多药耐药克雷伯菌属氨基糖苷类药物耐药相关基因研究
肺炎克雷伯菌耐药基因近年国内研究进展
ＫＰＮ中同时携带多种Ｂ．内酰胺酶基 因十分常见。国内报道的同时携带多种Ｂ ．内酰胺酶丛因的有昆ｕＪＪ（３种）、深圳与南 京（４种），常州（６种）。国内ＫＰＮ完整ｐ 内酰胺酶基凶系统研究报道仍鲜见。
和新的氨基糖苷类修饰酶基因ａａｃ（６’）一ｂ— Ｓｕｚｈｏｕ型。后来黄支密等又从阴沟肠 杆菌中查出ａａｃ（６。）一ｂ．Ｓｕｚｈｏｕ型。
５耐药基因载体
耐药基因载体都是可移动的遗传元 件（ｍｏｂｉｌｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｌｅｍｅｎｔｓ），包括质粒、 转座子、整合子。近年来，国外大量文献 报道质粒、转座子和整合子可介导各种 耐药基因。获得质粒、转座予和整合子 的细菌可表现为多重耐药。
质粒是染色体ＤＮＡ之外的ＤＮＡ 分子，多数情况下为环状圆形。Ｆ质粒， 又称致育因子（ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｆａｃｔｏｒ）。它含有 的ｔｒａＡ基因可编码性毛，是细菌接合 （ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）关键部件．Ｆ质粒接合型质 粒。ｔｒａＡ越凶为Ｆ质粒的边ｆ擘标记。
收稿日期：２００８．０９．１ｌ （责任编辑：孙海儿）
医学文稿中缩略语使用须知
·编读往来·
文题一般不使用缩略语，正文内也尽量不用。必须使Ｊｆ】绵略．ｉ籍时，于首次ｆＩｊ现｝Ｊｊ先叙述中文，然后括号注出英文全称及 其缩略语，后两者用“。”分开，如该缩略语已公知，也可不注出ｊ￡英文全称。缩略语不宜移行。
（本刊编辑部）
万方数据
饰作用的新氨基精苷类修饰酶ａａｃ（６＇）－ Ｉ ｂ．Ｃｒ型；还发现了能使喹诺酮类药物 外排的ｑｅｐＡ基因。但国内尚缺乏关于 ＫＰＮ上述基因系统的研究报道。
４广谱抗菌药物耐药基因
四环素、氯霉素、磺胺为广谱抗荫药 物，作为老药已不作为临床一线药物使 用。但上述药物可用作医用敷料，或用 于涂布于进入人体导管的表面，其目的 均为预防感染。在革兰阴性菌中四环 素、氯霉素、磺胺耐药基因分别为ｔｅｔＡ／ ｔｅｔＢ、ｃａｔＢ／ｅｍｌＡ、ｓｕｌ、ｄｆｒＡ、ｄｆｒＢ基因。 ＫＰＮ四环素、氯霉素、磺胺耐药基因研 究尚缺乏。
54株肺炎克雷伯菌氨基糖苷类抗生素耐药基因分析
54株肺炎克雷伯菌氨基糖苷类抗生素耐药基因分析郭少君;林章礼;刘碧清;翁达航【摘要】目的了解临床分离的54株肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药谱,分析氨基糖苷乙酰转移酶基因的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药的相关性,为临床抗感染治疗提供依据.方法采用MIC法测定临床分离的54株肺炎克雷伯菌对7种氨基糖苷类抗生素的耐药谱,应用Whonet5.4软件统计耐药率,通过聚合酶链反应进行氨基糖苷乙酰转移酶基因研究.结果 54株肺炎克雷伯菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、链霉素、大观霉素和奈替米星的耐药率分别为14.8%、77.8%、59.3%、68.5%、66.7%、61.1%、22.2%;测试菌株中存在aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、aac(3)-Ⅳ、aac(3)-Ⅰ 4种耐药基因,aac(3)-Ⅱ和aac(6')-Ⅰ是主要的产酶基因,检出率分别为78.5%和65.0%.结论产生氨基糖苷类钝化酶是临床分离的肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素主要的耐药机制,临床分离菌的耐药表型和钝化酶基因关系较为复杂,可能与耐药菌中存在多钟耐药基因有关,临床实验室应加强检测,指导临床合理使用抗菌药物.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2011(008)011【总页数】3页(P1315-1317)【关键词】肺炎克雷伯菌;氨基糖苷类抗生素;aac基因【作者】郭少君;林章礼;刘碧清;翁达航【作者单位】广东省汕头市第二人民医院检验科,515011;广东省汕头市第二人民医院检验科,515011;广东省汕头市第二人民医院检验科,515011;广东省汕头市第二人民医院检验科,515011【正文语种】中文氨基糖苷类(AGs)抗生素是一类由氨基环醇、氨基糖与糖组成的抗生素的总称，包括如庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、链霉素等。
