微生物实验技术应用实例优秀课件
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《微生物纯培养技术》课件
纯培养技术可用于病原微生物的分离、鉴 定和药物敏感性试验，为临床诊断和治疗 提供依据。
微生物纯培养技术
02
的基本原理
微生物的分离与纯化
微生物的分离
通过选择合适的培养基和培养条件， 将混合的微生物群体分离成单一的微 生物个体。
微生物的纯化
通过反复划线、稀释接种等方法，获 得纯培养的微生物，即同一菌种或纯 种微生物的培养。
微生物的培养基
培养基的组成
培养基是由水、碳源、氮源、无机盐 等组成，根据不同微生物的需求，培 养基的成分和比例会有所不同。
培养基的制备
根据配方和操作步骤，将各种成分混 合在一起，经过灭菌处理后，制成适 合微生物生长的培养基。
微生物的培养条件
温度
不同微生物对温度的需求不同，适宜的 温度可以促进微生物的生长和代谢。
生理生化特性分析
测定微生物的生理生化特性，如氧化酶试验 、糖发酵试验等。
应用前景探讨
探讨微生物纯培养技术在生产、科研等领域 的应用前景和潜在价值。
微生物纯培养技术04Fra bibliotek的应用实例
在医学领域的应用
抗生素生产
01
微生物纯培养技术用于分离和培养具有抗生素产生能力的菌株
，为医学领域提供大量抗生素。
疾病诊断
《微生物纯培养技术》 ppt课件
目 录
• 微生物纯培养技术概述 • 微生物纯培养技术的基本原理 • 微生物纯培养技术的实验操作 • 微生物纯培养技术的应用实例 • 微生物纯培养技术的挑战与展望
微生物纯培养技术
01
概述
微生物纯培养技术的定义
01
微生物纯培养技术是指通过一定 的物理、化学手段，将自然界中 混杂的微生物群体分离出来，获 得纯种微生物的技术。
微生物的培养与应用 ppt课件
在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分 散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操 作和涂布平板操作。
微生物的培养与应用
系列稀释操作
101
102
103
1mL水的试管灭菌并编号。 (2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中， 轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。
微生物的培养与应用
涂布平板操作讨论
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板 划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何 进行无菌操作？
应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯 与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物 体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。
微生物的培养与应用
三、结果分析与评价
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
一、微生物的实验室培养
（一）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出供其生长繁殖的营养基质称 培养基 培养基的基本成分
一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水 等（具体见教材15页“100mL牛肉蛋白胨培养 基的营养构成”）。
微生物的培养与应用
1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮 源的分别是是什么物质？
碳源是葡萄糖，氮源是尿素。 2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？ 如果有，又是如何进行筛选的？ 有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只有能合成分解 尿素的脲酶的细菌才能生长。
微生物的培养与应用
（二） 统计菌落数目
原理
运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。
统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高
时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的
稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操 作和涂布平板操作。
微生物的培养与应用
系列稀释操作
101
102
103
1mL水的试管灭菌并编号。 (2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中， 轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。
微生物的培养与应用
涂布平板操作讨论
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板 划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何 进行无菌操作？
