G418溶液(geneticin,20mgml)

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最全的G418筛选稳定表达细胞系总结1

最全的G418筛选稳定表达细胞系总结1

最全的G418筛选稳定表达细胞系G418是一种广谱抗生素,可以选择性地杀死没有正确整合的质粒DNA转染的细胞,从而筛选出具有稳定表达的细胞系。

G418筛选是基因转染中常用的一种选择方法,通过对G418敏感性的筛选来选择转化基因。

本文将G418筛选步骤和优化方案。

G418筛选步骤细胞株选取首先需要选取稳定转染所需的细胞株。

需要保证选取的细胞株生长健康、分裂正常、易于培养以及不易死亡。

常用的细胞株有293T、CHO、HEK293。

转染在开始筛选之前,需要将目的基因转染进入所选细胞株。

目前常用的转染方法有磷酸钙共沉淀法、电转染法和脂质体转染法等,需要根据实际情况选择转染方法。

初步筛选完成转染后,需要在培养基中加入G418,通常的加药浓度不超过1mg/mL,推荐浓度为400μg/mL。

在转染后24-48小时内开始进行初步筛选,通过观察细胞的生长状态以及基因表达情况来判断筛选效果。

细分筛选初步筛选后,需要将G418的浓度逐步增加,通常第二轮加药浓度是初步筛选浓度的2倍,第三轮加药浓度是第二轮的2倍。

逐渐递增药物浓度,可以让敏感的细胞死亡,生存的细胞逐渐表达目的基因,从而得到稳定的细胞株。

稳定维持筛选到稳定的细胞后,需要对细胞进行定期维护。

通常可以在培养基中加入适当的G418浓度,维持稳定表达的转染细胞。

优化方案药物浓度G418的加药浓度直接影响到细胞死亡率和筛选效果。

在进行筛选前需要先进行剂量反应实验,通过不同浓度药物的处理,检测细胞生长状态和基因表达情况。

细胞密度传统细胞密度在98%时,死亡率是最高的。

因此,为了降低G418对细胞的毒性,可以将细胞密度控制在70-80%左右。

同时,过稀的细胞密度也会影响到筛选效果,因此需要根据实际情况进行调整。

培养时间筛选时间也直接影响到G418对细胞的毒性程度和筛选效果。

不同的细胞株和实验条件下,对筛选时间的选择有所不同。

通常初步筛选时间在24-48小时,细分筛选筛选时间需要根据实际情况进行判断。

G418筛选tzmbl细胞适宜浓度实验

G418筛选tzmbl细胞适宜浓度实验
4.
表1含有不同剂量组G418的DMEM培养基配制
0
1
2
3
4
5
G418体积(பைடு நூலகம்L)
100
(从前一管中吸取,后面类推)640
5000
5000
5000
5000
DMEM体积(μL)
900
9360
5000
5000
5000
5000
管中G418浓度(μg/mL)
50000
3200
1600
800
400
200
每孔G418含量(μg)
对照
C
D
表2不同剂量组G418的DMEM培养基加入96孔板
三、2~3天更换新鲜培养基,培养2周,选择细胞全部死亡的最低G418浓度作为细胞筛选的浓度。最终确定筛选用G418浓度为---------μg/mL。
2.G418储液浓度为500mg/mL=500μg/μL,先用DMEM培养基将其稀释为50μg/μL的工作液。
3.每个剂量组做三个复孔,每孔加入100μL含有G418的DMEM培养基,每次准备的各个剂量DMEM培养基按500μL计算,一次性配制10次的培养基量,为5000μL。对照组,加入100DMEM培养基
320
160
80
40
20
每孔加入体积(μL)
100
100
100
100
100
G418工作液浓度(μg/mL)
3200
1600
800
400
200
(0号管为1.5 ml EP管,2-5号为15 ml无菌离心管)
2
3
4
5
6
7
B

G418的使用

G418的使用

G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。

它通过抑制转座子Tn601,Tn5 的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。

当neo 基因被整合进真核细胞DNA后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。

G418的这一选择特性,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

418使用方法室温下运输, 干粉在室温下储存,溶于水、甲醇,溶液于-20℃储存由于各真核细胞系对G418敏感度不同,各新细胞系或株稳定转染时杀死非稳定转染细胞所需用量需要通过实验优化。

