免疫分析技术研究进展

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免疫检测技术在临床应用中的新进展

免疫检测技术在临床应用中的新进展

免疫检测技术在临床应用中的新进展随着科技的不断发展,现代医学迎来了前所未有的挑战和机遇。

其中最重要的一个领域便是免疫检测技术。

这种技术已经成为医生们诊断和治疗患者的重要工具,而且在未来的医学发展中仍将发挥重要作用。

接下来将介绍免疫检测技术在临床中的新进展。

一、简介免疫检测技术是一种通过检测机体细胞或者体液中存在的特定抗体或者抗原来诊断疾病的技术。

这种技术被广泛应用于临床、生物技术、药物研究等领域。

随着科技的不断发展和创新,新的免疫检测技术和方法也在不断涌现。

二、新型免疫检测技术1、核酸扩增技术核酸扩增技术是一种从病原体中扩增出特定基因片段来诊断疾病的方法。

这种技术具有灵敏、特异、快速等优点,是目前最常用被用于感染性疾病的检测。

通过核酸扩增技术,医生可以从体液样本中直接筛查出病原体,如细菌、病毒、真菌等,对于快速准确地确定某些病原体的存在有重要的意义。

2、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是一种通过将数千种蛋白质分子固定在芯片上来检测生物体内某些蛋白质含量和变异的技术。

这种技术可以同时检测多种不同的蛋白质,具有高通量、高灵敏度、高特异性、高复现性等优点,已经广泛应用于肿瘤诊断、药物研发等领域。

3、生物传感器技术生物传感器技术是一种将生物识别分子与传感器结合,通过分子相互作用所引起的信号变化来检测疾病或药物的技术。

生物传感器具有灵敏度高、选择性好、快速、便携等特点,能够应用于各种现场检测和实时监测的场合,如无线设备和移动设备等。

三、应用前景随着技术的不断发展,免疫检测技术有望在临床中更广泛,更深入地应用。

首先,免疫检测技术可以用于筛查肿瘤早期。

在临床实践中,早期的肿瘤大多不会出现症状,但通过免疫检测技术,医生可以快速、准确地识别肿瘤细胞群,促进早期诊断、早期治疗。

其次,免疫检测技术也可以用于预测药物的反应。

通过分析病人体内的生物标志物,医生可以预测不同类型的疾病对不同药物的反应,为病人量身定制最合适的治疗方案。

免疫学研究的新进展与应用前景

免疫学研究的新进展与应用前景

免疫学研究的新进展与应用前景免疫学作为生物医学领域中的重要学科,研究人体免疫系统的组成、功能和调节机制,以及免疫系统与疾病发生发展的关系,对于预防和治疗各种疾病具有重要意义。

