溶液各种配制
实验室溶液配制

实验室所需溶液配制1.费休氏试液,购买;2.氢氧化钠溶液,C=0.01mol/l;氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体0.4g溶于200ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;3.中性红溶液,C=1%;准确称取中性红固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;4.溴百里香酚蓝溶液,C=1%;准确称取溴百里香酚蓝固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;5.碘化钾溶液,C=10%;准确称取KI固体50g溶于50ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;6.硫代硫酸钠溶液,C=0.1mol/l;硫代硫酸钠分子量158.11,准确称取硫代硫酸钠固体15.811g溶于200ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;7.硫酸溶液,C=2mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体108.78ml稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液;8.淀粉溶液,C=0.5%;准确称取可溶性淀粉0.5g,溶于50ml水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;9.铬酸钾溶液,C=50g/L;准确称取铬酸钾固体50g,溶于500ml水中,并在1000ml容量瓶中定容,搅拌下逐滴加入10%的硝酸银溶液,直至溶液出现棕红的悬浮物为止.静置1昼夜,用干净的滤纸漏斗过滤即可,不一定用饱和硝酸银溶液,用10%硝酸银溶液即可.配制方法:1克硝酸银+10毫升纯水溶解,置于棕色瓶中;10.氯化钠基准试剂,C=0.1mol/l,氯化钠分子量58.5,准确称取氯化钠固,5.85g溶于500ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;11.硝酸银溶液,C=0.1mol/l,硝酸银分子量169.87,准确称取硝酸银固体8.49g溶于200ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液,用前采用基准氯化钠试剂10标定,需保存于棕色试剂瓶中;12.酚酞指示剂,C=0.1%,准确称取酚酞固体0.1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;13.氯化钡溶液,C=10%,准确称取氯化钡固体10g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;14.乙醇溶液,C=1%,准确移取乙醇AR1ml与100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液;15.盐酸标准溶液,C=1mol/l,分子量36.46,D154=1.2039.11%,1.1529.57%、1.1020%、1.0510.17%;准确量取39.11%盐酸77.68ml或称取93.216g,稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液;16.甲基橙指示剂,C=0.1%,准确称取甲基橙固体0.1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;17.邻苯二甲基二辛酯DOP标准液C=100ppm配制:用1ml移液管移取1mlDOPAR加入250ml容量瓶中,并用二氯甲烷稀释至250ml定容,摇匀即可得DOP浓度为4000ppm溶液;用5ml移液管移取浓度为4000ppmDOP溶液2.5ml,加入100ml 容量瓶中,用二氯甲烷稀释至100ml,摇匀即可得浓度为100ppmDOP溶液;18.钼酸铵溶液的配制,C=5%,准确称取钼酸铵固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液;19.硫酸溶液,C=10mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体543.9ml稀释与300ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液;20.氢氧化钠溶液,C=5%,准确称取氢氧化钠固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液;21.