半定量检测与表述
蛋白半定量,定量,绝对定量
百泰派克生物科技
蛋白半定量，定量，绝对定量
在蛋白质分析中主要对定性分析和定量分析进行研究，定量分析就是对蛋白样品的含量进行鉴定，可以分为定量、半定量、相对定量和绝对定量。
蛋白定量很容易理解，那什么又是半定量、相对定量和绝对定量呢？今天小编就和大家聊聊这个问题。
蛋白定量就是对某蛋白样品进行精确的定量鉴定，其测定结果较接近真实值，可信度高。
通常利用标记（iTRAQ、TMT、SILAC等）或非标记（Label Free）策略进行
蛋白定量研究。
蛋白半定量不是指对一半的蛋白质进行定量研究，而是指在某些特殊情况下，如难以直接对蛋白质含量进行测定或蛋白含量易发生周期性波动时，只能对蛋白质的含量进行粗略的、大致的鉴定，所得到的结果是近似的测量值，精确度远不如定量分析。
蛋白相对定量，又称为比较定量，是将两种蛋白质在不同状态下的表达量或含量进行相对比较分析，常用于检测不同生理或病理状态下蛋白含量的变化。
蛋白绝对定量是对各类蛋白进行浓度或含量的绝对分析，可以对组织、体液或细胞蛋白质组中的每一种蛋白质进行绝对含量和浓度分析，是一种靶向定量蛋白组学技术，常用于蛋白质或其修饰状态的定量分析。
目前主要利用内标法或基于质谱的非标记方法进行蛋白绝对定量研究。
百泰派克生物科技基于高分辨率质谱仪结合丰富的生物信息学分析经验，提供高效精准的蛋白质定量服务技术包裹，能够实现蛋白质定量、半定量、相对定量、绝对定量、标记定量以及非标记定量等分析，欢迎免费咨询。
半定量
半定量又叫半定量PCR半定量是RT-PCR做基因表达分析的一种方法，其操作的方法是在野生型和突变体中用一个看家基因（通常是actin）做参照标准来观察目标基因在各自的表达情况（上调还是下调），所谓半定量的“半”是通俗的说法，即在看电泳图估计参照亮度一致（可看作是表达的细胞数一致）情况下，确定目标基因的表达；这是与更加精确的Q-PCR的相对定量和绝对的量区分。
半定量解释（semi-quantitative interpretation）是介于定性和定量之间的解释。
尽管使用了数学方法对地质目标的空间位置或物性进行了数值计算，也获得了量值，但由于这些方法的使用是有非常严格的前提条件的，而在实际情况下这些条件是不满足的，所以这些定量计算的结果只能从趋势上为解释人员提供参考。
半定量分析定性分析是能区分出是个什么东西。
举个例子来说，你能辨认出这是苹果，但你不能确定是几个苹果。
定量分析是在定性的基础上给出清晰的数量关系。
比如，你确定了这是5个苹果。
而半定量分析是通常实现定量分析非常困难时采取的一种则中办法。
还是举例说明。
这里有一堆苹果，你不知道具体的数量。
但是你能知道的是这一堆苹果能装5麻袋。
这5麻袋的数量估计就是半定量分析。
定量PCR是PCR的一种。
PCR仪目的为了基因扩增。
在基因扩增中最重要的就是升降温过程，最早的PCR就是三个水浴锅,一个机械臂，定时抓出反应槽转换水浴锅。
PCR的结果需要借助其他手段来检测。
后来随着定量技术的发展，将PCR和检测做成一体，就形成了定量PCR仪。
还可以与荧光技术结合，同时在每个扩增过程都能实施监控。
定量PCR（PolymeraseChainReaction）技术有广义概念和狭义概念。
广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR 起始模板量的定量。
广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：（1）外参法+终产物分析。
所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。
lh半定量检测试纸参考区间的描述
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半定量分析与定量分析
• 揭示物理规律和现象的本质
• 为物理理论建设和技术创新提供依据
化学研究