近年来,免疫学研究在理论和实践方面都取得了新的进展,并且在临床应用中显示出广阔的前景。

一、基于生物信息学的研究方法随着科技的不断进步,生物信息学作为一门新兴学科在免疫学研究中起到了重要作用。

生物信息学通过利用大规模基因测序数据等高通量数据的分析和挖掘,帮助研究人员发现了许多与免疫功能相关的关键基因和信号通路。

例如,利用生物信息学技术,研究者们发现了一类重要的T细胞亚群,即调节性T细胞(Treg),在调节免疫应答和自身免疫疾病中起到了关键作用。

二、免疫细胞治疗免疫细胞治疗是一种利用人体自身的免疫系统来治疗疾病的新技术,近年来在癌症治疗领域取得了显著进展。

免疫细胞治疗通过采集患者的免疫细胞,经过体外培养和改造后再重新注入患者体内,以增强患者自身的抗肿瘤免疫应答。

其中,CAR-T细胞疗法是最为广泛研究和应用的免疫细胞治疗技术之一,已经取得了一定的临床疗效。

三、免疫检测技术的创新免疫检测技术在临床诊断和治疗中的应用越来越广泛,同时也在不断地创新和发展。

近年来,研究者们提出了许多新的免疫检测方法,如流式细胞术、质谱和免疫组织化学等。

这些新技术的应用使得免疫学研究和疾病诊断更加准确和可靠,为临床提供了更精准的个体化治疗方案。

四、免疫治疗联合其他治疗方法免疫治疗作为一种相对副作用较小的治疗方法,越来越被广泛应用于多种疾病的治疗中。

不仅如此,免疫治疗还可以与其他治疗方法相结合,增强其疗效。

例如,在肿瘤治疗中,免疫治疗与化疗、放疗等配合使用,可以显著提高治疗效果,并减少对患者的伤害。

五、免疫学研究的应用前景在免疫学研究领域,尤其是在免疫治疗领域,未来的应用前景非常广阔。

随着基因编辑技术的突破,研究者们已经可以通过改变基因序列来调节免疫细胞的功能,进一步提高免疫治疗的疗效。

免疫学研究方法的新进展和应用

免疫学研究方法的新进展和应用

免疫学研究方法的新进展和应用免疫学是现代医学领域的一个重要分支,它主要研究生物体对抗病原体的免疫机制。

免疫系统包括多种细胞、分子和组织,其功能涉及到人体健康的众多方面。

近年来,随着科技的不断进步和发展,免疫学研究方法也在不断创新和改进,为抗疾病、护健康提供了更多的手段和技术。

一、单细胞技术单细胞技术是近年来免疫学研究中的一大进展,它可以对某些具有重要功能的细胞进行单个细胞层析和分析,避免了多细胞混杂而造成的数据误差和掩盖。

单细胞技术的应用使得免疫学研究得以更加深入,例如可以更好地了解抗体的形成、各类淋巴细胞的功能及其与肿瘤、自身免疫性疾病的关系等。

二、细胞流式技术细胞流式技术是一种基于单细胞的免疫学检测工具,它依赖于自动化设备实现多个参数的单细胞检测和分析。

细胞流式技术将光源与荧光探针紧密结合,使得检测精度更高。

同时,该技术也可以用于病毒、细菌的检测和分析,具有引领性的科学和应用价值。

三、免疫组化与细胞图像技术免疫组化技术以其高灵敏度的特点,被广泛用于病理诊断和药物研发。

在免疫组化技术的基础上,细胞图像技术更加突出了分子和细胞定位的重要性,能够对生物分子和细胞的特异性分子或者某项基因表达情况进行检测,为研究细胞的基本行为提供了有效手段。

四、抗原刺激诱导免疫细胞分离技术抗原刺激诱导免疫细胞分离技术是近年来非常新颖的技术方法。

该技术基于单个抗原上的高度特异性,可以有效地将免疫反应中所有与该特定抗原相关的免疫细胞分离出来,具有极高的分离纯度。

该技术不仅可以发掘已知和未知的新靶点,并且能够用于体外筛选多肽和激动剂,对免疫抗肿瘤治疗等方面的研究有着重要的意义。

五、多能免疫疗法多能免疫疗法充分利用了单细胞技术和制备技术的结合,即选取具有特定功能的单细胞进行操作和改造,再进行规模化制备。

这种技术能够开发出针对多个细胞表面分子的结合和重组抗体,为肿瘤等多种免疫疗法的研究提供了新的思路和方向。

总的来说,免疫学研究方法的新进展和应用,不仅要求我们具备先进和不断革新的技术手段,也需要我们不断深入地了解免疫学基础、挖掘免疫机制的本质,这样才能更好地推动免疫学研究的深入发展。