最适用量通过建立细胞死亡曲线获得。

将细胞稀释至1000cell/ml,每孔100ul加入有培养基的24孔板,将每孔中的G418浓度稀释至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12个级别, 培养10-14天,以细胞全部死亡最低浓度为基准,一般400-800左右,筛选时比该浓度再高一个级别,维持时使用筛选浓度的一半即可。

G418选择浓度范围细胞系或机体G418浓度(ug/ml)中国仓鼠卵巢细胞700~800Madin-Darby犬肾细胞500人上皮A431细胞400猿CV-1细胞500盘基网柄菌属10~35植物10酵母125~500加药时间由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。

所以筛选不能太早;但是也不能太晚,因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,最终导致筛选不出阳性克隆,一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。

随着细胞的代谢G418的浓度和活性都会下降,所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。

G418详细信息

G418详细信息

•保存于运输说明:•2-8℃•详细信息:•G418 sulfate (Geneticin) 现货供应说明:真核表达筛选用抗生素,可以用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。

筛选哺乳动物细胞,推荐起始筛选浓度为400微克/毫升;筛选植物细胞,推荐起始筛选浓度为10微克/毫升;筛选酵母,推荐起始浓度为500微克/毫升。

根据起始浓度的效果可以再适当升高或降低G-418的使用浓度。

分子式:C20H40N4O10·2H2SO4分子量:692.71CAS#:108321-42-2外观:白色粉末特性:溶解性:可溶于水、甲醇、缓冲液和培养基。

溶解后,0.22μm过滤除菌,分成小包装,4℃可保存12个月,-20℃保存时间更长。

最常用的储存液使用100mM HEPES(pH7.3)配制,浓度为50mg/ml。

使用HEPES配制的好处是:加入储存液不会改变培养体系的pH值。

储存条件:2-8℃Ordering InformationDescription Quantity Price(RMB)Cat. no.产地G418 sulfate 1g45011811-023 Invitrogen 5g200011811-023 Invitrogen其他公司产品:G418溶液的配制配的时候就是用配好的HEPES溶G418,然后过滤,不用高压灭菌了,配好后分装,-20度保存,用的时候取一管放4度。

100mM HEPES(pH7.3)缓冲液(500ml)ddH2O 490mlNacl 4gNa2HPO4-12H2O 0.1357gKcl 0.185gGlu 0.5gHEPES 2.5g用氢氧化钠调PH至7.3 ,定容至500mlG418贮存液(50mg/ml)的配制以下为细胞筛选的常用步骤:仅仅作为参考1.G418的配制:取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中,加蒸馏水至10ml,过滤消毒,4度保存。

2.细胞培养:取待测培养细胞,制备成细胞悬液,按等量接种入多孔培养板中,培养6小时左右开始加药。

生命科学科研领域常用抗生素概要

生命科学科研领域常用抗生素概要

生命科学科研领域常用抗生素北京华越洋生物G418溶液 (geneticin,20mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,6个月又称遗传霉素 , 新霉素 , 对细菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳动物细胞具有氨基苷类毒性 , 对真核细胞进行筛选。

无菌溶液。

pH7.2--‐7.9, 经一般工作浓度为 50--‐1000ug/ml。

氨苄青霉素溶液 (Ampicillin,50mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月细菌培养常用抗生素 , 用于配制含氨苄的 LB 或 LB 平板等。

干扰肽聚糖的交联从而抑制细胞壁的合成。

无菌溶液。

工作浓度为 50--‐100ug/ml。

氨苄青霉素溶液 (Ampicillin,100mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月细菌培养常用抗生素 , 用于配制含氨苄的 LB 或 LB 平板等。

干扰肽聚糖的交联从而抑制细胞壁的合成。

主要由氨苄青霉素溶于水 ,0.22um 滤膜过滤除菌 , 工作浓度为 50--‐100ug/ml。

潮霉素 B 溶液 (Hygromycin B ,50mg/ml 10ml 抗生素 40% 4℃ , 避光 ,12个月抑制原核细胞、真核细胞中蛋白质合成,多种细胞类型的重组克隆的筛选。