应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯 与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物 体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。
微生物的培养与应用
三、结果分析与评价
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
一、微生物的实验室培养
（一）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出供其生长繁殖的营养基质称 培养基 培养基的基本成分
一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水 等（具体见教材15页“100mL牛肉蛋白胨培养 基的营养构成”）。
微生物的培养与应用
1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮 源的分别是是什么物质？
碳源是葡萄糖，氮源是尿素。 2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？ 如果有，又是如何进行筛选的？ 有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只有能合成分解 尿素的脲酶的细菌才能生长。
微生物的培养与应用
（二） 统计菌落数目
原理
运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。
统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高
时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的
《微生物实验》课件
实验三 微生物的纯种分离法 思考题 在你所实验的三种培养基平板上长出的菌落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 稀释分离时，为什么要将融化的琼脂培养基冷却到45～50℃左右才能倾入装有菌液的培养皿内？ 划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 培养时为什么要将培养皿倒置培养？
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验器材
实验室环境微生物、大肠杆菌、酿酒酵母、放线菌及霉菌。
菌种：
马铃薯固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基、高氏一号固体培养基
培养基：
无菌培养皿、无菌棉签、火柴、超净工作台及恒温培养箱。
其他：
斜面接种
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法 液体接种 斜面 液体培养基 接种环 将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
中心实验室提供
微生物学实验教学课件
汇报人姓名
目 录
实验一 培养基的配置、分装和灭菌 实验二 环境中微生物的检测和菌落识别 实验三 微生物的纯种分离 实验四 细菌染色法和光学显微镜的使用 实验五 微生物的间接计数法——水中细菌总数的测定 实验六 放线菌和真菌的培养和形态观察 实验七 微生物显微镜直接计数法 实验八 细菌芽孢染色法 实验九 微生物生长量的测定和生长曲线的绘制 实验十 物理、化学因素对微生物生长的影响 实验十一 细菌鉴定中的生理生化反应 实验十二 食用菌菌种的分离和制种技术 实验十三 环境中细菌分离鉴定综合实验
实验一 培养基的配ຫໍສະໝຸດ 、分装与灭菌 实验方法实验一 培养基的配置、分装与灭菌 实验方法
微生物技术及应用PPT课件-2024鲜版
生长曲线的调控与优化 讲解如何通过改变培养条件或使用特定的生长因子等手段， 调控和优化微生物的生长曲线，以满足实验或生产需求。
10
03
微生物代谢与发酵技术
2024/3/28
11
微生物的代谢途径与调控
糖代谢途径
包括糖酵解、三羧酸循 环等，产生ATP和还原
力。
2024/3/28
氮代谢途径
包括氨基酸、核苷酸和 蛋白质的代谢，合成细
2024/3/28
33
微生物在医药工业中的应用
生产抗生素
利用微生物发酵技术生产抗生素，如青霉素、链霉素等，用于治疗 各种细菌感染。
生产疫苗
利用微生物培养技术生产疫苗，如麻疹疫苗、流感疫苗等，用于预 防传染病。
生产酶制剂
利用微生物发酵技术生产酶制剂，如淀粉酶、蛋白酶等，用于促进药 物合成和分解。
2024/3/28
研究微生物生长、底物消耗和 产物生成的动力学关系。
发酵设备与技术
包括发酵罐设计、传质与传热、 在线监测与控制等。
2024/3/28
13
发酵产品的分离与纯化
预处理
去除发酵液中的菌体、杂质等， 提高后续分离纯化效率。
2024/3/28
分离方法
包括萃取、吸附、膜分离等，根 据目标产物的性质选择合适的分 离方法。
医学领域
利用微生物技术生产疫苗和诊断试剂， 预防和治疗各种传染病和慢性病。此 外，基因工程和细胞工程等技术在医 学领域也有广泛应用。
2024/3/28
农业领域
利用微生物肥料和生物农药等技术， 提高农作物产量和品质，减少化学肥 料和农药的使用。
环境领域
利用微生物处理污水和废气等环境污 染物，以及进行环境监测和评价等工 作。
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03
微生物代谢与发酵技术
2024/3/28
11
微生物的代谢途径与调控
糖代谢途径
包括糖酵解、三羧酸循 环等，产生ATP和还原
力。
2024/3/28