这类药物自1944年问世以来，由于其抗菌谱广、抗菌活性强，对革兰阴性杆菌具有较强活性，一直被临床用于治疗革兰阴性菌、肠球菌和葡萄球菌引起的感染。
肺炎克雷伯菌耐药机制的研究进展
２ ． １ ． １ ｐ 一 内酰 胺 酶
革兰阴性杆菌 产生的 Ｂ ＿ 内 酰 胺 酶 是 细 菌
耐药的重要机制之一 ， 肺炎克雷伯菌几乎可以产生所有 的 内 酰胺 酶 ， 可通 过 水 解 内 酰胺 环 使 抗 菌 药 物 失 去 抗 菌 活 性 。肺 炎克 雷伯菌的 ｐ 一 内酰 胺 酶 耐 药 机 制 主 要 通 过 产 生 超 广 谱 ８ 一 内
・１ ２ ４・
西部 医 学 ２ ０ １ ４年 １月 第 ２ ６卷 第 １ 期 Ｍｅ ｄ Ｊ Ｗｅ ｓ ｔ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ， Ｊ ａ ｎ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ６ ， Ｎ ｏ ． １
肺 炎 克 雷伯 菌 耐药 机 制 的研 究进 展
贺 晓珊 综述 梅 传 忠 审校
肺 炎 克 雷 伯 菌 引 起 的 免 疫 低 下 患 者感 染 或 院 内 感染 不 断 增 多 ， 且 由 于 广 谱 抗 菌 药 物 的 广 泛 应用 甚 至 滥 用 ， 导 致 肺 炎 克 雷 伯 菌
报道的 Ａ ｍｐ Ｃ酶 有 ４ Ｏ 余 种 基 因 型 。不 同 国家 不 同地 区 Ａ ｍｐ Ｃ
洲［ ３ ］ ， 在我国以 Ｄ ＨＡ一 １基 因 型 为 主［ 。在 不 同 国家 和 地 区 ， 临
肺 炎 克 雷 伯 菌 的耐 药 机 制 主 要 包 括 ： 产生 药物灭活 酶、 形 成生物被膜 、 外膜孔蛋 白缺失 、 基 因变异 、 外排泵 作用增 强、 存
在 基 因盒 一 整合子系统 。
（ 蚌埠 医学 院 医 学检 验 系 ， 安徽 蚌埠 ２ ３ ３ ０ ３ ０ ）
【 摘要】 随 着 抗 茵 药 物 日新 月异 及 其 在 临床 治 疗 中 的广 泛 应 用 甚 至 滥 用 ， 迫使 细 茵 不 断产 生新 的 耐 药机 制 以 适 应
肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性分析
肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性分析肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）是一种常见的致病菌，引起了全球范围内的严重感染和医疗相关感染。
本文将分析肺炎克雷伯菌在临床上的分布情况，并重点关注其耐药性。
一、肺炎克雷伯菌的临床分布肺炎克雷伯菌广泛存在于自然环境中，如土壤、水体、植物和动物肠道等。
然而，在医疗机构内，尤其是重症监护单位和长期护理机构，肺炎克雷伯菌感染明显增加。
在临床上，肺炎克雷伯菌是一种重要的病原体，主要引起下呼吸道感染（如肺炎）、尿路感染、血流感染和手术切口感染等。
由于其高度传染性和强烈的耐药性，肺炎克雷伯菌感染往往导致病情严重，并增加了治疗难度。
二、肺炎克雷伯菌的耐药性分析1. β-内酰胺酶产生肺炎克雷伯菌是β-内酰胺类抗生素的主要耐药细菌之一。
这些细菌通过产生β-内酰胺酶来破坏抗生素的作用，进而导致药物失效。
其中，产超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectrum β-lactamases, ESBL）的肺炎克雷伯菌对多种抗生素，如第三代头孢菌素、氟喹诺酮类和氨基糖苷类等显示出高度耐药性，给治疗带来极大挑战。
2. 氨基糖苷酶产生另外，肺炎克雷伯菌也常出现产氨基糖苷酶（Aminoglycoside-modifying enzymes, AME）的情况。
这类酶能够修饰氨基糖苷类抗生素的结构，降低其对细菌的杀菌效果。
3. 硫酸肼抗性硫酸肼是一种常用于治疗结核病的抗生素。
然而，一些肺炎克雷伯菌菌株发生了对硫酸肼的耐药。
这主要是由于突变目标位点引起的，导致细菌对硫酸肼失去了敏感性。
4. 羟基磺胺类抗生素耐药羟基磺胺类抗生素是治疗呼吸道感染的常用药物。