• 通过对化学反应和物质性质进行定量分析
• 揭示化学规律和现象的本质
• 为化学理论建设和技术创新提供依据
⌛️
自然科学研究方法的比较研究
• 通过对不同自然科学研究方法进行比较分析
• 探讨各种研究方法的优势和局限性
• 提高研究的准确性和可靠性
• 探讨各种研究方法的优势和局限性
• 提高研究的科学性和可靠性
半定量分析在自然科学研究中的应用
自然科学研究方法的比较研究
• 通过对不同自然科学研究方法进行比较分析
• 探讨各种研究方法的优势和局限性
• 提高研究的准确性和可靠性
生态系统分析
• 通过对生态系统进行定性描述和分类
• 揭示生态系统的结构和功能
推断性统计方法
• 揭示研究对象之间的相
互关系和影响程度
• 为预测和控制提供依据
和方法
• 通过对数据进行推断和
预测
• 揭示研究对象的内在关
系和规律
• 为实证研究提供依据和
方法
定量分析在社会科学研究中的应用
01
经济实证研究
• 通过对经济数据进行分析和计算
• 揭示经济增长和发展的规律
• 为经济政策制定提供依据和建议
• 采用非数值化的研究方法
• 适用于对复杂现象的研究
半定量分析的目的
• 深入了解研究对象的内在联系
• 为定量分析提供基础和支持
• 提高研究的科学性和可靠性
定量分析的定义与特点
01
定量分析是一种研究方法
• 通过数值化的手段
• 对研究对象进行测量和计算
半定量介绍
关于mRNA和蛋白的一致性，mRNA是不能代替蛋白水平的分析的，因为还有翻译效率和RNA降解速度的影响，当然还有蛋白的剪切和分解速度等等，但是表达水平一般来说可以大致估计一种基因的翻译产物的，有时。
但二者不能混委一谈。
基因组问题:如上所述，可以不用处理基因组的。
但是如果是单外显子呢?曾经有以为朋友问我，她的样品中总是有基因组的污染，用RNA去p总能P出来。
她先用trizol过两遍，再用qiagen过两遍，还能P出来。
这是很多人碰到的问题，问题的关键是TAQ(除了具有DNA指导的)还有RNA指导的DNA聚合酶功能，所以是可以直接从RNA中P出来的!那就冒险让RNA 高温一下吧，只是DNAase处理时一定小心，买大公司的，保险一些，至少也应该是takara 的，买液体做好的，不要自己配，比起标本来，这时候银子已经退居其次了。
长度:我们认为500之内比较好，不受中间可能出现的各种序列和二级结构的影响。
至于eeflying说的跑的在前会弥散则可以用2%的胶就行了。
我一般是250左右。
目的基因和内参照之间的大小比例可以根据爱好和胶的浓度、分辨率调整的。
如果是250，则相差100bp很好，如果4、500则差个200bp也可以。
内参照:每一次一定要做内参。
不作内参的结果是不可信的，实际上我想大部分半定量RT-PCR 本身就是不可信的，不过我做的是可信的，因为我反复摸，重复做，每次作内参照，跟自己对照，用不同的酶，不同的体系，作出同样的结果(基因表达结果，不是条带什么的)。
不管多少样品，内参不作，等于说比较珠穆朗玛峰和泰山的高度一样，没有海拔，泰山从地面的高度和珠穆朗玛峰从青藏高原的高度没什么差别。
PCR一定要同时作，但是电泳可以不一起跑，没有关系，记住，计算的是相对表达程度，再说一遍我的观点:1、半定量和定量RT-PCR做的都是基因相对表达量，不是绝对表达量，除非你能准确知道来自多少细胞，但是细胞还有死的呢。
半定量
半定量又叫半定量PCR半定量是RT-PCR做基因表达分析的一种方法，其操作的方法是在野生型和突变体中用一个看家基因（通常是actin）做参照标准来观察目标基因在各自的表达情况（上调还是下调），所谓半定量的“半”是通俗的说法，即在看电泳图估计参照亮度一致（可看作是表达的细胞数一致）情况下，确定目标基因的表达；这是与更加精确的Q-PCR的相对定量和绝对的量区分。
半定量解释（semi-quantitative interpretation）是介于定性和定量之间的解释。