氮代谢途径
包括氨基酸、核苷酸和 蛋白质的代谢，合成细
2024/3/28
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微生物在医药工业中的应用
生产抗生素
利用微生物发酵技术生产抗生素，如青霉素、链霉素等，用于治疗 各种细菌感染。
生产疫苗
利用微生物培养技术生产疫苗，如麻疹疫苗、流感疫苗等，用于预 防传染病。
生产酶制剂
利用微生物发酵技术生产酶制剂，如淀粉酶、蛋白酶等，用于促进药 物合成和分解。
2024/3/28
研究微生物生长、底物消耗和 产物生成的动力学关系。
发酵设备与技术
包括发酵罐设计、传质与传热、 在线监测与控制等。
2024/3/28
13
发酵产品的分离与纯化
预处理
去除发酵液中的菌体、杂质等， 提高后续分离纯化效率。
2024/3/28
分离方法
包括萃取、吸附、膜分离等，根 据目标产物的性质选择合适的分 离方法。
医学领域
利用微生物技术生产疫苗和诊断试剂， 预防和治疗各种传染病和慢性病。此 外，基因工程和细胞工程等技术在医 学领域也有广泛应用。
2024/3/28
农业领域
利用微生物肥料和生物农药等技术， 提高农作物产量和品质，减少化学肥 料和农药的使用。
环境领域
利用微生物处理污水和废气等环境污 染物，以及进行环境监测和评价等工 作。
微生物的培养和利用PPT课件
氧元素—— 物质本身不含水。
滴有浓硫酸的滤纸炭化变黑。
C.强氧化性
（１）金属与浓硫酸反应：浓硫酸可以与除 Au、Pt外的金属加热反应，一般不产生H2， 而是产生硫的化合物SO2；
思 考：
１.反应前后溶液及铜丝有 那些变化？
铜与浓硫酸反应
２.实验发生后品红溶液有 何变化？
３.盛品红溶液试管口的棉 花起什么作用？
H2S + H2SO4（浓）= S↓ + SO2 + 2H2O
疑问：
(a)H2S、NH3能用浓硫酸干燥吗？为什么呢？ (b)能用浓硫酸干燥的气体有哪些呢？
CO2、Cl2、H2、O2、NO2、SO２、HCl等
4.在5NH4NnO3=2HNO3+4N2 +9H2O的反应 中,被氧化的氮原子与被还原的氮原子
（２）Ｃ、Ｓ、Ｐ非金属等与浓硫酸反应: 浓硫酸的还原产物一般为SO2
C + 2H2SO4（浓）= CO２↑+ 2SO2↑+ 2H2O
S + 2H2SO4（浓）= 3SO2↑+ 2H2O
（３）还原性化合物与浓硫酸反应:
2NaI + 2H2SO4（浓）= Na2SO4 + I2 + 2SO2 ↑+2H2O
（1）都含有氢元素。
（2）H2SO4 = 2H＋+ SO42－ 酸的通性实
HCl = H＋+Cl－
质就是H＋的
HNO3 = H＋+NO3－ 性质。
• 酸的通性：
稀硫酸 H2SO4 = SO42-+2H+
石蕊试液
金属 Fe
金属氧化物 CuO
碱
Cu(OH)2
滴有浓硫酸的滤纸炭化变黑。
C.强氧化性
（１）金属与浓硫酸反应：浓硫酸可以与除 Au、Pt外的金属加热反应，一般不产生H2， 而是产生硫的化合物SO2；
思 考：
１.反应前后溶液及铜丝有 那些变化？
铜与浓硫酸反应
２.实验发生后品红溶液有 何变化？
３.盛品红溶液试管口的棉 花起什么作用？
H2S + H2SO4（浓）= S↓ + SO2 + 2H2O
疑问：
(a)H2S、NH3能用浓硫酸干燥吗？为什么呢？ (b)能用浓硫酸干燥的气体有哪些呢？
CO2、Cl2、H2、O2、NO2、SO２、HCl等
4.在5NH4NnO3=2HNO3+4N2 +9H2O的反应 中,被氧化的氮原子与被还原的氮原子
（２）Ｃ、Ｓ、Ｐ非金属等与浓硫酸反应: 浓硫酸的还原产物一般为SO2
C + 2H2SO4（浓）= CO２↑+ 2SO2↑+ 2H2O
S + 2H2SO4（浓）= 3SO2↑+ 2H2O
（３）还原性化合物与浓硫酸反应:
2NaI + 2H2SO4（浓）= Na2SO4 + I2 + 2SO2 ↑+2H2O
（1）都含有氢元素。
（2）H2SO4 = 2H＋+ SO42－ 酸的通性实
HCl = H＋+Cl－
质就是H＋的
HNO3 = H＋+NO3－ 性质。
• 酸的通性：
稀硫酸 H2SO4 = SO42-+2H+
石蕊试液
金属 Fe
金属氧化物 CuO
碱
Cu(OH)2
最新微生物的培养和应用课件PPT课件
选择培养基和鉴别培养基的比较
从众多微生物 中分离所需的 微生物
加入青霉素分离得 到酵母菌和霉菌
鉴别不同种 类的微生物
伊红—美篮培养基 使大肠杆菌的菌落 呈深紫色，可以鉴 别大肠杆菌
几种选择培养基：
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A.C A 光合细菌 B 根瘤菌 C 硝化细菌 D 乳酸菌
2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是
A 糖、有机酸等 B 二氧化碳、碳酸盐
A.C
C 蛋白质
D 无机氮化物
下表关于四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢的类 型，描述正确的是
1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方
（2）特殊营养：—生长因子
细菌生长必需，而往往自身不能合成的 化合物，如维生素、某些氨基酸、碱基等
（3）pH、氧气等要求
四：营养基配制的原则
1：目的要明确 配制培养基要根据 培养的微生物、培养
的目的、培养基的用途来确定培养基的化 学成分、物理状态。 2：营养要协调 3：PH要适宜
五、培养基的配制过程
霉菌 5.0～6.0 细菌6.5～7.5 放线菌 7.5～8.5
以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？
