硝基甲苯与硝基苯甲酸异构体的高效液相色谱法分析
高效液相色谱法测定硝基苯酚得三种异构体实验报告
高效液相色谱法测定硝基苯酚得三种异构体实验报告高效液相色谱法测定硝基苯酚得三种异构体实验报告________________本实验旨在采用高效液相色谱（HPLC）法测定硝基苯酚（o-nitrophenol）得三种异构体的含量。
硝基苯酚是一种重要的有机合成原料，具有多种重要的医药和农药应用。
此外，它也是一种污染物，可以在水中形成三种异构体：o-硝基苯酚，m-硝基苯酚和p-硝基苯酚。
因此，对于硝基苯酚的分析是十分必要的。
一、实验原理硝基苯酚的HPLC分析是通过将样品进行溶解，然后将其通过高效液相色谱仪进行分析来实现的。
在HPLC法中，样品通过被加压的溶剂进入柱内，然后在一定时间内不断流动，样品分子会根据它们的吸附特性与立体结构在柱内分离，最后利用检测器对样品的吸光度进行测定。
由于不同的异构体有不同的吸光度，因此可以根据它们在HPLC图上的分布来测定不同异构体的含量。
二、实验步骤1.准备样品：将样品分别加入少量乙醇并加热，使其溶解；2.准备HPLC柱：将C18固定相HPLC柱装入HPLC仪中；3.准备溶液：将乙腈-水（1:1）作为流动相；4.流动条件设置：设置流速为1.0 mL/min；5.样品注射：将样品以10 μL/min的速度注入HPLC仪中；6.数据处理：在HPLC仪中进行数据处理，并画出三种异构体的HPLC图；7.计算含量：根据所得的HPLC图计算三种异构体的含量。
三、实验结果根据所得的HPLC图可以得出以下结果：o-硝基苯酚含量为9.6%；m-硝基苯酚含量为33.7%；p-硝基苯酚含量为56.7%。
四、实验总结通过本实验可以得出以下结论：通过HPLC法可以准确测定硝基苯酚得三种异构体的含量。
实验中使用的C18固定相HPLC柱可以有效地分离三种异构体。
此外，使用乙腈-水作为流动相可以保证样品的有效流动。
本实验发现，o-硝基苯酚、m-硝基苯酚和p-硝基苯酚的含量分别为9.6%、33.7%和56.7%。
48硝基苯(硝基苯、邻硝基甲苯、间硝基甲苯、对硝基甲苯)水质硝基苯类化合物的测定气相色谱法HJ592-2010
水质 硝基苯类化合物的测定 气相色谱法 1适用范围本标准规定了水中硝基苯类化合物的气相色谱法。
本标准适用于工业和生活污水中硝基苯类化合物的测定。
当样品体积为500ml 时，本方法的检出限、测定下限和测定上限，见表1。
表1 方法检出限及测定上限、下限2方法原理用二氯甲烷萃取水中的硝基苯类化合物，萃取液经脱水和浓缩后，用气象色谱氢火焰离子化检测器进行测定。
2,4,6-三硝基苯甲酸水溶性强，在加热时脱羟基转化为1,3,5-三硝基苯。
因此，将二氯甲烷萃取后的水进行加热，再用二氯甲烷萃取单独测定2,4,6-三硝基苯甲酸。
3 试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂，实验用水为新制备的蒸馏水。
3.1 浓硫酸（H 2SO 4）：P=1.84g/ml 3.2 二氯甲烷（CH 2CI 2）：液相色谱纯。
3.3 乙酸乙酯（C 4H 8O 2）:液相色谱纯。
3.4 无水硫酸钠（Na 2SO 4）：使用前在350℃马弗炉中灼烧4h ，冷却至室温，装入玻璃瓶中备用。
3.5 硝基苯类化合物标准溶液： P=1.00mg/ml 。
于4℃密闭避光保存。
可以使用市售有证标准物质。
3.6 2,4,6-三硝基苯甲酸:粉末状固体颗粒，纯度>98.5%。
3.7 2,4,6-三硝基苯甲酸标准溶液：P=1.00mg/ml 。
避光保存，一周内有效。
3.8载气：氮气，纯度≥99.99%（体积分数）。
法 作业指导书项目 硝基苯类（硝基苯、邻硝基甲苯、间硝基甲苯、对硝基甲苯）适用范围 工业、生活污水编制人 批准人 朱小平 共 5 页第 1 页批准日期2014年3月10日3.9 燃烧气:氢气，纯度≥99.99%(体积分数)。
3.10 助燃气：空气。
4 仪器和设备4.1 气象色谱仪：聚氢火焰离子化检测器。
4.2 色谱柱：石英毛细管色谱柱，30m ×0.32mm （内径）×0.25um （膜厚），固定相为5%苯基-95%甲基聚硅氧烷。
高效液相色谱法测定工作场所空气中邻硝基甲苯
高效液相色谱法测定工作场所空气中邻硝基甲苯管敏娅;倪忠【期刊名称】《中国卫生检验杂志》【年(卷),期】2007(17)9【摘要】目的：建立工作场所空气中邻硝基甲苯的液相色谱分析方法。
方法：硅胶管吸附空气中邻硝基甲苯，样品经甲醇解吸，在SinoChrom ODS—BP柱（250mm×4．6mm×5μm）上，以甲醇＋水（76＋24）为流动相，柱温25℃，紫外256nm检测，外标法定量。
