饲料中霉菌毒素检测技术
紫外检测器 荧光检测器
荧光检测器 荧光检测器 串联质谱 需柱前化学衍生 荧光检测需柱前 化学衍生
甲醇-水
甲醇-水 甲醇-水
免疫亲和柱
免疫亲和柱 免疫亲和柱 SAX净化柱
四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用
2、免疫亲和柱净化原理
加入待净化样本 洗涤干扰物 洗脱目标物
四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用
检测方法
高效液相色谱法（荧光） 酶联免疫吸附法 薄层色谱法 液相色谱-串联质谱法 胶体金法 荧光光度法 免疫层析法 高效液相色谱法 高效液相色谱法（荧光） 薄层色谱法 酶联免疫吸附法 高效液相色谱法 液相色谱-串联质谱法 高效液相色谱法（紫外） 薄层色谱法
高效液相色谱法
黄曲霉毒素
NY/T 2071-2011 NY/T 2550-2014 NY/T 2549-2014 NY/T 2548-2014 DB37/T 2617-2014 GB/T 28716-2012
四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用
1、HPLC法检测霉菌毒素的关键点比较
霉菌毒素 名称
黄曲霉毒素 玉米赤霉烯酮
提取液
甲醇-水 乙腈-水 水
净化
免疫亲和柱 多功能净化柱 免疫亲和柱 免疫亲和柱
检测器
荧光检测器 串联质谱 荧光检测器 串联质谱
备注
荧光检测需柱前 光化学衍生
脱氧雪腐镰刀菌 烯醇（呕吐毒素） 赭曲霉毒素A
•
•
加洗液不要溢出微孔，防止交叉污染
拍板用力适当，看不到明显液体为宜
三、ELISA法的操作要点及注意事项
2、操作要点及注意事项(续)
（5）显色 • • • • 加显色液要快速准确 回形振荡混匀，消除气泡 严格按照说明书控制温度、时间及避光要求 防止微孔内液体挥发，加以密封
（6）显色终止
•
•
按照加显色液的顺序及速度加终止夜
4、其他注意事项
取样和制样 玻璃纤维滤纸不得含荧光物质 基质效应
质量第一
公正科学 及时准确
氧雪腐镰刀菌稀醇（呕吐毒素）等6种毒素
一、饲料中霉菌毒素的危害
4、霉菌毒素的主要危害
一是可以引起饲料的变质，产生异味，降低 其饲用价值，甚至完全让其失去商品价值
二是饲料被霉菌污染后，导致畜禽的急、慢 性中毒，免疫机能和生产性能下降，造成养 殖业效益的下降
三是残留于畜禽肌肉、内脏或乳中的霉菌毒 素通过食物链传递给消费者，给食品安全带 来更大的风险
3、免疫亲和柱使用注意事项
免疫亲和柱应在2~8℃保存，不要冷冻，关注有效期 免疫亲和净化柱使用前要恢复其温度至室温（20-25℃ ） 整个纯化过程尽量不要让柱子干涸 免疫亲和净化柱不能混用
具体使用方法按照说明书操作，不可完全按检测标准生
搬硬套
四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用
玉米赤霉烯酮
GB/T19540-2004 DB51/T 1080-2010
DB22/T 1618-2012
脱氧雪腐镰刀菌烯醇 （呕吐毒素）
GB/T 30956-2014 GB/T 8381.6-2005 DB51/T 1079-2010 GB/T 30957-2014
高效液相色谱法（荧光） 薄层色谱方法 酶联免疫吸附测定法 高效液相色谱法 高效液相色谱法（荧光） 薄层色谱法 高效液相色谱法 液相色谱串联质谱法 高效液相色谱法（荧光） 高效液相色谱法
赭曲霉毒素A
GB/T19539-2004 DB51/T 1081-2010 GB/T 28718-2012
T-2毒素 伏马毒素
GB/T 8381.4-2005 DB51/T 1078-2010 NY/T1970-2010 DB51/T 1082-2010
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
2、霉菌毒素的主要检测方法
2、检测步骤及注意事项
（1）准备阶段 • • • 详细阅读说明书 确认试剂盒试剂组成、数量及其用途 试剂配制
•
• • • •
试样的制备、提取及稀释
