3抗体筛选操作步骤.pdf
第三单元 免疫凝集类实验
免疫凝集分析系统——全自动血型分析系统
（临床见习）
基本原理
全自动血型分析系统采用柱凝集血型诊断系统试剂卡技术和数 字图像处理技术自动实现人血样本的体外免疫血液检测。 ABO/Rh 血型诊断试剂卡是基于独特的柱凝集技术原理而设计 的。该卡是在一种特制的塑料卡上设计有6个微柱，每个微柱中 均装有一定数量具有分子筛作用的玻璃珠，并分别预臵了抗A 、抗B、抗D特异性抗体的试剂。当受检者红细胞进入测试柱与 相应抗体反应并经低速和高速双相离心后，发生凝集的红细胞 被阻滞在玻璃珠的上层（阳性），而未凝集的游离红细胞则会 在离心力的作用下通过玻璃珠介质之间的间隙沉积于柱的底部 （阴性）。由此可将凝集红细胞与未凝集红细胞分开，达到鉴 定ABO/Rh血型的目的。
0.5
菌液 1
0.5 0.5 0.5 0.5
弃掉0.5
2
3
4
5
6
7
结 果
试 管 凝 集 试 验 原 理
结果判断
实验结果
将试管臵于有良好光源和黑色背景下，观察管底凝集物的范围和上清 液的浊度，记录凝集程度，判断凝集效价用++++、+++、++、+、-等 符号记录凝集效价。
对照管：应无凝集现象 试验管：“++++”：上清液澄清，细菌全部凝集，凝集块全部沉于管底
实验结果分析和讨论
妊娠免疫诊断试验是临床常用的经典胶乳凝集抑制试验， 操作简便、快速、特异性强，停经35～40天以上的孕妇可 测得阳性结果。需注意的是，绒毛膜上皮癌、葡萄胎及睾 丸畸胎瘤病人尿中HCG含量远较正常妊娠尿液为高，将尿 液作1∶200稀释后仍可呈阳性反应。 待测尿液以晨尿为好。测试时应注意标本及各诊断试剂加 入的顺序，并设立阳性和阴性对照。试分析若随意变更加 样顺序，如先加标本、再加胶乳抗原，最后加抗HCG或先 加胶乳抗原、再加抗HCG，最后加标本，结果如何？ 凝集抑制试验可用于确证呈阳性反应的间接凝集实验是否 是非特异凝集反应，试讨论如何进行该项实验？
抗体筛选技巧
抗体筛选技巧抗体筛选技巧1. 引言在现代生命科学研究中，抗体在许多实验和应用中发挥着重要的作用。
抗体的选择和筛选是获得高质量抗体的关键步骤。
本文将介绍几种常用的抗体筛选技巧，帮助研究人员更有效地选择适用的抗体。
2. 背景知识在开始抗体筛选之前，我们需要了解一些基本概念。
抗体是一种由免疫系统产生的蛋白质分子，可以识别和结合目标分子，如细菌、病毒、蛋白质等。
抗体筛选旨在从大量候选抗体中鉴定和选择具有高亲和力和特异性的抗体。
3. 抗体筛选技巧3.1 免疫吸附法免疫吸附法是一种常见的抗体筛选方法。
该方法利用已知抗原固定在固相载体上，然后与抗体混合反应，通过洗脱非特异性结合抗体，最终获得特异性的抗体。
这种方法适用于具有高亲和力和特异性的抗体的筛选，可以用于活体和死体标本。
3.2 免疫组化技术免疫组化技术结合了免疫学和组织学的原理，用于检测细胞和组织中特定分子的存在和分布。
该技术可以帮助研究人员验证抗体的特异性和亲和力，并确定其在特定细胞或组织中的表达情况。
在抗体筛选中，免疫组化技术可以用于确认候选抗体的特异性。
3.3 流式细胞术流式细胞术是一种高通量的细胞分析技术，可以同时检测和筛选大量细胞。
在抗体筛选中，流式细胞术可以用于确定抗体的亲和力、特异性和适用范围。
通过标记目标分子和抗体，可以利用流式细胞术定量地分析抗体与细胞及其表面分子的相互作用。
3.4 直接酶标记法直接酶标记法是一种高灵敏度的抗体筛选技术，可以快速鉴定和筛选高亲和力的抗体。
该技术利用酶标记的抗体与抗原结合后，通过酶活性产生的化学反应或发色反应来检测抗体-抗原复合物的存在。
该方法操作简单，灵敏度高，适用于大规模抗体筛选。
4. 讨论与总结抗体筛选技巧的选择应基于研究目的、样本类型和实验条件。
免疫吸附法和免疫组化技术适用于确定抗体的特异性和亲和力，可以对候选抗体进行初步的筛选。
流式细胞术可以进一步评估抗体在细胞水平上的特异性和亲和力，而直接酶标记法可用于快速大规模的抗体筛选。
不规则抗体筛查
不规则抗体检查不规则抗体检查也称红细胞抗体检查.不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体.ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体。
其多为ＩｇＧ抗体。
主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞，必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应.临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同，其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血，则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应，可导致溶血性输血反应的发生。
红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时;2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时;5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。
1。
原理利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应,如果出现凝集表示血清中存在不规则抗体。
2。
试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操作步骤3.1 取试管三支,标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清(血浆）2滴，加5%筛选细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴。
3。
2 各加LIM0。
7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀。
3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒,然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0。
1ml液体。
3。
