组织培养第九章植物脱毒技术
植物组织培养脱毒技术
植物病毒大部分属于单链RNA病毒，少数为DNA病毒。其基 本形态有杆状、丝状和等轴对称的近球形二十面体。植物病 毒虽是严格的细胞内寄生物，但专一性并不强，往往一种病 毒可寄生在不同种、属甚至不同科的植物上。如烟草花叶病 毒能侵染十多个科，200多种草本和木本植物。
已知的植物病毒种类有600多种，绝大多数种子植物易发生 病毒病。植物被病毒感染后，一般表现出三类症状：①因寄 主细胞的叶绿素或叶绿体被破坏，使植物出现花叶或黄化病 症。②阻碍植株发育，使植株发生矮化、丛枝或畸形等。③ 杀死植物细胞使植株出现枯斑或坏死。
三、植物病毒对植物的侵染途径
由于植物病毒一般无专门吸附结构，而且植物细胞表面至今也 未发现有病毒特异性受体部位，因而植物病毒的侵染途径主要 是通过伤口。如：①借昆虫刺吸式口器损伤植物而侵入细胞。 ②借带病汁液与植物伤口相接触而侵入。③借人工嫁接时的伤 口而侵入。
植物病毒侵入植物细胞后，病毒按其各自的核酸类型进行复制。 其增殖过程因病毒类型不同其细节也很不相同，但步骤大致相 似。
热处理有一定的局限性，一方面热处理只能降低植株内病毒的 含量，单独处理难以获得无毒材料；另一方面热处理时间过长， 会造成植株代谢紊乱，加大品种变异的可能性。生产上通常采 用热处理结合茎尖培养的脱毒方式，获得较高
二、茎尖脱毒
研究表明，茎尖和根尖 的分生组织中一般是无 毒或仅含极低浓度的病 毒粒子。
茎尖由顶端分生组织及 其下的1～3个叶原基构 成。一般大小在0.1～1 ㎜之间.
四、植物病毒病的防治
目前防治植物病毒病的基本策略是：防重于治和综合防治。 一般采取以下措施：
1、选育抗病品种 选育病毒不能侵入或即使侵入也无法复 制的抗病品种和对病毒感染有较强适应性的耐病品种。
植物组织培养脱毒技术综述
植物组织培养脱毒技术综述作者：李美娜来源：《农家科技下旬刊》2015年第06期摘要：植物病毒分布广、危害大，对农业和花卉产业的发展产生了巨大的冲击。
国内外的系统研究和生产实践证明，培育和栽培无病毒种苗是防治作物病毒病的根本措施。
本文通过查阅国内外研究文献和资料，综合阐述了热处理脱毒法、组织培养脱毒法、微体嫁接离体培养脱毒法等方法以及几种常用的病毒检测方法。
关键词：植物组织培养；脱毒技术；检测技术植物病毒分布广、危害大，对农业和花卉产业的发展产生了巨大的冲击。
近年来，随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术，病毒病开始流行，严重影响了中国花卉产业的发展。
目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。
世界上不少国家十分重视这项工作，把脱除病毒纳入常规良种繁殖的一个重要程序，建立了大规模的无病毒苗生产基地，为生产提供无病毒良种种苗，已经在生产上发挥了重要作用，取得了显著的经济效益。
无病毒良种种苗的优点有：（1）产量提高。
通过脱毒可大大提高作物的产量，如草莓脱毒可提高产量20%—30%、马铃薯脱毒可提高产量40%以上、地瓜脱毒可提高产量30%—50%、苹果脱毒可提高产量15%—45%。
（2）品质提高。
脱毒后的植物所结果实品质提高，如地瓜脱毒可提高出干率0.1%—1.5%；苹果着色好，糖度高；观赏植物生长健壮、花大、花艳，优质花增加，商品价值提高。
（3）抗病性增强。
脱毒后，植物本身抗性提高。
对病虫的抗性增强，如地瓜脱毒后可增强抗茎线虫病；另外，脱毒时，还会同时脱除有些细菌、真菌、线虫等。
一、脱毒技术当前脱除植物病毒的方法有热处理脱毒法、组织培养脱毒法、微体嫁接离体培养脱毒法3类。
其中组织培养脱毒法又包括微茎尖培养脱毒、愈伤组织培养脱毒法、珠心组织培养脱毒法3种方法。
1.茎尖培养脱毒。
（1）茎尖培养脱毒原理。
在染病毒植株体内，病毒分布并不均匀，在生长点病毒含量最低。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
植物组织培养项目六 植物脱毒技术
2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制
了病毒的复制；
3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生 组织中比其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的 增殖 。
二、植物脱毒的方法
1. 茎尖培养脱毒
通过茎尖培养脱毒的原理 1）病毒在植物体内的分布：茎尖、根尖顶端分生组织病毒 浓度低，甚至不带病毒。（茎尖、根尖无维管束系统，病毒 无法运动）
获得的再生植株无病毒。
珠心胚培养对柑橘鳞皮病、速衰病、裂皮病、
脉突病等十分有效。
柑橘珠心胚培养：取花后约7 周的幼果胚囊， 接种在25±2 ℃黑暗条件下培养 1个月，再转光 培养（1000 lx，12 h/d）。
3-4 周发生球形胚和愈伤组织，9-10 周分化子
叶，苗高 3 cm左右移植到营养钵蛭石基质中培
全世界植物病毒近788种，病毒对寄主植物造成
毁灭性危害，导致大幅度减产。
2. 植物病毒病的症状
1）变色
2）坏死 3）畸形 4）萎蔫
3. 植物病毒的侵染特性
1）有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物，
极易受病毒病的侵染。
2）大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒除 外）。 3）病毒在生长旺盛的部位繁殖速度较慢。
4）生根诱导：
将 2-3 cm 的无根苗转入生根培养基（ 1/2MS+IBA 0.10.2 mg/L）继续培养1-2 个月就可形成根。 极难生根的（桃、苹果等）通过微体嫁接法获得完整 植株。 二次茎尖培养，脱毒率达100%
培养基与培养方式
