黄霉素高产菌株的选育
产黄原胶微生物的筛选和高产菌株的选育
通讯作者：张彩凤
参考文献 [1] 秦方袁 詹晓北. 黄原胶前提取过程中菌体的去除
[J] . 食品与机械袁 2018袁 3 (14)院 17 ~ 18. [2] 白先放袁 周韶南袁 卢洁. 紫外线诱变高产黄原胶菌
40 s、80 s 和 120 s，设计紫外照射距离分别为 20 cm、 30 cm 和 40 cm。 1.5 黄原胶的纯化提取。通过对诱变结果观察对比， 淘汰生长相对迟缓和菌落较小的黄单胞菌株，选取几
株生长速度较快的菌株再进行摇瓶发酵，得到发酵 液，再通过提取黄原胶，并测定其黄原胶产量。取 200 ml 发酵液置于离心管中，向发酵液中添加 5 g 的 CaCl2，在发酵液温度 65 ℃、pH 值 5.5 的条件下添加 蛋白酶 1 万 U，酶解 3 h；在发酵液温度 40 ℃，pH 值 9.5 的条件下，添加溶菌酶 1 万 U 并维持 6 h，酶 解全部完成后灭酶醇提，称量其干重。并与标准菌株 进行对比，得到高产的正突变菌株。相对提取率(%) = 突变株黄原胶回收量 / 对照株黄原胶回收量。 2 结果与分析 2.1 菌种的获得与培养。经增殖和选择培养分离到菌 株，菌落形态和生理生化鉴定结果符合黄单胞菌属特 征。试验得到菌种生长曲线(图 1)。由图 1 可看出， 适合黄单胞菌的生长温度为 20 ℃ ~ 35 ℃，40 ℃时黄 单胞菌基本停止生长，60 ℃为它的致死温度。
株 [J] . 吉林农业袁 2010袁 11 (2)院 8 ~ 12. [3] 张伊宁. 黄原胶和变性淀粉在提升方便面汤底口感
中的应用 [J] . 现代食品袁 2020袁 13 (1)院 59 ~ 62. [4] 赵兰坤袁 朱心双袁 王均成袁 等. 高透明黄原胶提取
红霉素高产菌株选育及其发酵条件的优化
红霉素高产菌株选育及其发酵条件的优化
李春玲;牛莎莎;牛春;石彦鹏;张萍
【期刊名称】《中国兽药杂志》
【年(卷),期】2024(58)1
【摘要】为选育出红霉素(Erythromycin)发酵生产的优良菌株并建立其高效发酵条件,以产红霉素的红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea)SE-2207菌株作为原始菌株,利用EMS(甲基磺酸乙酯)、UV(紫外诱变)和ARTP(常压室温等离子体诱变)诱变的方法开展优良菌种选育,比较了三种方法的诱变效果,选育出1株遗传稳定、且对红霉素碱耐受性强的菌株SEM-7,其红霉素发酵效价达到8368mg/L,比原始菌株提高了25.5%。
而且,SEM-7菌株细胞酰基辅酶A合成酶活力显著高于原始菌株。
通过对发酵培养基中添加正丙醇、豆油的浓度进行优化筛选,使SEM-7菌株500L中试发酵效价达到9155mg/L。
研究结果对提升红霉素工业化发酵生产水平具有重要意义。
【总页数】7页(P37-43)
【作者】李春玲;牛莎莎;牛春;石彦鹏;张萍
【作者单位】宁夏泰瑞制药股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S859.79
【相关文献】
1.红霉素高产菌株F2-4的选育及摇瓶发酵工艺的优化
2.达托霉素高产菌株选育及发酵条件优化
3.LiCl-ARTP复合诱变选育高产碱性蛋白酶菌株及其发酵条件优化
4.γ-聚谷氨酸高产菌株选育及发酵条件优化
5.复合诱变选育虾青素高产菌株及发酵条件优化
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蛋白酶高产菌株的选育以及菌种鉴定课案
本科毕业论文蛋白酶高产菌株的选育以及菌种鉴定专业名称：生物科学 1302学生姓名：**学号： **************师：**蛋白酶高产菌株的选育以及菌种鉴定摘要分离和纯化培养法在实验中常常是分离杂菌筛选所需菌落的有效方法，紫外线诱变可以试验出菌落突变率最高的诱变时间或诱变强度，从而选择最适剂量对纯化菌株进行诱变，产生性能更加优秀的可育后代，这就是菌株的选育过程。
本实验采用以上方法对土壤中的杂菌进行分离纯化，得到纯化的能分解蛋白质的菌株，通过紫外线诱变而获得分解能力强的菌株，即高产蛋白酶的菌株。
菌种鉴定则是对微生物快速深入了解的捷径。
关键字灭菌、培养基、无菌操作、分离纯化、紫外线诱变、菌种鉴定Abstract英文省略。
正文1.蛋白酶菌种的采样由于采样的菌种需要有分解蛋白质的能力，所以采样地点可以是餐饮聚集地或者种植大豆等富含高蛋白植物的土地。