结果：当空气中邻硝基甲苯浓度范围在3．33～33．3mg／m^3，方法的变异系数为0．42％，回归方程式y=27370X＋1110，相关系数r=0．99999，检出限0．10μg/ml，以采集3L空气样品计，最低检出浓度0．07mg／m^3，平均解吸效率为99．4％。
硅胶吸附40．00μg邻硝基甲苯，样品放置3周，回收率仍可达98．7％，变异系数为0．51％。
方法的不确定度为1．9％。
与国标方法作比对试验，经统计分析，无显著性差异。
在本实验条件下，能与苯胺、对硝基苯胺、硝基苯、甲苯等组分有较好的分离。
结论：本法可应用于工作场所空气中邻硝基甲苯浓度的检测。
【总页数】3页(P1560-1562)【关键词】邻硝基甲苯;硅胶管;溶剂解吸;液相色谱【作者】管敏娅;倪忠【作者单位】浙江省台州市椒江区疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】O657.72【相关文献】1.工作场所空气中二苯胺测定的高效液相色谱法 [J], 于甜甜;谭启涛;王宇2.工作场所空气中苯醌测定的高效液相色谱法 [J], 张梦萍;孟潇;卫海燕;门金龙;陈学磊;邹嶶;张志虎3.高效液相色谱法测定工作场所空气中的尿素 [J], 韩红玉;曹林林4.工作场所空气中米非司酮测定的超高效液相色谱法 [J], 赵玮;宋爽;闫慧芳5.高效液相色谱法测定工作场所空气中丙烯酰胺的不确定度评估 [J], 吴川;丘静静;董明;林佐侃;袁静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法分析硝基苯甲酸异构体
黄淮学院2012-2013学年第二学期《仪器分析》课程实践论文题目：高效液相色谱仪班级化学1101B姓名吴俊鹏学号1133110137高效液相色谱仪摘要随着高效液相色谱这一新型分离分析技术的广泛应用，现在每天都有许多色谱工作者在研究使用高效液相色谱。
特定样品的最佳分离条件，只有通过实验才能得到。
关键词：高效液相色谱分离条件HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHABSTRACTWith the high oerformance liquiid chromatography separation and analysis of this new technology widely used, and now everyday ,many workes in studies using high perfomance liquid chromatography. The optimal conditions for a sample, can be obtained only by experiment. KEY WORDS ; high perormance lipuid chromatography ; separations conditions高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
工作原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
硝基化合物的高效液相色谱_HPLC_分析_刘秀华
第31卷第3期2012年3月环境化学ENVIRONMENTAL CHEMISTRYVol．31，No．3March 20122011年3月28日收稿．*中国工程物理研究环保基金（617）资助．＊＊通讯联系人，E-mail ：liuxiuhuajulia@yahoo．com．cn 硝基化合物的高效液相色谱（HPLC ）分析*刘秀华＊＊朱方华何小波孟丹胥全敏（中国工程物理研究院，绵阳，621900）摘要硝基化合物是炸药废水的主要成分，大部分硝基化合物具有较高的毒性．本文对奥克托今、黑索今、1，3，5-三硝基苯、1，3-二硝基苯、硝基苯、2，4，6-三硝基甲苯、2-氨基-4，6-二硝基甲苯、2，4-二硝基甲苯共8种硝基化合物的紫外光谱和液相色谱分离条件进行了研究，其最佳检测波长分别为228nm 、227nm 、227nm 、237nm 、272nm 、230nm 、226nm 、244nm．本文建立了8种硝基化合物的高效液相色谱测定方法，色谱条件为：色谱柱为ZORBAX SB-C18（3．0mm ˑ250mm ，5μm ），检测器为紫外检测器，流动相为甲醇-水（50ʒ50），流速为0．5mL ·min －1．水中8种硝基化合物可以在13min 内得到较好的分离，检出限均≤0．8ng ，回收率大于95%．关键词硝基化合物，紫外光谱，液相色谱分析，炸药．