1）MS培养基适于多种植物茎尖培养，White、Morel培
葵、紫罗兰等；块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物
脱毒技术及组织培养操作
（二）诱导、继代培养
在无菌条件下，用剪刀将外植体茎段切成0. 5～1
cm 长小段，水平放置接种；叶片切成5mm×5mm小
块，下表皮朝下水平放置接入初代培养基中，接种完
成后即转入培养室进行初代培养，培养温度22～28 ℃，
光强1000～4000 Lx。
1.间接再生途径
培养温度为(25±2)℃,光照强度2000Lx,光照时间为
12h/d,空气相对湿度为65%左右。培养基pH值为5.8～
6.0。培养25d后出现黄绿色的愈伤组织块，诱导率高。
（三）分化、继代培养
将上步得到的愈伤组织转接在诱导丛生芽 的分化培养基MS+6-BA2.0+NAA0.1上，培养1周左 右,观察到愈伤组织表面陆续长出不定芽，继续 增殖培养达到所需芽丛数。
组培快繁技术
• 1．无菌苗培养 • (1)西瓜籽消毒 取无籽西瓜的种子用水浸泡24h， 70％酒精消毒1～2min，再转入0.1％升汞溶液中 消毒15～20 min，无菌水冲洗4～5次，在无菌条 件下剥去种壳，置于无激素的1/2MS培养基中， 直接接受光照或发芽后再行光照培养，30～33℃ 下发芽。 • (2)小腋芽消毒 用于西瓜蔓的消毒剂为滴加少 量吐温-80的4.0％漂白粉溶液。先将西瓜蔓在清 水中漂洗、揩干，再用70％酒精擦净。然后置于 上述消毒剂中消毒15～30 min，在无菌水中漂洗 5次，接种于1/2MS的培养基中或直接放于增殖培 养基中，在25～28℃的条件下培养。
茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周 内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。20d后 产生愈伤组织，30d愈伤组织分化出芽。
2.直接再生途径
茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周 内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。但是 20d后不产生愈伤组织，直接分化出芽。
组织培养脱毒
组织培养脱毒植物组织培养脱毒是目前广泛应用和正在继续发展的主要脱毒方法。
依据的原理是病毒在植物体内分布的不均匀及细胞全能型，如在植物茎尖等分裂旺盛、生长迅速的组织细胞往往检测不到病毒的存在。
采用不含病毒的植物组织或细胞进行组织培养，获得无病毒的植株。
将组织培养脱毒技术与基因工程、品种改良和植物快繁结合起来，利用工厂化育苗，达到快速获得品性优良的无毒种源，具有广阔的开发和应用前景。
3.3.2.1茎尖组织培养脱毒Morel等（1952）从侵染花叶病毒的大丽花的茎尖组织培养获得无病毒的植株，从此茎尖培养成为脱毒的一个有效途径，在马铃薯、兰花、百合、鸢尾、苹果等植物中获得了脱毒成功。
利用茎尖脱毒技术，能够将很多不能通过热处理脱除的病毒脱掉，同时茎尖脱毒获得的植株遗传变异小，能够很好的保持品种的特性。
葡萄脱毒与快繁工艺流程图(摘自曹孜义，2001)3.3.2.2茎尖微芽嫁接脱毒茎尖微芽嫁接脱毒是将组织培养与嫁接相结合，来获得无毒植株的一种新方法，它是将0.1-0.3mm的茎尖作为接穗嫁接到组织培养获得的无毒实生砧木上，再进行试管培养，愈合成为完整的脱毒植株。
该方法可以解决一些果树茎尖组培成苗的困难。
另外，在柑橘等茎尖培养过程中可能发生芽变，出现返祖现象，而茎尖嫁接则不出现这些想象。
3.3.2.3其他组培脱毒方法植株中除茎尖含病毒较少外，花药、胚、胚珠及珠心等组织器官都几乎不含病毒，以这些组织器官为外植体进行组织培养也可以获得无病毒植株。
3.3.2.3.1花药培养法大泽胜次等(1974)首先发现草毒花药培养可脱除病毒，且草莓花药培养与热处理、茎尖组织培养比较，具有脱毒率高，安全可靠等优点。
其后对枸杞、苹果、葡萄、莴苣、玉米等药用植物、果树及蔬菜、农作物进行花药脱毒取得了成功。
3.3.2.3.2珠心胚培养法柑桔的种子具有多胚性，其中有一个胚是受精后产生的有性胚，其余是珠心细胞形成的无性胚，称为珠心胚。
珠心胚经培养后可以得到无病毒的珠心胚苗。
植物脱毒技术课件
•《植物脱毒技术》
任务三 茎尖剥离和接种
将消毒后的材料在解剖镜下进行剥离，如果是用于快速繁 殖的茎尖材料可带2-4个叶原基或更多，如果是用于脱毒的 切取0.1-0.5mm,带1-2个叶原基，并迅速接到培养基上。
2024/•22/10924/2/19
解剖镜下剥取茎尖
•《植物脱毒技术》
任务四 继代培养
•《植物脱毒技术》
Hale Waihona Puke （一）茎尖培养脱毒v 1．微茎尖培养脱毒机理 v 2．微茎尖培养脱毒的过程
剥离茎尖 顶芽或腋芽
感染病毒植株
茎尖培养
离体快繁
病毒检测 植株再生
防虫网室内繁殖脱毒苗 图11-1 微茎尖培养生产脱毒苗的流程图（陈世昌，2011）
•《植物脱毒技术》
马铃薯脱毒
•《植物脱毒技术》
马铃薯脱毒技术
•2024/2/19
•《植物脱毒技术》
（二）热处理脱毒
1．热处理脱毒的原理 2．热处理脱毒的方法 ①温烫处理脱毒法 ②热空气处理脱毒法 3．影响热处理脱毒的因素 4．热处理的优缺点
•2024/2/19
•《植物脱毒技术》
（三）茎尖脱毒与热处理相接合
•2024/2/19
•《植物脱毒技术》
（四）微体嫁接脱毒法
一、脱毒苗培育的意义
v （一）植物病毒的危害 v （二）病毒传播的方式 v （三）脱毒苗培育的意义
•《植物脱毒技术》
二、脱毒的方法
v （一）茎尖培养脱毒 v （二）热处理脱毒 v （三）茎尖脱毒与热处理相接合 v （四）微体嫁接脱毒法 v （五）愈伤组织培养脱毒 v （六）珠心胚培养脱毒法 v （七）花药培养脱毒 v （八）抗病毒药剂法