试剂盒试用前要充分回温 实验室室温最好控制在20-25℃ 准备好实验器具（移液枪机及枪头） 确认仪器设备运行正常
三、ELISA法的操作要点及注意事项
2、检测步骤及注意事项（续）
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
1、饲料中主要霉菌毒素的检测标准一览表
霉菌毒素名称 标准号
GB/T 30955-2014 GB/T 17480-2008 GB/T 8381-2008
标准名称
饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 半定量薄层色谱法 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 时间分辨荧光免疫层析法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 高效液相色谱法 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱/质谱法 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法 配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定薄层色谱法 饲料中呕吐毒素的测定高效液相色谱法 饲料中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法 饲料中赭曲霉毒素A的测定 饲料中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法 饲料中T-2毒素的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 配合饲料中T-2毒素的测定薄层色谱法 饲料中T-2毒素的测定高效液相色谱法 饲料中伏马毒素的测定（伏马毒素B1和伏马毒素B2含量） 饲料中伏马毒素B1的测定 高效液相色谱法
胶体金免疫层析法
酶联免疫吸附法
荧光光度法 薄层色谱法 高效液相色谱（荧光/紫外）法 高效液相色谱串联质谱法
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
3、主要检测方法的特点比较
色谱方法
样品处理 检测时间 检测通量 复杂，需要净化柱纯化操作 30-60分钟 单个样品，一种或多种毒素
ELISA
检测效率
几乎可以处理任何样品
可以进行多毒素检测
对样品基质要求高
只能完成单一毒素检测
对样品基质要求非常高
只能完成单一毒素检测
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
4、检测方案
初筛
胶体金 ELISA
批量样本 可疑样品
阳性样确证 √液 质 联 用 高 效 液 相 荧 光 分 析
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
真菌
霉菌
霉菌毒 素
蕈菌
一、饲料中霉菌毒素的危害
2、霉菌毒素产生的原因
霉菌无处不在，它们可在农作物生长、收获、 运输和储存期间生长并产生毒素 农作物作为饲料原料在生产、销售、储存、运 输过程中如果受到霉菌污染也会发生霉变、遭 受霉菌毒素污染
一、饲料中霉菌毒素的危害
3、霉菌毒素的种类
现已报道的霉菌毒素大约有300种 在饲料中常见的、对人和动物健康造成潜在 危害的毒素主要有：黄曲霉毒素、玉米赤霉 烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、伏马毒素和脱
饲料中霉菌毒素检测技术
交流提纲
一、饲料中霉菌毒素的危害
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
三、ELISA法的操作要点及注意事项
四、 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用
质量第一 公正科学 及时准确
一、饲料中霉菌毒素的危害
1、什么是霉菌毒素？
霉菌毒素是霉菌产生的次级代谢产物
酵母
次 级 代 ห้องสมุดไป่ตู้ 产 物
抗生素