尽管使用了数学方法对地质目标的空间位置或物性进行了数值计算，也获得了量值，但由于这些方法的使用是有非常严格的前提条件的，而在实际情况下这些条件是不满足的，所以这些定量计算的结果只能从趋势上为解释人员提供参考。
半定量分析定性分析是能区分出是个什么东西。
举个例子来说，你能辨认出这是苹果，但你不能确定是几个苹果。
定量分析是在定性的基础上给出清晰的数量关系。
比如，你确定了这是5个苹果。
而半定量分析是通常实现定量分析非常困难时采取的一种则中办法。
还是举例说明。
这里有一堆苹果，你不知道具体的数量。
但是你能知道的是这一堆苹果能装5麻袋。
这5麻袋的数量估计就是半定量分析。
定量PCR是PCR的一种。
PCR仪目的为了基因扩增。
在基因扩增中最重要的就是升降温过程，最早的PCR就是三个水浴锅,一个机械臂，定时抓出反应槽转换水浴锅。
PCR的结果需要借助其他手段来检测。
后来随着定量技术的发展，将PCR和检测做成一体，就形成了定量PCR仪。
还可以与荧光技术结合，同时在每个扩增过程都能实施监控。
定量PCR（PolymeraseChainReaction）技术有广义概念和狭义概念。
广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR 起始模板量的定量。
广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：（1）外参法+终产物分析。
所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。
半定量pcr的原理及其应用
半定量PCR的原理及其应用1. 引言半定量PCR（Semi-quantitative PCR）是一种应用广泛的分子生物学技术，用于分析特定基因在样本中的相对表达水平。
本文将介绍半定量PCR的原理和其在生命科学研究中的应用。
2. 原理半定量PCR基于定量PCR技术，但相对于定量PCR，半定量PCR并不精确地确定特定基因的绝对表达水平，而是通过对样本中目标基因和内部参照基因的PCR扩增进行比较，从而得出目标基因的相对表达水平。
半定量PCR的原理过程如下：1.样本提取：从待测样本（如细胞、组织等）中提取总RNA或DNA，并经过反转录反应获得cDNA。
2.反应设计：选择目标基因的引物和内部参照基因的引物。
内部参照基因在不同样本中的表达水平稳定，因此可作为对照。
3.PCR反应：将待测样本的cDNA和引物以及适当的PCR缓冲液、酶等加入PCR反应管中，进行PCR扩增。
4.延伸周期：利用PCR仪按照特定的温度和时间条件进行一系列的扩增周期，使目标基因和内部参照基因进行扩增。
5.凝胶电泳：将PCR产物进行凝胶电泳，确定扩增产物的大小，并通过测定相对带状强度来比较目标基因和内部参照基因的表达水平。
6.数据分析：通过半定量PCR的标准曲线或内标法等方法，计算出目标基因的相对表达水平。
3. 应用半定量PCR的应用广泛，特别在以下方面具有重要作用：3.1 基因表达研究半定量PCR可用于研究不同基因在不同组织或细胞中的相对表达水平，从而了解基因的功能及其调控机制。
通过对目标基因和内部参照基因的半定量PCR分析，可以比较不同样本中目标基因的表达差异。
3.2 药物研发半定量PCR可用于药物研发过程中的药效评估。
通过比较药物处理组和对照组样本中目标基因的表达水平，可以评估药物对基因表达的影响。
3.3 疾病诊断半定量PCR在疾病诊断中具有重要的应用价值。
通过检测目标基因在患者样本中的表达水平，可以辅助诊断某些疾病，如癌症、遗传病等。
基因表达的半定量PCR检测
基因表达的半定量PCR检测实验目的：以cDNA为模板，利用PCR技术制备目的基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）的大量拷贝，以便进行目的基因的克隆；此实验还包括PCR引物设计，PCR产物的琼脂糖电泳检测等内容。
实验原理：真核细胞含有三类基本RNA：核糖体RNA（rRNA）、信使RNA（mRNA）、转移RNA（tRNA）。
