肾浊清颗粒剂对慢性肾衰竭大鼠肾

【关键词】慢性肾衰竭；肾浊清颗粒；α 平滑肌肌动蛋白；实验研究 【中图分类号】R692 【文献标识码】B【文章编号】1674 8999(2013)12 0078 02 慢性肾功能衰竭(CRF)是多种病因导致肾损害的晚期综合征。如何阻止肾脏疾病慢性恶化过程,保护残余肾单位,延缓慢性肾衰竭进展， 一直是肾脏病领域的难题。肾间质纤维化是预测肾脏病情的重要指标,对肾病的预后有重要影响,是几乎所有肾脏病进展到终末期肾衰竭的共 同通路［1］。在肾组织纤维化过程中都涉及细胞因子诱导间质成纤维细胞、肾小管上皮细胞或肾小球系膜细胞等转分化为α SMA ［2］。本研究以肾浊清颗粒（处方：人参、熟地、黄芪、枸杞、当归、白术、草果仁、大黄、水蛭、黄芩等）为研究对象，观察其对5/6 肾切除慢性肾衰竭大鼠模型肾组织α SMA表达的影响，探讨肾浊清颗粒治疗慢性肾衰竭的作用机理。 1实验材料 1 1实验动物 清洁级Wistar雄性大鼠100只，体重（220±20）g。由四川省医学科学院实验动物研究所提供（动物合格证号：SCXK （川）2010 15）。 1 2药物 肾浊清由云南理想药业提供，每包10g。尿毒清颗粒由广州康臣药业有限公司提供（20061022）。 1 3主要仪器与试剂 全自动生化仪，微量离心机，生物组织包埋机BM IX，切片机LEICARM2235，摊片烤片机CS IV型。 2实验方法 2 1造模方法 参照文献［3］。100只大鼠购入后，适应性喂养一周，称重，随机分为2组：假手术组（17只）、手术组（83只）。 I期手术：腹腔注射10%水合氯醛0 3ml/100g麻醉，消毒后，在大鼠左侧背部脊柱旁开2cm行纵行切口，暴露左侧肾脏，剥离肾周脂肪 及肾包膜，用止血镊夹住肾动脉，剪除左肾上、下极（左肾2/3），压迫止血，用甲硝唑注射液1ml冲洗伤口后逐层缝合切口。 II期手术：10天后以同样手术步骤暴露右侧肾脏，剥离脂肪及肾包膜，分离、结扎右肾动脉后切除右肾。 假手术组暴露肾脏后，只剥离肾包膜，不做肾脏手术切除。 II期手术正常喂养7周后，全部大鼠断尾采血，测定大鼠尿素氮（BUN）、肌酐(Scr)；另外随机抽出假手术组2只和手术组大鼠10只处 死，摘除残余肾作病理常规切片，观察肾组织病理变化，确定大鼠慢性肾衰模型造模成功（见表一）。造模期间手术组大鼠死亡13只。 2 2给药 慢性肾衰模型造模成功后，将手术组随即分为4组，即模型组、肾浊清颗粒高剂组（简称高剂组）、肾浊清颗粒低剂组（简称 低剂组）、尿毒清组（对照组），每组15只，加假手术组（15只），共5组。大鼠给药剂量确定按每公斤体重占体表面积比值算得，肾浊 清颗粒剂低剂量组为临床等效组，按1 35 g·kg 1·d 1灌胃; 高剂量组为其3 倍。尿毒清按1 81 g·kg 1·d 1灌胃。假手术组、模型组给 予2 ml 蒸馏水灌胃，共治疗60d。 2 3观察指标 观察并记录各组大鼠一般情况 (体重、毛色、进食、尿量、精神状态）、治疗后BUN、Scr，免疫组织化学染色（SP 法）技术分析检测α SMA。 免疫组织化学染色（SP法）结果判定方法:细胞膜或胞浆出现棕黄色染色为阳性。按以下分析： 阳性细胞率评分法 阳性细胞率评分表： 评分 0分 1分 2分 3分 细胞阳性率 无 <相应视野25% 相应视野26% 50% >相应视野50% 每张切片低倍镜下（100×）依序单盲观察左上、右上、左下、右下、中间5个视野，然后计算各项计分之和，作为阳性细胞率评分。 （2）按平均灰度 LEICA显微镜下观察肾组织病理变化并拍照,输入北航医学病理图像分析系统进行图像分析。观察视野内免疫阳性部分的平均灰度,半定 量法评估,平均灰度越小就表示免疫阳性程度越强。 2 4统计学处理 数据用±s 表示,组间比较用 t 检验。采用 SPSS17 0 统计软件处理。 3结果 3 1一般情况 假手术组：外观、活动正常，体重逐渐增大，到实验结束时达(280±32）g，动物无死亡。模型组、高剂组、低剂组、 对照组大鼠造模后开始出现明显多尿、食量减少、毛色发黄、弓背，并出现明显消瘦、眼珠红色变淡，有大鼠死亡，模型组死亡5只，死亡 率 33 33 %；高剂组死亡1只，死亡率 7 %，低剂组死亡3只，死亡率 20%，对照组死亡2只，死亡率 13 33%.3组治疗2周后大多数鼠毛 皮光柔度、眼珠红色度、食量等比模型组明显改善，反射性排尿不减少反增多，大多数鼠症状已出现好转。
3 2各组大鼠治疗后肾功能