回形振荡混匀液体
三、ELISA法的操作要点及注意事项
2、操作要点及注意事项(续)
（6）读数（检测吸光度） • • 终止反应后应尽快检测吸光度 按照说明书要求设置酶标仪参数
三、ELISA法的操作要点及注意事项
3、其他应注意的问题
劳动安全保护及环境保护 不同批次的试剂盒微孔板不要混用
试剂盒质量差异（重复性、准确性）明显
知抗体
将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗检测液
双抗体夹心法
相中的可溶性抗原
竞争法
将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗 体检测液相中的可溶性抗原或抗体
三、ELISA法的操作要点及注意事项
2、竞争 ELISA 的原理
三、ELISA法的操作要点及注意事项
枪头一次性使用
试样加入后的 步骤枪头不接触微孔 使用硅化枪头 高质量移液枪+配套墙头+人员操作训练 轻轻回形振荡
三、ELISA法的操作要点及注意事项
2、操作要点及注意事项(续)
（3）孵育 • • • • 孵育前应混匀反应物 严格按照说明书控制温度、时间及避光要求 防止微孔内液体挥发，加以密封
（4）洗板 甩除液体要干净利落，不要投鼠忌器
（2）加样
标准曲线孔--- 酶标抗原 + 标准曲线溶液 样品测试孔--- 酶标抗原 + 样品提取物溶液 注意事项：
加样体积准确
前后加样时间不宜过长 不可漏孔、跳孔 防止交叉污染
三、ELISA法的操作要点及注意事项
2、操作要点及注意事项（续）
容易出现的问题 解决方法
一次检测不要检测太多样品 加样时间过长，导 致前后反应时间差 加样使用使用单枪，其他步骤使用排枪 异大 先将酶标抗原和样品提取液在空白微孔板中混合均 匀，再用多通道移液器将混合液加到检测微孔板中 交叉污染 液体挂壁排不尽 移取体积不一致 产生气泡
5、检测流程
取样
制样
GB/T14699.1 2005 饲料 采样
饲料中霉菌毒素快速检测技术
Veratox 组胺检测试剂盒
检测线2.5-50ppm
检测结果
NEOGEN公司ELISA试剂盒特点
1-操作简单,速度快-所有的霉菌毒素检测只需移液器和酶标 仪就可以获得准确结果,并且所有试剂盒操作步骤几乎一 样;大部分试剂盒的前期样品处理时间不超过3分钟,检测时 间不超过20分钟,同传统方法相比有明显的优势; 2-使用广泛-世界各地普遍使用,适合于目前中国大多数饲料 企业实验室检测; 3-质量可靠-试剂盒灵敏度和重复性非常高,其它公司产品无 法达到;黄曲霉毒素试剂盒是美国农业部指定使用产品,呕 吐毒素试剂盒是世界同类产品金标准,玉米烯酮试剂盒为 AOAC官方方法;
Veratox 伏马毒素试剂盒
检测线1-6ppm和 50-600ppb
检测结果
Veratox T-2毒素试剂盒
第一步 样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取5g到25ml 50%甲醇溶液中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液;。 第二步 检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育5分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育5分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数。
Veratox黄曲霉毒素试剂盒 (美国农业部指定使用产品 USDA认证号#2005-102)
Veratox黄曲霉毒素试剂盒 (美国农业部指定使用产品,USDA认证号 #2005-102)
第一步 样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取5g到25ml 70%甲醇溶液中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液; 第二步 检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育2分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育3分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数