氯化亚锡溶液,C=10%,准确称取氯化亚锡固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,溶液配置完成后向其中投入锡粒一颗并保存于大口瓶中;22.二氧化硅贮备液,1ml相当于1.0mg二氧化硅:准确称取分析纯硅酸钠4.730g分子式Na2SiO3·9H2O,分子量284.22溶于200ml蒸馏水中,并与1L容量瓶中定容,保存于塑料瓶中;23.二氧化硅工作液,C=20ppm,用移液管移取二氧化硅贮备液20ml与1L容量瓶中定容,即可得上述浓度溶液,保存于塑料瓶中;24.硫酸溶液,C=1mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体54.4ml或称取100.096g稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液;25.硫代硫酸钠溶液,C=0.05mol/l,硫代硫酸钠分子量158.11,准确称取硫代硫酸钠固体7.9055g溶于200ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;26.硼酸溶液,C=2%,准确称取硼酸固体2g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,保存于塑料大口瓶中;27.氢氧化钠溶液,C=40%,准确称取硼酸固体40g,溶于50ml蒸馏水中,冷却后在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,保存于塑料大口瓶中或胶塞玻璃瓶中;=1.2039.11%,1.1529.57%、28.盐酸溶液,C=0.05mol/l,分子量36.46,D1541.1020%、1.0510.17%;准确量取39.11%盐酸3.884ml或称取4.661g,稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液;29.甲基红乙醇溶液,C=1%,准确称取甲基红固体1g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液;30.溴甲酚绿乙醇溶液,C=1%,准确称取溴甲酚绿固体1g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液;31.甘油水溶液,C=2%,准确移取甘油AR2ml与100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液;32.盐酸溶液,C=6mol/l,分子量36.46,D15=1.2039.11%,1.1529.57%、1.1020%、41.0510.17%;准确量取39.11%盐酸466.08ml或称取559.296g,稀释与300ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液;33.氢氧化钠溶液,C=6mol/l,氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体240g溶于500ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;34.氢氧化钠溶液,C=1mol/l,氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体40g溶于500ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;。
溶液配置

实验常用试剂配置1.铜标准贮备溶液:称取1.000±0.005g金属铜(纯度99.9%)置于150ml烧杯中,加入20ml1+1硝酸,加溶解后,加入10ml1-1硫酸并加热至冒白烟,冷却后,加水溶解并转入1L容量瓶中,用水稀释至标缓。
此溶液每毫升含1.00mg铜。
2.铜标准溶液:吸取5.00ml铜标准贮备溶液于1L容量瓶中,用水稀至标线。
此溶液每毫升含5.0μg铜。
3.二乙基二硫代氨基甲酸钠0.2%(m/v)溶液:称取0.2克二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物(C5H10NS2Na •3H2O,或称铜试剂cupral)溶于水中并稀释至100ml,用棕色玻璃瓶贮存,放于暗处可用两星期。
4.EDTA-柠檬酸铵-氨性溶液:取12g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na-EDTA•2H2O)、2.5g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7],加入100ml水和200ml浓氨水中溶解,用水稀释至1L,加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液,用四氯化碳萃取提纯。