任务1
教案3植物脱毒技术
（1）优点：设备要求不高，技术简单，短时间可除去病毒。
（2）局限性：
●热处理不能脱除所有病毒，
●同时同样的处理效果也不一样（具有不确定性）。
●对植株有伤害，只有部分植株成活。
●对寄主植物进行较长时间的高温处理有可能钝化植物组织中的阻抗因子，使寄主植物中抗病毒因子难于活化，从而增加无效植株的发生率。
（4）茎尖培养
用小刀片切下茎尖放入培养基。培养条件为25℃，光照16h，光照强度为2000Lx。在White、Morel、MS培养基的基础上略加修改，尤其是K+与NH4+含量适当提高有利于茎尖的生长。大多数植物的茎尖培养以MS＋NAA 0.1-1.0mg/L＋CM（椰乳）5～10%。也可加0.1-1mg/L的KT和活性炭，进行固体培养或液体滤纸桥培养。微茎尖培养须经历较长的时间，一般要持续2个月以上才能见到茎尖的分化，一般由茎尖直接分化出芽丛。
注：热处理需与其他方法配合应用，才可获得良好的效果。
（二）茎பைடு நூலகம்培养脱毒
1、原理
病毒在感染植株上的分布是不均匀的，即老叶片及成熟的组织和器官中病毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织和器官中病毒含量较低，生长点（约0.1-1.0mm区域）则几乎不含或含病毒很少。
2、方法
（1）材料的选择和预处理
选择具有原品种典型特征、病毒危害较轻的健壮植株，采集外植体。
提出引导性问题：请大家说说如何能脱除植物体内病毒？
新课讲述：
一、植物脱毒的意义
通过植物组织培养方法生产无病毒种苗可以同时除去真菌、细菌和线虫的寄生，因此产量大幅度增加，最高可增产300％，平均增产也在30％以上。
二、脱毒方法
（一）热处理脱毒
1、原理
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•显微镜下 获取茎尖
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•接种
•盖好瓶塞
组织培养第九章植物脱毒技术
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•脱毒马铃薯试管苗
组织培养第九章植物脱毒技术
3．培养
25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新 鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从 生芽。 4．生根诱导 诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生 根培养基继续培养1-2个月可生根。
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组织培养第九章植物脱毒技术
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组织培养第九章植物脱毒技术
四、分子生物学鉴定 1、双链RNA法
通过提取纯纯化待测植物RNA，并对其进行电 泳分析，可确定dsRNA存在，从而判断待检植物是 否带病毒。 2、互补DNA（c DNA）检测法
也叫DNA分子杂交法
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叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑
叶和茎干锈斑、坏死斑 叶片出现褪绿斑点、线纹斑及环斑、 局部坏死、畸形；叶脉间出现星状 透明斑
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组织培养第九章植物脱毒技术
葡萄卷叶病毒 葡萄茎沟病毒 葡萄栓皮病毒 葡萄金黄病毒
欧亚种葡萄 Kober 5BB LN33 Baco 22A
葡萄脉坏死病 110R
葡萄脉斑驳病 河岸葡萄
苹果 柑橘 葡萄 草莓
桃 梨
感染病 毒种类
36 23 26 24 23 11
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组织培养第九章植物脱毒技术
• 所谓脱毒就是采用一定的方法除去植 物体内病毒的技术。 • 无病毒苗：指不含该种植物的主要危 害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的 存在表现阴性反应的苗木。
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组织培养第九章植物脱毒技术
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组织培养第九章植物脱毒技术
• 危害一些植物的病毒数目
植物种 类
菊花 康乃馨
水仙 唐菖蒲 风信子
月季
感染病 毒种类
19 11 4 5 3 10
植物种 类
矮牵牛 百合
马铃薯 大蒜 豌豆 樱桃
感染病 毒种类
5 6 17 24 15 44
植物种 类
9组织培养第九章植物脱 毒技术
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2020/11/30
组织培养第九章植物脱毒技术
•目的与要求
• 了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及 其操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用， 掌握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴 定方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱 毒苗的保存和繁殖方法。 • 具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物 鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。