饲料霉变防控及霉菌毒素脱毒技术规范
DB41/T 2617—2024饲料霉变防控及霉菌毒素脱毒技术规范1范围本文件规定了饲料霉变防控及霉菌毒素脱毒的术语和定义、饲料霉变控制、霉变判定、霉菌毒素脱毒、效果评价及档案管理等的技术要求。
本文件适用于饲料霉变控制及脱毒。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6435饲料中水分的测定GB 13078饲料卫生标准GB/T 13092饲料中霉菌总数的测定GB/T 14699.1饲料采样GB/T 18823饲料检测结果判定的允许误差GB/T 20195动物饲料试样的制备GB/T 30956饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T 30957饲料中赭曲霉毒素A的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法NY/T 1970饲料中伏马毒素的测定NY/T 2071饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定—液相色谱-串联质谱中华人民共和国农业部公告第1773号.饲料原料目录.2013年中华人民共和国农业部公告第2045号.饲料添加剂品种目录.2013年3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1饲料霉变因湿度、温度等环境因素或收获、贮存、加工、运输等过程不当，致使饲料出现霉菌和霉菌毒素污染的情况。
判定标准按照GB 13078执行。
3.2饲料脱毒采用物理、化学或者生物学方法，去除或降解饲料中霉菌毒素，以消除或降低霉菌毒素对畜禽的危.害。
3.3饲料原料粮食作物或其副产物等能够用于饲料加工生产的原料。
3.4饲料防霉剂DB41/T 2617—2024能降低饲料中微生物的数量、控制微生物的代谢和生长、抑制霉菌毒素的产生，预防饲料贮存期营养成分的损失，防止饲料发霉变质并延长贮存时间的饲料添加剂。
防霉剂品种参照《饲料添加剂品种目录》。
猪饲料中黄曲霉素毒素危害与检测
农技服务畜禽养殖2017，34（19）·95·猪饲料中黄曲霉素毒素危害与检测马亚伟（河南省济源市动物卫生监督所，河南 济源459000）黄曲霉毒素是一种能引起饲料原料霉变的霉菌毒素，黄曲霉毒素主要来源于霉变的玉米，尤其在多发于夏季梅雨季节，玉米容易的发霉，玉米发霉后产生黄曲霉毒。
而玉米是猪日粮中主要组成部分，当猪采食含有黄曲霉毒素的饲料，引起严重的中毒，饲料中黄曲霉毒素具有很强毒性，可引起不同阶段猪急性或慢性黄曲霉毒素中毒，情况严重时可导致死亡，极大地危害着我国养猪业发展。
猪黄曲霉毒素中毒给养殖户造成了严重的经济损失，在养殖生猪过程中应引起重视，及时检查饲料新鲜程度，定期预防黄曲霉毒素，才能降低损失，提高生猪养殖效益。
1饲料中黄曲霉毒素对猪的危害1.1饲料中黄曲霉毒素对仔猪的危害饲料中黄曲霉毒素中毒对仔猪危害最大，当母猪在妊娠的过程中采食了含有黄曲霉毒素或者被黄曲霉毒素污染的日粮后，母猪分娩产子后的25d，母猪乳汁中黄曲霉毒素的浓度逐渐增加，仔猪出生后通过母猪的乳汁可导致仔猪发生黄曲霉毒素中毒，仔猪黄曲霉毒素中毒死亡较快，仔猪主要表现为精神极度沉郁、卧地不起、严重的腹泻、脱水，个别的严重中毒的仔猪出现皮肤全身透红、出现抽搐，麻痹而死。
1.2饲料中黄曲霉毒素对育肥猪的危害育肥猪黄曲霉毒素中毒后严重破坏消化系统和呼吸系统，导致育肥猪的消化和呼吸发生紊乱，育肥猪黄曲霉毒素中毒治愈之后，育肥猪生长受阻，生长缓慢、对饲料的利用率较低、转化率均较低，严重的降低了育肥猪的生产性能。
育肥猪采食了含有黄曲霉毒素或者被黄曲霉毒素污染的日粮后，初期主要表现为食量明显减少，精神沉郁、个别的育肥猪出现先便秘后腹泻的症状，到了中期后，育肥猪初出现体温降低、食欲废绝、精神沉郁、个别的育肥猪只只喝水，出现了严重的消瘦、严重的腹泻，有的猪只出现了严重的嘴、耳、四肢内侧和腹下等多处皮肤发红。