4.1EDTA-柠檬酸铵溶液:将5g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na2-EDTA•2H2O)20g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7]溶于水中并稀释至100ml,加入4滴甲酚红指示液,用1+1氨水调至PH=8~8.5(由黄色变为浅紫色),加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液,用四氯化碳萃取提纯。
5.氯化铵-氢氧化铵缓冲溶液将70g氯化铵(NH4Cl)溶于适量水中,加入570ml浓氨水,用水稀释至1L。
6.甲酚红指示液0.4g/L:称取0.02克甲酚红(C21H18O5S)溶于50ml195%(v/v)乙醇中。
7.碘溶液C=0.05mol/L:称12.7g碘片,加到含有25g碘化钾+少量水中,研磨溶解后用水稀释至1000mL。
8.丁二酮肟[(CH3)2C2(NOH)2]溶液5g/L:称取0.5g丁二酮肟溶解于50mL浓氨水中,用水稀释至100mL9.丁二酮肟乙醇溶液,10g/L:称取1g丁二酮肟,溶解于100mL乙醇(3.4)中。
配制溶液的方法有

配制溶液的方法有
配制溶液的方法主要有以下几种:
1. 固体溶解法:将固体溶质加入到溶剂中,通过搅拌和加热使其溶解。
这是最常用的配制溶液的方法,比如将盐加入水中配制盐水。
2. 溶液稀释法:当需要调整溶液浓度时,可以通过溶液稀释的方法进行。
将已有的浓溶液取出一部分,加入适量的溶剂使其稀释,从而得到所需浓度的溶液。
3. 液体混合法:将两种或多种溶液混合在一起,通过计算混合前后的溶质浓度和容积,可以得到所需浓度的溶液。
这种方法常用于配制某些特定浓度的试剂液。
4. 稀酸稀碱稀化法:将浓度较高的酸、碱加入到大量的水中,通过稀化的方法得到所需浓度的酸碱溶液。
这种方法常用于配制实验室中的常用酸碱溶液。
5. 水合物溶解法:有些化合物具有结晶水,通过将结晶体加入到水中,可以得到溶解度较高的溶液。
这种方法常用于配制一些含水合物的溶液。
在配制溶液时,需要注意以下几点:
1. 需要准确称量溶质和溶剂,以保证溶液浓度的准确性。
2. 溶质的溶解度和溶剂的性质需要考虑,确保溶解度足够高,否则溶质不易溶解或溶液浓度无法满足需求。
3. 在溶质溶解过程中,可以适当加热或搅拌促进其溶解,但需注意加热时避免溶液溢出或溶质分解。
4. 配制过程中,需要注意实验室安全,避免对身体和环境造成伤害。
总之,配制溶液的方法多种多样,具体选择哪种方法要根据实际情况和需求确定。
在操作过程中,需要严格控制溶质和溶剂的量,充分考虑溶液的浓度和溶解度,以确保得到所需浓度的溶液。
同时还需注重实验室安全,遵守操作规范,保证人身安全和环境保护。
常用溶液的配制方法

常用溶剂的配制方法1、磷酸缓冲液:0、15M,pH=7、4磷酸缓冲液:KH2PO4:2、041g+100ml水K2HPO4·3H2O:10。
3g+300mL水两液混合即成400mL,0、15M,pH=7、4的磷酸缓冲液0、2mol/L不同pH的磷酸缓冲液:先配制0。
2mol/L的磷酸二氢钾溶液和0。
2mol/L的磷酸二氢钾溶液,然后按下表配制:2、硼酸缓冲液0。
15M,pH=8、2硼酸缓冲液:四硼酸钠溶液:2g+35 mL水硼酸溶液:3。
246g硼酸+350 mL水两液混合即成700 mL,0、15M,pH=8、2的硼酸缓冲液0。
2 mol/L(硼酸根),不同pH的硼酸缓冲液:先配制0、2 mol/L的硼酸溶液和0、05 mol/L的四硼酸钠溶液,然后按下表配制:3。
甘氨酸-盐酸缓冲液:0、2 mol/L0。
2 mol/L甘氨酸溶液(15、01g/L)4。
柠檬酸缓冲液:0。
1mol/LC6H8O7·H2O:0。
1mol/L溶液为21。
01g/LNa3C6H5O7·2H2O:0、1mol/L溶液为29、41g/L5。
Tris-HCl缓冲液:0、1mol/L100mL0。
1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与一定量的0。
1mol/L盐酸混匀,可得0。
1mol/L,不同pH的缓冲液、200mL 0。
1MTris(2、42g)加入0、1M HCl 24mL→pH=9,0、1MTr is-HCl buffer6。
醋酸缓冲液:0。
2mol/L0、2mol/L醋酸钠:27、22g三水醋酸钠(无水的为16、4g)+1L水0。
2mol/L醋酸:11、55mL冰醋酸+1L水7。
碳酸缓冲液:0、1 mol/L(Ca2+、Mg2+存在时不得使用)0。
1 mol/LMES缓冲液:1。
921gMES+100mL水,pH=4、098、电泳溶液:电泳缓冲液:3gTris碱、14、4g甘氨酸和1gSDS溶于水中,调pH至8。
溶液配制方法