4讨论 研究证实,,肾小管间质纤维化程度更能体现慢性肾脏疾病中肾脏疾病的严重性并与预后相关。肾间质纤维化几乎是各种肾脏疾病进展到 终末期肾病的共同途径，是导致慢性肾衰竭的主要病理学基础［4］。因此,对抗肾纤维化,特别是肾小管间质纤维化是延缓慢性肾衰竭进展 的途径之一。纤维化的形成表现为ECM合成增多,降解减少,基质蛋白在肾间质过度沉积［5］。抑制肌成纤维细胞的活化可起到抑制肾纤维 化,延缓慢性肾衰竭进展的作用。在一定病理条件下，肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞转分化后均表达α SMA，异化为肌成纤维细胞。 肌成纤维细胞在肾纤维化的发展中有重要的作用。其具有很强的增殖能力，在慢性肾脏疾病中过度增殖，逐渐成为肾间质的主要细胞，可 合成Ⅰ型胶原,分泌大量的ECM，是细胞外基质(ECM)积聚的主要来源［6］。并抑制ECM 降解,在肾纤维化的发展中起重要作用。 中医将慢性肾衰竭归于“水肿”、“关格”、“癃闭”、“溺毒”等范畴,认为本病为本虚标实之证,正虚为本,邪实为标。正虚方面多为属于脾肾虚 损、气阴两虚、肝肾阴虚;邪实责之于湿浊、瘀血、水气的认识。我们通过多年临床观察发现，慢性肾衰虽为“本虚标实，虚实夹杂”之证， 但在慢性肾衰的早中期呈正气虚损较重，邪实较轻的病理特点。此时应以补脾肾为主，化湿解毒活血为辅。在继承导师张琪教授学术思想 的基础上，总结出的经验方肾浊清颗粒剂应用于CRF早中期以求延缓慢性肾衰竭的进展。肾浊清颗粒剂以人参、熟地为君，人参益气健 脾，熟地补血滋肾、益精助阳，二者合用补脾肾之虚损，益气血之不足；配黄芪增益气健脾之功，淫羊藿补肾助阳，枸杞子补肾填精为臣 药；当归补血活血，白术健脾祛湿，助参地补益气血、健脾益肾，同时有祛瘀生新、祛湿化浊之功，共为臣药；草果仁芳香化湿醒脾亦为 本方臣药；大黄攻积导滞、解毒活血，水蛭活血化瘀，去瘀血而不伤新血为佐；黄芩清热化湿解毒兼制约草果等药的辛烈之性。诸药配伍 以补脾肾为主，化湿解毒为辅，具扶正祛邪之功，补得消则补而不滞，消得补则不伤正，补泻兼施以补为主，紧扣病机以达治疗之功。 研究结果显示，“肾浊清”治疗的CRF 大鼠一般情况如进食、毛色、反射性排尿及反应比模型组明显改善，大鼠死亡模型组最多，高剂 组最少。肾浊清及尿毒清组均可降低慢性肾衰竭大鼠的肌酐、尿素氮，与模型组比较有显著性差异（P<0 01），肾浊清高剂组优于尿毒清 组（P<0 05），提示肾浊清可以延缓CRF的进展。本研究发现慢性肾衰竭大鼠模型肾小管 间质α SMA阳性细胞率明显增强，灰度值降 低，提示α SMA表达显著增强,经过治疗后肾浊清高低剂组、尿毒清组α SMA阳性细胞率降低，灰度值增强，与模型组比较差异显著 （P<0 01），提示肾浊清可能通过降低α SMA的表达，从而干预肾间质纤维化。 参考文献 ［1］Eddy AA. Molecular basis of renal fibrosis. Pediatr Nephrol，2000，15 (3 4）:290 301 ［2］Zhang C，Meng X， Zhu C， et al. Role of connective tissue growth factor in renal tubular epithelial – myofibroblast transdifferentiation and extracellular matrix accumulation in vitro. Life Sci，2004，75(3）: 367 370 ［3］周小舟，张盛光，阳晓，等.腺嘌呤所致CRF大鼠的机理研究.基础医学与临床，1997，17（1）：54 57
大鼠100பைடு நூலகம்随机分为假手术组和模型组、肾浊清高剂组、肾浊清低剂组、尿毒清组。5 /6肾大部切除法建立慢性肾衰大鼠模型。免疫组化检 测大鼠肾组织α SMA表达。结果：治疗后肾浊清组、尿毒清组均能降低大鼠肾组织中α SMA表达，与模型组比较有显著意义 (P<0 05)，肾浊清高剂组与尿毒清组比较无显著性差异(P>0 05）。结论：肾浊清颗粒剂能抑制肾组织α SMA的表达，干预肾间质纤维 化。
肾浊清颗粒剂对慢性肾衰竭大鼠肾
发表时间：2014-03-21T10:56:41.030Z 来源：《中医学报》2013年12月第28卷供稿 作者： 张春艳王建明吉勤王坤
[导读] 宫颈鳞状细胞癌一种较为常见的女性恶性肿瘤,常见于女性生殖道，其发生发展通常是由多种因素导致。
张春艳王建明吉勤王坤 云南中医学院第一附属医院云南昆明 650021 作者简介：张春艳，女，40岁，副主任医师，医学博士。毕业于黑龙江中医药大学，现从事肾脏疾病的临床、教学、科研工作。 基金项目：云南省应用基础研究项目（NO2007C259M）肾浊清颗粒剂对慢性肾衰竭肾小管 间质纤维化的影响 【摘要】目的：探讨肾浊清颗粒剂对慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾组织α 平滑肌肌动蛋白(α SMA)的影响。方法：将健康Waster雄性