到后期育肥猪精神极度沉郁，甚至卧地不起，育肥猪严重的抽搐，麻痹而死。
饲料中微生物检验
饲料中微生物检验一、概述1.饲料微生物检验的意义饲料微生物学检验是饲料品质控制的一个重要方面。
正常条件下，饲料中微生物数量有限，但当饲料因加工不当、贮藏不善或因意外事故受到微生物污染时，微生物数量会有大幅度提高，并可有致病性微生物出现。
微生物污染饲料后会带来以下几个方面的危害。
(1)微生物繁殖过程中产生特殊的颜色和刺激性物质，使饲料具有不良的外观、滋味和气味，影响饲料的适口性。
(2)微生物繁殖过程中会消耗大量的营养物质，使饲料营养价值降低。
(3)微生物繁殖过程中会产生大量有毒代谢产物，如细菌可产生内毒素或外毒素，霉菌可产生霉菌毒素，因而造成动物细菌毒素或霉菌毒素中毒，并可通过食物链影响人体健康。
(4)造成动物细菌性感染或霉菌性感染。
(5)扰乱动物消化道正常菌群，破坏动物消化道微生态平衡，使动物出现消化功能紊乱。
因此，检测饲料微生物指标，控制饲料微生物数量，对保证饲料卫生安全具有重要点义。
2.饲料微生物的种类及形态饲料中常见的微生物主要包括霉菌和细菌。
霉菌(mold)并不是生物分类学名称，而是指能在基质上长成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状真菌的俗称，是真菌的一部分。
真菌是指有细胞壁、不含叶绿素、无根茎、叶，以寄生或腐生方式生存，仅少数类群为单细胞、其他都有分枝或不分枝的丝状体，能进行有性或无性繁殖的一类生物。
真菌的形态有单细胞和多细胞两种类型，霉菌为多细胞类型。
在分类学上，霉菌分属于真菌的藻状菌纲(Phycomycets)、子囊菌纲(Ascomycets)和半知菌类(Fungi Imperfecti)。
污染饲料的霉菌主要是曲霉菌属、镰刀菌属和青霉菌属的霉菌，可产生近200种霉菌毒素，其中比较重要的有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、杂色曲霉毒素、T-2毒素、玉米赤霉烯酮、二氢雪腐镰刀菌烯酮、岛青霉素、橘青霉京、黄绿青霉素等。
值得注意的是，并非所有的霉菌都能产毒，或者说能产毒的霉菌只是霉菌中的一少部分，同时还应注意，即便是产毒霉菌，也是在其生长到一定阶段才会产毒，并不是在其整个生命期都能产毒。
上海地区猪饲料中霉菌毒素的检测
适 口性 。导 致 猪群 采 食 量 和 生 产性 能
的降低。猪群 长期摄人霉菌毒素污染
表 １ 生 猪 饲 料 中霉 菌 毒 素 检 测
情况 汇 总 表
１月进 行 了４ 常见 霉 菌毒 素 （ 曲 ０ 种 黄 霉 毒 素 、 吐 毒 素 、 马 毒 素 和 玉米 赤 呕 伏
霉烯酮） 的针对 性检 测 。
３ 小 结与讨论
３１ 根 据 上 海 地 区 猪 饲 料 样 品 中 四 ． 种 霉菌 毒 素 的检 测 和 临床 追 溯 调 查 结
（． 海 市 动 物 疫 病 预 防控 制 中心 ， 海 １上 上
预 防控 制 中心 ）
２ １０ ；． 海 市 南 汇 区动 物 疫 病 ０ １３ ２上
后 抗体 达 不 到 应 有 滴 度 甚 至造 成 免 疫
失 败 ，增 加 混 合 感 染 或继 发 感 染 的 机 率 。２ ０ 年 开 始 发 生 的 “ 无 名 高 热 ０６ 猪 病 ” 已有 许 多 报 道证 实 饲料 霉 菌 毒 素 ， 是 促使 发 病 的 元 凶 之 一 。 随着 全 球 气
１ 材 料 与 方 法 １１ 饲 料 样 品 ．
的饲 料 后 可 引起 慢 性 中毒 症 状 ， 脏 、 肝
肾脏 、 殖 道 等 重要 组 织 器 官 受 损 。 生 影
响 动 物 的正 常 生 理 功 能 ．并 能破 坏 或
降 低 免疫 系 统 的 结 构 和 功 能 而导 致 免 疫 抑 制 ， 扰 和 影 响猪 群 对 猪 瘟 、 干 口蹄
．
２ 。 营养与 ８ ｏ 粮
Ｌ Ｅ Ｔ Ｃ Ｎ ｏ ＬＲ ｏ ｓＲ № １ ｜ ｓ Ｏ ＫＡ ＤＰ ｕ Ｔ Ｙ ｕ Ｔ Ｙ ２ ｖ ５
高效液相色谱法检测农产品中黄曲霉毒素B1的含量