溶液配制方法一、指示剂配制1.0.3%二甲酚橙指示剂:称取0.15g二甲酚橙,加5ml无水乙醇,用水稀释至50ml。
2.5g/L液体铬黑T:称取0.5g铬黑T和2.0g氯化羟胺,溶于乙醇,用乙醇稀释至100ml,此使用前配备。
贮存于100ml棕色试剂瓶中。
3.固体铬黑T:称取1.0g铬黑T和100g氯化钠研磨混合均匀,贮存于100ml棕色广口瓶中备用。
4.1%紫脲酸胺:1g紫脲酸胺与100g固体氯化钠混合,研磨,烘干。
5.1g/L酚酞指示剂:称取0.1g酚酞指示剂,加乙醇100ml溶解混合。
6.10 g/L酚酞指示剂:称取1.0 g酚酞指示剂,加乙醇100ml溶解混合。
7.甲基红—溴甲酚绿指示剂:1份2g/L甲基红乙醇溶液与三份1g/L溴甲酚绿乙醇溶液混合。
8.甲基红-亚甲基蓝指示剂:一份甲基红乙醇溶液(1g/L)与两份亚甲基蓝乙醇溶液(1g/L)混合。
9.品红试剂(0.15%):称取0.15g酸性品红,加75ml水,加热到品红溶解,冷却到室温,加4ml盐酸搅拌。
再加15ml10%亚硫酸钠溶液搅匀,放置过夜,加活性炭过滤于100ml容量瓶中。
二、标准溶液的配制1.钴标准溶液:称取3.000g金属钴(99.98%)置于250ml烧杯中,加少量蒸馏水润湿,盖上表面皿,缓慢加入20ml硝酸,加热溶解完全后,洗表面皿及烧杯壁于烧杯中,移入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀。
此溶液1ml含钴3.000mg。
2.铁氰化钾标准溶液:C﹝K3Fe(CN)6﹞=0.03mol/L,称取9.9g铁氰化钾溶于水中,并稀释至1000ml,摇匀,贮存于棕色瓶中。
3.硫酸钴标准溶液:C(CoSO4)=0.15mol/L,称取4.2g硫酸钴(CoSO4·7H2O)溶于水中,并稀释至1000ml,摇匀,此溶液1ml含钴大约0.9mg。
4.锂标准贮存溶液:称取 5.3228g光谱纯级碳酸锂(预先于110℃、烘2个小时置于干燥器中冷却)置于250ml烧杯中,加少量水润湿,盖上表面皿,沿杯壁缓慢加入15ml盐酸,待溶解后转入1000ml容量瓶中,用蒸馏水定容。
65种溶液与指示剂的配制

65种溶液、指示剂配制方法1、淀粉指示液1.1称1g淀粉加入100mL H2O中煮沸完全溶解,冷却后加入几滴氯仿。
1.2称可溶性淀粉0.5g,加5mL H2O搅拌后,缓缓倾入100mL沸水中,边加边搅拌,继续煮沸2分钟,放冷,倾取上层清液。
此指示液应临用新配。
2、酚酞指示液:1g酚酞溶于80mL酒精,以酒精稀释到100mL,变色范围PH8.3-10.0,无色变红色3、靛红指示液:0.5g靛红+50%的酒精,以H2O稀释至100mL。
4、石蕊指示液:称10g石蕊粉末,加40mL乙醇,回流煮沸1小时,静置,倾去上层清液,再用同以方法处理2次,每次用乙醇30mL,残渣用水10mL洗涤,倾去洗液,再加H2O50mL 煮沸,放冷,滤过,即得。
变色范围:PH4.5-8.0,红色变蓝色。
5、间苯二酚指示液:0.2间苯二酚溶于20mL丙酮,以H2O稀释至100mL,摇匀。
6、甲基红指示液5.1称0.1g甲基红溶解于60mL酒精,以H2O稀释至100mL。
5.2称0.1g甲基红,加7.4mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液,使溶解,再加H2O稀释至200mL,变色范围:PH4.2-6.3,红色变黄色。
7、甲基橙指示液:称0.1g甲基橙溶解于100mL热H2O中,若有不溶物应过滤,变色范围:PH3.2-4.4,红色变黄色。
8、二甲酚橙指示剂:称0.2g干燥的二甲酚橙,加入100g无碘氯化钠,研匀,可长期保存。
9、二甲酚橙指示液:称0.2g二甲酚橙,以H2O稀释至100mL,摇匀,变色范围:PH3.2-4.4,红色变黄色。
10、溴酚蓝指示液:称0.1g溴酚蓝溶解于3.0mL0.05N氢氧化钠溶液中,使溶解,以H2O稀释至200mL,摇匀,变色范围:PH2.8-4.6,黄色变蓝绿色。
11、铬黑T(简称EBT)10.1 称10g干燥的分析纯氯化钠研细,加入0.1g铬黑T,再研匀,可长期保存。
10.2 称0.5g铬黑T,加入盐酸羟胺4.5g,加酒精100mL溶解。
标准溶液配制

标准液配制资料指示剂配制1、PP指示剂的配制:准确称取AR级PP指示剂1g,溶于60ml无水乙醇,加纯水稀释至100ml。
2、0.1%溴甲酚蓝指示剂:称取0.1g溴甲酚蓝于2.88ml, 0.05N NaOH 溶液中,用水稀释至100ml。
3、0.1%甲酚红的配制:准确称取AR级甲酚红指示剂0.1g,溶于50ml无水乙醇中,加纯水稀释至100ml。