无菌溶液,水溶液,经过滤除菌。

潮霉素 B 溶液 (Hygromycin B ,50mg/ml 20ml 抗生素 40% 4℃ , 避光 ,12个月抑制原核细胞、真核细胞中蛋白质合成,多种细胞类型的重组克隆的筛选。

无菌溶液,水溶液,经过滤除菌。

相当于 1个的包装。

丁胺卡那霉素溶液 (Amikacin,50mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月抗菌谱与庆大霉素相似 , 但对耐卡那霉素、妥布霉素和庆大霉素的细菌包括绿脓杆菌和沙雷氏杆菌仍有效。

无菌溶液,经过滤除菌。

放线菌素

放线菌素

放线菌素D溶液(Actinomycin D,1mg/ml)
产品简介
放线菌素D (Actinomycin D或Dactinomycin)简称放线菌素,又称更生霉素,CAS号为50-76-0,分子量为1255.42,是从链霉菌分离出来的多肽类抗生素中的一种。

放线菌素D可以抑制转录过程,它能够在转录起始复合物的位置与DNA中的脱氧鸟苷结合并形成复合体,并且RNA聚合酶,从而抑制合成mRNA.临床常用于癌症的治疗。

Jimei Actinomycin D storage在生物科研领域用于抑制mRNA的合成,诱导多个细胞系凋亡,但在PC12细胞中,Actinomycin D可以抑制依托泊苷诱导的细胞程序性死亡。

产品组成:
编号
JA1006 storage
名称
放线菌素D溶液
1ml 4。

C避光
(Actinomycin storage D,1mg/ml)
使用说明书1份
操作步骤(仅供参考):
1、根据实验具体要求操作。

2、一般工作浓度在1~5μmol/L.
注意事项:
1、注意无菌操作,避免污染。

2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12个月有效。

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产品编号产品名称
JA1001G418溶液( geneticin,20mg/ml)
JA1002氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml)
JA1015青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗)
JD3016Massom三色染色液
JP7157 Western抗体洗脱液(碱性)
JT9111葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

G418溶液(geneticin,20mgml)

G418溶液(geneticin,20mg/ml)产品简介:新霉素(geneticin, G418)又称遗传霉素,是一种氨基糖苷类抗生素, 是细胞稳定转染最常用的抗性筛选试剂。

G418能阻断蛋白质合成,对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细胞均具有氨基糖苷类毒性,用于真核细胞从转座子Tn5和Tn601稳定转染新霉素(neo)抗性基因的选择和维持。

经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。

Leagene G418溶液经过滤除菌,一般工作浓度为50~1000ug/ml不等,然而不同类型的细胞需要根据实验确定最佳浓度。

在具有相对稳定基因组的细胞(如CHO细胞)中,一旦筛选出稳定细胞株后,无需加入G418继续培养。

产品组成:主要成分:主要由G418、HEPES等组成,过滤除菌。

操作步骤(仅供参考):1、由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同批次的G418的活性液不同,所以在筛选之前,需要确定G418的最佳筛选浓度,一般在50~1000μg/ml范围内进行筛选。

2、将细胞制备成细胞悬液,并稀释到1000个/ml。

3、加入不同量的G418 solution (20mg/ml),选择在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。

注意事项:1、尽量减少反复冻融的次数,以免失效。

2、基因转染到细胞内要一段时间才能表达出蛋白质, 所以筛选不能太早。

3、筛选也不宜太迟,一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。

因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,最终导致筛选不出阳性克隆。

4、随着细胞代谢,G418的浓度和活性都会下降,应每3~5天更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200μg/ml。

5、加药筛选约5~7天左右,细胞会大量死亡,为了减少死亡细胞对阳性克隆的不利影响以及增加阳性克隆的得到率,可以应用套环法或刮除法结合有限稀释法来筛选阳性克隆。

G418详细信息

保存于运输说明:2-8℃详细信息:G418 sulfate (Geneticin) 现货供应说明:真核表达筛选用抗生素,可以用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。