分析检测高效液相色谱法检测农产品中黄曲霉毒素B1的含量韩 宇（四川省甘孜藏族自治州食品药品检验所，四川康定 626000）摘 要：目的：建立高效液相色谱法联合免疫磁固相萃取法测定农产品食品中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）含量的分析方法。
方法：采用70%乙腈溶液提取花生、玉米、大豆、小麦、豌豆和绿豆样品中的AFB1，然后利用免疫磁珠净化、萃取和富集提取液中的AFB1，采用高效液相色谱法进行定量分析。
结果：方法的检出限为0.03～0.92 μg·kg-1，回收率为79.52%～97.53%。
利用该方法对市场上购买的20份花生、玉米、大豆、小麦、豌豆、绿豆样品中的AFB1进行检测，除了玉米和绿豆中未检测出AFB1外，其余实验样品中均检测出一定含量的AFB1。
结论：该方法简便、快速、准确，适用于复杂样品中黄曲霉毒素B1的测定。
关键词：高效液相色谱法；免疫磁固相萃取；黄曲霉毒素B1Determination of Aspergillus Flavus B1 in Agricultural Products by High-Performance Liquid ChromatographyHAN Yu(Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute for Food and Drug Control, Kangding 626000, China)Abstract: Objective: To establish a method for the determination of Aflatoxin B1 (AFB1) in agricultural products by high performance liquid chromatography combined with immunomagnetic solid phase extraction. Method: AFB1 was extracted from samples of peanuts, corn, soybeans, wheat, peas, and mung beans using a 70% acetonitrile solution, and then AFB1 was purified, extracted and enriched by immunomagnetic beads, and quantitative analysis was performed by HPLC. Result: The limits of detection were 0.03～0.92 μg·kg-1, and the recoveries were 79.52%～97.53%. AFB1 in 20 samples of peanut, corn, soybean, wheat, pea and mung bean purchased from the market was detected by this method. AFB1 content was detected in all the other samples except corn and mung bean. Conclusion: The method is simple, rapid, accurate and suitable for the determination of aflatoxin B1 in complex samples.Keywords: high-performance liquid chromatography; immunomagnetic solid-phase extraction; aspergillus flavus B1黄曲霉毒素是一种由黄曲霉菌产生的有毒代谢产物，在自然界中分布广泛，在粮食和饲料等农产品中广泛存在。
粮油谷物饲料中霉菌毒素荧光定量快速检测系统——10分钟准确定量测定
食 品 类 别
植 物油 脂 （ 花 生油 、 玉 米油 除外 ） 花 生 油 、 玉 米油 玉 米 及 玉 米 制 品
黄 曲霉 毒 素 Ｂ １ 玉 米 赤霉 烯 酮 呕吐 毒 素 赭 曲霉 毒 素 Ａ
１ ０ ｕ ｇ ／ ｋ ｇ