4、甲基橙指示剂:称取0.1克甲基橙溶于100ml热水中.如有不溶物应过滤.5、酚酞指示剂:称取1克酚酞溶于80ml乙醇中,溶解加水稀释至100ml.6、淀粉指示剂:称取5克可溶性淀粉,以少量水调成浆,倾入100ml沸水中,搅拌均匀冷却.7、PAN指示剂:称取0.1克PAN用酒精溶解后,加水稀释至100ml.8、MX指示剂:称取0.1克紫尿酸铵和100克氯化钠混合均匀.9、溴酚蓝指示剂:称取1克溴酚蓝,加酒精稀释至100ml.10、铬酸钾指示剂:称取5克铬酸钾,溶于100ml纯水中.11、醋酸铵缓冲液:称取100克醋酸钠,加入50ml醋酸溶解,加水稀释至1L。
12、甲基红指示剂:称取0.1克溶于18.6ml, 0.02L/L氢氧化钠中,用水稀释至250ml.标准溶液配制与标定标准一、1、 0.1N Na2S2O3的配制:a.准确称取分析纯Na2S2O3、5H2O 24.8g,溶于200ml纯水中。
b.将此溶液煮沸10min冷却,用纯水稀释并溶至1L。
2、0.1N Na2S2O3的标定:a.移取标准0.1N I220ml,加50ml纯水b.用配好的0.1N Na2S2O3溶液滴定至淡黄色,再加5ml淀粉,继续用Na2S2O3溶液滴至无色为V。
c.Na2S2O3(N)=(0.1×20)/V二、1、0.1N HCL的配制 :a.移取分析纯HCL 8.6ml于溶量瓶b.加纯水并定溶至1L2、0.1N HCL的标定:a.移取标准0.1N NaOH 20ml,加水200ml,加3~5滴PP指示剂,用配好的HCL溶液滴至无色为V。
常用溶液的配制

常用溶液的配制一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至1000ml乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P049.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI5.29 5.595.916.24 6.47 6.64 2.55.010.020.030.040.097.595.090.080.070.060.06.816.987.177.387.738.0450.060.070.080.090.095.050.040.030.020.010.05.0(二)0.3%台盼兰染液称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
(三)0.5%酚红指示剂酚红0.5g0.1N(0.4%)NaOH 15ml双蒸水85ml将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
(四)5.6%NaHCO3溶液称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)(五)10μg/ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
(七)2%柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。
(八)0.2%次甲基兰染液称次甲基兰(Methylene blue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。
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附录:常用试剂配制及应用一、常用缓冲液、试剂的配制碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer)由于碳酸盐pH值偏碱,因此,常用于pH>9的缓冲液配制(附表1)。
附表1. 0.2 mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.2~10.7)磷酸缓冲液(Phosphate Buffers,PB)磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂,由于它们是二级解离,有二个pKa 值,PO4:pKa1=2.12,pKa2=7.21;所以用它们配制的缓冲液,pH 范围最宽。
NaH2HPO4:pKa1=7.21,pKa2=12.32。
Na2另外,磷酸盐还有钾盐分子形式,一般来说,低温时钠盐难溶,钾盐易溶,因此,配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂,但若配制十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时,只能用钠盐而不能用钾盐,因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液的优点为:①可配制成不同离子强度的缓冲液;②适用pH缓冲范围较宽;③受温度影响缓冲液pH值变化较小;④离子强度对缓冲液pH影响较小,如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。