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组织培养第九章植物脱毒技术
三、其他组织培养脱毒方法 （一）愈伤组织培养脱毒
将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织， 再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植 株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。
部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方 面的原因： 一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制 速度较慢，赶不上细胞的繁殖； 二是愈伤组织发生了抗病毒突变。
生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基 能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。 但茎尖越大，脱毒效果差。
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组织培养第九章植物脱毒技术
（二）茎尖脱毒方法 1、取样与消毒
可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采 顶芽与侧芽消毒接种 。
马铃薯Y病 毒（PVY）
马铃薯卷 叶病毒 （PLRV）
指示植物
表现症状
千红日、曼陀罗、辣 椒、心叶烟
脉间花叶
苋色藜、千日红、曼 陀罗、昆诺阿藜
叶脉深陷，粗缩
野 曼生陀马罗铃薯、洋酸菜、随微品品花种种叶反而 或 应异 粗 为， 缩 坏有 ， 死些 敏轻 感
洋酸菜
叶尖呈浅黄色，有些 品种呈紫色或红色
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组织培养第九章植物脱毒技术
（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠
心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带 病毒。 （三）微尖嫁接脱毒
指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎 尖（0.14-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗 的技术。 脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接— —嫁接苗培养——移植。
桃细菌性穿孔病
萎蔫
棉花枯萎病、茄科植 物青枯病
矮化
玉米矮化病、泡桐丛 枝病、小麦丛矮病
徒长 水稻恶苗病
疮痂
柑桔疮痂病、梨黑星病、马 铃薯疮痂病
卷叶 马铃薯卷叶病
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组织培养第九章植物脱毒技术
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•指示植物法
组织培养第九章植物脱毒技术
•几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状
病毒种类 马铃薯X病 毒（PVX） 马铃薯S病 毒（PVS）
•酒精灯灼 烧
•酒精擦拭培养 皿 组织培养第九章植物脱毒技术
•2、茎尖剥离和接种
• 将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上—器械
固定—解剖镜下剥去幼叶—切下带1-2个叶原基的 生长点（0.3-0.5mm）—切下的茎尖转至培养基 上（顶部向上）。
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组织培养第九章植物脱毒技术
•酒精擦拭
•旋转灼烧
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组织培养第九章植物脱毒技术
定确系无特顶病毒者，既是无病毒原种。
• 无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有
可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病
毒苗，就应很好保存，这些原原种或原种材料保
管得好可以保存利用5～10年。
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组织培养第九章植离保存 • 通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300 目，即网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，也可用盆 栽钵。栽培用的土壤也应进行消毒，周围环境也 要整洁，并及时喷施农药防治虫害，以保证植物 材料在与病毒严密隔离的条件下栽培。 另一种更 便宜的方法，是把由茎尖得到的并已经过脱毒检 验的植物通过离体培养进行繁殖和保存。
组织培养第九章植物脱毒技术
•五、电镜检测法 运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有无