２ ０ ｕ ｇ ／ ｋ ｇ ２ ０ ｕ ｇ ／ ｋ ｇ ６ ０ ｕ ｇ ／ ｋ ｇ １ ０ ０ ０ ｕ ｇ ／ ｋ ｇ ５ ｕ ｇ ／ ｋ ｇ
而 不 能 食 用 ，这 不仅 在 经 济 上 造 成 了 巨
份 ，南 方 地 区 的 平 均 气 温 都 处 于 ２ Ｏ ℃
以上 ，平 均 相 对 湿 度 在 ８ ０ ％ 以上 ，在 格 昂贵 ，前 处理 过 程 复 杂 、 操作 繁 琐 、 这 种 高 温 高 湿 的 环 境 条 件 下 ，真 菌 生 效 率 低 ，成 本极 高 ， 因此 不 适用 于 大 规
大 的损 失 ，而 且 由 真菌 产 生 的 霉菌 毒 素
还 能 引起 人畜 中毒 ， 严重 时甚至可 以致癌 。 长 繁 殖 最 为 旺 盛 ， 谷 物 饲 料 霉 变 大 多 模 样 本 的 筛 查和 日常 的 内 控 检测 ，一 般
发 生 在 这 个 季 节 ， 北 方 的 夏 季 虽 然 温 仅 用 于 最 终 的 确 证 。 酶 联 免 疫 吸 附 法
或 与其 他 真 菌 竞 争 的 应 激 情 况 时 ，就 会 产 生霉 菌 毒 素 。 由于 真 菌 生 长 有 一 定 的
地 域 性 ，因 此 ，不 同 区域 占优 势 的霉 菌 毒 素种 类也 有 所 不 同。 例 如 ，在 亚 热 带 和 热 带 地 区 ，农产 品和 饲 料 主 要 被 黄 曲
目前 ， 已知 能 产 生 霉菌 毒 素 的真 菌 霉 菌 毒 素 。 目前 ，霉 菌 毒 素 的检 测 方法 主 要 分 为两 大 类 ，即确 认 方法 和 快 速 方 法 。确
霉菌毒素检测方法
霉菌毒素检测方法1.呕吐毒素(DON)的检测ELISA法测试前请仔细阅读本说明在2—8℃冷藏—不要冻结1.简介 DON毒素脱氧瓜萎镰菌醇（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。
脱氧瓜萎镰菌醇的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。
研究表明猪对脱氧瓜萎镰菌醇很敏感。
当脱氧瓜萎镰菌醇含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。
其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对脱氧瓜萎镰菌醇的敏感性各不相同。
研究表明脱氧瓜萎镰菌醇会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。
因此，精确测定可能含有脱氧瓜萎镰菌醇的食物和食品就现得十分重要。
FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了脱氧瓜萎镰菌醇含量的强制标准。
美国食品药物管理局已经颁布的DON毒素建议限量如下：2.方法原理本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppm级的DON毒素。
样品和标准控制液中游离的DON毒素与轭合物中的DON毒素竞争抗体结合位置。
清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明DON毒素越少。
将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中DON毒素的准确浓度。
3.贮存要求本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
4.试剂与仪器4.1已提供的材料48个包被了抗体的孔；48个红色标记的混合孔；5瓶2ml浓度为0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制标准液(黄色标签)；1瓶DON毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)；1瓶24ml底物溶液(绿色标签)；1瓶32ml红色终止液（红色标签）4.2需要但未提供的材料提取材料；蒸馏水或去离子水；100ml量筒；150ml的具塞三角瓶；滤纸；样品收集具塞试管；漏斗；粉碎机；称量为5～25克的秤；带450nm滤光片的酶标仪；200μl移液器；200μl吸咀；纸巾或等效的吸水材料；计时器；防水记号笔；洗瓶；移液器用的试剂槽；蒸馏水或去离子水；计时器等5.注意事项本测试盒不使用时应在2～8℃下存放。