筛选哺乳动物细胞,推荐起始筛选浓度为400微克/毫升;筛选植物细胞,推荐起始筛选浓度为10微克/毫升;筛选酵母,推荐起始浓度为500微克/毫升。

根据起始浓度的效果可以再适当升高或降低G-418的使用浓度。

分子式:C20H 40N4O10·2H2SO4分子量:692.71CAS#:108321-42-2外观:白色粉末特性:溶解性:可溶于水、甲醇、缓冲液和培养基。

溶解后,0.22μm过滤除菌,分成小包装,4℃可保存12个月,-20℃保存时间更长。

最常用的储存液使用100mM HEPES(pH7.3)配制,浓度为50mg/ml。

使用HEPES配制的好处是:加入储存液不会改变培养体系的pH值。

储存条件:2-8℃Ordering InformationDescription Quantity Price(RMB)Cat. no.产地G418 sulfate 1g45011811-023 Invitrogen 5g200011811-023 Invitrogen其他公司产品:产地货号规格促销价赠送Gibco11811-0231G450(元)单道计时器一个Gibco11811-0235G2000元送4G优盘一个Amresco E5891G380元单道计时器一个Amresco E5895G1250元送4G优盘一个Merck3458101G400元单道计时器一个Merck3458105G1610元送4G优盘一个Promega V79831G420元单道计时器一个Promega V79835G1700元送4G优盘一个G418溶液的配制配的时候就是用配好的HEPES溶G418,然后过滤,不用高压灭菌了,配好后分装,-20度保存,用的时候取一管放4度。