废水中的梯恩梯（TNT ，三硝基甲苯）、黑索今（RDX 、1，3，5-三硝基-1，3，5-三氮杂环己烷、又称环三亚甲基三硝胺）、二硝基甲苯（DNT ）和奥克托今（HMX ，1，3，5，7-四硝基-1，3，5，7-四氮杂环辛烷，又称环四亚甲基四硝胺）等硝基化合物主要来源于炸药及其制造所用原料及中间产物［1］，它们大多是高毒性物质，且化学性质稳定，很难为一般微生物所降解，可以经皮肤或呼吸道吸入后进入人体，引起中毒或致死．比如TNT 会损害眼的晶状体导致中毒性白内障、伤害消化系统及肝功能、血液系统和生殖系统，导致胃炎、肝炎、再障、贫血等慢性中毒症状．黑索今会影响人类中枢神经系统，引起狂躁、肌肉痉挛、头晕目眩、呕吐、甚至死亡，还显示出对肾、胃肠的毒性．炸药废水中硝基化合物排放到河流中会毒死鱼虾、也会造成土壤污染，进而毒害树木和农田作物等［2-3］．因此，准确测定和控制废水中TNT 、RDX 、DNT 等炸药残余物在废水中的含量对保护水生生态系统和保证人类的健康具有重要意义．现有的关于废水中硝基化合物分析的国家标准方法有气相色谱法（GB 13904—92）和分光光度法（GB 13905—92、GB 13903—92、GB /T 13900—92等），气相色谱法只是针对TNT 、RDX 、DNT 3种炸药进行测定，且方法是采用苯试剂液液萃取两次，操作步骤繁杂、溶剂有毒且耗用量大，而且耗时较长．分光光度法都只是针对水中一种炸药成分的测定，而且试样要进行蒸馏，操作繁琐，不能实现多组分的同时测定［4］．高效液相色谱法（HPLC ）能同时检测多种炸药组分，并可以实现较低的检测限和较宽的线性范围，而且所需样品量少，进样一般只需要几微升到几十微升．另外，反相液相色谱柱在优化的色谱条件下对两者有较好的选择性和分离效果，可直接进样测定，无需有机溶剂萃取，没有二次污染［5-6］．目前利用液相色谱测定硝基化合物的相关报道要么是有机溶剂中硝基化合物的测定［7-8］，要么是单独某一种硝基化合物的测定［9-10］．对水中多种硝基化合物的分析较少，对大部分硝基化合物没有进行光谱分析，本文利用HPLC-PDA 对8种硝基化合物进行了光谱分析，并获得了理想的液相色谱分析条件．1实验部分1．1主要试剂奥克托今、黑索今、1，3，5-三硝基苯、1，3-二硝基苯、硝基苯、2，4，6-三硝基甲苯、2-氨基-4，6-二硝基甲苯、2，4-二硝基甲苯混合标准溶液（美国Supelco 公司，浓度分别为98．4mg ·L －1、97．9mg ·L －1、386环境化学31卷97.1mg ·L －1、98．3mg ·L －1、96．7mg ·L －1、99．3mg ·L －1、98．2mg ·L －1、98．6mg ·L －1），使用时由超纯水稀释；甲醇（液相色谱级）；超纯水．1．2主要仪器硝基化合物的分离条件研究采用美国HP1050高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C18，3．0mm ˑ250mm ，5μm ；流量：0．5mL ·min －1；流动相：甲醇与水的混合物；进样量20μL．全波长扫描采用美国Finnigan LCQ Advantage 液相色谱仪，配二极管阵列检测器（PDA ）；色谱柱：Hypersil ODS C18，2．1mm ˑ150mm ，5μm ，流量：0．2mL·min －1；流动相：甲醇/水=50%/50%；进样量10μL．2结果与讨论2．1检测波长的选择进行液相色谱测定时，检测波长的选择要根据仪器的性能和化合物的最大吸收波长来确定．利用HPLC 对2mg ·L －1混合标准溶液进行分离测定，在8种硝基化合物的各色谱峰分离度较好的情况下，利用二极管阵列检测器（PDA ）对8种硝基化合物进行了全波长扫描，采集到的紫外吸收光谱见图1．得到各化合物的最大吸收波长，见表1．化合物光谱测定是在水和甲醇混合溶剂中测定，水和甲醇的透明界限分别为190nm 和205nm ，所以在205nm 以上的吸收波长不需溶剂校正［11］．奥克托今、黑索今、1，3，5-三硝基苯、1，3-二硝基苯、硝基苯、2，4，6-三硝基甲苯、2-氨基-4，6-二硝基甲苯、2，4-二硝基甲苯的最大吸收波长分别为228nm 、227nm 、227nm 、237nm 、272nm 、230nm 、226nm 、244nm．对于多波长检测器，可以针对不同成分的响应情况同时设定多个波长进行检测，如硝基苯的设为272nm ，1，3-二硝基苯设为237nm ，2，4-二硝基甲苯设为244nm ，其它的设为（227ʃ1）nm．对于单波长检测器，可以设定为大多数化合物吸收较强的位置，如230nm．图1硝基苯类化合物的紫外可见光谱图Fig．