需要准确，并且要 注意控制条件， 注意控制条件，保温时间要严格 本法测定SGTP正常值为40单位以下。 SGTP正常值为40单位以下 本法测定SGTP正常值为40单位以下。
SGPT单位 单位= 单位
（ODA-ODB） ） × （ODs-ODs＇）5 ＇）
0.1 × 2.5
=
（ODA-ODB） ） （ODs-ODs＇） ＇）
× 20
二、标准曲线法
配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液， 配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液 作成标准曲线。具体做法如下表。标准丙酮酸 50μg/ml） （50μg/ml） 基质液ml 基质液ml 蒸馏水ml 蒸馏水ml 丙酮酸含量μg 丙酮酸含量μg 相当GPT GPT单位 相当GPT单位
1 0.05 0.5 0.45 2.5 10
实验十三氨基移换反应——谷丙转氨酶活性的测定（纸层析法）
实验十三氨基移换反应——谷丙转氨酶活性的测定（纸层析法）一、目的进一步理解转氨基作用。
学习应用纸层析法鉴定氨基移换反应。
二、原理转氨基作用是指在转氨酶的催化下α-氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移作用。
转氨酶广泛存在于生物体内，目前已发现的转氨酶至少有50种以上，其辅酶均为磷酸吡哆醛，酶反应的最适pH为7.4。
生物体内分布最广、活力最强的转氨酶有两种：一种为谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶，GPT）主要存在于肝脏；另一种为谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶，GOT）在心肌中活力最大，其次在肝脏。
GPT⎯⎯→+α⎯−丙氨酸酮戊二酸丙酮酸谷氨酸+GOT⎯→⎯⎯+α草酰乙酸天冬氨酸酮戊二酸谷氨酸+−正常情况下转氨酶主要存在于细胞中，人及动物的血清中含量很少，活性很低。
而当组织细胞受到损伤（如发生肝炎、心肌梗死等病变）时，这些细胞中的转氨酶就会释放到血液中去，此时血清中转氨酶的含量及活性均显著增加。
因此转氨酶活性的测定在临床诊断上有重要意义。
三、仪器、试剂与材料剪刀、镊子、研钵、大烧杯、试管及试管架、吸量管、漏斗、滤纸、培养皿、表面皿、酒精灯、喷雾器、恒温水浴箱、烘箱、离心机。
1%谷氨酸溶液、1%丙酮酸钠溶液、0.1%碳酸氢钾溶液、0.025%溴乙酸溶液、2%醋酸溶液、0.9%氯化钠溶液、标准谷氨酸溶液、标准丙氨酸溶液、酚饱和水溶液（扩展剂）、0.1%水合茚三酮正丁醇溶液（显色剂）。
兔肝、海砂。
四、操作1、肝匀浆液制备在研钵中加入兔肝1g＋0.9%氯化钠3ml＋海砂200mg→置于放有冰水的大烧杯上面，研磨成匀浆→3000r/min离心5min→弃沉淀、得到肝糜匀浆液。
2、氨基移换反应：取干燥试管2支，分别标明测定管与对照管。
实验管1 对照管21%谷氨酸溶液（ml） 0.5 0.51%丙酮酸钠溶液（ml） 0.5 0.50.1%碳酸氢钾（ml） 0.5 0.50.025%溴乙酸（ml） 0.25 0.25混匀后加入肝糜提取液（ml） 0.5 0.5立即酒精灯加热或沸水浴2~3min加盖胶塞，置45℃水浴保温1h，并时常振荡2%醋酸（滴） 4 4 沸水浴中（或酒精灯）2~3min（终止反应、沉淀蛋白）离心（或过滤），收集上清液做层析使用3、层析：取3＃滤纸一张，用圆规作半径1cm的圆，通过圆心作两条相互垂直的线，与圆相交的4点作为点样位置，在滤纸圆心处剪一小孔φ2mm。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告引言：血清谷丙转氨酶（AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。
AST的测定在临床上具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过酶促动力学方法测定血清中AST的活性，并分析实验结果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清标本：从健康志愿者采集的血样。
- AST测定试剂盒：包括底物、辅酶、酶标试剂等。
- 酶标仪：用于测定底物的光吸收值。
2. 实验方法：- 步骤一：标定酶标仪将已知浓度的AST酶标溶液分别加入不同的试管中，测定其对应的光吸收值，建立标准曲线。
- 步骤二：制备样本将采集到的血清标本离心，取上清液，稀释至适宜浓度。
- 步骤三：测定AST活性将标定好的试剂和稀释后的血清标本加入试管中，混匀后，放入酶标仪中测定吸光度。
- 步骤四：计算AST活性根据标准曲线，计算出各个样本的AST活性。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列样本的AST活性数据。