免疫学在医学中的应用与研究进展

免疫学在医学中的应用与研究进展

免疫学在医学中的应用与研究进展免疫学是研究机体抵抗外来病原体、维持内环境稳定的科学,它在医学领域中扮演着重要角色。

近年来,随着科技的不断进步,免疫学在医学领域的应用不断拓展,同时也推动了免疫学的研究进展。

本文将从免疫治疗、疫苗研发和免疫检测等方面探讨免疫学在医学中的应用和研究进展。

一、免疫治疗免疫治疗是利用免疫学理论和技术,通过调节或增强机体免疫功能来治疗疾病的方法。

免疫治疗在癌症的治疗中取得了显著的进展。

免疫检查点抑制剂通过抑制癌细胞对免疫系统的阻抗作用,使免疫系统能够主动攻击并清除癌细胞。

这种治疗方法已被广泛用于黑色素瘤、非小细胞肺癌等多种肿瘤的治疗中。

二、疫苗研发疫苗是一种通过激发机体免疫系统产生特异性免疫防御能力,从而预防和控制传染病的方法。

免疫学在疫苗研发方面起到了至关重要的作用。

传统的疫苗制备基于病原体的灭活或减毒,但这种方法在生产和使用过程中存在一定的难度和风险。

近年来,基因工程和细胞工程技术的发展使得疫苗的研发更为精细和高效。

例如,蛋白亚单位疫苗通过基因工程技术将病原体表面的抗原基因表达于真核细胞中,产生纯净、高效的疫苗。

三、免疫检测免疫检测是利用免疫学原理和技术检测体内抗原或抗体的水平,以达到诊断疾病、监测疫情和评估治疗效果的目的。

近年来,免疫检测技术的不断创新推动了医学诊断的发展。

例如,流式细胞术可以实现对单个细胞的快速、准确分析,有助于研究和诊断免疫相关疾病。

同时,免疫组化技术的广泛应用也为癌症诊断提供了重要手段。

总之,免疫学在医学中的应用与研究进展取得了丰硕的成果。

免疫治疗在癌症治疗中的重要性日益凸显,疫苗研发和免疫检测技术的革新也为医学领域带来了福音。

未来,随着科技的不断进步和学科的不断发展,我们有理由相信免疫学在医学中的应用和研究将会取得更加辉煌的成就。

临床分析中的免疫组织化学技术进展

临床分析中的免疫组织化学技术进展

临床分析中的免疫组织化学技术进展免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)作为一种重要的临床分析方法,在肿瘤诊断、治疗和预后评估等方面发挥着重要作用。