2.蛋白酶菌种的分离纯化2.1.实验用品的灭菌灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物,灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类.本实验主要介绍物理方法的一种,即加热灭菌.加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种.通过加热使菌体内蛋白质凝固变性,从而达到杀菌目的.蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关,含水量越高,其凝固所需要的温度越低.在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,因为在湿热情况下,菌体吸收水分,使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强,可增加灭菌效力.本实验采用高压蒸汽灭菌法。
2.1.1.灭菌前的准备玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞,以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染.常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心,轻轻捅入管口,松紧必须适中,管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去,灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌,也可用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌.2.1.2.高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌用途广,效率高,是微生物学实验中最常用的灭菌方法.这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的.当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时,水蒸气的温度升高到121℃,经15～30min,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢.一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。
褐黄孢链霉菌高产纳他霉素的诱变选育
生产及遗传性能 ， 为纳他霉素的进一步工业化生产提供基础。
１ 材料 与 方 法
．－—
—ห้องสมุดไป่ตู้
３ ６ ０． － — —
江苏农 业科 学
２ ０ １ ３年第 ４ １ 卷第 ８期
高启 禹， 徐光翠 ， 张文博 ， 等．褐黄孢链霉菌高产纳他霉素的诱 变选育 ［ Ｊ ］ ．江 苏农业科学 ， ２ ０ １ ３ ， ４ １ （ ８ ） ： ３ ６ ０—３ ６ ２
褐黄孢链霉菌高产纳他霉素 的诱 变选育
机 仪 器 有 限公 司 ） 。
１ ． ３ 试 验 条 件
１ ． ３ ． １ 孢子悬 液的制备
将孢子生长 良好的斜 面保 藏菌株
用适量无菌水 冲洗 ， 收集 孢子悬液并置 于装有玻璃珠 的三角 瓶 中， 充分振荡打散 。采用细胞计数及稀释 的方法 ， 适 当调整
孢子浓度达到 １ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍ Ｌ 。
１ ． ２ 仪 器 与设 备
２ Ｈ ＷＹ一 ２ １ ０ ２新型恒温 培养 摇床 （ 上海 智诚分析 仪器制
造有限公司 ） ； Ｄ Ｈ Ｇ一 ９ ０ ３ ０型电热恒温鼓风干燥箱 （ 上海一恒
等食品行业 的应用外
， 同时在 医药工业 、 饲料工业 等领域
也得到了越来越 多的重视 ， 临床 上现 已将 纳他 霉素与伏立 康 唑混合 制成 霜剂或软膏用 于治疗皮肤 真菌感染疾病 、 真菌 性眼角膜炎 等。纳他霉 素主要 由恰塔努加链霉 菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ — ｔ ｏ ｍ ｙ ｃ ｅ ｓ ｃ ｈ ａ ｔ ｔ ａ ｎ ｏ ｖ ｇ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ） 、 纳塔 尔 链霉 菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍ ｙ ｃ ｅ ｓ ｎ ａ ｔ ｕ — ｌ ｏ ｎ ｓ ｏ ） 和褐黄孢链霉菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍ ｙ ｃ ｅ ｓ ｇ ｉ ｌ ｖ ｏ ｓ ｐ ｏ ｒ ｅ ｕ ｓ ） 等产生菌经 发酵过程产生 。目前在选用 系列不 同的纳他霉素生产 菌的过 程 中发现 ， 野生型菌种的发酵效价普遍偏低 、 遗传不稳定 ， 因而 严重影响着纳他霉素的生产成 本及 规模 化生产。本试验 以褐 黄孢链霉菌为产生菌 ， 通过紫外线和微波诱变、 链霉素抗性 筛 选育种的方法 ， 获得了理想的纳他霉素高产菌株 ， 并探讨 了其