三、培养基的营养物质 1、水 2、碳源（提供碳元素的物质） 3、氮源（提供氮元素的物质） 4、无机物（无机盐） 5、生长因子（微生物生长不可缺少的微 量有机物。如维生素、含氮碱基）
碳源
▪ 可作为碳源的物质有: ▪ 含碳无机物: 碳酸盐 碳酸氢盐 二氧化碳 ▪ 含碳有机物： 糖类（主要）
微生物操作范例.ppt
2.平板划线接种：
（三）棉塞的制作
制作棉塞原则上采用普通棉花（非脱脂棉）
(四）玻璃仪器的包扎
1.移液管的包扎
2.试管的包扎
（五）获得菌种的途径：
1.从专业机构、科研机构、高等院校等获 取
*广东省微生物研究所微生物菌种保藏 中心中国广州市先烈中路一百号省微生物 所实验楼五楼
电话：(020)37656629,35973334 *有微生物教学任务的高等院校
2.通过菌种分离
(1) 从自来水中分离大肠杆菌
我国城市自来水卫生标准，大肠杆菌指数<10个／升
(2)用简易组织分离法获得食用菌菌种
三、微生物实验技术操作规范示例
（一）斜面接种无菌操作技术 （二）倒平板及平板划线接种 （三）棉塞的制作 （四）玻璃斜面接种无菌操作技术
(二）倒平板及平板划线接种
1.倒平板：按无菌要求，在火焰旁操作，取融化并冷却至 不烫手的固化培养基（约50℃），倒入无菌培养皿中，倒 量以铺满皿底为限，不超过培养皿高度的1/3。
《微生物采油》课件
实验步骤与实验结果
注入微生物，开始采油过程。
监测采油过程中的各项参数，如采收率、油品质量等。
实验步骤与实验结果
实验结果
油品质量得到改善，轻质 油比例增加。
采收率显著提高，达到预 期目标。
微生物对石油的降解作用 明显，证实了其有效性。
实验结论与实验意义
01
实验结论
02 微生物采油技术具有可行性和优势，可提高采收 率和油品质量。
微生物采油的未来展望
未来，微生物采油技术将更加注重与其他油田 开发技术的结合，形成多学科交叉的油田开发
技术体系。
未来，微生物采油技术有望在非常规油田、老油田和 边际油田的开发中发挥重要作用。
随着全球能源需求的不断增长，微生物采油技 术有望成为未来重要的油田开发技术之一。
微生物采油技术将更加注重智能化和自动化技术 的应用，提高采油效率和降低人工成本。
微生物采油的挑战与机遇
微生物采油技术面临的挑战主要包括提高采收率、降低成本、环保和安全 生产等方面。
随着技术的不断进步和研究的深入，微生物采油技术将不断克服这些挑战 ，迎来更多的发展机遇。
政府和相关机构应加大对微生物采油技术的支持力度，推动其产业化进程 ，为油田开发提供更多选择和解决方案。
05
结论
微生物在地层中生长、繁 殖和代谢，产生生物表面 活性剂、溶剂和酸等代谢 产物。
通过微生物及其代谢产物 的物理和化学作用，降低 原油粘度，提高采收率。
微生物采油的关键技术
微生物种类的选择与优化
针对不同油藏条件，选择适合的微生物 种类并进行优化，提高采收率。
注入参数的确定
根据油藏条件和采收率要求，确定合 理的注入参数，如注入量、注入速度
01
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6 操作步骤
6.2 初发酵试验
每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品 匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接 种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接 种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤）。
36℃±1 ℃培养24 h±2 h。
观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气 者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠 菌群阴性。
－
肺炎克雷伯氏菌Ⅰ －
－＋
＋
－－ －
－
肺炎克雷伯氏菌Ⅱ ＋
－＋
＋
－－ －
－
阴沟肠杆菌
＋
－＋
＋
－ ＋/－ ＋
－
3 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设 备及材料如下：
3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 3.4 天平：感量0.1 g。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻 度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量500 mL。 3.9 无菌培养皿：直径90 mm。 3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 3.11 菌落计数器。
大肠菌群生化特性分类表
大肠艾希氏菌Ⅰ 大肠艾希氏菌Ⅱ 大肠艾希氏菌Ⅲ
靛基质 甲基红 V-P 枸椽酸盐 H2S
＋
＋－
－
－
－
＋
－
－
－
＋
＋－
－
－
明胶
－ － －
动力
＋/－ ＋/－ ＋/－
44.5 ℃乳糖
＋ － －
弗氏柠檬酸杆菌Ⅰ －
＋－
＋ ＋/－ － ＋/－
－
弗氏柠檬酸杆菌Ⅱ ＋
＋－
＋ ＋/－ － ＋/－
食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数
1 范围 本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。