随着技术的不断进步和应用的广泛推广,免疫组织化学技术逐渐成为临床医学中的一项必备技能。

本文将从技术原理、应用领域和进展方面对免疫组织化学技术进行综述。

一、技术原理免疫组织化学技术是利用抗体与相应抗原结合的特异性反应来检测组织或细胞中特定分子的存在与定位。

其基本原理是将组织切片经过特定的预处理步骤后,使用专门的免疫反应试剂盒,将抗体与待检测的抗原发生特异性结合,并通过染色反应来显示抗原的分布情况。

免疫组织化学技术的核心在于选择合适的抗体,其中包括一抗和二抗。

一抗与待检测的抗原结合后,通过与二抗反应生成复合物,再使用染色试剂可使复合物形成染色沉积物。

通过显微镜观察染色沉积物的颜色和分布情况,可以得出待检测抗原在组织中的表达情况。

二、应用领域免疫组织化学技术已广泛应用于肿瘤学、病理学、免疫学等临床领域。

在肿瘤诊断中,可以通过检测特定标志物的表达来帮助鉴别不同类型的肿瘤,指导临床治疗。

例如,通过检测ER、PR、HER2等标志物的表达情况,可以为乳腺癌患者提供更精确的治疗策略。

在病理学中,免疫组织化学技术可以帮助鉴别病变的类型和性质。

通过检测特定抗原的表达情况,可以确定病变是否来源于肿瘤细胞、病毒感染等。

此外,免疫组织化学技术还可以在肾脏病变、风湿疾病等方面提供重要的诊断依据。

免疫组织化学技术在免疫学研究中也起着重要作用。

通过检测特定免疫细胞或分子的存在与定位,可以揭示机体对疾病或外界刺激的免疫应答过程,对于研究免疫学机制具有重要意义。

三、进展方向随着科学技术的不断进步,免疫组织化学技术也在不断发展和完善。

主要体现在以下几个方面。

1. 抗体的选择和特异性改进。

随着对不同抗原的研究深入,筛选和改进抗体的方法不断提升。

目前,已有多种技术可用于获得高特异性的抗体,如单克隆抗体和人工合成抗体等。

免疫学实验技术新进展

免疫学实验技术新进展

免疫学实验技术新进展免疫学作为生命科学的重要分支,一直以来都是医学和生物学研究的热点领域。

随着科学技术的不断发展,免疫学实验技术也在不断创新和完善,为免疫学研究和临床应用提供了更强大的工具和手段。

本文将介绍一些近年来免疫学实验技术的新进展。

一、单细胞免疫分析技术单细胞免疫分析技术是近年来免疫学领域的一项重大突破。

传统的免疫分析方法通常是对大量细胞群体进行平均化的测量,无法揭示单个细胞之间的异质性。

而单细胞免疫分析技术能够在单个细胞水平上对免疫细胞的表型、基因表达、蛋白质分泌等进行精确分析,为深入了解免疫系统的复杂性和多样性提供了有力的手段。

例如,单细胞 RNA 测序技术(scRNAseq)可以同时检测数千个单个细胞中的基因表达谱,帮助研究者发现新的免疫细胞亚群和细胞状态转换。

流式细胞术与单细胞分选技术的结合,可以对特定的免疫细胞进行分离和后续的深入分析。

此外,质谱流式细胞术(CyTOF)能够同时检测大量蛋白质标志物在单个细胞中的表达,提供了更全面的细胞免疫表型信息。

二、免疫组库分析技术免疫系统的多样性主要体现在 T 细胞受体(TCR)和 B 细胞受体(BCR)的基因重排上,形成了庞大的免疫组库。

免疫组库分析技术通过对 TCR 和 BCR 的基因序列进行测序和分析,可以了解免疫系统在不同生理和病理状态下的动态变化。

新一代测序技术(NGS)的应用使得大规模、高通量的免疫组库分析成为可能。

通过对 TCR 和 BCR 的可变区基因进行测序,可以评估免疫细胞的克隆多样性、克隆扩增情况以及抗原特异性等。

免疫组库分析在肿瘤免疫、自身免疫性疾病、感染性疾病等领域都具有重要的应用价值,有助于揭示免疫系统与疾病发生发展的关系,为疾病的诊断和治疗提供新的靶点和策略。

三、成像技术在免疫学中的应用成像技术在免疫学研究中的应用越来越广泛,为直观地观察免疫细胞在体内的分布、迁移和相互作用提供了重要手段。

共聚焦显微镜和双光子显微镜能够在细胞水平上实时观察免疫细胞与靶细胞之间的相互作用,以及细胞内的信号转导过程。

免疫学的研究现状和新思路

免疫学的研究现状和新思路

免疫学的研究现状和新思路免疫学是研究生物体如何通过自身的抵抗力来对抗病原微生物侵袭和异物侵入的一门学科。