然而，一些肺炎克雷伯菌对羟基磺胺类抗生素产生了耐药性。
这种耐药机制主要是通过细菌产生羟化酶来降解药物，从而降低了其疗效。
三、对策与建议1. 合理使用抗生素临床医生在治疗感染时应根据患者的具体情况，选择合适的抗生素，并遵循抗生素使用指南。
猪源肺炎克雷伯氏菌耐药性及毒力基因分析
102猪源肺炎克雷伯氏菌耐药性及毒力基因分析欧冠标1，周雨晴1，彭 昊2，陆泽宁3，廖玉英2，马东鑫1，袁敬知1，葛 强1，李 珣1，王晓晔1（1.广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530004；2. 广西壮族自治区兽医研究所，广西南宁 530000；3.南宁市武鸣区双桥镇水产畜牧兽医站，广西南宁 530104）摘 要：为了解猪群中猪源肺炎克雷伯氏菌耐药情况和毒力基因携带状况，2019年采集存栏生猪肛拭子样品125份、宰后生猪肉类样品50份，通过细菌分离培养、药敏试验以及PCR 扩增16S rRNA 、khe 基因、耐药基因和毒力基因等方法对肺炎克雷伯氏菌特性进行分析。
结果显示，从125份肛棉拭子样品、50份宰后生猪肉类样品中各分离得到32、4株肺炎克雷伯氏菌；药敏试验结果显示，分离的肺炎克雷伯氏菌对四环素耐药性最高（83.3%），其次是氯霉素（63.9%）。
对36株分离菌进行耐药基因和毒力基因检测，发现携带耐药基因tet(A)的达30株、携带floR 、mcr-1的分别为23、10株，且有23株菌同时携带tet(A)和floR 基因，少部份菌株携带aadA1、bla TEM 、bla CTX-M-1、bla OXA 、qnrB 、aac(6')-Ib -cr ；携带毒力基因wabG 的达26株、携带uge 和fimH 的25株、携带kfu 的23株、携带aereobactin 的7株，且有20株菌同时携带wabG 、uge 、fimH 和kfu 基因。
结果表明，我国猪群中肺炎克雷伯氏菌检出率可能较高，菌株携带耐药基因及毒力基因较为集中，对部分抗生素耐药性较强。
本研究为肺炎克雷伯氏菌的检测、诊断以及合理使用抗生素治疗提供了试验依据，同时也为猪源肺炎克雷伯氏菌防控提供了数据支撑。
关键词：猪源肺炎克雷伯氏菌；PCR 鉴定；药敏试验；耐药基因；毒力基因中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1005-944X （2021）06-0102-10DOI ：10.3969/j.issn.1005-944X.2021.06.021 开放科学（资源服务）标识码（OSID ）：Analysis on Drug Resistance and Virulence Genes of Porcine Klebsiella pneumoniaeOu Guanbiao 1，Zhou Yuqing 1，Peng Hao 2，Lu Zening 3，Liao Yuying 2，Ma Dongxin 1，Yuan Jingzhi 1，Ge Qiang 1，Li Xun 1，Wang Xiaoye 1（1. College of Animal Science and Technology ，Guangxi University ，Nanning ，Guangxi 530004，China ；2. Veterinary Research Institute of Guangxi Zhuang Autonomous Region ，Nanjing ，Guangxi 530000，China ；3. Fisheries ，Animal Husbandry and V eterinary Station of Shuangqiao Township ，Nanning ，Guangxi 530104，China ）Abstract ：In 2019，in order to investigate the status of drug resistance and carrying virulence genes of porcine Klebsiella pneumoniae （K. pneumoniae ），125 anal swabs and 50 fresh pork samples were collected respectively from live and slaughtered pigs to analyze the characteristics of