纤维素酶高产菌株的选育
纤维素酶高产菌株的选育
纤维素酶是一种能够分解纤维素的酶，对生物质的利用具有重要意义。
选育纤维素酶高产菌株是提高纤维素酶生产效率的关键。
以下是一些选育纤维素酶高产菌株的常用策略和方法：
1. 采用自然筛选法：从自然环境中采集植物残渣、堆肥等具有高纤维素含量的样品，通过培养和筛选获取纤维素酶高产菌株。
这种方法的优势是能够发现具有适应性强、高纤维素酶产量的菌株。
2. 遗传工程法：通过对已知具有高纤维素酶产量的菌株进行基因工程改造，引入其他有利于纤维素酶产量提高的基因或突变体。
3. 诱变法：通过化学物质（如EMS、亚硝酸钠等）或辐射（如紫外光、X射线等）处理菌株，诱发基因突变，筛选出纤维素酶高产突变菌株。
4. 基因筛选法：通过分析纤维素酶基因的表达水平和调控机制，筛选具有高纤维素酶基因表达水平和调控机制的菌株。
5. 代谢工程法：通过改造代谢途径，优化产生纤维素酶所需的底物和能量供应等因素，提高纤维素酶产量。
以上方法可根据实验室条件和研究目的选择合适的方法进行选育纤维素酶高产菌株。
1 株灰黄霉素产生菌的诱变选育 及其发酵条件优化
1 株灰黄霉素产生菌的诱变选育及其发酵条件优化作者：罗秀针郑金华林燕燕张文华来源：《福建农业科技》2020年第06期摘要：以灰黄霉素产生菌 ji 2 为出发菌株经过紫外线与氯化锂诱变处理，选育出灰黄霉素效价高且发酵周期较短的菌株UL 100 80 ，其效价为91 304 μg·mL-1 ，比出发菌株 ji 2 提高了47.8%，通过连续传代培养，其遗传稳定性良好。
对UL100 80 发酵条件进行优化，优化后液体发酵培养基：大米粉150g·L-1 ，NaCl 8.0g·L-1 ，CaCO 3 8.0g·L-1 ，黄豆饼粉 1.0g·L-1 ，KH 2PO 4 6.0g·L-1 ，KCl 7.0g·L-1 ，NaNO 3 1.0g·L-1 ，FeSO 4 1.0g·L-1 ，pH自然;优化后的培养条件：培养40 h的种子液以12%的接种量接种，28℃下培养12 d，灰黄霉素的效价从未优化前的91 304 μg·mL-1 提高到124 965 μg·mL-1 ，提高了36.9%，与出发菌株 ji 2 相比，UL 100 80 产灰黄霉素的效价提高了1.02倍，发酵时间上缩短了48 h。
关键词：灰黄霉素;诱变育种;效价;培养基;培养条件优化中图分类号： Q939.9文献标志码： A文章编号： 0253-2301（2020）06-0012-05DOI：10.13651/ki.fjnykj.2020.06.003Mutation Breeding of a Griseofulin-producing Strain and the Optimization of Its Fermentation ConditionsLUO Xiu-zhen， ZHENG Jin-hua， LIN Yan-yan， ZHANG Wen-hua（Zhangzhou Health Vocational College， Zhangzhou， Fujian 363000， China）Abstract：By taking the griseofulin-producing strain ji-2 as the original strain， the strainUL100 80 with high potency of griseofulvin and short fermentation period was selected after the mutagenesis with ultraviolet ray and lithium chloride. The potency of the strain UL100 80 was91 304 μg·mL-1 ，which was47.8 % higher than that of the original strain ji-2， and the genetic stability was good through the continuous subculture. The fermentation conditions of UL100 80 were optimized，and the optimized liquid fermentation medium was as follows： rice