分子生物学论文
分子生物学技术论文（2）
分子生物学技术论文(2)分子生物学技术论文篇二现代分子生物学技术在医学检验中的应用[摘要]随着医学的不断发展，生物学也不断在创新，其中，现代分子生物学技术在医学检验中起到关键作用。
所以，将生物学与医学相结合，是一项不可拖延的任务。
本文针对现代分子生物学技术，探讨了它在医学检验中的应用。
[关键词]现代分子生物学技术;医学检验随着基因克隆技术趋向成熟和基因测序工作逐步完善，后基因时代逐步到来。
20世纪末数理科学在生物学领域广泛渗透，在结构基因组学，功能基因组学和环境基因组学逢勃发展形势下，分子诊断学技术将会取得突破性进展，也给检验医学带来了崭新的领域，为学科发展提供了新的机遇。
1 分子生物传感器在医学检验中的应用分子生物传感器是利用一定的生物或化学的固定技术，将生物识别元件(酶、抗体、抗原、蛋白、核酸、受体、细胞、微生物、动植物组织等)固定在换能器上，当待测物与生物识别元件发生特异性反应后，通过换能器将所产生的反应结果转变为可以输出、检测的电信号和光信号等，以此对待测物质进行定性和定量分析，从而达到检测分析的目的。
分子生物传感器可以广泛地应用于对体液中的微量蛋白、小分子有机物、核酸等多种物质的检测。
在现代医学检验中，这些项目是临床诊断和病情分析的重要依据。
能够在体内实时监控的生物传感器对于手术中和重症监护的病人很有帮助。
Skladal等用经过寡核苷酸探针修饰的压电传感器检测血清中的丙型肝炎病毒(HCV)并实时监测其DNA的结构转录和聚合酶链式反应(PCR)扩增过程，完成整个监测过程仅需10 min且装置可重复使用。
Petricoin等用压电传感器研究了破骨细胞生成抑制因子(OPG)和几种相应抗体的相互作用，研发出可快速检验血清中OPG的压电免疫传感器。
Dro-sten等报道了检测神经递质的酶电报，将电极放置在神经肌肉接点附近可实时测定并记录邻近的神经元去极化后所释放的递质谷氨酸。
2 分子生物芯片技术在医学检验中的应用随着分子生物学的发展及人们对疾病过程的认识加深，传统的医学检验技术已不能完全适应微量、快速、准确、全面的要求。
分子生物学论文通用4篇
分子生物学论文通用4篇分子生物学论文篇一1制定合理的带教计划，重点明确实习学生在本院实习分子生物学的时间为4周。
由于实习时间较短，带教老师应首先制定合理的带教计划，便于学生充分利用有限的时间掌握实习内容。
在制定带教计划的过程中，不仅要结合学科的大纲要求，还应结合历届学生的学习情况和实验室的基本情况，制定最合理、最贴近实际的带教计划。
由于本实验室开展的检验项目较多，而学生实习时间较短，实习内容不可能面面俱到，因此在带教计划中将带教内容分为4个类别，即熟练掌握、基本掌握、熟悉和了解。
例如，分子生物学实验室的分区制度、工作流程、乙型肝炎病毒DNA检测等纳入实习生应熟练掌握的内容。
有侧重点的带教可以让实习学生在有限的时间内牢固掌握常用检测项目的原理、操作方法、注意事项、临床意义等，有助于学生在以后的工作中进一步由点到面地进行分子生物学检验知识的学习。
2注重岗前教育，树立整体意识为引导实习学生转变角色，保证实习质量，岗前教育是必不可少的。
分子生物学实验室对设备、环境和操作人员有较高的要求，因此在实习学生进入分子生物学实验室前，应首先对其进行岗前教育，包括分子生物学实验室基本情况、分区制度及相关工作流程等。
并且要求学生实习前仔细阅读实验室管理文件和标准操作规程（SOP）文件，着重学习分子生物学实验室各区的工作制度、各项目检测操作规范、质量控制、生物安全防护及标本接收、处理和保存等内容，使学生对实验室工作有初步的认识。
学生进入实验室后，带教老师应首先引导实习学生按照区域流向制度依次参观各实验分区，系统地向其介绍各检验项目的检测原理及临床意义。
然后，根据带教计划的侧重点，选择常用检测项目，结合项目介绍主要相关仪器设备的工作原理、操作程序、日常保养及记录登记，让实习生树立整体意识，对实验室的工作有全面的了解。
3加强操作训练，培养质量控制理念分子生物学的发展速度较快，学生在校园内依靠有限的教学设备和较少的实验课时难以掌握分子生物学的基本技术。
分子生物学课程论文(精)
PCR技术发展与应用的研究进展王亚纯 09120103摘要：聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR 是最常用的分子生物学技术之一，通过变性、退火和延伸的循环来完成核酸分子的大量扩增．定量PCR 技术是克服了原有的PCR 技术存在的不足，能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等，快速PCR 技术快速PCR 在保证PCR 反应特异性、灵敏性和保真度的前提下，在更短时间内完成对核酸分子的扩增．mRNA 差异显示PCR 技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一．近年来已经开展了许多这三方面的研究工作，本文就定量PCR 技术、快速PCR 技术、mRNA 差异显示PCR 技术作一综述，以便更好地理解及应用这项技术。