其中mRNA传递合成蛋白质的全部遗传信息，是蛋白质生物合成的中间环节，具有特殊意义。
Trizol试剂可从细胞中快速提取细胞总RNA，将其中的mRNA逆转录成cDNA，以一对特异性引物对目的cDNA进行聚合酶链式反应扩增。
由于每个循环中合成的引物延伸产物可作为下一循环中的模板，因而每次循环中靶DNA的拷贝数呈几何级数增长，因此，30次PCR循环将产生约1亿倍（230）的扩增片段。
PCR技术又称聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction）技术，是一种在体外（试管）扩增核酸的技术。
该技术模拟体内天然DNA的复制过程。
其基本原理是在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶（Taq DNA polymerase）存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。
每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。
每一循环的产物作为下一个循环的模板，如此循环30次，介于两个引物之间的新生DNA片段理论上达到230拷贝（约为109个分子）。
PCR技术的特异性取决于引物与模板结合的特异性（图3-1）。
PCR反应的基本步骤包括高温变性（denaturation）；低温退火（annealing）；中温延伸（extension）三步反应（图3-2）。
①变性（denaturation）（95℃）；②退火(annealing)；③延伸(elogation)（72℃）图3-1 PCR扩增DNA原理示意图图3-2PCR实验中各种组分的剂量：（1）dNTP常用浓度为20~200μM，不能低于10~15μM。
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现场快速检测方法的主要形式
现场快速检测方法的形式大体上有以下几种： 1 试纸法 1.1 用试纸显色来定性或作为限量指示：如农药等。
1.2 用试纸层析显色来定性并作为限量指示：如苏丹红、瘦肉精等。
1.3 用试纸显色的深浅来半定量：如食用油酸价、过氧化值等。
2 试管法 2.1 用试管显色来定性并来作为限量指示：如生豆浆等。
（浙食药监食〔2012〕57号）
浙江省餐饮服务食品安全监督执法人员现场快速检测设备基本标准
编号
检测项目
仪器设备
1
中心温度、环境温 度
食品表面/中心温度计
2 距离
测距仪
3 紫外照度
紫外照度仪
4 ATP
ATP测量仪
5 极性组分
煎炸油质量检测仪
6 有效氯
消毒液有效氯检验试纸
7 二氧化硫
二氧化硫检测管
8 过氧化氢
➢ 限量检测与表述 即快速地得出被检样品中有毒有害物质是否超出标准规定值或有效物质 是否达到标准规定值。通常以合格或不合格来表述。
现场快速检测是重大活动保障与应急事件处理的有效措施：现场第一时 间快速筛查、发现食物安全风险隐患和食物中毒可疑因子，快速检测有 其特殊作用可以利用。
快速检测的时间概念
快速检测没有明确的时间限制，但基本上有一种共识，即： 理化快速检验方法：包括样品制备在内，能够在两小时以内出具检测结 果，即可视为实验室快速检测方法。如果方法能够应用于现场，在30 分钟内出具检测结果，即可视为现场快速检测方法。如果能够在10几 分钟甚至几分钟内得到检测结果，可视其为比较理想的现场快速检测 方法。 微生物快速检验方法：与传统检验方法相比，能够大幅度缩短检测时间， 其检测结果基本相同或相近的方法，可视为快速检测方法。
过氧化氢检测管
9 亚硝酸盐
亚硝酸盐检测管
10 甲醛
甲醛检测管
11 酸价
测试卡
12 过氧化值
测试盒
13 氨基酸态氮
试剂盒
14 农药残留
农残检测仪
15 农药残留
农药速测卡
罂粟碱、吗啡、可 16 待因、那可汀等生 罂粟粉检测试纸卡
物碱
17 硼砂
试剂盒
18 荧光增白剂 19 20
荧光增白剂检测仪 冰箱 食品采样箱