4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集,如无凝集，则必须重作.3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。
如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性;如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性,应进一步作抗体鉴定。
DNAJA3抗体使用说明
DNAJA3 Antibody
Product Code Abbreviation Storage Uniprot No. Immunogen
Raised In Species Reactivity Tested Applications
Relevance
Form Conjugate Storage Buffer
Modulates apoptotic signal transduction or effector structures within the mitochondrial matrix. Affect cytochrome C release from the mitochondria and caspase 3 activation, but not caspase 8 activation. Isoform 1 increases apoptosis triggered by both TNF and the DNA-damaging agent mytomycin C; in sharp contrast, isoform 2 suppresses apoptosis. Can modulate IFN-gammamediated transcriptional activity. Isoform 2 may play a role in neuromuscular junction development as an effector of the MUSK signaling pathway.
Liquide: 0.03% Proclin 300 Constituents: 50% Glycerol, 0.01M PBS, pH 7.4
>95%, Protein G purified
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2．供血者血清抗体筛检；3．输血前受血者血清抗体检查；4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5．孕妇血清的抗体检查；6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。
筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。
这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。
在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。
对患者或供血者的血样不需要用这种方法。
在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。
【试剂】1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。
筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。
因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。
筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。
这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。
每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。
如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。
合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。
2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。
因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。
三聚氰胺人源scFv抗体筛选与鉴定
ｃｏ ｅ ， ｓｎ ｎ ｙ ｑｉｋ ｄｉ ｌｎ ｓ ｕ ｉｇｅｚ ｍｅ ｎ ｅ ｍｍｕ ｏ ｏ ｂ ｎ ｓａ ｔ ｏ （ Ｓ ，ｃｏ ｓｒａ ｔ ｅａ ｄｃ ｍｐ ｔｔ ｅｉ ｉｉｏ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓ ｎ ｓ ｒ ｅ ｔａ ｓｙｍｅｈ ｄ ＥＩ Ａ） ｒｓ—ｅ ｃｉ ｎ ｏ ｅｉｉ ｈｂｔ ｎｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ， Ｉ ｖ ｖ ｎ ｉ
关键 词 ： 体 ； 菌体表 面展 示技 术 ； 抗 噬 三聚氰 胺 中图分 类号 ： ３ ２ １ 文献 标 志码 ： 文 章编号 ：６ １７ １ （ ０ ２ ０ —１ —４ Ｒ ９． １ Ａ １ ７ —４ ４ ２ １ ） ３０ ００
ｄ ｉ１ ． ９ ９ｊ ｉ ｎ １ ７— ４ ４ ２ １ ． ３ ０ ３ ｏ ： ０ ３ ６ ／． ｓ ． ６ １ ７ １ ． ０ ２ ０ ． ０ ｓ
艾滋病病毒抗体快速检测技术手册
艾滋病病毒抗体快速检测技术手册艾滋病病毒抗体快速检测技术手册（2011年版）中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心前言近年来，在党和政府的高度重视和领导下，各项艾滋病防治措施得到有效落实，艾滋病疫情快速上升的势头有所减缓，病死率有所下降，艾滋病病毒感染者、病人的生活质量明显改善，社会歧视有所减少。
但我国艾滋病流行形势依然严峻，艾滋病传播方式更加隐蔽，性传播已成为主要的传播途径，男男性行为传播上升明显，许多感染者和病人尚未发现。
2009年中国艾滋病疫情估计有74万HIV感染者，但截至2010年底，通过网络直报累计数只有38.6万人，还有近一半的感染者和病人没有被发现。