G418

G418 一种氨基糖苷类抗生素gab gene cluster gab 基因簇gabaergic gama-氨基丁酸能的gaeumannomyces graminis virus 禾顶囊壳病毒gal operon 半乳糖操纵子galactan 半乳聚糖galactocerebroside 半乳糖脑苷脂galactofuranose 呋喃半乳糖galactofuranosidase 呋喃半乳糖苷酶galactofuranoside 呋喃半乳糖苷galactokinase 半乳糖激酶galactosamine 半乳糖胺galactose 半乳糖galactosidase 半乳糖苷酶galactosyl ceramide 半乳糖神经酰胺galactosyl diglyceride 半乳糖甘油二酯galactosylation 半乳糖基化galactosyltransferase 半乳糖基转移酶galline 鸡精蛋白GalNAc N-乙酰半乳糖胺gametangial copulation 配囊交配gamete lytic enzyme 配子溶酶,溶配子酶gamete 配子gametic ratio 配子(分离)比gametoclonal variation 配子克隆变异gametocyst 配子囊gametocyte 配子母细胞gametogamy 配子生殖gametogenesis 配子发生gametophyte 配子体gamma 微克gamone 交配素ganciclovir 9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤gancyclovir 甘昔洛韦ganglion 神经节ganglioside 神经节苷脂gangliosidosis 神经节苷脂沉淀症gankyrin 癌锚蛋白gap junction protein 间隙连接蛋白gap junction 间隙连接gap repair 缺口修复gap 缺口,空隙,间隙,裂隙gapped duplex (带)缺口(的)双链体gargoyle cell 脂肪软骨营养不良细胞gargoylism 软骨代谢障碍病gas gene 生长停滞基因gas holdup 气体滞留gas storage 气体保存gastric inhibitory polypeptide 肠抑胃肽gastric juice 胃液gastric mucin gene 胃黏蛋白基因gastric trypsin 胃胰蛋白酶gastricsin 胃亚蛋白酶gastrin 胃泌素gastrinoma 促胃泌素瘤gastrointestinal hormone 胃肠激素gastrointestinal tract 胃肠道gastrone 抑胃素gastrula 原肠胚gastrulation 原肠胚形成gated channel 门控通道gauche conformation 邻位交叉构象,扭曲构象Gaucher disease 戈谢病,高雪病Gaulin homogenizer Gaulin匀浆器[美国APV Gaulin公司生产的匀浆器] Gaulin press Gaulin压碎器[美国APV Gaulin公司生产的高压匀浆器] Gaussian distribution 高斯分布GC box GC框[真核生物结构基因上游的顺式作用元件]GC clamp GC封条GC content GC含量GC tailing GC对GC value GC值,GC百分比GDP dissociation inhibitor GDP解离抑制因子[一种G蛋白调节蛋白]GDP dissociation stimulator GDP解离刺激因子[一种G蛋白调节蛋白]gegenion 反离子,反荷离子Geiger counter 盖革计数器gel casting 凝胶灌制gel mobility shift assay 凝胶迁移率变动分析,凝胶移位分析[DNA结合蛋白的电泳分析技术之一,在该试验中标记核酸因与蛋白质结合而导致迁移率变动(下降),相应gel mold (凝)胶模gel mould (凝)胶膜gel 凝胶gelatin liquefaction 明胶液化gelatin 明胶gelatinous precipitate 胶状沉淀gelation 凝胶作用geldanamycin 格尔德霉素gelsolin [肌动蛋白]凝溶胶蛋白[可使肌动蛋白从凝胶状编委溶胶状]geminin 孪蛋白geminivirus 双粒病毒组[一组植物病毒]gemma 芽胞[从真菌菌丝上长出的一种适于在不良环境下生存的厚壁孢子];胞芽genBank nucleotide sequence database GenBank核酸序列资料库gender determination 性别决定gender difference 性别差异gene flow 基因流[一个随机交配群体,由于合子或配子的散布而造成基因流动,从而引起等位基因频率的改变]gene redundancy 基因丰余[因所编码的RNA或蛋白质用量很大,故基因的份数很多]gene 基因genealogical tree 系统树general initiation factor 通用起始因子GeneScreen [商]基因筛[是NEN Dupont公司的商标,一种用于杂交筛选的特制尼龙膜]genetic drift 遗传漂变[由于遗传群体大小有限造成基因频率的随机波动]genetic extinction 遗传绝灭,遗传死亡[由于突变使某基因型的适合度降低,并使有关个体的繁殖力降低或不育,从而导致某等位基因从基因库中消失]genetic fingerprint 基因指纹,遗传指纹[例如不同个体的DNA表现不同的限制性片段长度多态性,即可将这种限制酶切片段的电泳带型作为基因指纹]genetic