检测饲料中霉菌毒素的方法及防控措施
去离 子 水 洗 去多 余 抗 体 ，再 加 入 酶 的底 物 ，产 生有 色 物 质 ，最 后 器 内 ，以流水 冲洗 ，直 至 冲洗用 水 无 色 。吸 附 脱毒 法 使用 霉 菌 毒 加 入 终 止 液 使 反 应 终 止 ，用 酶 标 仪 测 定 酶 底 物 的 降解 量 ，参 照 素 吸附剂 减 少霉 菌毒 素对 畜 禽 的危 害 。可用 霉可 吸 ，在 １ ｏ ｏ ０ ｋ ｇ 饲 标 准 曲线 计 算试 样 中 的抗 原量 。如 ，黄 曲霉 毒 素 Ｂ ． ，烟 曲霉 毒 素 料添 加 １ ｋ ｇ即可 吸附 ８ ０ ％以上 的霉 菌毒 素 。
中 国 畜牧 兽 医 文 摘 ２ ０ １ ５ 年
３ ｌ 卷第３ 期 Nhomakorabea饲 料 及 饲 料 添 加 剂
检测 饲料 中霉菌 毒素 的方法及 防控 措施
古 莉
（ 涪 陵区畜牧兽医局 ，重庆 ４ ０ ８ ０ ０ ０ ）
霉 菌毒 素 种 类繁 多 ，广 泛存 在 于 自然 界 中 ，并 且 经 常污 染 饲 床症 状 。畜 禽 长期 少 量摄 入 黄 曲霉 毒 素 ，虽 不 会 出现 明显 的 中毒 料。 （ １ ） 霉菌可以引起饲料 的变质，使饲用价值降低 ，甚至完全 症状 ，但 毒 素 能损 害 畜禽 的免 疫机 能 ，引起 畜 禽 抵抗 力 下 降 ，引 失 去商 品价值 ，从而 造 成 巨大 的经 济损 失 ； （ ２） 饲 料被 霉 菌污 染 发继 发性 传染 病 。
的检 测 。Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法 一 般 对样 品作 净 化 处理 ，操作 简 单 ，检测 速 度 （ ６） 定 期监 测 。严 防饲 料 霉菌 。
快 ，成本低 ，适用于大批量样品的快速筛选。
４ 小结 与展望
饲料中霉菌毒素的检测技术
饲料中霉菌毒素的检测技术摘要：饲料被污染后，除了可引起饲料变质外，还可导致动物的各种疾病，甚至引起急性中毒性死亡，给养殖业造成了巨大危害。
论文就霉菌毒素对动物的危害及其在饲料和动物体内的检测方法进行归纳分析，为今后进一步健全霉菌毒素检测方法，减轻霉菌毒素对养殖业的危害提供参考依据。
关键词：饲料；霉菌毒素；检测技术1 霉菌毒素对动物体的危害高浓度霉菌毒素可导致动物的急性中毒甚至死亡，而长期饲喂含有低浓度霉菌毒素的饲料可引起动物体慢性中毒。
其危害主要表现在以下四个方面：（1）破坏或降低饲料的营养成分，影响养分的吸收及代谢；（2）引起动物体肝脏、肾脏、肺脏、肠道等脏器损伤，如黄曲霉毒素的靶器官为肝脏，可引起肝硬化及肝癌等疾病，赭曲霉毒素A、桔青霉素、杂色曲霉毒素具有较强的肾脏毒性，可引起肾小管变性、坏死，导致患畜多尿、血尿及蛋白尿等；（3）引起各种繁殖障碍，导致母畜假发情、脱肛、流产、死胎等，如玉米赤霉烯酮具有较强的激素样作用，可导致动物发情综合症；（4）造成动物体免疫抑制，诱发各类慢性疾病，降低饲料效益。
2 霉菌毒素的检测方法2.1 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA法是利用抗原抗体反应原理，将已知抗原吸附在酶标板上，加入酶标记抗体和样品提取液并混合均匀，充分反应后用去离子水洗去多余抗体，再加入酶的底物，产生有色物质，最后加入终止液使反应终止，用酶标仪测定酶底物的降解量，参照标准曲线计算试样中的抗原量。
柳其芳采用ELISA法在1-20μg/kg范围内测定黄曲霉毒素B1，CV为0.4%-2.6％，回收率为92%-105％。
Paepens等检测玉米中的烟曲霉毒素含量，检测限为1mg/kg。
ELISA法一般对样品作净化处理，操作简单，检测速度快，成本低，适用于大批量样品的快速筛选。
2.2 近红外光谱法（NIR）NIR法是近年来发展得比较快的光谱分析技术，在农业、食品、化工等多个行业都有成功的应用，创造了良好的社会和经济效益。