病毒粒体存在，并根据所观察病毒的形态等对病毒 种类进行鉴定。是较为先进的方法，但需一定的设 备和技术。
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组织培养第九章植物脱毒技术
•
第三节 无病毒苗的保存和繁殖
• 通过不同脱毒方法所获得的脱毒植株，经鉴
三、抗血清鉴定法 特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可 以完成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。 （一）原理
刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能 发生高度专一性的血清学反应（免疫反应） （二）方法 1、叶绿体凝集法 2、块茎沉淀法 3、环形接口法 4、酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测 定法。现在灵敏度较高和常使用的方法。
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（三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。
（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术 的关键）
植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.30.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养
•应用植物脱毒技术意义 • 植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特 性，生长势增强，明显提高产量、改善品质， 产量的提高幅度最高可达300%。 • 植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以 去除多种真菌、细菌及线虫病害，使种性得 以恢复，植株生长健壮，减少肥料和农药施 用量，降低生产成本，保护了环境
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消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大 叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒 左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消 毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。
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组织培养第九章植物脱毒技术
• •酒精擦拭手
•外植体消毒
•浸泡5min
•器械消毒
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羽毛状花叶病毒 0.3～1.0
剥离茎尖大
植物 病毒名称
小
（mm）
百合 花叶病 0.2～1.0
鸢尾 花叶病 菊花 各种病毒 康乃馨 各种病毒 大丽花 花叶病 大蒜 花叶病毒 甘蔗 花叶病 草莓 各种病毒
0.2～0.5 0.2～1.0 0.2～0.8
0.6 0.3～1.0 0.7～3.0 0.2～1.0
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组织培养第九章植物脱毒技术
• 全世界已发现植物病毒有近788种。 病毒的危害：
• 组织和细胞病变 • 新陈代谢等生理机能受到干扰 • 外观表现不正常状态 • 由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄 主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产， 甚至全株死亡。世界作物生产中，病毒危害程 度仅次于真菌。
2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空 气处理2～4周或更长时间。 特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间
适用：多数植物
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组织培养第九章植物脱毒技术
•3、热处理结合茎尖培养脱毒 • 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合 起来的方法脱毒。 •特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率， 又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱 毒率。 •适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除 的纺锤块茎类病毒
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组织培养第九章植物脱毒技术
二、热处理脱毒 脱毒原理
即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温 的温度下（35-40度）即钝化失活。
1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中 浸渍几十分钟到数小时。