immunization 基因免疫接种[采用基因疫苗进行接种]genetic imprinting 遗传印记genetic polarity 遗传极性[上游基因翻译终止,使下游基因表达下降]genetic system 遗传体系[主要指生物的交配方式,如自交、异交,或两者兼具]genetic transformation 遗传转化[例如一个品系的生物吸收另一品系生物的遗传物质,并获得后一品系某些遗传性状]genetic typing 遗传分型[例如根据人白细胞抗原(HLA)基因的限制性Geneticin [商]遗传霉素[一种氨基糖苷类抗生素,Life Technologies公司(GIBCO)的商标]genistein 染料木黄酮,4,5,7-三羟异黄酮genital cell 生殖细胞genocopy 拟基因型genome 基因组,染色体组genomic imprinting 基因组印记[配子发生过程中基因的选择性差异表达] genomic walking 基因组步查,基因组步移genonema 基因线,基因带genophore 基因线,基因带genotoxicity 基因毒性[DNA损伤]genotype 基因型gentamycin 庆大霉素,艮他霉素gentianose 龙胆三糖gentiobiose 龙胆二糖geometric mean 几何均数geosmin [放线菌]土臭味素geotropism 向地性geraniol 牻牛儿糖geranyl 牻牛儿基,香叶基geranylpyrophosphate 牻牛儿焦磷酸geriatrics 老年病学germ band 胚带germ cell 生殖细胞germ layer 胚层germ line 种系germ nucleus 生殖核germ 胚芽;胚;微生物,(细)菌germicide 杀菌剂germin 萌蛋白germinal center 生发中心germinal disc 胚盘germinal vesicle 生发泡[初级卵母细胞的细胞核]germplasm 种质[经生殖细胞传递的遗传物质];生殖质[决定性细胞分化的卵质成分]gerovital 衰老维生素gestagen 孕激素ghost band 假带,鬼带ghost cell 血影细胞ghost peak 假峰,鬼峰ghost 血影,空(细)胞;菌蜕[例如丧失胞质仅余胞壁空壳的细菌光学显微图像];假峰giant colony 巨大菌落[可用于观察微生物形态]giant nicelle 巨胶束gibberellic acid 赤霉酸gibberellin 赤霉素Gibbs adsorption equation 吉布斯吸附公式Gibbs free energy of activation 活化吉布斯自由能Gibbs free energy 吉布斯自由能Giemsa band 吉姆萨带,G带[中期染色体带]Giemsa banding 吉姆萨带,G显带Giemsa stain 吉姆萨染液gigaseal 吉伽(欧)封口,千兆(欧)封口[见于膜片箝术,在膜片与吸液管间形成]ginsengenin 人参皂苷配基,人参皂苷元ginsenoside 人参皂苷glacial acetic acid 冰乙酸,冰醋酸gland 腺体Glasgow Minimum Essential Medium 格拉斯哥极限必需培养基GlcNAc N-乙酰葡糖胺glia (神经)胶质glial fibrillary acidic protein 胶质(细胞)原纤维酸性蛋白glial filament acidic protein 胶质(细胞)纤丝酸性蛋白glial growth factor 胶质(细胞)生长因子gliding growth 滑过生长[见于植物]gliding 滑行,滑移[可指滑行细菌和蓝细菌与固体表面接触时的运动方式,通常很缓慢,并有分泌粘液的轨迹]gliotoxin 胶霉毒素global alignment 总体(序列)对比global regulation circuit 全局调节回路global regulation 全局调节[例如多个分属不同代谢途径的操纵子受控于同一调节物]global regulon 全局调节子globin fold 珠蛋白折叠globin 珠蛋白globoside 红细胞糖苷globular protein 球状蛋白质globulin 球蛋白glomerulus 小球glucagon 胰高血糖素glucan 葡聚糖glucanase 葡聚糖酶glucoamylase 葡糖淀粉酶glucocerebrosidase 葡糖脑苷脂酶glucocerebroside 葡糖脑苷脂glucocorticoid 糖皮质(激)素glucocorticosteroid 糖皮质类固醇glucogenesis 糖生成(作用)glucogenic amino acid 生糖氨基酸glucokinase 葡糖激酶glucomannan 葡甘露聚糖gluconeogenesis 糖异生(作用)gluconic acid 葡糖酸gluconolactone 葡糖酸内酯glucosamine 葡糖胺,氨基葡糖glucosaminoglycan 葡糖胺聚糖glucosan 葡聚糖glucose 葡萄糖[简称或在复合词中可用葡糖] glucosidase 葡糖苷酶glucoside 葡糖苷glucosylation 葡糖基化glucosylceramidase 葡糖神经酰胺酶glucosylceramide 葡糖神经酰胺glucoxyltransferase 葡糖基转移酶glucurnic acid 葡糖醛酸glucuronidase 葡糖醛酸酶glucuronolactone 葡糖醛酸内酯glucuronyl 葡糖醛酸基glutaconate 戊烯二酸;戊烯二酸根、酯、盐glutaconic