关键字：定量PCR ；荧光PCR ；快速PCR ；DNA 聚合酶；mRNA 差异显示PCR0 前言聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR 技术由于PCR 简便易行、灵敏度高等优点，该技术被广泛应用于基础研究。
但是，由于传统的PCR 技术不能准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，使其在临床上的应用受到限制[1]。
鉴于此，对PCR 产物进行准确定量便成为迫切的需要。
几经探索，先后出现了多种定量PCR (quantitative PCR ，Q-PCR 方法，其中结果较为可靠的是竞争性PCR 和荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR 。
随着生命科学和医学检测的不断发展，人们越来越希望在保证PCR 反应特异性、灵敏性、保真度的同时，能够尽量缩短反应的时间，即实现快速PCR(Rapid PCR or Fast PCR。
快速PCR 技术不仅可使样品在有限的时间内可以尽快得到扩增，而且可以显著增加可检测的样品数量，显然，在大批量样本检测和传染病快速诊断等方面将会有重要的应用前景。
分子生物学综述论文(基因敲除技术)
现代分子生物学课程论文题目基因敲除技术班别生物技术10-2学号 *********** 姓名陈嘉杰成绩基因敲除技术的研究进展要摘基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。
此后经历了近20年的推广和应用，直到2007年10月8日，美国科学家马里奥•卡佩奇（Mario Capecchi）和奥利弗•史密西斯（Oliver Smithies）、英国科学家马丁•埃文斯（Martin Evans）因为在利用胚胎干细胞对小鼠基因金星定向修饰原理方面的系列发现分享了2007年诺贝尔生理学或医学奖。
基因敲除技术从此得到关注和肯定，并对医学生物学研究做出了重大贡献。
本文就基因敲除的研究进展作一个简单的综述。
关键词基因敲除、RNAi、生物模型、同源重组前言基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改制，具有转移性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。
应用DNA同源重组技术将灭活的基因导入小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES cells）以取代目的基因，再筛选出已靶向灭活的细胞，微注射入小鼠囊胚。
该细胞参与胚胎发育形成嵌合型小鼠，再进一步传代培育可得到纯合基因敲除小鼠。
基因敲除小鼠模型的建立使许多与人类疾病相关的新基因的功能得到阐明，使现代生物学及医学研究领域取得了突破性进展。
上述起源于80年代末期的基因敲除技术为第一代技术，属完全性基因敲除，不具备时间和区域特异性。
关于第二代区域和组织特异性基因敲除技术的研究始于1993年。
Tsien等[1]于1996年在《Cell》首先报道了第一个脑区特异性的基因敲除动物，被誉为条件性基因敲除研究的里程碑。
该技术以Cre/LoxP系统为基础，Cre在哪种组织细胞中表达，基因敲除就发生在哪种组织细胞中。
2000年Shimizu等[2]于《Science》报道了以时间可调性和区域特异性为标志的第三代基因敲除技术，其同样以Cre/LoxP系统为基础，利用四环素等诱导Cre的表达。
分子生物学论文(精)
作用在小分子核糖核酸(miRNAs抗癌药物的分子机理与其耐药性和临床实践意义班级: 药学一班组员:张志强陈建斌刘军伟廖鑫杨承林张相如作用在小分子核糖核酸(miRNAs抗癌药物的分子机理与其耐药性和临床实践意义文摘抗药性在治疗癌症患者的常规的化疗中和新颖的生物药剂中仍然是一个主要的问题。
内在或获得性耐药可能是由于一系列的机制，包括增加药物性的消除，减少的药物吸收，药物的药物靶点失活和改变等。
最近的数据表明，除了遗传(突变，放大和表观基因(DNA甲基化、组蛋白修饰的变化，翻译后修饰等耐药机制也可能受小分子核糖核酸(mRNA的影响。