flour150 g·L-1 ， NaCl8.0 g·L-1 ，CaCO 3 8.0 g·L-1 ， soybean powder1.0 g·L-1 ， KH 2PO 46.0 g·L-1 ， KCl7.0 g·L-1 ，NaNO 31.0 g·L-1 ，FeSO 4 1.0 g·L-1 ， and pH was natural. The optimized culture conditions were as follows： the seed solution cultured for 40 h was inoculated at 12% dose， and cultured at 28℃for 12 d. The potency of griseofulvin was increased from91 304 μg·mL-1 before the optimizationto124 965 μg·mL-1 ， with an increase of36.9 %. While compared with the original strain ji-2， the potency of griseofulvin produced by UL100 80 increased by1.02 times， and the fermentation time was shortened by 48 h.Key words：Griseofulvin; Mutation breeding; Potency; Culture medium; Optimization of culture conditions灰黃霉素由青霉菌 Penicillium griseofulvum 产生[1] ，它属非多烯类抗真菌抗生素，临床上普遍应用于治疗皮肤和角质层真菌感染[2] 。
一种高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法
一种高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法可以采用以下步骤：
1. 采集不同环境样品，如土壤、水体、植物等，制备样品悬浮液。
2. 将样品悬浮液分别接种到含有蛋白质的琼脂平板上，培养24-48小时。
3. 观察菌落形态和周围透明圈的大小，筛选出产生蛋白酶的菌株。
4. 对筛选出的菌株进行初步鉴定，如形态学观察、生理生化特性检测等。
5. 通过测定菌株在不同培养条件下的蛋白酶产量，筛选出高产蛋白酶的菌株。
6. 对高产蛋白酶的菌株进行进一步鉴定和优化培养条件，以提高蛋白酶产量和质量。
该方法简单易行，可快速筛选出高产蛋白酶霉菌菌株，适用于大规模筛选和优化培养条件。
紫外线诱变深黄被孢霉选育花生四烯酸高产菌株
微生物学通报JUN 20, 2009, 36(6): 853~857 Microbiology© 2009 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@基金项目：黑龙江省教育厅利心护肝保健乳制品关键技术研究项目(No. 10551226) *通讯作者：Tel: 86-459-6819231; : spxyycq@收稿日期：2008-11-17; 接受日期：2009-02-06摘要:为获得生长活力较强, 产花生四烯酸能力强的菌株, 以微生物油脂产量和花生四烯酸产量为评价指标, 采用2轮紫外线诱变的方法, 利用单因素试验确定紫外线照射时间, 并采用气相色谱分析花生四烯酸含量。
试验结果表明: 紫外灯功率20 W, 照射距离30 cm, 照射时间80 s, 其致死率为76.4%。
经过诱变及菌种筛选, 获得1株高产菌株Z80s2-109, 其总油脂含量为16 g/L, 花生四烯酸产量为2.34 g/L, 花生四烯酸产量比原始对照菌株提高377%, 并且遗传性能稳定。
关键词: 花生四烯酸, 深黄被孢霉, 紫外线, 诱变Breeding of Arachidonic Acid Producting Strain with Mortierella Sabellina by Ultraviolet MutationYU Chang-Qing* LI Li-Na(Foodstuff College, Heilongjiang August First Land Reclamation University, Daqing, Heilongjiang 163319, China)Abstract: In order to gain the strain which has high growth vigor and whose biomass concentration satisfy further fermentation