acid 戊烯二酸glutamate 谷氨酸;谷氨酸盐、酯、根glutamic acid 谷氨酸glutamic semialdehyde 谷氨酸半醛glutaminase 谷氨酰胺酶glutamine 谷氨酰胺glutaraldehyde 戊二醛glutaredoxin 谷氧还蛋白glutathion peroxidase 谷胱甘肽过氧化物酶glutathion 谷胱甘肽glutelin 谷蛋白glutenin 麦谷蛋白glycan 聚糖glycation 糖化,加糖(作用)glyceollin 大豆抗毒素glyceraldehyde 甘油醛glyceride 甘油酯glycerol facilitator 甘油易化蛋白[见于细菌,与甘油的转运有关] glycerol shock 甘油休克glycinamide 甘氨酰胺glycinergic synapse 甘氨酸能突触glycinin 大豆球蛋白glycobiology 糖生物学glycocalyx 糖萼,多糖包被[如见于细菌细胞壁外]glycocholic acid 甘氨胆酸glycoconjugate 糖缀合物,缀合糖,复合糖glycogen 糖原glycogenesis 糖原生成glycogenolysis 糖原分解glycoglyceride 糖基甘油酯glycolipid 糖脂glycolysis 糖酵解glycopeptidase 糖肽酶glycopeptide 糖肽glycophorin 血型糖蛋白glycoprotein 糖蛋白glycosaminoglycan 糖胺聚糖glycosidase 糖苷酶glycoside (糖)苷glycosphingolipid 鞘糖脂glycosyl 糖基glycosylated 糖基化的glycosylation 糖基化glycosylsphingolipid 鞘糖脂glycosyltransferase 糖基转移酶glycyrrhizin 甘草皂苷glyoxal 乙二醛glyoxaline 咪唑glyoxysome 乙醛酸循环体glypiation 糖基磷脂酰肌醇化[在蛋白质的近C端加上G-PI锚] glypican 磷脂酰肌醇(蛋白)聚糖[带有G-PI锚的蛋白聚糖]gnotobiology 悉生生物学gnotobiote 悉生生物[在其体内外生存的微生物均属已知] goblet cell 杯状细胞Golgi apparatus 高尔基体Golgi body 高尔基体Golgi complex 高尔基复合体Golgi membrane 高尔基体膜Golgi network 高尔基体网络Golgi protease 高尔基体蛋白酶gonad 性腺gonadoliberin 促性腺素释放素gonadotrophic hormone 促性腺激素gonadotrophin 促性腺素gonadotropin 促性腺素[为促滤泡素及促黄体素的统称] gonidium 微生子gonium 性原细胞gonococcus 淋球菌gonocyte 性原细胞gonoplasm 精原质gonosome 生殖体goodness of fit 适合度,吻合度gossypol 棉酚gougerotin 谷氏菌素Graafian follicle 囊状滤泡,格拉夫卵泡gracilicute 薄壁(细)菌[胞壁由薄层肽聚糖和脂多糖构成的细菌(一般为革兰氏阴性)]graft hybrid 嫁接杂种Gram stain 革兰氏染液gramicidin 短杆菌肽grana (复)基粒grana lamella 基粒片层granule 颗粒体[杆状病毒的包含体];粒,颗粒granuliberin 颗粒释放肽[一种蛙皮肽]granulin 颗粒体蛋白granulocrine 颗粒性分泌granulocyte chemotactic peptide 粒细胞趋化肽[即白细胞介素-8]granulocyte colony stimulating factor 粒细胞集落刺激因子granulocyte 粒细胞granulopoiesis 粒细胞生成granulose 细菌淀粉粒granulosis virus 颗粒性病毒granum 基粒granzyme 粒酶[由细胞毒性T细胞及大颗粒淋巴细胞通过颗粒胞吞的方式分泌的丝氨酸蛋白酶]gratuitous inducer 义务诱导物,安慰诱导物[能诱导酶的合成但不能作为该酶grisein 灰霉素GTPase GTP酶guanase 鸟嘌呤酶guanidine hydrochloride 盐酸胍guanidinium isothiocyanate 异硫氰酸胍guanylin 鸟苷蛋白[从肠中分离的鸟苷酸环化酶配体]guanylyl 鸟苷酰基guessmer 猜测体[用于基因克隆的低简并性寡核苷酸探针,其序列按已知的氨基酸序列推导,但仅采纳据猜测最可能与目前的基因配对的密码子]guest 客体guide RNA 指导RNA[RNA编辑的模板]guide sequence 指导序列[如见于RNA编辑或RNA剪接]gusducin 味(转)导素[见于味蕾的一种转导素(G蛋白)]gustin 味肽,味多肽gut hormone 胃肠激素guttation 吐水gymnoplast 裸质体gynandromorph 雌雄嵌合体gynandromorphism 雌雄嵌合体gynoecium 雌蕊群gynogenesis 雌核发育,单雌生殖gynomerogony 雌核卵块发育gynospore 雌孢子gynostemium 合蕊柱gynotermone 雌性决定素gyplure 类舞毒蛾醇gyrase 回旋酶,促旋酶[大肠杆菌的II类拓扑异构酶,可在DNA中引入负超螺旋] 的底物,如IPTG就是beta半乳糖苷酶的义务诱导物]的条带发生位移(滞后)]片段长度多态性对个体进行分型]。