1UV-Vis absorption spectra of the eight nitrobenzene compounds表1硝基化合物的最大吸收波长Table 1The maximum absorption wavelength of nitro compounds化合物奥克托金黑索今1，3，5-三硝基苯1，3-二硝基苯硝基苯梯恩梯2-氨基-4，6-二硝基甲苯2，4-二硝基甲苯波长/nm2282272272372722302262443期刘秀华等：硝基化合物的高效液相色谱（HPLC）分析3872．2流动相的选择实验研究表明，淋洗液成分和流速的变化会引起基线较大的波动，而且色谱峰的对称性很差．所以后面实验的流动相均采用恒定的配比．图2是不同配比的淋洗液成分下约2mg·L－1硝基化合物的混合标准溶液在230nm下测定的色谱图，在甲醇/水=70/30和甲醇/水=60/40时，硝基苯类化合物的出峰较快，但是分离度较差．而在甲醇/水=48/52和甲醇/水=40/60时，硝基苯类化合物的出峰较慢，大部分峰的分离度变好，但是最晚出峰的2-氨基-4，6-二硝基甲苯和2，4-二硝基甲苯的色谱峰重叠在一起，没有分离开，而且出峰的时间拉长，在甲醇/水=40/60时需要0．5h以上．甲醇/水=50/50的条件下最好，样品分离度好且出峰时间短．流动相的最佳流速与色谱柱的长短、固定相的粒径和仪器的状态等因素有关，流速较快则化合物的峰面积变小，分离度变差，容易出现肩峰，流速较慢则运行时间大大增长，本实验条件下，采用甲醇/水为50/50、流速为0．5mL·min－1可以使各硝基化合物得到较好的分离，见图2（c）．该方法采用的是反相液相色谱技术，极性大的组分先出峰，出峰顺序依次为奥克托今、黑索今、1，3，5-三硝基苯、1，3-二硝基苯、硝基苯、梯恩梯、2-氨基-4，6-二硝基甲苯、2，4-二硝基甲苯．图2不同流动相成分下硝基化合物的色谱图Fig．2Chromatograms of the nitro compounds in different mobile phases（1）奥克托金；（2）黑索今；（3）1，3，5-三硝基苯；（4）1，3-二硝基苯；（5）硝基苯；（6）梯恩梯；（7）2-氨基-4，6-二硝基甲苯；（8）2，4-二硝基甲苯2．3校正曲线的绘制分别配制不同浓度的混合标准系列溶液，各化合物的浓度因初始浓度的不同而略有差异．在上述的优化条件（甲醇/水=50/50，流速=0．5mL·min－1）下进行测定，以进样量（ng）为横坐标，以峰面积（硝基苯在272nm下检测，其它化合物在230nm下检测）为纵坐标进行作图，得到各化合物的校准曲线．进样量在2—70ng之间时，各化合物校准曲线的相关系数均在0．999以上，见图3和表2．图3硝基化合物的校准曲线Fig．3Calibration curves of the nitro compounds进样量在2—100ng之间时，HMX校准曲线的相关系数在0．999以上，其它化合物校准曲线的相关388环境化学31卷系数有所下降，但是均大于0．997．高效液相色谱法以噪声的3倍所相当的浓度或量为检出限［12］，计算得到各化合物的检出限均≤0．8ng．表2硝基化合物的线性拟合结果Table2Linear fitting results of the nitro compounds化合物CAS#方程R检出限/ng奥克托金2691-41-0Y=9．76331X－1．554221．00000．78黑索今121-82-4Y=5．8647X+4．38570．99990．481，3，5-三硝基苯99-35-4Y=17．43649X－2．442190．99990．551，3-二硝基苯99-65-0Y=12．24432X－2．290410．99990．66硝基苯98-95-3Y=7．8786X－3．27560．99980．68梯恩梯118－96-7Y=11．19022X+2．336950．99990．472-氨基-4，6-二硝基甲苯35572-78-2Y=13．88878X+2．19460．99980．412，4-二硝基甲苯121-14-2Y=8．35034X－0．011260．99960．652．4实际废水的测定利用该方法对某炸药废水进行了测定，见图4．计算表明，废水中含有奥克托今、黑索今和梯恩梯，含量分别为1．58mg·L－1、43．77mg·L－1、1．23mg·L－1．向50mL水样中加入2mL的49．20mg·L－1、48.95mg·L－1、49．65mg·L－1的奥克托今、黑索今和梯恩梯标准溶液，回收率分别为98．9%、95.35%、99.6%，满足测试要求．图4某炸药废水的色谱图Fig．4Chromatogram of an explosive wastewater sample3结论对奥克托今、黑索今、1，3，5-三硝基苯、1，3-二硝基苯、硝基苯、2，4，6-三硝基甲苯、2-氨基-4，6-二硝基甲苯、2，4-二硝基甲苯8种硝基化合物的液相色谱分析条件进行了优化研究．