2 术语和定义 2.1 大肠菌群coliforms 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性 厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.2 最可能数most probable number，MPN基于泊松分布 的一种间接计数方法。
4 培养基和试剂
4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录A 中A.1。 4.2 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录A 中A.2。 4.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：见附录A 中A.3。 4.4 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.4。 4.5 无菌生理盐水：见附录A 中A.5。 4.6 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.6。 4.7 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.7。
微生物实验技术应用实例
实例1
食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数
National food safety standard Food microbiological examination: Enumeration of coliforms
2010-03-26 发布
中华人民共和国卫生部 发布
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数 量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
6.1.3 样品匀液的pH 值应在6.5～7.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。
100
1ml
10-1
1ml
10-2
1ml
LST肉汤管
（36±1）℃培养（24±2）h
初 发 酵 试 验 操 作 图 示
Байду номын сангаас
6 操作步骤
6.3 复发酵试验
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环， 移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1℃ 培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌 群阳性管。
2010-06-01 实施
GB 4789.3—2010
前言
本标准代替GB/T 4789.3-2008《食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数》。 本标准与GB/T 4789.3-2008相比，主要修改如下： ——修改了标准的中英文名称； ——“第二法 大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的 选择范围修改为“15 CFU～150 CFU”； ——删除了“第三法 大肠菌群PetrifilmTM 测试片法”。 本标准的附录A、附录B为规范性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——GB 4789.3-1984、GB 4789.3-1994、GB /T 4789.32003、GB /T 4789.3-2008。
6 操作步骤
6.1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品 匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 磷酸盐缓冲液 或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不 要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌 吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品 匀液。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作， 依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释 1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品 匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。
第一法 大肠菌群MPN 计数法
5 检验程序
6 操作步骤
6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品,放入盛有225 mL 磷 酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.4 大肠菌群最可能数（MPN）的报告
按6.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表 （见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的 MPN值。
LST肉汤管
复
发
酵
试
BGLB肉汤管
（36±1）℃培养（48±2）h
验 操
作
图
示
100
1ml
10-1
1ml
10-2
1ml
三步法大肠菌 群检验的全过 程及结果判断