K. pneumoniae through isolation and culture of bacteria ，drug sensitivity test and amplification of 16S rRNA and the Khe ，drug resistance and virulence genes by PCR. The results showed that ，32 and 4 strains of K. pneumoniae were isolated respectively from anal swabs and fresh pork samples. 收稿日期：2021-02-07 修回日期：2021-04-16基金项目：国家现代农业产业体系广西肉鸡产业创新团队建设专项（nycytxgxcxtd ）；南宁市科学研究与技术 开发计划项目（20202106）；崇左市科技计划项目（崇科FA 2019006）；南宁市武鸣区科学研究与 技术开发项目（20190101）同等贡献作者：欧冠标，周雨晴通信作者：王晓晔。
肺炎克雷伯菌耐药基因近年国内研究进展
ＤＨ Ｉ 、 Ｃ等Ｄ内酰胺酶和碳 肯霉 刚 外 套 通 用 引 物 扩 增 ， 内 套 分 别 为 Ａ、ＭＰ ＫＰ 一
烯 陷丛 囚 ，所 表 达 的产 物 可 以水 ８内 Ｓ 一 ＨＶ、 Ｅ Ｏ Ｌ Ｎ、 ＫＰ特异性引物扩Ｊ 。这 ｆ ＿ ！ ｝ 酰 胺 类 和 碳 青 霉 烯 类 药 物 。２ ０ ～ ０ ７ 样 来 准 确 区分 三 类 基 。研 究 发现 １ ０ ６ ２ ０ Ｎ ＨＶ、 Ｅ 均 性 。如 研 究 ＬＮ ＂ ｆ， 内尽 管 已有 Ｋ Ｎ 的Ｂ内酰 胺 牌 株 ＫＰ 为 Ｓ ｌ Ｏ囡 ｑ Ｐ 一
川药物 Ｌ现 了严 重 的多重 耐药 － 常 导 胺 酶 （ Ｓ Ｌ ）而 Ｌ Ｎ、 Ｐ二个 基 因家 （６ ｒ ＮＡ） ｌ ５ Ｈ， ： 并 Ｅ Ｂ ｓ， Ｅ ＯＫ １ＳＤ 突变 以及核糖体蛋 白编码
致致死性感染 ， 抗感染治疗 当困难。近 族 为 青 霉 酶 。 不 同其 水解 的抗 菌 药 物 因突 变 所 致 。 酶 国内 于 ２ ０ 年 从 产 Ｅ Ｂ ｓ ０７ Ｓ Ｌ
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专家论坛 ・
肺炎克雷伯菌耐药基 因近年 国内研 究进展
糜祖 煌， 秦玲
【 中图 分 类 号 】 Ｒ ７ ． 【 献 标 识 码 】 Ｃ 【 章 编 号 】 １７ —８ ０２ ０ ）１０ ０ —２ ３ ８ ９６ ９ 文 文 ６ １００ （０ ９０ —０ １０
《』 Ｉ界感染杂志》 』 ＝ 编委，现代实川医学》 《 编委， 《ｉ ・ 幽人兽共忠病学报》 一 编委， 《…司抗生岽杂 志》 编委 ，
肺炎克雷伯菌乳房炎的致病机理及其耐药性分析
肺炎克雷伯菌乳房炎的致病机理及其耐药性分析李海源莘县畜牧兽医事业发展中心，山东聊城 252400摘 要：肺炎克雷伯菌是引起奶牛乳房炎的重要病原微生物之一。
奶牛场通常用抗生素对其进行治疗。
但抗生素的大量使用，使得肺炎克雷伯菌的耐药性越来越高，给疾病治疗造成了不利影响。
因此，为了更好地应对由肺炎克雷伯菌引起的乳房炎，本文对肺炎克雷伯菌的生物学特性进行了阐述，特别对生长特性、基因编码和种属等进行了介绍，同时对肺炎克雷伯菌目前的危害情况进行了概要，对其毒力因子中的荚膜多糖、脂多糖、黏附因子、铁载体和外排泵等进行了综合分析，概述了肺炎克雷伯菌对不同抗生素的耐药性特点。
只有加深对肺炎克雷伯菌的了解，才能够有效降低该病菌引起的乳房炎发病率，促进奶牛养殖业的绿色健康发展。
关键词：乳房炎；肺炎克雷伯菌；耐药性；毒力因子文章编号：1671-4393（2023）11-0039-06 DOI:10.12377/1671-4393.23.11.080 引言奶牛乳房炎是奶牛在养殖过程中乳腺部位受到外部物理、化学或病原微生物的入侵而导致炎症反应的一种常见疾病。
患病乳房内部会发生病理变化，主要表现为乳汁中体细胞数量增多、pH值大于7.0，NaCl的含量增高，电导率上升，细菌学鉴定为阳性等[1]。
奶牛乳房炎是一种危害牛群范围广的疾病，国外发病率可达25%～60%，国内的平均发病率可达33.4%[2]。
我国每年由于乳房炎而淘汰的奶牛占总淘汰奶牛数的10%，经济损失高达6 亿元人民币[3]。
奶牛乳房炎致病微生物主要分为传染性病原微生物和环境型病原微生物，其中环境型病原微生物占主要地位[4]，主要包括大肠杆菌、乳房链球菌、停乳链球菌、沙雷氏菌、肠球菌和肺炎克雷伯菌等。