利用二极管阵列检测器（PDA）对上述化合物进行全波长扫描，获得了其最佳检测波长分别为228nm、227nm、227nm、237nm、272nm、230nm、226nm、244nm．研究还表明，流动相成分和流速的变化会引起基线较大的波动，流动相中甲醇含量大时硝基化合物色谱峰的分离度较差，水含量大时，运行时间过长．流速较快则化合物的峰面积变小，分离度变差，容易出现肩峰，流速较慢则运行时间大大增长，在甲醇/水=50/50，流速= 0.5mL·min－1水中8种硝基化合物可以在13min内全部出峰并且得到有效分离．参考文献［1］Sublette K 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liquid chromatographic systems［J］．Journal of Hazardous Materials，2009，162（2/3）：1578-1582［7］梁奕昌，义志忠，蔡志虹，等．硝基甲苯与硝基苯甲酸异构体的高效液相色谱法分析［J］．色谱，1999，17（4）：397-398［8］刘永刚，陈曙东，罗顺火．多组分炸药混合物中CL-20的高效液相色谱测定［J］．化学研究与应用，2000，12（4）：446-448［9］宁艳利，王亚鑫，葛彦平，等．改性双基推进剂中HMX含量的高效液相色谱测定［J］．含能材料，2005，13（4）：252-254［10］张艳林，高翠莲，杨业全，等．固相萃取-高效液相色谱法检测水中硝基苯［J］．贵州农业科学，2009，37（7）：238-239［11］宁永成．有机化合物结构鉴定与有机波谱学（第二版）［M］．北京：科学出版社，2000［12］中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会发布，GB T5009．1—2003《食品卫生检验方法理化部分总则》附录A［S］Studies on the HPLC analysis conditions of nitryl compoundsLIU Xiuhua*ZHU Fanghua HE Xiaobo MENG Dan XU Quanmin（China Academy of Engineering Physics，Mianyang，621900，China）ABSTRACTNitro compounds are the main components of explosive wastewater．Most nitro compounds are poisonous．This paper studied the ultraviolet spectra and HPLC separation conditions of eight nitro compounds，including HMX，RDX，1，3，5-trinitrobenze，1，3-dinitrobenzeze，Nitrobenzene，TNT，2-Amino-4，6-dinitrotoluene and 2，4-dinitrotoluene．Their optimal determination wavelengths are228nm，227nm，227nm，237nm，272nm，230nm，226nm，244nm respectively．The HPLC method is employed with ZORBAX SB-C18 column（3．0mmˑ250mm，5μm）and a UV detector．The mobile phase was methanol mingled with water（Vmethanol ʒVwater=50ʒ50）at a flow rate of0．5mL·min－1．The eight nitro compounds can be separated well in13min，the detection limits are less than0．8ng and the recoveries are more than95%．Keywords：nitro compounds，ultraviolet spectrum，HPLC Analysis，explosives．。
硝基苯类的测定
第二十二章硝基苯类的测定22.1概述硝基苯是一种广泛应用的化工原料，常见的硝基苯类化合物有硝基苯、二硝基苯、二硝基甲苯、三硝基甲苯及二硝基氯苯等。
该类化合物均难溶于水，易溶于乙醇、乙醚及其它有机溶剂。
应用于印染、国防、塑料、医药与农药工业。