在本文我们概述小分子核糖核酸在抗癌药物的耐药性的作用，报道主要研究经由放松管制的mRNA 的表达导致的细胞存活和细胞凋亡通路的改变，以及在药物的目标和药物代谢的决定因素，还讨论了当前状态的药理遗传学研究及其可能的mRNA 作用，是肿瘤干细胞药物耐药性。
最后，在肺癌和胰脏癌症的研究中整合了临床前数据与临床证据，证明小分子核糖核酸对癌症的作用。
1介绍癌症是全球范围内一种最常见的死亡原因，我们在继续寻找新的有效的治疗方法，以及生物标志物的可能性，应对这些疗法进行评估，最新了解新的肿瘤的分子基础已经启用开发合理设计，有针对性的药剂。
然而，通过在治疗癌症的限制效力，两个传统化疗和新颖的生物制剂中抗药性仍然是一个主要的障碍。
[1]癌症药物耐药性可以大致分为两种类别:内在和获得性耐药。
肿瘤可以是对治疗药物治疗前的固有电阻，其他肿瘤是最初敏感，逐渐获得阻力的治疗，最常见的原因是大范围抗癌药物的抵抗。
表达一个或多个能源依赖运输检测抗癌药物的细胞，导致多药耐药性[ 2 ]。
然而，由于非均质性和复杂的癌细胞作用机制和抗癌药物的不同，其他几个机制参与肿瘤耐药性也就不同。
特别是，细胞毒性药物造成的细胞死亡过程的影响，这通常对过于活跃的或在增强的肿瘤与正常细胞相比较强，如脱氧核糖核酸的合成，而生物药物与受体，配体，信号分子，和基因是在肿瘤的生长和发展的关键，并能抑制肿瘤细胞增殖，诱导程序性细胞死亡，抑制血管生成，或增强抗肿瘤免疫反应。
分子生物学方法范文
分子生物学方法范文分子生物学是一门研究生物体分子结构与功能的学科，它使用一系列方法和技术来研究细胞和分子之间的相互作用。
这些方法和技术包括基因克隆、Polymerase Chain Reaction (PCR)、DNA测序、基因组学、蛋白质分析、基因表达调控研究等。
基因克隆是分子生物学中最常用的方法之一、基因克隆是将DNA片段从一个生物体中分离并插入到另一个生物体的过程。
它通常使用限制性内切酶切割DNA，然后将切割后的DNA片段连接到载体DNA上，最后将重组的DNA转移到宿主细胞中。
基因克隆可以用来研究基因功能、生物体的发育过程以及生物体对特定环境条件的适应能力。
PCR是一种用于扩增DNA的方法。
它是在体外重复进行的DNA复制过程，通过不断重复DNA的变性、退火和延伸，使DNA分子数倍增加。
PCR可以用于从非常少量的DNA样本中扩增特定的DNA片段，甚至可以从古代DNA样本中扩增DNA序列。
PCR广泛应用于基因检测、基因组学、疾病诊断、DNA测序等领域。
DNA测序是研究DNA序列的方法。
它能够确定DNA分子中不同碱基的顺序。
DNA测序技术的发展使科学家能够更好地理解生物体的基因组结构、功能和演化。
现代DNA测序技术包括链终止法和高通量测序技术。
链终止法通过引入标记的碱基和DNA聚合酶来合成DNA链，并测定终止反应产物的碱基序列。
高通量测序技术可以同时测序数百万个DNA片段，大大提高了测序效率和测序深度。
基因组学是研究生物体基因组的科学领域。
它包括DNA测序、基因组序列分析、基因组结构与功能的研究等。
通过基因组学的研究，科学家能够了解一个生物体的基因组大小、基因数目、基因的组织形式以及基因在生物体中的调控等信息。
基因组学的发展使我们能够更好地理解生物进化、发育和疾病的相关机制。
蛋白质分析是研究生物体蛋白质结构和功能的方法。
蛋白质是生物体中最重要的分子之一，它们参与调控细胞的代谢过程、结构与功能。
蛋白质分析方法包括电泳、质谱、免疫学方法等。
生物芯片研究进展分子生物学论文
生物芯片研究进展摘要生物芯片是切采用生物技术制备或应用于生物技术的微处理器是便携式生物化学分析器的核心技术。
通过对微加工获得的微米结构作生物化学处理能使成千上万个与生命相关的信息集成在一块厘米见方的芯片上。
生物芯片发展的最终目标是将从样品制备、化学反应到检测的整个生化分析过程集成化以获得所谓的微型全分析系统或称缩微芯片实验室。
生物芯片技术的出现将会给生命科学、医学、化学、新药开发、生物武器战争、司法鉴定、食品和环境卫生监督等领域带来一场革命。
本文主要阐述了生物芯片技术种类和应用方面的近期研究进展。
关键词生物芯片，疾病诊断，研究运用，基因表达基因芯片的种类基因芯片产生的基础则是分子生物学、微电子技术、高分子化学合成技术、激光技术和计算机科学的发展及其有机结合。
根据基因芯片制造过程中主要技术的区别，下面主要介绍四类基因芯片。
一、光引导原位合成技术生产寡聚核苷酸微阵列开发并掌握这一技术的是Affymetrix公司，Affymetrix采用了照相平板印刷技术技术结合光引导原位寡聚核苷酸合成技术制作DNA芯片，生产过程同电子芯片的生产过程十分相似。
采用这种技术生产的基因芯片可以达到1×106/cm2的微探针排列密度，能够在一片1厘米多见方的片基上排列几百万个寡聚核苷酸探针。