它们广泛存在于垫料等牛舍环境中，感染细菌后，可引起乳房部位发生急性红肿，坚硬且有触痛，乳汁呈絮状或水样，严重者产奶量显著下降[5]。
其中的肺炎克雷伯菌还能进一步感染奶牛尿作者简介：李海源（1973-），男，山东莘县人，本科，高级兽医师，研究方向为畜禽屠宰检疫技术。
肺炎克雷伯菌抗生素耐药性的研究进展
文章编号：1001-8689(2020)06-0540-05肺炎克雷伯菌抗生素耐药性的研究进展罗可人 唐军(四川大学华西第二医院儿科/出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室，成都 610041)摘要：肺炎克雷伯菌的耐药问题日益严重，给临床治疗带来了严峻挑战。
本文总结了近年来的相关研究，阐述了肺炎克雷伯菌对多种抗生素的耐药机制及分子特征，以及肺炎克雷伯菌耐药性与毒力之间可能存在的联系，希望能给临床实践带来新视角和新选择。
关键词：肺炎克雷伯菌；耐药；毒力中图分类号：R978.1 文献标志码：A Progress in antibiotic resistance of Klebsiella pneumoniaeLuo Ke-ren and Tang Jun(Department of Pediatrics, West China Second University Hospital, Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women andChildren (Sichuan University), Ministry of Education, Chengdu 610041)Abstract The resistance of Klebsiella pneumoniae is becoming more and more serious, which brings severe challenges to clinical treatment. This article summarizes related research in recent years, and elaborates the resistance mechanism, molecular characteristics of Klebsiella pneumoniae to various antibiotics, and the possible relationship between Klebsiella pneumoniae resistance and virulence with the hope to bring clinical practice new perspectives and new choices.Key words Klebsiella pneumoniae ; Drug resistance; Virulence收稿日期：2019-12-13作者简介：罗可人，女，生于1994年，在读博士研究生，主要从事新生儿相关研究，E-mail:********************通讯作者，E-mail:******************。
16S rRNA甲基化酶导致的氨基糖苷类抗生素高水平耐药研究进展
16S rRNA甲基化酶导致的氨基糖苷类抗生素高水平耐药研究进展余方友【摘要】16S rRNA甲基化酶能够造成对包括阿贝卡星在内的所有氨基糖苷类抗生素耐药,并且为高水平耐药.自2003年在革兰阴性杆菌临床分离株中发现第一个质粒介导的16S rRNA甲基化酶ArmA以来,已发现7种质粒介导的16S rRNA甲基化酶,包括ArmA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD、RmtE和NpmA.16S rRNA 甲基化酶基因通常和ESBL基因位于同一可转移的质粒上,造成多重耐药.世界各地在革兰阴性杆菌临床分离株中检测出16S rRNA甲基化酶,而我国分离的临床分离株中只检测出ArmA和RmtB.16S rRNA甲基化酶是导致革兰阴性杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要原因.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2011(029)005【总页数】6页(P463-468)【关键词】革兰阴性杆菌;氨基糖苷类抗生素;16S rRNA甲基化酶【作者】余方友【作者单位】温州医学院附属第一医院检验科,浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R446.5;R978.1;Q522+.3;Q939.92氨基糖苷类抗生素可以治疗革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌引起的感染，由于氨基糖苷类抗生素具有耳和肾毒性，在临床上的应用受到一定的限制。