由于硝基苯结构稳定，较难降解，特别是进入水体会以黄绿色油状物沉入水底，并随地下水渗入土壤，长时间保持不变，因此，造成的水体和土壤污染会持续相当长的时间，并对水生生态系统和土壤—陆地生态系统产生一系列的生态影响和环境效应。
人体可通过呼吸道吸入或皮肤吸收而产生毒性作用，可引起神经系统症状、贫血，可破坏人体的肝脏和呼吸系统，由于其毒性强、分布广，硝基苯可直接作用于肝细胞导致肝实质病变，引起中毒性肝病。
肝脏脂肪变性，严重者可发生亚急性肝坏死。
急性硝基苯中毒的神经系统症状较明显，严重者可有高热，并有多汗，缓脉，初期血压升高，瞳孔扩大等植物神经系统紊乱症状。
慢性中毒可有神经衰弱综合症，慢性溶血时，可出现贫血、黄疸。
吸人硝基苯后，由于它的氧化作用，使血红蛋白变成氧化血红蛋白(即高铁血红蛋白)，大大阻止了血红蛋白的输送氧的作用,因而呈现呼吸急促和皮肤苍白的现象。
症状严重的患者会因呼吸衰竭而死亡。
22.2相关环保标准和工作需要国外学者对硝基苯的环境效应已经有了一定研究。
但过去一段时期，硝基苯污染在我国并没有引起足够重视，有关硝基苯环境行为及产生的环境效应等方面研究基础薄弱，对生物暴露情况、硝基苯的作用效果及作用机制等缺乏数据，限制了风险评价、管理及硝基苯等苯类有机环境污染物控制战略计划的制定。
按照我国国家标准《急性毒性实验》附录D的毒性分级标准，硝基苯(501～5000 mg/kg)属于低毒污染物，但由于硝基苯属于易燃易爆的危险物质，容易产生环境污染事件，因此许多国家和组织都将硝基苯作为优先污染物记录在案，特别是2005年中石油吉林石化公司爆炸引起的硝基苯污染事件为人们再次敲响了警钟，因此，有必要对环境中硝基苯进行监测。
49硝基苯类
49硝基苯类方法一、液液萃取/固相萃取-气相色谱法HJ 648-20131适用范围本标准规定了水中 15 种硝基苯类化合物的液液萃取和固相萃取气相色谱测定方法。
15 种硝基苯类化合物包括硝基苯、对-硝基甲苯、间-硝基甲苯、邻-硝基甲苯、对-硝基氯苯、间-硝基氯苯、邻-硝基氯苯、对-二硝基苯、间-二硝基苯、邻-二硝基苯、2,4-二硝基甲苯、2,6-二硝基甲苯、3,4-二硝基甲苯、2,4- 二硝基氯苯、2,4,6-三硝基甲苯。
本标准适用于地表水、地下水、工业废水、生活污水和海水中硝基苯类化合物的测定。
液液萃取法取样量为 200ml，方法检出限为 0.017 g/L~ 0.22 g/L；固相萃取法取样量为 1.0L 时，方法检出限为 0.0032 g/L~0.048 g/L。
详见附录 A。
2相关文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB 17378 HJ/T 164 HJ/T 91 海洋监测规范地下水环境监测技术规范地表水和污水监测技术规范3方法原理液液萃取：用一定量的甲苯萃取水中硝基苯类化合物，萃取液经脱水、净化后进行色谱分析。
固相萃取：使用固相萃取柱或萃取盘吸附富集水中硝基苯类化合物，用正己烷/丙酮洗脱，洗脱液经脱水、定容后进行色谱分析。
萃取液注入气相色谱仪中，用石英毛细管柱将目标化合物分离，用电子捕获检测器测定，保留时间定性，外标法定量。
4仪器设备、实验材料、环境条件实验材料：4.1 正己烷(C6H14)：色谱纯。
4.2 丙酮(C3H6O)：色谱纯。
4.3 甲醇(CH4O)：色谱纯。
4.4 甲苯(C7H8)：色谱纯。
4.5 无水硫酸钠（Na2SO4）：在450℃的烘箱中烘烤4h，置于干燥器中冷却至室温，装入瓶中，于干燥器中保存。
4.6 盐酸（HCl）：(HCl)=1.19g/ml。
4.7 氢氧化钠(NaOH)。
4.8 硝基苯类化合物标准物质：纯度均不小于 98%。
高效液相色谱法测定地表水中硝基苯类化合物
第8卷第6期2016年12月环境监控与预警Environmental Monitoring and ForewarningVol.8,No.6December2016高效液相色谱法测定地表水中硝基苯类化合物佘彬彬，饶钦全'王晖，丁苗，牛禾(台州市环境监测中心站，浙江台州318000)摘要：建立了液相色谱法直接测定水中的1〇种硝基苯类化合物的方法，C18色谱柱为分离柱，检测波长为254nm，以甲醇和水为流动相，前处理过程水和甲醇以9:1的体积比混合，水样过微孔滤膜后直接进液相色谱分析。
该法分析10种硝基苯类化合物的检出限为4.3〜5.5pg/L，加标回收率为79%〜136%，精密度为6.8%〜13%，符合监测要求。