to produce arachidonic acid, we took the yield of microbes olein and arachidonic acid as evaluative index, adopted twice ultraviolet mutation, determined the time of ultraviolet irradiation by single factor expriment, and then the content of the arachidonic acid was measured by GC. The results of this ex-periment showed that the power of viltalight lamp was 20 W, exposure distance was 30 cm and exposure time was 80 s, lethality of spores of Mortierella isabellina was 76.4%. After twice ultraviolet mutation and repeatedly screen, a mutation of Mortierella isabellina Z80s2-109 whose arachidonic acid concentration in biomass were 3.77 times of the control strains was obtained and genetic stability.Keywords: Arachidonic acid, Mortierella isabellina, Ultraviolet, Mutation花生四烯酸(Arachidonic acid, AA或ARA)是人体的一种重要多不饱和脂肪酸[1], 在维持细胞膜的结构和功能方面具有重要的作用, 它不仅作为一种极为重要的结构脂类广泛存在于哺乳动物的组织(特别是神经组织)器官中, 而且还是人体前列腺素合成的重要前体物质[2], 具有广泛的生物活性和重要的营养作用, 已经在保健食品、化妆品、医药等领域得到广泛应用[3]。
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2. 1 紫外线诱变剂量的考察 以 SgWE - 11 为出发菌株 ,取制备好的单孢子悬液 10mL
置于一平皿内 ,将装有孢子悬液的平板置于波长 237. 5nm、功
28 生 物 技 术 第 16 卷第 6 期
Key words :Flavomycin ;UV mutagenesis ; HNO2 mutagenesis
加纳链霉菌 SgWE - 11 是本实验室分离得到的一株抗生 素产生菌 ,黄霉素 ( Flavomycin) 是其主要次级代谢产物 。黄霉 素 (Flavomycin) 又称为斑伯霉素 BM (Bambermycins) 、黄磷脂醇 素 FV (Flavop Hospolipol) 、默诺霉素 A (Moenomycin A) ,商品名为 富乐霉素 ,是一种新型的抗生素类药物添加剂或促生长剂 ,至 少由 4 种微生物活性物质组成 ,即默诺霉素 A、B1 、B2 和 C ,其 中默诺霉素 A 为主要成分[1] ,黄霉素是由 Lindner 等人于 1955 年从灰绿链霉素菌 S . banbergiensis (斑伯氏链丝菌) 的发酵产物 中分离的磷酸多糖类抗生素[2] 。该抗生素是一种含磷的糖 酯[3 ,4] ,不同于现有的任何一种抗生素 。黄霉素对革兰氏阳性 菌抑菌效果显著 (如金黄色葡萄球菌 、链球菌和双球菌等) ,用 作饲料添加剂 ,具有很好的促生长作用 。但黄霉素在发酵生 产中产量太低 ,限制了对它的研究和应用 。目前 ,国际上有关 黄霉素的发酵及化学合成的研究报道主要来自德国 [5] ,国内 市场上销售的产品也是由德国生产 (商品名富乐旺 ,10 %含 量 ,100 元Πkg 左右) 。国内有关黄霉素的报道多是在动物养殖 方面的 ,很少涉及菌种及发酵工艺 ,并且黄霉素效价值距离生 产要求还有一定距离 ,因此在这方面的研究工作很有意义 。