氨基糖苷类抗生素具有浓度依赖性快速杀菌作用、与β-内酰胺类抗菌药物可产生协同作用、细菌的耐药率低、抗生素后效应较长等优点，它仍是目前临床常用的药物，广泛用于治疗革兰阴性杆菌所致的严重感染。
在治疗严重感染时，特别是由多重耐药菌株引起的严重感染时，单独使用氨基糖苷类抗生素治疗时可能疗效不佳，常需联合应用其他对革兰阴性杆菌具有强大抗菌活性的抗菌药物，如第三代头孢菌素及氟喹诺酮类药物等。
氨基糖苷类抗生素的使用同样面临着耐药问题，近年来，细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药率不断上升。
细菌对氨基糖苷类抗生素产生耐药的机制主要由细菌产生氨基糖苷类药物钝化酶引起，如N-乙酰基转移酶、O-磷酸转移酶及O-腺苷转移酶[1-4]。
产ESBLs肺炎克雷伯菌多重耐药性与Ⅰ类整合子的相关性研究
２ １ ７月Байду номын сангаас００年
第 ｌ ４卷
第 ７期
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１ ７ －— ０９ － —
文章 编 号 ：０７— ２７ ２１）７ ０７ ３ １０ ４ ８（（０ 【 —１９ —０ 】 ）
产 Ｅ Ｂ ｓ 炎 克 雷伯 菌 多重 耐 药性 ＳＬ肺 与 Ｉ 整 合 子 的相 关 性 研 究 类
郭红 阳 ， 光泽 ， 朱 连树林
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多药耐药克雷伯菌属氨基糖苷类药物耐药相关基因研究发表时间：2016-11-11T14:12:22.010Z 来源：《医药前沿》2016年11月第31期作者：吴海鹏1 林宁2（通讯作者）孙海平2 [导读] 本组克雷伯菌对氨基糖苷类产生耐药，造成该结果的主要原因是其产4种氨基糖苷类修饰酶基因和1种16SrRNA甲基化酶基因。
（1江苏省宜兴市第二人民医院江苏宜兴 214221）（2南京医科大学附属淮安一院江苏淮安 223300）【摘要】目的：了解一组多药耐药克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因和16SrRNA甲基化酶基因的存在状况。
方法：收集南京医科大学附属淮安一院2013年2月至2015年3月病人标本中分离的多药耐药克雷伯菌属共20株，用分子鉴定法鉴定菌种，将15种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因使用聚合酶链反应（PCR）方法进行分析。
结果：本组20株菌中19株为肺炎克雷伯菌, 1株为变栖克雷伯菌。
氨基糖苷类修饰酶基因或/和16SrRNA甲基化酶基因检出率达80.0%。
其中aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb群、ant(3″)-Ⅰ、aph(3’)-Ⅰ、rmtB的检出分别为9株、12株、10株、5株、4株。
并且在变栖克雷伯菌中发现了aac(6’)-Ⅰb-cr基因。
结论：本组克雷伯菌对氨基糖苷类产生耐药，造成该结果的主要原因是其产4种氨基糖苷类修饰酶基因和1种16SrRNA甲基化酶基因。
在变栖克雷伯菌中发现了aac(6’)-Ⅰb-cr基因是国内外首次报道。