自从人类有了对病原微生物感染的认识以来,免疫学就成为了防治疾病的重要领域之一。

目前,免疫学的研究内容十分广泛,包括细胞免疫、分子免疫、疫苗免疫、肿瘤免疫等多个方面。

一、细胞免疫研究现状细胞免疫是免疫学中的一个重要分支,它研究的是免疫系统中各类细胞的生理特性和免疫功能。

在细胞免疫的研究中,越来越多的人关注到了免疫细胞的分化和分裂问题。

例如,人们发现,由于免疫细胞的极度活化,免疫细胞在活化过程中会发生细胞凋亡现象。

在这种情况下,研究人员需要对免疫细胞的生命周期进行深入探究,从而更好地理解细胞免疫过程中发生的各类反应。

同时,研究人员还在探索各类细胞因子如何影响免疫细胞的生命周期和免疫反应。

例如,通过分析免疫细胞的蛋白质组成,人们发现一类名为”白细胞介素“的细胞因子对免疫细胞的分裂和分化具有非常重要的作用。

因此,研究人员正在尝试制备这种细胞因子,从而促进免疫细胞的生长和发育。

二、分子免疫的新思路相对于细胞免疫,分子免疫是近年来免疫学研究中的一个新领域,它主要关注免疫过程中分子的表达和功能。

最近,分子免疫领域的研究人员们发现,免疫细胞在入侵漏洞时会引发一系列化学反应过程,这些化学反应过程显著影响免疫细胞对病原微生物等侵入的敏感度和反应能力。

因此,研究人员正在探求基于分子调控的免疫细胞研究方法。

据报道,一种名为噬菌细胞神经凋亡相关分子(DAPK)的蛋白质能够调节免疫细胞的分化和功能,并且有望成为制备免疫调节剂的药物靶点。

此外,人们还在探求其他免疫分子以及分子调控机制,以找到更有效的免疫疗法。

三、疫苗免疫的近期进展疫苗免疫是预防疾病的重要手段之一,由于其安全性和有效性,疫苗免疫一直受到广泛的研究和应用。

目前,疫苗免疫已经发展到了第四代,结合了分子免疫、基因工程等多项前沿技术。

例如,研究人员正在尝试利用DNA疫苗,这种疫苗可以通过DNA转染实现免疫细胞的稳定表达,从而在体内特异性诱导免疫反应。

免疫学的最新研究进展及其未来

免疫学的最新研究进展及其未来

免疫学的最新研究进展及其未来免疫学是一个既古老又现代的学科,在过去几十年里,它取得了令人瞩目的进展。

随着科技的高速发展和免疫学的不断深入研究,我们的对免疫系统的认识逐渐清晰。

本文将介绍一些最新的研究进展和技术,同时也探讨了免疫学未来的一些前景。

概括性免疫理论目前,最受关注的研究领域之一是研究免疫系统是如何在规定的时间内产生适当的反应,而这个时间是由免疫系统内部的计时系统来控制的。

细胞周期和昼夜节律是计时系统中几个特别关键的因素,目前的研究证实了这个理论的正确性。

这个新的研究领域是免疫学和计时系统的一个新的交叉领域,这有助于我们更好地理解免疫系统对机体的自我调节和维护的机制,并为疾病的治疗提供新思路。

免疫检测免疫检测已经成为研究人员捕获特定抗原和分析免疫系统的最常用方法之一。

该技术已经发展出多种方法,包括酶联免疫吸附法(ELISA)、流式细胞术、单克隆抗体、转录组学、蛋白质芯片以及CRISPR/Cas-based技术等。

其中,流式细胞术(FACS)是一种强有力的免疫检测技术,可以通过同时检测细胞和表达的分子进行高度复杂的表型和功能分析。

它可以量化单个细胞或细胞次群中的蛋白表达、细胞大小和形状,并可用于研究线性和非线性分子交互作用。

由于FACS的灵活性、准确性和可重复性,它已经成为当前基础研究和应用研究的重要组成部分。

免疫基因组学免疫基因组学是指将基因组学和免疫学结合起来,从而评估免疫系统如何对存在的环境参数作出反应。

由于每个人的免疫系统都有不同的反应模式,因此评价免疫系统如何对环境参数作出反应就显得格外重要。

利用大规模基因表达谱测序、高通量测序和蛋白质组学方法,我们可以通过对多种细胞类型的分析来确定免疫系统的反应模式。

此外,针对个体基因组差异进行定制化免疫治疗也开始逐渐受到重视。

免疫治疗随着免疫学的不断发展,治疗性干预和免疫治疗的范围也在不断拓展。

其中包括特异性抗体疗法、T细胞治疗和细胞外囊泡等。

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免疫分析技术研究进展摘要:目的:综述免疫分析技术的最新研究进展。