(终止液) 2mL 以终止反应 。 1. 2. 1. 4 诱变筛选[7] :出发菌株的单孢子悬液诱变处理后 ,经 过初筛和复筛 ,选取产量最高的 3 株菌转接斜面 ,待长至孢子 丰满后 ,收集孢子制成悬液 ,进行下一轮诱变 。不断重复以上 操作 ,直至ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ到理想菌株 。 1. 2. 2 筛选方法 1. 2. 2. 1 初筛 :琼脂块移菌法 ,菌落在分离培养基上长出后用 牙签挑至 F = 6mm 的固体发酵培养基琼脂柱上 ,37 ℃培养 7d 后移至以金黄色葡萄球菌 ( Staphylococcus aureus) 26003 为指示 菌的双层平板上 ,培养 24h 后测量抑菌圈的直径作为指标 。 1.2. 2. 2 复 筛 : 发 酵 后 , 将 50mL 发 酵 液 离 心 (3 000rΠmin , 20min) 得上清液 ,取上清液以双碟扩散法测定发酵液效价 ,指 示菌为金黄色葡萄球菌 ( Staphylococcus aureus) 26003 。
0. 08g ,定容 1L ,pH 值 7. 2～7. 4 。 1. 1. 5 培养条件
斜面培养条件 :培养温度 37 ℃,相对湿度 30 %～60 % ,培 养时间 7d。
种子培养条件 :培养温度 37 ℃,装量 25mLΠ250mL 三角瓶 , 摇床转速 200rΠmin ,培养时间 2d。
发酵瓶培养条件 :培养温度 37 ℃,装量 25mLΠ250mL 三角 瓶 ,摇床转速 200rΠmin ,接种量 5 % ,培养时间 7d。 1. 2 方法 1. 2. 1 菌株诱变 1. 2. 1. 1 孢子悬液的制备[6] :将培养 7d 的孢子斜面加入适量 的无菌水 ,刮下孢子置于盛有玻璃珠的三角瓶中 ,在回转式摇 床上震荡 30min ,然后用 9 层纱布过滤 ,诱变处理时孢子浓度 稀释至 106 个ΠmL 。 1. 2. 1. 2 紫外线诱变 :单孢子悬液涂布平板后 ,15W 紫外灯 30cm 照射一定时间后 ,避光培养至菌落长出 。 1. 2. 1. 3 亚硝酸诱变 :孢子悬液 1mL 加入 1molΠL pH4. 5 的醋 酸缓冲液 2mL 后摇匀 ,加 0. 2molΠL 亚硝酸钠溶液 1mL (诱变 剂) 混合均匀 ,使亚硝酸的处理浓度为 0. 05molΠL ,25～26 ℃保 温诱变不同时间 ,时间到后加 0. 07molΠL pH8. 6 NaH2 PO4 溶液
灭菌锅 (上海申安医疗器械厂) 。
1. 1. 4 培养基 斜面和平板培养基 : 高氏一号培养基 (可溶性淀粉 20g ,
KNO3 1g , MgSO4 ·7H2O 0. 5g , NaCl 0. 5g , K2 HPO4 0. 5g , FeSO4
0. 01g ,琼脂 20g ,定容 1L ,pH 值 7. 4) ; 液体种子培养基 :可溶性淀粉 30g ,葡萄糖 10g ,蛋白胨 4g ,
(1. HLJ August First Reclamation University , Daqing 163319 ,China ;2. Tianjin Agricultural University ,Tianjin 300384 ,China)
Abstract :Objective : In order to get some high - yield strains , different mutant modes and screening factors were used. Method :A flavomycin
率 15W 紫外灯下 30cm 处开盖 ,震荡照射 0 、10s、20s、30s、40s、 50s、60s、70s、80s、90s、100s ,根据紫外线诱变的致死曲线 (图 1) 可以看出在照射 70s 时 ,致死率已达 100 %。
2. 3 亚硝酸诱变剂量的考察 以 2. 2 节筛选得到的 SgWEU - 9 作为这轮诱变的出发菌
producing strain SgWE - 11 was treated by UV and flavomycin as screening factor. Results :A stable strain was obtained with the titer of flavomycin
increased by 170. 25 % than parent strain. Then the mutant which grow on media containing Streptomycin was treated with HNO2 ,we got a high yeild strain SgWE - 25. The productivity of strain SgWE - 25 reached 875uΠmL which was 4. 4 - times. higher than that of the original of strain Sg2 WE - 11. When it was subcultured combined with natural screening ,its stability was rather satisfied.