G418溶液(geneticin,20mgml)

G418溶液(geneticin,20mg/ml)产品简介:新霉素(geneticin, G418)又称遗传霉素,是一种氨基糖苷类抗生素, 是最常用的细胞稳定转染抗性筛选试剂。

G418能阻断蛋白质合成,对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细胞均具有氨基糖苷类毒性,用于真核细胞从转座子Tn5和Tn601稳定转染新霉素(neo)抗性基因的选择和维持。

经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。

Leagene G418 solution经过滤除菌,一般工作浓度为50~1000ug/ml不等。

操作步骤(仅供参考):1、由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同批次G418的活性也不尽相同,所以在筛选之前,需要确定G418的最佳筛选浓度,一般在50~1000μg/ml范围内进行筛选。

注意事项:1、尽量减少反复冻融的次数,以免失效。

2、基因转染到细胞内后,需要一段时间才能表达出蛋白质,所以筛选不宜太早。

3、筛选也不宜太迟,一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。

因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,最终导致筛选不出阳性克隆。

4、随着细胞代谢,G418的浓度和活性都会下降,应每3~5天更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200μg/ml。

5、一般经过4周左右的筛选,得到的阳性克隆都比较稳定。

但是外源基因如果没有整合到基因组中的话,目的基因还是很容易丢失的,再次筛选往往是必不可少的,经过2次以上的筛选之后才能找到遗传稳定的细胞克隆。

6、注意无菌操作,尽量避免污染。

7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6个月有效。

相关产品:产品编号 产品名称CA0012 潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)CA0045 硫酸卡那霉素溶液(Kanamycin,10mg/ml)CA0055 硫酸庆大霉素溶液(Gentamycin Sulfate,50mg/ml)CA0075 青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗)CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)DC0032 Masson三色染色液DG0005 糖原PAS染色液PS0013 RIPA裂解液(强)。

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G418溶液(geneticin,20mg/ml)
简介:
新霉素(geneticin, G418)又称遗传霉素,是一种氨基糖苷类抗生素, 是最常用的细胞稳定转染抗性筛选试剂。

G418能阻断蛋白质合成,对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细胞均具有氨基糖苷类毒性,用于真核细胞从转座子Tn5和Tn601稳定转染新霉素(neo)抗性基因的选择和维持,经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。

Leagene G418 solution 经过滤除菌,一般工作浓度为l 不等,不同类型的细胞需要根据实验确定最佳浓度。

在具有相对稳定基因组的细胞(如CHO 细胞)中,一旦筛选出稳定细胞株后,无需加入G418即可继续培养。

组成:
操作步骤(仅供参考):
1、 由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同批次G418的活性也不尽相同,所以在筛选之前,需要确定G418的最佳筛选浓度,一般范围内进行筛选。

2、 将细胞制备成细胞悬液,并稀释。

3、 加入不同量的G418 solution (20mg/ml),选择使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。

注意事项:
1、 尽量减少反复冻融的次数,以免失效。

2、 基因转染到细胞内后,需要一段时间才能表达出蛋白质,所以筛选不宜太早。

3、 筛选也不宜太迟,一般要在转染之后才开始加G418筛选。

因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,最终导致筛选不出阳性克隆。

4、 随着细胞代谢,G418的浓度和活性都会下降,应每3~5天更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至。

5、 加药筛选,细胞会大量死亡,为了减少死亡细胞对阳性克隆的不利影响以及增加阳性克隆的获得率,可以应用套环法或刮除法结合有限稀释法来筛选阳性克隆。

加药后,在高倍镜下,刮除阴性克隆,消化阳性克隆后继续筛选培养。

或者用套环套住阳性克隆,在 编号 名称 CA0002 Storage G418 solution(20mg/ml) 10ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
套环内加胰蛋白酶消化,把消化液吸到另外一个新的孔中培养,最后再用有限稀释法把阳性克隆在孔板中筛选。

6、一般经过筛选,得到的阳性克隆都比较稳定。

但是外源基因如果没有整合到基因组中的
话,目的基因还是很容易丢失的,再次筛选往往是必不可少的,经过以上的筛选之后才能找到遗传稳定的细胞克隆。

7、注意无菌操作,尽量避免污染。

8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12个月有效。

相关:
编号名称
CA0012 潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)
CA0045 硫酸卡那霉素溶液(Kanamycin,10mg/ml)
CA0055 硫酸庆大霉素溶液(Gentamycin Sulfate,50mg/ml)
CA0075 青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗)
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
DC0032 Masson三色染色液
DG0005 糖原PAS染色液
PS0013 RIPA裂解液(强)。

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