现场快速检测技术应用实务
浙江省食品药品监督管理局
食品危害来源及分类
食品本身含有，如河豚鱼毒素、组胺等 种养殖过程带入，如农药兽药残留 人为添加，如三聚氰胺、甲醛、罂粟壳等
危害 来源
外界污染，如重金属、真菌毒素等
危害 分类
物理危害：玻璃、金属、头发丝等 化学危害：农兽残、天然毒素、添加剂等 生物危害：细菌、真菌、病毒、寄生虫等
传统监管模式和手段
手摸、眼看、嘴尝、鼻闻，难以发现潜在的食品安全问题，难以客观地现场
确认风险存在，难以及时发现不合格产品或环节
➢查看餐饮服务许可证和从业人员健康证
➢肉眼查看冰箱、保洁柜的卫生状况
➢检查二次更衣室的设置和设施有无 ➢查看食品原辅料采购索证索票登记台账
处理
➢检查从业人员食品加工操作规范
法律要求
➢《食品安全法实施条例》第五十条 质量监督、工商行政管理、食品药品监督管理部门 在食品安全监督管理工作中可以采用认定的快速检测方法对食品进行初步筛查。 ➢《关于加快推进餐饮服务食品安全检验能力建设的意见》（国食药监食[2011]122号） ➢《餐饮服务食品安全现场快速检测设备配备基本标准》（国食药监食[2011]130号） ➢《餐饮服务食品安全快速检测方法认定管理办法》（国食药监食[2011]294号） ➢《“十二五”餐饮服务食品安全监测能力建设规划》（国食药监办[2013]46号） ➢《浙江省餐饮服务食品安全监督执法人员现场快速检测设备配备基本标准》
适用范围和技术参数 熟食等中心温度，专间、盒饭、 储运等环境温度，手持式 餐饮许可等，瞬时，手持式 专间消毒，瞬时，手持式 环境洁净度，10秒，手持式 烹调煎炸油，30秒，手持式 含氯消毒液，5秒，半定量 腐竹、酸菜、罐头等，3分钟，半定量 水发产品等，3分钟，半定量 蔬菜、食用盐等，3分钟，半定量 水发产品等，3分钟，半定量 植物油，2分钟，半定量 植物油，2分钟，半定量 酱油，15分钟，半定量 蔬菜、水果，1小时，台式机 蔬菜、水果，1小时，定性
报告
采样
储存
送样
接样
检验
审核
实验室检测方法（国标法）不足
➢检测周期长 ➢检测费用高 ➢检测技术复杂，操作过程繁琐
快速检测的定义
快速检测没有经典的定义，而是一种约定俗成的概念， 即在短时间内，如几分钟、十几分钟，采用不同方式方 法检测出被检物质是否处于正常状态？被检物质是否是 有毒有害物质？或检测的物质是否超出标准规定值的一 种检测、筛查行为称之为快速检测。 ———实验准备简化 ———样品处理简化或自动化 ———结果判读直观化
2.2 用试管显色的深浅来半定量：如亚硝酸盐、甲醇、二氧化硫等， 比色定量可以是目视，也可以用便携式光度计。
3 便携式仪器法
如便携式甲醇速测仪、酸度计、电导仪、温湿度计、中心温度计、 食用油极性测定仪、辐照度计、ATP荧光度仪等。
现场快速检测结果表述
➢ 定性检测与表述 即快速地得出被检样品中是否含有有毒有害物质，或其本身就是有毒有 害物质。通常以阴性或阳性来表述。阴性表示用本方法未检出要检测的 物质。阳性表示检出了有毒有害物质。
现场快速检测的意义
现场快速检测是食品安全监管人员的有利工具：在日常监管过程中，及 时发现可疑问题，迅速采取相应措施，这对提高监督工作效率和力度， 保障食品安全有着重要的意义。
现场快速检测是实验室常规检测的有益补充: 为了保障食品安全，需要 检测的半成品、成品有很多，一一采集样品送实验室检测不现实，采用 快速检测的方法，可增加样品检测数量，扩大食品安全控制范围，对有 问题的食品，必要时送实验室进一步检测，既能提高监督效率，又能提 出有针对性的检测项目，达到现场检测与实验室检测的有益互补。
火锅（麻辣烫）底料,5分钟，定性
粉丝、肉（鱼、虾）丸等，15分钟， 半定量，试剂法 食用菌、农产品等，1分钟，台式机
现场快速检测的形式
随身携带型 组合检测箱 流动检测车 简易实验室
仪器
仪器+试剂一次性试剂或试纸Fra bibliotek随身携带型
ATP测量仪
紫外线照度仪
食品中心温度计
组合检测箱
流动检测车
简易实验室