2006 年 12 月 黄霉素高产菌株的选育 27
关键词 :黄霉素 ;紫外线诱变 ;亚硝酸诱变 中图分类号 :TQ93 文献标识码 :A 文章编号 :1004 - 311X(2006) 06 - 0026 - 04
黄霉素高产菌株的选育
王洪秀1 ,高树仁1 ,童应凯2 3 ,杨永涛2 ,韦东胜2
(1. 黑龙江八一农垦大学 ,黑龙江 大庆 163319 ;2. 天津农学院 ,天津 300384) 摘要 :目的 :为了获得黄霉素高产菌株 。方法 :进行了一系列的诱变筛选 。以加纳链霉菌 ( Streptomyces ghanaesis) SgWE - 11 为 出发菌株 ,采用紫外线诱变 ,以其自身代谢物黄霉素作为筛选因子 。结果 :获得一株遗传稳定且黄霉素发酵效价比出发菌株高出 170. 25 %的菌株 。对该菌株采用亚硝酸诱变 ,并以链霉素作为筛选因子时得到一株效价值为 875uΠmL 的高产菌株 SgWE - 25 ,比 出发菌株 SgWE - 11 提高了 4. 4 倍 。传代结果表明 ,在传代的同时结合自然分离 ,可以保持稳定的产抗特性 。
株 ,不同时间下进行亚硝酸诱变 ,根据菌体存活率和死亡率绘 制的菌体对亚硝酸诱变得致死曲线 (图 2) ,可以看出 SgWEU 9 对亚硝酸抗性很强 ,在 120min 时死亡率接近 100 % ,故在选 择较高剂量的同时 ,为保证能获得足够的突变株进行进一步 的筛选 ,选用 100min 作为诱变时间比较合适 。
本文采用复合诱变 ,通过 3 轮诱变就得到 1 株黄霉素高产 菌株 ,其摇瓶效价较出发菌株提高了 4. 4 倍 。该菌株的稳定 性试验表明 ,在传代的同时结合自然分离 ,可以保持稳定的产 抗性能 。
1 材料及方法
1. 1 材料 1. 1. 1 实验材料
加纳链霉菌 SgWE - 11 和指示菌金黄色葡萄球菌 (26003) 由本实验室保藏 。 1. 1. 2 试剂
第 16 卷第 6 期 2006 年 12 月
:26
生 物 技 术 BIOTECHNOLOGY
Vol116
,No16 :26 Dec12006
2. 上海英骏生物公司测序报告 : 整合载体 pb - Trs - n 测序结果 :以 Tkt - up 单引物测序的部分 DNA 片段 。
收稿日期 :2006 - 06 - 09 ;修回日期 :2006 - 09 - 07 基金项目 :天津市高等学校科技发展基金项目资助 (020804) 作者简介 :王洪秀 (1981 - ) ,女 ,在读硕士生 , E - mail :wanghongxiu0624 @163. com ; 3 通讯作者 :童应凯 (1961 - ) ,男 ,副教授 ,研究方向 :微生 物遗传育种 ,E - mail :yingkaitong @126. com ,Tel :022 - 89485412 。
无水乙醇 ,天津市北方化玻购销中心 ; 链霉素 ,华北制药 股份有限公司 ;黄霉素 ,德国赫斯特公司 ; 琼脂粉 、蛋白胨 ,天 津市英博生化试剂有限公司 ;可溶性淀粉 ,天津市北方天医化 学试剂厂 ;玉米粉 、豆饼粉 ,吉林省黄龙食品工业有限公司 ;亚 硝酸钠 ,上海试剂一厂 ;葡萄糖 、硫酸亚铁 ,天津市化学试剂三 厂 ;硫酸铵 、磷酸氢二钾 、硝酸钾 、氯化钠 、硫酸镁 ,天津市津东 天正精细化学试剂厂 ;碳酸钙 ,北京红星化工厂 。 1. 1. 3 仪器