原位合成法主要为光引导聚合技术（Light-directed synthesis），它不仅可用于寡聚核苷酸的合成，也可用于合成寡肽分子。
光引导聚合技术是照相平板印刷技术（photolithography）与传统的核酸、多肽固相合成技术相结合的产物。
半导体技术中曾使用照相平板技术法在半导体硅片上制作微型电子线路。
固相合成技术是当前多肽、核酸人工合成中普遍使用的方法，技术成熟且已实现自动化。
二者的结合为合成高密度核酸探针及短肽列阵提供了一条快捷的途径。
Affymetrix公司已有诊断用基因芯片成品上市，根据用途可以分为三大类，分别为基因表达芯片、基因多态性分析芯片和疾病诊断芯片，基因表达分析芯片和基因多态性分析芯片主要用于研究机构和生物制药公司，可以用来寻找新基因、基因测序、疾病基因研究、基因制药研究、新药筛选等许多领域，Affymetrix公司主要生产通用寡聚核苷酸芯片；疾病诊断芯片则主要用于医学临床诊断，包括各种遗传病和肿瘤等，目前Affymetrix公司生产三种商品化诊断芯片，分别为p53基因突变诊断芯片、艾滋病病毒基因基因突变诊断芯片和细胞色素P450基因突变诊断芯片。
分子生物学论文
贵州大学课程论文学院：贵州大学农学院班级：植物生产类113姓名：蒲云海学号：1109010171课程名称：分子生物学课程论文题目：基因工程评阅成绩：评阅意见：成绩评定教师签名：日期：年月日基因工程学生：蒲云海(贵州大学农学院植物生产类113班，学号蒲云海摘要：基因作为机体内的遗传单位，不仅可以决定我们的相貌、高矮，而且它的异常会不可避免地导致各种疾病的出现。
某些缺陷基因可能会遗传给后代，有些则不能。
基因治疗的提出最初是针对单基因缺陷的遗传疾病，目的在于有一个正常的基因来代替缺陷基因或者来补救缺陷基因的致病因素。
生物工程主要有基因工程、细胞工程、酶工程、蛋白质工程和微生物工程等5个部分。
其中基因工程就是人们对生物基因进行改造，利用生物生产人们想要的特殊产品。
随着DNA的内部结构和遗传机制的秘密一点一点呈现在人们眼前，生物学家不再仅仅满足于探索、提示生物遗传的秘密，而是开始跃跃欲试，设想在分子的水平上去干预生物的遗传特性。
一.分子生物学技术概述分子生物学是一门在分子水平上研究生命现象的科学。
通过研究生物大分子(核酸、蛋白质)的结构、功能和生物合成等方面来阐明各种生命现象的本质。
研究内容包括各种生命过程。
比如光合作用、发育的分子机制、神经活动的机理、癌的发生等。
分子生物学从分子水平研究生物大分子的结构与功能从而阐明生命现象本质的科学。
自20世纪50年代以来，分子生物学是生物学的前沿与生长点，其主要研究领域包括蛋白质体系、蛋白质-核酸体系 (中心是分子遗传学)和蛋白质-脂质体系（即生物膜）。
生物大分子，特别是蛋白质和核酸结构功能的研究，是分子生物学的基础。
现代化学和物理学理论、技术和方法的应用推动了生物大分子结构功能的研究，从而出现了近30年来分子生物学的蓬勃发展。
二．基因工程基础基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。
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题目：PCR技术*****班级：生物工程1201班学号：********指导老师：***摘要：PCR是分子生物学的关键技术，又是常规技术。
它的出现极大地推动了分子生物学的发展，旋即被迅速推广并应用到生命科学的各个领域。
关键词：PCR、发展简史、基本原理、基本操作、主要应用PCR技术一、概念：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）是体外扩增DNA序列的技术。
它与分子克隆和DNA序列分析方法几乎构成了整个分子生物学实验工作的基础。
在这三种技术中，PCR方法理论上出现最早，实践中应用也最广泛。
PCR技术使对微量的核酸（DNA或RNA）操作变得简单易行，同时还可以使核酸研究脱离活体生物。
PCR技术的发明是分子生物学的一项革命，它极大地推动了分子生物学以及生物技术产业的发展。
二、基本原理（一）PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA 聚合酶的酶促合成反应。
DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA 来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。
在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。