方法:通过查阅国内外有关免疫分析技术的研究论文,对放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CLIA)等免疫分析技术进行了综述,同时指出了发展前景和尚待解决的问题。

结果:多种免疫分析方法相互结合,可大大提高分析方法的灵敏度,增大检测范围;CLIA和TRFIA是非放射免疫分析的两大主流,其中,CLIA更具有竞争力。

结论:目前还没有一种免疫分析技术是完美无缺的,各种技术还需要不断发展和完善,以开发出更新、更理想的免疫分析技术。

关键词:药物分析学;免疫分析;放射免疫分析;酶免疫分析;荧光免疫分析;化学发光免疫分析免疫分析法(immunoassay ,IA)是基于抗原和抗体特征性反应的一种技术。

由于免疫分析试剂在免疫反应中所体现出的独特的选择性和极低的检测限,使这种分析手段在临床、生物制药和环境化学等领域得到广泛应用。

各种标记技术(放射性标记、荧光标记、化学发光、酶标记等)的发展,使免疫分析的选择性更加突出。

免疫分析法起始于本世纪50年代,首先应用于体液大分子物质的分析,1960年,美国学者Yalow和Berson等将放射性同位素示踪技术和免疫反应结合起来测定糖尿病人血浆中的胰岛素浓度,开创了放射免疫分析方法的先河。

1968年,Oliver将地高辛同牛血清白蛋白结合,使之成为人工抗原,免疫动物后成功获得了抗地高辛抗体,从而开辟了用免疫分析法测定小分子药物的新领域。

在RIA的基础上,随着新的标记物质的发现及新的标记方法的使用,以及电子计算机、自动控制技术的广泛应用,派生出许多新的检测技术[1],使免疫分析法逐渐发展成为一门新型的独立学科。

1 免疫分析方法分类(1)根据标记物的不同,可以免疫分析主要分为放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)、酶免疫分析(enzyme immuoassay,EIA)、化学发光免疫分析(chemiluminescent immunoassay,CLIA)、荧光免疫分析法(fluorescence immunoassay,FIA)等。

(2)按反应机制的不同,可以分为竞争法和非竞争法。

非竞争法是将待测抗原与足够的标记抗体充分反应形成抗原-标记抗体复合物,产生的信号强度与抗原的量成正比。

竞争法是将过量的待测抗原与定量标记抗原竞争结合形成定量的特异性抗体,待测抗原的量越大,与抗体结合的标记抗原量越少,产生的信号强度越小,由此定量待测抗原的量。

(3)还可以按测定过程中的某些步骤的差异分为均相免疫分析和非均相免疫分析两大类。

均相酶免疫测定法的特点是抗原-抗体反应达到平衡,对结合与游离的标记物无需进行分离,可在自动生化分析仪器上直接测定。

非均相酶兔疫测定法的特点是必须对结合和游离的标记物进行分离,才能测定各自的浓度。

2 放射免疫分析(RIA)放射免疫分析是以放射性同位素为示踪物,与免疫反应相结合的一种分析方法,提供的检测信号是不断发出的放射线。

常用来标记的放射性同位素有3H、14C、1251、1311等。

放射免疫分析在应用上的优点是准确灵敏、特异性强,仪器试剂价格低廉、技术成熟,在我国仍将在相当长一段时间内被应用、推广和发展。

然而,其在应用上的缺点也是显而易见的,如药盒的使用寿命短,批间、批内变异较大,虽涉及放射性微小,但仍会面临公众反核的负面影响。

此外,放射免疫分析较难进行自动化分析,将面临新一代更灵敏、稳定、快速而且自动化程度高的测量技术的挑战。

3 酶免疫分析(EIA)酶免疫分析是一种非放射性标记免疫分析技术,以酶标记抗原或抗体作为示踪物,由高活性的酶催化底物显色或发光,达到定量分析的目的。

最初应用的EIA技术,多采用HRP标记抗体或抗原,灵敏度不高。

后来逐步发展了各种放大体系,如底物循环放大体系、酶联级放大体系、生物素-亲和素放大体系、脂质体或红细胞等作为标记物载体以包载大量标记物的放大体系,以及采用PCR 技术的PCR-EIA分析,使灵敏度有很大改进。