【关键词】克雷伯菌属；氨基糖苷类修饰酶；16SrRNA甲基化酶；多药耐药【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）31-0195-02 Study on the drug resistance-related aminoglycoside genes form multi-resistant klebsiella Wuhaipeng1 Linning2 Sunhaiping21 Yixing Second People’s Hospital,Jiangsu,214221,China;2.Huai’an First Hospital, Nanjing Medical University, Jiangsu,223300,China 【Abstract】Objective To understand the distribution of aminoglycoside modifying enzyme genes（AMEs）and 16SrRNA methylase genes in a group of multidrug-resistant Klebsiella. Methods From feburary 2013 to march 2015, 20 strains of multidrug-resistant Klebsiella were collected from samples of inpatients in Huan’an First Hospital Nanjing Medical University, strains were identified by molecule identification, and 15 kinds of AMEs and 6 kinds of 16SrRNA methylase genes were analyzed by PCR. Results In 20 strains of Klebsiella, 19 strains were Klebsiella pneumonia, 1 strain was Klebsiella variicola. And AMEs and 16SrRNA methylase genes were positive in 16 strains: 9 strains of aac(3)- Ⅱ, 12 strains of aac(6’)-Ⅰb group , 10 strains of ant(3″)-Ⅰ, 5 strains of aph(3’)-Ⅰ, 4 strains of rmtB were positive. And aac(6’)-Ⅰb-cr was discovered in Klebsiella variicola. Conclusion In this group of Klebsiella, producing AMEs and 16SrRNA methylase genes played a key role in resistance to aminoglycosides. And it’s the first report that aac(6’)-Ⅰb-cr were discovered in Klebsiella variicola in the world.【Key words】Klebsiella; Aminoglycoside modifying enzyme;16SrRNA methylase;Multidrug resistance 近年来氨基糖苷类药物在临床抗感染领域过度应用，临床对其耐药的分离株屡见不鲜。
本研究对一组多药耐药克雷伯属菌进行15种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因检测，以清晰克雷伯菌属对氨基糖苷类药物产生耐药的相关基因及存在现状，现报告如下。
1.材料与方法1.1 菌株来源20株克雷伯属菌均分离自南京医科大学附属淮安一院2013年2月至2015年3月住院患者临床标本，其中痰液18份，血液1份，脑脊液1份。
采用法国生物梅里埃公司Vitek32全自动细菌鉴定仪对全部菌种进行初步鉴定。
经检测和对比确认，19株为肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)，1株为变栖克雷伯菌(Klebsiella variicola,Kva)。
1.2 抗菌药物敏感性试验选择14种抗菌药物，采用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验。
质控菌株ATCC700603肺炎克雷伯菌购自江苏省临床检验中心。
1.3 细菌处理提前将新鲜配制浓度为200μg/L的蛋白酶K溶液400μl置入0.5ml的离心管，再置入经纯培养的单个菌落，为消化细菌细胞膜裸露DNA而放置56℃水浴2小时，为灭活蛋白酶K而改置95℃水浴10分钟，提取上清液-20℃保存备用。