关键词：高效液相色谱法；硝基苯类化合物；地表水中图分类号：X832;0657.7+2文献标志码：B 文章编号：1674 -6732 (2016) 06 -0029 -03 Determination of Nitrobenzene Compounds in Surface Water by High Performance Liquid ChromatographyYU Bin-bin,RAO Qin-quan' ,WANG Hui,DING Miao,NIU He{Taizhou Environmental Monitoring Center,Taizhou,Zhejiang 318000, China)Abstract ：A method was developed to determine 10nitrobenzene compounds in water directly by high performance liquid chromatography. C18was used as the separated colum n, and UV detection was set at the wavelength of 254nm. A mixture of methanol and water was employed as the mobile phase. Methanol and water was mixed at the volume ratio of 9：1in the pretreatm ent, and the sample was filtered through microfiltration membrane followed with high performance liquid chromatography analysis. The detection limits of 10nitrobenzene compounds were in the range of 4. 3〜5. 5(jig/L. Values of recovery were in the range of 79%〜136%with RSDs of 6.8%〜13%，which met the requirem ents of monitoring.Key words：High performance liquid chrom atography；Nitrobenzene com pounds；Surface water硝基苯类化合物是重要的化工原料，主要来源 于炸药及制造过程中所用的原料和中间产物[1]，在医化、染料等行业上有广泛的用途[2_3]。
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（） 成样 品的分析 ： ３合 用上述 方法测定硝 酸氧化 对硝基 甲苯合成对 硝基苯 甲酸样 品中对硝基 苯甲酸
的质量 分数 ， 结果见表 ２ 。
表 ２ 合成样品 中对硝基苯 甲酸 的质量分数
Ｃ ｒｍ ｔｇ Ｓｉ １８ ，７１ ）６５６ １ ｈｏ ａｏｒ ， ９ ９２ （１ ：６－７ ｃ
４ 语 结 上 述结 果表 明 ， 我们所 选 择 的色谱条件 能 同时 分离硝 基 甲苯与硝 基苯 甲酸异构体 ， 时间短 ， 分析 结 果准确 ， 动相 中加 入 Ｃ （０ ｌ ）对异 构体 流 Ｄ ２ ｍｏ Ｌ ， ／ 的分离有 一定意义 ， ｒｍ ｓ Ｃ８ Ｋ ｏ ａｉ １ ｌ 柱保持 良好 。
２ ｒ ｓ ｏｇ Ｗ， ｅ ｏｄ Ｊ ｒｍ ｔ ｒ ，９４ Ａ ｍ ｔ ｎ Ｄ Ｄ ｍ ｎ Ｗ． Ｃ ｏ ａ ｇ Ｓｉ１８ ， ｒ ｈ ｏ ｃ
２ ４ １４ ５ ２： １ － １
３ ａ ａｕｈ Ｙ Ｔ ｎｋ Ｍ， ａａ Ｍ ａ Ａ ａＣ ｅ Ｋ ｗ ｇｃｉ ａａａ Ｎ ｋｅ ｅ ｌ ｎｌ ｍ， ， ｔ ． ｈ
Ｃ ｒｍａｏ ｒ １ ８ ，５ （） ３ １３ ０ ｈ ｏ ｔｇ ， ９ ５ ３ ０ ２ ：７ －８
１ ｈ ｇ ｉ ｌ ， ｉ ｉ ｎ ，ｙ Ｃ ｉ ｇａｇ Ｊ Ｃ ｉ Ｈ ｎ ｉ ＭｅＨ ｙ ｇ Ｊｈ ａ ｊｎ． ｎ ｓ ｇｎ ｕａ ｈｎｉ
Ａ ａｙｉ ｏ ＨＰ Ｃ Ｉｏ ｒ ｏ Ｎ ｔｏｏｕｎ ａ ｄ ｔｏ ｅ ｚｉ Ａ ｉ ｎ ｌｓ ｆ Ｌ ｏ ｓｍｅｓ ｉ ｔｌｅ ｅ Ｎ ｒｂ ｎ ｏｃ ｄ ｓ ｆ ｆ ｒ ｎ ｉ ｃ
ａ ０ ０ ＡＵＦ ｗａ ｕ ｅ ． ｔ ４ ． Ｓ ｓ ｄ ｓ
Ｋ ｙ ｒｓ ｉ ｐｒ ｒ ａｃ ｌ ｕ ｃｒｍ ｔｇａｈ ，ｏ ｅ，ｉｏｏ ｅｅｎ ｒｂｎｏ ａｉ ｅ ｗ ｄ ｈ ｈ ｆ ｍ ｎｅ ｉ ｈｏ ａｏｒ ｙｉ ｍ ｒｎｔ ｔｌ ｎ ，ｉｏｅｚｉ ｃ ｏ ｇ ｅｏ ｉ ｄ ｑ ｐ ｓ ｒ ｕ ｔ ｃ ｄ
５ ５：４ ：１ － 糊 精 的 浓 度 为 ０ ０ ｍｏ／ Ｐ ４ ， 环 ．２ ｌＬ， Ｈ
３０柱温 ３ ．； ５℃； 器波长 ２４ ｍ，．４ Ｕ Ｓ 流 检测 ５ ｎ ００Ａ Ｆ ； 速 为 ２０ｍ ／ ｎ 前 ４ｍ ｎ 和 ２６ ／ ｉ（ ６ ． Ｌ ｍｉ（ ｉ） ． ｍＬ ｍ ｎ 后