类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
（二）PCR的反应动力学：PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。
反应最终的DNA扩增量可用Y＝(1＋X)n计算。
Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，n代表循环次数。
平均扩增效率的理论值为100%，但在实际反应中平均效率达不到理论值。
反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应”，这种效应称平台期数、PCR扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。
大多数情况下，平台期的到来是不可避免的。
（三）PCR扩增产物：可分为长产物片段和短产物片段两部分。
短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间，是需要扩增的特定片段。
短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的，以一个原始模板为例，在第一个反应周期中，以两条互补的DNA为模板，引物是从3'端开始延伸，其5'端是固定的，3'端则没有固定的止点，长短不一，这就是“长产物片段”。
进入第二周期后，引物除与原始模板结合外，还要同新合成的链(即“长产物片段”)结合。
引物在与新链结合时，由于新链模板的5'端序列是固定的，这就等于这次延伸的片段3'端被固定了止点，保证了新片段的起点和止点都限定于引物扩增序列以内、形成长短一致的“短产物片段”。
不难看出“短产物片段”是按指数倍数增加，而“长产物片段”则以算术倍数增加，几乎可以忽略不计，这使得PCR的反应产物不需要再纯化，就能保证足够纯DNA片段供分析与检测用。
（四）标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液10ul 4种dNTP混合物各200umol/L 引物各10～100pmol 模板DNA0.1～2ug TaqDNA聚合酶2.5u Mg2+1.5mmol/L加双或三蒸水至100ulPCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA 互补的程度。
理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
酶及其浓度：目前有两种TaqDNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。
催化一典型的PCR反应约需酶量2。
5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。
dNTP的质量与浓度：dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP 粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。
模板(靶基因)核酸：模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用S DS和蛋白酶K来消化处理标本。
Mg2+浓度：Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。
三、PCR技术发展简史人类对于核酸的研究已经有100多年的历史。
20世纪60年代末70年代初，人们致力于研究基因的体外分离技术。
但是，由于核酸的含量较少，一定程度上限制了DNA的体外操作。
Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想。
但是，当时的基因序列分析方法尚未成熟，对热具有较强稳定性的DNA聚合酶还未发现，寡核苷酸引物的合成仍处在手工、半自动合成阶段，这种想法似乎没有任何实际意义。
1985年，美国科学家Kary Mullis在高速公路的启发下，经过两年的努力，发明了PCR技术，并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文。
从此，PCR技术得到了生命科学界的普遍认同，Kary Mullis也因此而获得1993年的诺贝尔化学奖。
但是，最初的PCR技术相当不成熟，在当时是一种操作复杂、成本高昂、“中看不中用”的实验室技术。
1988年初，Keohanog通过对所使用的酶的改进，提高了扩增的真实性。