1.4 基因检测将15种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因使用聚合酶链反应（PCR）方法进行分析。
无锡新区虎马生物信息学工作室设计并授权使用全部PCR引物。
无锡市克隆遗传技术研究所提供检测试剂盒以及阳性对照DNA，所有步骤和使用方法均严格按照试剂盒说明书进行操作。
1.5 基因测序采用荧光法直接测序检测阳性基因（委托铂尚(上海)生物技术有限公司完成）。
测得序列采用Chromas软件读序,并进行BLAST Search比对。
2.结果2.1 抗菌药物敏感性试验20株多药耐药克雷伯菌属菌对14种抗菌药物的耐药率：头孢噻肟100%、头孢呋辛90%、复方新诺明85%、庆大霉素75%、氯霉素75%、头孢他啶75%、头孢吡肟70%、环丙沙星70%、阿米卡星70%、头孢西丁65%、左氧氟沙星60%、头孢哌酮/舒巴坦45%、哌拉西林/他唑巴坦45%、亚胺培南30%。
2.2 基因PCR检测及其测序20株多药耐药克雷伯属菌中有16株检出氨基糖苷类修饰酶基因或/和16SrRNA甲基化酶基因，检出率80.0%。
其中aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb群、ant(3″)-Ⅰ、aph(3’)-Ⅰ、rmtB的检出率分别为9株（45.0%）、12株（60.0%）、10株（50.0%）、5株（25.0%）、4株（20.0%）。
Klebsiella variicola(Kva)菌aac(6’)-Ⅰb-cr型测序图见图1。
3.讨论革兰氏阴性菌主要携带乙酰转移酶(AAC)、磷酸转移酶(APH）、核苷转移酶(ANT)三大类基因，是氨基糖苷类药物产生耐药的最重要机制[1]，目前已发现30余种。
引起革兰阴性杆菌对氨基糖苷类药物耐药的原因，一是由于产氨基糖苷类修饰酶灭活进入细菌胞内的氨基糖苷类药物活性而耐药；二是由于产16SrRNA甲基化酶导致靶位甲基化后的16SrRNA与氨基糖苷类药物结合力下降，该二类基因常常为可移动遗传元件介导，为获得性耐药机制且易于水平传播。
其它原因尚有细菌对药物摄入量减少，细菌核糖体小亚单位的16SrRNA或小核糖体蛋白编码基因突变，细菌主动外排机制增强等。
本组研究20株多药耐药克雷伯属菌中共检出4种（16株）氨基糖苷类修饰酶基因，分别为aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb群、ant(3″)-Ⅰ、aph(3’)-Ⅰ，其中aac(6’)-Ⅰb群、ant(3″)-Ⅰ阳性率均大于50.0%。
国内、外陆续有学者发现新氨基糖苷类修饰酶-aac(6’)-Ⅰb-cr型对氨基糖苷类药物以及喹诺酮类药物均会产生修饰钝化作用 [2]。
我们也曾在耐药铜绿假单胞菌临床分离株发现aac(6’)-Ⅰb-cr基因[3]。
本研究中aac(6’)-Ⅰb群阳性共检出12株，经PCR阳性产物测序比对，其中10株检出aac(6’)-Ⅰb-cr型。
其中变栖克雷伯菌检出aac(6’)-Ⅰb-cr型基因,为国内外首次发现。
细菌产16S rRNA甲基化酶而耐氨基糖苷类药物是近年革兰阴性杆菌出现的新现象,氨基糖苷类药物作用靶位被甲基化后，全部氨基糖苷类药物失去作用，故后果非常严重。
本组20株多药耐药克雷伯属菌检出rmtB型16S rRNA甲基化酶基因，阳性率达20.0%。
过去我们曾从本院的多药耐药大肠埃希菌和耐药铜绿假单胞菌中査出rmtB型16SrRNA甲基化酶基因[4]。
本研究再次从克雷伯属菌中査出,提示rmtB型16SrRNA甲基化酶基因在本院的菌株中有一定的流行。
【参考文献】[1]原鸿雁,郭兵方,尹晶平,等.耐药大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶和16SrRNA甲基化酶基因的分析[J].江苏大学学报（医学版）,2013,23(5):419-422.[2]黄支密,糜祖煌,王春新,等.阴沟肠杆菌中发现氨基糖苷类-氟喹诺酮类修饰酶基因aac(6’)-Ⅰb-cr[J].中华微生物学和免疫学杂志,2007,27(6):531-533.[3]林宁,孙海平.耐药铜绿假单胞菌临床分离株发现aac(6’)-Ⅰb-cr基因[J].中华临床感染病杂志,2011,4(3):163-167.[4]林宁,孙海平,糜祖煌.多重耐药大肠埃希菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究[J].中国抗生素杂志,2008,33(9):536-539.。