ｍｉ） ｎ 。
Ａ ｓ ａｔ ｉｏｏ ｅｅ ｎ ｒｂｎｏ ａｉ ｉ ｍ ｒ ｗ ｒ ｓｐｒ ｅ ｃｍ ｌｅ ｉ ｌ ｓ ｎ ｍｎ ｔ ｂ ｂｔ ｃ Ｎｔ ｔｌ ｎ ａｄ ｏ ｅｚｉ ｃ ｓ ｅｓ ｅ ａ ｔｄ ｐｅ ｌ ｎ ｔａ １ ｉ ｅ ｙ ｒ ｒ ｕ ｎ ｉ ｔ ｃ ｄ ｏ ｅ ｅ ａ ｏ ｔｙ ｅ ｈ ０ ｕ ｓ ｓ
硝基 甲苯 与硝基苯 甲酸异构体 的高效液相色谱法分 析
梁奕 昌
义 志 忠 逯
蔡志虹 ＊ 朱广 一
广州 ５０９） １００
（ 广东工业大学分析测试中心
提 要 采用Ｋｏ ａｌ ｒ ｓ Ｃ１ ｍ ｉ 柱同时分离了 硝基甲 苯与硝基苯甲 酸异构体。 在选定的色谱条件下， 硝基甲 苯与硝 基苯甲酸异构体得到了良 好分离。
（） ２硝基甲苯与硝基苯甲酸在 ０１ ． ｇＬ范 ．～１０ ／
围内呈 良好 的线性关系 。各组分 的线性 回归方 程及
２４ ． 测定方法
＊ 广州有色金属研究 院分析室 本文收稿 日 ：９８０－１修回 日期 ：９８０－３ 期 １９－５２， １９－７１
相关系数见表 １ 。
表 １ 组分 的回归方程及相关系数 各
对硝基苯甲酸各 ５ｍ ， ｇ用甲酸溶解定容后进样 １ ０
μ Ｌ分析 。
３ 结果与分析
（） 基 甲苯与硝 基苯 甲酸异构 体在上 述实验 １硝 条件下分 离的色谱 图如图 １ 所示 。
体的分离１ ５对这两类异构体的同时分离尚未见 ～，
报道 。本 文采用 Ｋ ｏ ａｉＣ８ 对硝基 甲苯与硝 基 ｒｍ ｓ １ ｌ 柱 苯 甲酸异构体进行 了分离与分 析。 ２ 验 部 分 实 ２１ ． 主要仪器 日本 岛 津 公 司 的 Ｌ －Ａ 液 相 色 谱 仪 ， 括 Ｃ６ 包
１ ８ ５ １ ５－ ８ ７ ９ ３， ５： ８ ２ １ ５
４ ａａａ ｄｄ Ｈ， ｈｎ Ｔ Ｊ ｒｍ ｔｇ，９ ７ Ｔ ｎｋ Ｍ，Ｉ ａ Ｓ ｏｏ Ｃ ｏ ａｏｒ １８ ， ｅ ． ｈ
３９ ： ６ ５ ８ １ －１７ ３
参
考
文
献
５ Ｆ ｊ ｕａ ，Ｋｔ ａ ａ ，Ｔ ｋｙｎｇ Ｈ ｅ ａ ｕｉ ｒ Ｋ ｍ ｉｇｗ Ｍ ａ ａａａａｉ ｔ ｉ ｌ ．Ｊ
甲醇 、 四氢呋喃 、 醋酸均为分 析纯 ， 邻硝基 甲苯 、 间硝基 甲苯 、 对硝 基 甲苯、 邻硝基 苯 甲酸 、 间硝基 苯
甲酸 、 硝 基 苯 甲酸 均 为 化学 纯 。 对
２３ ． 色谱条件 色 谱 柱 ： ｒｍ ｓ Ｃ１ （０ Ｋ ｏ ａｉ ｌ 柱 ２０ｍｍ ４６ｍ ． ｍ ｉ ． ； 动相 ： 甲醇 ） Ｖ 水 ）： （ ． ）流 ｄ Ｖ（ ： （ Ｖ 四氢 呋喃） ＝
Ｋｏ ａｉＣ８２０ｍ ４６ｍ ｉ ．，ｈｎ Ｃ ３Ｈ）： Ｈ０） Ｖ（Ｈ ） ５： ４： ｗｔ Ｃ ｏ ｒｍ ｓ １ ０ ｍ ． ｍ ｄ）ｗ ｅ Ｖ（Ｈ０ ｌ （ ． Ｖ（２ ： Ｔ Ｆ ＝５ ４ １ ｈ Ｄ ｉ ｆ
００ ｍ ｌ ａ ｆ ｗ ｔ ｏ ２ ０ Ｌ ｍ ｎ（ ｒ ｅ ４ｍｎ ａｄ ６ Ｌ ｍ ｎｌ ｅ ６ ） Ｄ ｔ ｔｒ Ｕ －５ ．２ ｏ／ ｔ ｒ ｅ ． ｍ ／ ｉ ｆ ｍ ｒ ｉ） ｎ ２ ｍ ／ ｉ（ ｔ ｍｎ ． ｅｅ ｏ ｏ Ｖ ２４ Ｌ ｌ ａ ｆ ｏ ｏ ． ａ ｒ ｉ ｃ ｆ
Ｓ Ｌ ６ 系统 晨 刂 器 、 Ｐ － Ａ 可 调 波 长 紫 外 － 见 Ｃ － Ａ 控 低 ＳＤ６ Ｖ 可
分光光 度 检 测器 、 Ｔ －Ａ 色 谱 柱 箱、 Ｃ ６ 溶 剂 Ｃ Ｏ６ Ｌ －Ａ
输 送 泵 以 及 Ｃ Ｒ３ 数 据 处 理 机 。 － Ａ ２ ２ 剂 ． 试
关健词
分类号
高效液相色谱法 ， 异构体 ， 硝基 甲苯 ， 硝基苯 甲酸
Ｏ６ ８ ５
于 １ Ｌ容量瓶 中依次加入 邻硝基 甲苯 、 ０ｍ 间硝 １ 言 前 硝 基 甲苯 （ Ｔ 与硝基苯 甲酸 （ Ｂ 异 构体 均 Ｎ ） Ｎ Ａ） 是 用于制造染 料 、 医药 及合成 材料 等精细化 学 品的 重要 中间体。研 究硝基 甲苯与 硝基苯 甲酸异构体 的 分离 ， 成反应 过程 的分 析及 产品纯度 分析具 有 对合 极其 重要 的意义 。 目前 ， 用高效 液相 色谱 法对 硝基 甲苯与硝基 苯 甲酸异构体进行分 离的报 道仅 仅局限于对各 自 构 异 基 甲苯 、 对硝基 甲苯 、 邻硝基苯 甲酸 、 间硝基苯 甲酸 、
Ｌａｇ ｉ ａ ｇ Ｙｉ ｉ ｏ ｇ ａ Ｚ ｉｏ ｇ ｄ ｕ ａ ｇ ｉ ｉｎ Ｙｃ ｎ ， Ｚ ｚ ｎ ，Ｃ ｉ ｈ ｎ ａ Ｚ Ｇｕｎ ｙ ｈ ｈｈ ｈ ｎ ｈ （ｅｔ ｏ Ａａ ｓ ＆Ｔｓｎ ， ｕｎｄｎ Ｕ ｉｅｉ ｏ Ｔｃｎｌ ｙＧ ａｇｈｕ ５０９） Ｃｎｒ ｆ ｌ ｉ ｅ ｎ ｙ ｓ ｅｉ Ｇ ａｇ ｏｇ ｖｒｔ ｆ ｈｏｇ ，ｕｎｚｏ ， １００ ｔｇ ｎ ｓｙ ｅ ｏ