尔后，Saiki等人又从生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热的DNA聚合酶，使得PCR技术的扩增效率大大提高。
也正是由于此酶的发现使得PCR技术得到了广泛地应用，使该技术成为遗传与分子生物学分析的根本性基石。
在以后的几十年里，PCR方法被不断改进：它从一种定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片段。
到目前为止，PCR技术已有十几种之多，例如，将PCR与反转录酶结合，成为反转录PCR，将PCR与抗体等相结合就成为免疫PCR等。
四、PCR技术的操作（一）PCR的基本成分PCR包括7种基本成分：模板DNA、特异性引物、热稳定DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸（dNTP）、二价阳离子、缓冲液及一价阳离子。
模板DNA：包括基因组DNA、质粒DNA、噬菌体DNA、预先扩增的DNA、cDNA和mRNA分子等几乎所有形式的DNA和RNA都能成为PCR技术反应的模板。
除此之外，PCR反应还可以直接以细胞为模板。
特异性引物：是一段与模板DNA链结合的寡核苷酸片段，对于DNA的扩增起到引发的作用。
热稳定DNA聚合酶：这是PCR技术实现自动化的关键。
热稳定DNA聚合酶是从两类微生物中分离的：一类是嗜热和高度嗜热的真细菌，另一类是嗜热古细菌。
现在又出现了一种兼顾了几种DNA聚合酶特点的混合型酶。
脱氧核苷三磷酸（dNTP）：是DNA合成的原料，包括dATP、dGTP、dTTP、dCTP。
二价阳离子：常用到Zn2+和Mg2+,作为构成热稳定性DNA聚合酶的成分之一。
缓冲液：一般使用Tris-Cl缓冲液，标准的为10mmol/L,并将其调节到8.3~8.8之间。
一价阳离子：一般使用50mmol/L的KCl溶液，有利于改善扩增的产物质量。
（二）PCR的基本操作PCR是一种级联反复循环的DNA合成反应过程。
PCR技术的基本反应由三个步骤组成：1. 变性：通过加热使模板DNA完全变性成为单链，同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除；2. 退火：将温度下降至适宜温度，使引物与模板DNA退火结合；3. 延伸：将温度升高，热稳定DNA聚合酶以dNTP 为底物催化合成DNA链延伸。
以上三部为一个循环，新合成的DNA分子又可以作为下一轮合成的模板，经多次循环后即可达到扩增DNA片段的目的。
（三）PCR操作中的注意和要求1、污染的预防进行PCR 操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR 污染或杜绝污染的出现。
（1）划分操作区：目前，普通PCR 尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR 的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：标本处理区，包括扩增摸板的制备；PCR 扩增区，包括反应液的配制和PCR 扩增；产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。
各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。
如：标本制备→PCR扩增? 产物分析? 产物处理。
切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
2、环境污染：在排除试剂污染的可能性外，更换试剂后，若不久又发现试剂被污染了，如果预防措施比较严密，则考虑可能为环境污染。
环境污染中常见的污染源主要有：（1）模板提取时真空抽干装置；（2）凝胶电泳加样器；（3）电泳装置；（4）紫外分析仪；（5）切胶用刀或手术刀片；（6）离心机；（7）冰箱门把手，冷冻架，门把手或实验台面等；此时可用擦拭实验来查找可疑污染源。
用无菌水浸泡过的灭菌棉签擦拭可疑污染源；2）0.1ml 去离子水浸泡；3）取5ml 做PCR 实验；4）电泳检测结果。
（8）气溶胶。
如果经过上述追踪实验，仍不能查找到确切污染源，则污染可能是由空气中PCR 产物的气溶胶造成的，此时就应该更换实验场所，若条件不允许，则重新设计新的引物（与原引物无相关性）。
（三）．污染处理1、环境污染（1）稀酸处理法：对可疑器具用1mol/L 盐酸擦拭或浸泡使残余DNA 脱嘌呤；（2）紫外照射（UV）法：紫外波长（nm）一般选择254/300nm，照射30min 即可。