根据标准曲线，我们可以计算出每个样本的AST活性，并进行进一步的分析。
首先，我们可以观察到不同样本之间AST活性的差异。
正常情况下，AST活性在一个相对稳定的范围内，超出该范围可能提示肝脏功能异常或疾病存在。
因此，通过测定AST活性，我们可以初步判断一个人的肝脏健康状况。
其次，我们还可以对不同条件下AST活性的变化进行研究。
例如，我们可以比较不同性别、不同年龄段、不同体重指数的人群的AST活性是否存在差异。
这样的研究有助于进一步了解AST在人体内的生理变化和代谢过程。
此外，我们还可以将AST活性与其他临床指标进行关联分析。
例如，我们可以比较AST活性与肝功能指标、炎症指标等之间的关系。
这些关联分析可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
总结：通过本实验，我们成功地测定了血清中AST的活性，并对实验结果进行了分析和讨论。
AST的测定在临床中具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
血清谷丙转氨酶活力测定
血清谷丙转氨酶活力测定目的和要求了解转氨酶的性质及临床意义。
掌握用测定试剂盒方法测定谷丙转氨酶（GP T或ALT）活力。
原理在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。
此过程可用下式表示：本实验以丙氨酸的氧化脱氨为例，测定谷丙转氨酶活性。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α–酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。
此反应可逆，平衡点近于1。
无论正向或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可测定生成的α–酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸及α–酮戊二酸作为谷丙转氨酶（GP T或ALT）作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。
丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸–2，4–二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439～530nm，可用于测定丙酮酸含量。
α–酮戊二酸也能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯稍有差别，在520nm波长比色时，α–酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。
经转氨酶作用后，α–酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长520nm处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α–酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以籍以测定谷丙转氨酶的活力。
但是，由于在实验中不宜有过多的α–酮戊二酸以降低其对显色的干扰，因此，对于作为底物的α–酮戊二酸浓度作了一定的限制，从而不能保证酶反应充分进行，以致丙酮酸产量与酶之间的关系并不始终成一直线关系。
当酶量增大时，曲线斜率减小。
因此在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释后再进行测定。
另外，2，4二硝基苯肼对此显色反应也有一定的干扰，因此，在制作丙酮酸标准曲线时，虽没有加α–酮戊二酸，但是丙酮酸二硝基苯腙的吸光度与丙酮酸含量之间的关系也并不始终呈一直线关系，丙酮酸含量增大时，曲线斜率降低，因此，必须采用标准曲线中呈现出直线关系的部分来测定丙酮酸的生成量。
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谷丙转氨酶的测定原理
谷丙转氨酶（AST）测定的原理是利用AST催化谷草转氨酶（ALT）和α-酮戊二酸转氨酶（α-KGOT）之间的转氨反应。
AST在细胞内存在于线粒体和一些胞质中，当细胞受到损伤或溶解时，AST会释放到血液中。
在AST测定实验中，首先将待测血清样品与谷氨酸盐和α-酮戊二酸盐反应，生成天门冬氨酸和α-酮戊二酸。
然后添加谷草酰乙酸酐，谷草酰乙酸酐能够催化谷草转氨酶将天门冬氨酸和谷草酰乙酸转化为天门冬氨酰草酸。
最后，通过测定反应体系中生成的α-酮戊二酸的速率或产物的浓度，可以间接测定AST的活性。
AST测定可用于评估肝脏和心肌损伤。
当肝细胞或心肌受到损伤时，AST释放到血液中的量会增加，因此血清AST的浓度增高可作为肝脏疾病或心肌梗死等疾病的指标之一。