3.1 生物素-链亲和素酶免分析(biotin avidin sys-temBAS-EIA)生物素(botin)广泛存在于动植物组织中,在生物体内是羧化酶的辅酶;亲合素又名抗生物素蛋白,与生物素具有高度的亲和性,利用这一点,以生物素和亲和素为中介,可增强抗原-抗体反应的结合提高检测方法的灵敏度。

但亲和素的非特异性结合高,后又发现另一种亲合素,称之为链亲合素(Streptavin,SA),克服了亲合素非特异性结合高的缺点[2]。

免疫分析技术中,目前均采用SA供标记酶或其它示踪剂。

一个完整的SA分子上的4个相同亚基,都可以和一个生物素分子结合,其Ka值达1015L/mo1,是抗体抗原反应的10~100万倍。

又加之一个抗体或抗原分子结合多个生物素分子,不改变其免疫活性。

BAS-EIA的基本模式是以SA和酶的结合物作酶标记物,借助生物素、亲和素的高亲和力达到放大的目的,目前主要采用BSA-多层夹心法[3]:固相抗体-待测样品-生物素化抗体-链亲合素辣根过氧化物酶(SA-HRP)结合物;BSA-固相抗体竞争法[4]:固相抗体-抗原(生物素化抗原)-(SA-HRP);BSA-固相抗原竞争法:固相抗原(样品抗原)-生物素化抗体-(SA-HRP);BSA-固相二抗竞争法:固相抗抗体-抗体-生物素化抗原-(SA-HRP)。

3.2 脂质体免疫分析法(liposome immunoassay LIA)脂质体是一种生物摸拟膜,它是磷脂分子分散于水相介质中形成的密闭的双子单层或多层的囊泡。

其膜内可包容上万个标记物分子,具有很高的信号放大作用。

因此,将脂质体用于免疫分析是提高非放射免疫分析灵敏度的有效途径之一,由此所建立起来的方法即为脂质体免疫分析法。

3.2.1 LIA的分类LIA的测定模式主要有补体介导法、细胞膜溶解素介导法、凝集法和六角相变法。

补体介导法是依赖于补体的脂质体免疫的分析法,利用脂质体膜表面抗原抗体反应激活补体使脂质体溶解。

补体介导法的优点是均相、快速、灵敏、样品用量少及可实现自动化,既可以测定小分子的半抗原[5],又可以测定大分子的蛋白或抗体[6,7]。

其不足在于测定结果受脂质体膜表面形成的抗原-抗体复合物的数目、抗体的亲和力以及补体的活性等影响较大;参与经典途径激活的补体成分较多且不稳定,其中任何一个失活,都将导致脂质体溶解的减少或失败;所使用的补体活性有差异,每一批新的补体在使用之前都需测定其理想的浓度或稀释度。

细胞膜溶解素介导法是依据细胞膜溶解素及其与半抗原(或半抗原类似物)的复合物使脂质体膜溶解并释放出内含的标记物,而相应的游离抗体则抑制它的溶解建立起来的分析方法。

该方法具有通用性,一种脂质体的制备可用于不同分析物的测定,并且脂质体不致敏,避免了使用易变的补体,整个试验快速,可在5~10min内完成。

不过,该测定模式的敏感性受抗体的亲和力及半抗原-细胞膜溶解康的复合物的溶解活性影响较大。

六角相变法是依据某些磷脂如磷脂酰乙醇氨或心磷酯在一定条件下可分别形成脂质体和极不稳定的六角形相II(Hexagona,HII,)两种结构,且两者可以发生相变的性质,建立LIA,统称为六角相变法。