为了尽早、尽快发现感染者，《国务院关于进一步加强艾滋病防治工作的通知》（国发【2010】48号），明确提出要进一步加强监测检测网络建设，依托现有医疗卫生资源，配备必要的设备和人员，扩大检测服务范围，推广使用快速简便的检测方法，提高检测可及性。
组织各级各类医疗卫生机构主动开展艾滋病病毒检测咨询。
目前我国已经建成了较为完整的艾滋病检测实验室网络，截止2010年底，全国共有318个艾滋病检测确证实验室、10944个艾滋病检测筛查实验室，它们在艾滋病检测过程中发挥着不可替代的主导作用。
但我国地域辽阔，在一些有检测需求、尚不具备条件建立实验室的单位，包括医疗机构、农村乡（镇）卫生院、社区卫生服务中心和艾滋病自愿咨询点等，需要建立快速检测点，以扩大检测覆盖面、发现更多的感染者。
为规范、有效地开展艾滋病病毒快速检测，在《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》的基础上，国家参比实验室对快速检测的使用进行了细化，在广泛征求专家和基层工作人员意见的基础上，起草了《艾滋病病毒抗体快速检测技术手册》，以下简称《手册》。
本《手册》共分九章，包括：人员要求，检测点的设置、要求与管理，试剂选择，样本采集及注意事项，检测策略及流程，实验记录，结果报告与告知，检测质量控制，生物安全及个人防护。
交叉配血知识
临床上通常所称的“同型血”是指ABO血型系统和Rh血型
系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细,或只用盐水介质配血,则可能检查不出 ABO血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免
二二
血型
三 不规则抗体的筛选
四四
交叉配血
2020/3/27
3
标本的采集与要求
2020/3/27
4
1.标本要新鲜:
标本要具有代表性， 能代表患者目前状况
前三个月内输血或妊娠:配血试验标本抽取<48h,
避免因回忆反应产生的抗体漏检。
新近的输血或妊娠：可引起意外抗体迅速出现,如
果对病人的输血史或人身史不明,使用的标本必须是 输血前48h内抽取的。
2020/3/27
8
2. 离心力的标准
不同规格离心机，力矩不同，统一离心转速，但
没有统一离心力。
离心转速换算公式：
RCF = 1.118 × 10-5 × (rpm) 2× R (cm)
3. 离心后结果观察注意事项
将试管成30-45℃角拿在手上，细胞扣朝上，手腕
轻轻用力，用液体去冲细胞扣。
- 细胞成细沙状沿试管壁流下 + 细胞成块状或成齿状沿试管壁流下
（10）异常血浆蛋白 病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例异 常和高浓度的FIB等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象
（11）近期内进行大量的血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反 定型困难。
（12）不规则抗体的产生 受检者血浆中，含有ABO血型抗体以 外的不规则抗体，如自身抗I，与试剂A、B细胞上的相应抗原起 反应。
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抗体鉴定操作步骤
1. 抗体筛选阳性，应作抗体鉴定试验已确定其特异性。
2 依据谱细胞数量的多少 ( 一般由 8— 16 个单人份的已知血型表型的 0 型红细胞组成 ) 取相应
数目的试管，分别标记序号，各加入患者血清
2 滴，再分别加入谱细胞 2 滴。
3. 混匀， 37oC孵育 1h。
4.1300g 离心 15s 。
.
红细胞血型抗体筛选、鉴定操作规程 (SOP)
实验室ห้องสมุดไป่ตู้称
项目
编号
制定日期
血库
TY-XK-03
2017 年 8 月 14 日
红细胞血
型抗体筛
选、鉴定
操作规程
目 的 : 规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
职 责 : 输血科技术人员负责红细胞血型抗体筛选、鉴定。
适用范围 : 适用于输血科抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。
5. 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
6. 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤 3 次 。
;.
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7. 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。 8. 按试剂说明书加最适稀释度球蛋白试剂 1 滴，充分混合。 9.1300g 离心 15s 。轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
;.
4. 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
5. 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤 3 次。
6. 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
7. 按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂
1 滴，充分混合。
8.1300g 离心 15s 。轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
所需材料和设备 : 抗球蛋白试剂、筛选细胞、谱细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴 管、普通离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。
抗体筛选操作步骤
1. 取试管三支，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ；各加入患者血清
2 滴，再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选
细胞 2 滴。
2. 混匀， 37oC孵育 1h。
3.1300g 离心 15s 。