又可分为二价阳离子非双层构型诱导抑制法、靶敏感免疫脂质体测定法、接触敏感的脂质体免疫分析法[8]。

3.2.2 LIA的标记物及信号测量LIA应用研究的早期,人们以顺磁分于做标记物[9],采用电子自旋共振技术测量信号。

这种检测体系安全而灵敏,但仪器昂贵,而且实验中还必需避免自旋信号为生物液所猝灭。

用天然酶如辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酯酶(AP)、葡萄糖氧化酶(GOD)[10]等作标记物,优势在于信号可以用分光光度计测量,利于LIA的普及和推广;天然酶不会从脂质体中渗漏出来,从而保证了低的检测背景;脂质体和酶的双重放大作用使体系具有更高的灵敏度。

缺点是该体系脂质体溶解后不能直接进行信号测量,而必须先进行酶与底物的反应;脂质体制备期间,酶不可避免地会部分失活。

用荧光分子如羧基荧光素(CF)、钙黄绿素等作标记物,则脂质体溶解后无需进一步的反应,可直接用荧光分光光度计测量信号,此外,这类标记物以高浓度包裹在胎质体内时发生荧光自摔灭作用,从而保证了低的检阅背景和高的检阅灵敏度。

但荧光分子体积太小,能够从脂双层中渗漏出来,另外,Stoke s位移小于50 nm的荧光物质还存在着光散射的影响。

3.3 PCR-EIA分析PCR-EIA技术是运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性,它以一段特定的双链或单链DNA来标记抗体,用PCR扩增抗体所连接的DNA,由PCR产物的量来反映抗原分子的量。

由于PCR的高扩增能力,只需数百个抗原分子即可检测,甚至在理论上可检测到一至数个抗原分子。

3.3.1 PCR-EIA模式最初Sano等建立的免疫PCR模式为:固定化抗原-抗体-蛋白Ao链亲和素-生物素oPUC19,可以检测到600个BSA抗原,比用碱性磷酸酶作为标记物的ELISA敏感度高106。

虽然这种方法有极高的灵敏度,但所用的连接分子链亲和素-蛋白A嵌合体还没有商品化,限制了它在实际应用中的广泛普及。

Ruzicka[11]等人以生物素化的抗体取代Sano PCR-EIA系统中的抗体,采用固定化抗原-抗体o链亲和素-生物素oPUC19模式。

这种方法不需要特殊的试剂,生物素和亲和素(链亲和素)都已经商品化,因此在实际操作中得到广泛应用[12]。

3.3.2 PCR扩增产物的检测一般是通过琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色来检测并定量的,也有在凝胶电泳后用Southern杂交来检测PCR产物[13,14]。

1997年,Niemeyer[15]提出所谓免疫PCR和PCR-ELISA检测并定量PCR产物。

它主要是用一对分别标记生物素和地高辛的引物来扩增标记DNA,以亲和素作为捕获抗体固定扩增产物,用标记上碱性磷酸酶的抗地高辛抗体进行双抗夹心ELISA,即固相亲和素-生物素oDNAo地高辛-抗体o碱性磷酸酶,使结果具有更高的稳定性和可重复性。

4 荧光免疫分析(FIA)FIA是以荧光物质标记抗原或抗体,形成的标记物发生免疫反应后,引起荧光强度发生变化,从而达到定量分析的目的。

荧光免疫分析的方法很多,如荧光偏振免疫分析(fluroescence polaruzation immunoassay PFIA)、荧光猝灭免疫分析(fluorescemt enchancement immumoassay)、荧光增强免疫分析(Flurorescent Enhancement Immunoassay FEIA)。

传统荧光免疫分析受到散射光、样品的背景荧光和荧光淬灭等因素的干扰,分析灵敏度较低。

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