磷酸缓冲液的缺点是:①磷酸盐易与钙离子(Ca2+)、镁离子(Mg2+)及重金属离子结合生成不溶的沉淀物;②可能干扰某些生物化学反应过程,如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。
NaH2PO4的pH值偏酸性,可用作pH<4的缓冲液。
Na2HPO4的pH值偏碱性,可用作pH>10的缓冲液。
而pH=6~8的中性缓冲液是更常用的缓冲液,需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制(附表2)。
附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.7~8.2)磷酸盐缓冲溶液(Phosphate-buffered saline, PBS)磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压,因此,PBS适用于做细胞缓冲液,常用PBS配制如下。
NaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO41.44gKH2PO40.24g在800ml蒸馏水中溶解,用HCl调节溶液的pH值至7.2~7.4加水定容至1L,15psi(1.05kg/cm2)高压灭菌20min,室温保存备用。
Tris缓冲液(Tris-HCl Buffer, TB)Tris的pH值偏于碱性,因此,通过添加HCl调节pH至所需值,Tris-HCl 缓冲液的离子强度(mol/L)是专指Tris的浓度,如某一特定pH的0.05 mol/L Tris缓冲液的配制是将50ml 0.1 mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积(ml)的0.1 mol/L HCl混合,加水至将体积100ml,即为0.05 mol/L Tris缓冲液。
另外,按附表3制备的缓冲液,由于试剂来源的不同,缓冲液pH可能与所需略有差异,此时可通过稍许减少或增加HCl用量,精细调节pH至所需值。
附表4. 0.05 mol/L Tris缓冲液Tris盐缓冲液(TBS):Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压,因此,TBS也适用于做细胞缓冲液,常用TBS配制如下。
8g NaCl、0.2g KCl以及3g Tris溶解于800ml蒸馏水中,加入0.015g酚红并用HCl调pH至7.4用蒸馏水定容至1L,分装后在15psi(1.05kg/cm2)高压灭菌20min,室温保存。
现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂,而且该溶液如果不用于细胞培养,通常不加KCl及酚红。
Hank’s液 (Hank’s Balanced Salt Solution)Hank’s液是一种平衡盐溶液,主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。
贮存液A液:(I)NaCl 80gKCl 4gMgSO4·7H2O 1gMgCl2·6H2O 1g用双蒸馏水定容至450ml。
(II)CaCl2 1.4g (或CaCl2·2H2O 1.85g)用双蒸馏水定容至50ml。
将I和II液混合,即成A液。
贮存液B液:Na2HPO4·12H2O 1.52g,KH2PO40.6g,酚红 0.2g,葡萄糖 10.0g,酚红应先置研钵内磨细,然后按配方顺序一一溶解,用双蒸馏水定容至500ml。
(3)应用液:A、B储存液分别经112.6℃湿热灭菌20min,取A和B液各25ml,加无菌双蒸馏水至450ml,使用前用无菌的3.5%或5.6% NaHCO3调至所需pH。
注意:药品必须全部用A.R试剂,并按配方顺序加入,用适量双蒸水溶解,待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品,最后补足水到总量。
无Ca2+、Mg2+ Hank’s液(Hank’s Solution without calcium, magnesium sulfate)NaCl 80g,KCl 4g,Na2HPO4·12H2O 1.52g,KH2PO40.6g,葡萄糖 10g,用双蒸馏水溶解后,加入0.4%酚红溶液50ml,再加入双蒸水至1000ml,112.6℃湿热灭菌20min,4℃ 冰箱保存。
临用前将原液用无菌双蒸水作1:10倍稀释,用无菌的3.5%或5.6% NaHCO3调至所需pH。
pH7.2柠檬酸盐缓冲液(Citrate Buffer)柠檬酸 0.327g柠檬酸钠 2.63g磷酸氢钠 0.222葡萄糖 0.00255mg蒸馏水加至100ml。
pH3.3枸橼酸-磷酸盐缓冲液(Citric acid- Phosphate Buffer)0.131mol/L citrate acid,0.066mol/L Na2HPO4,等量混合,调节pH至3.3。
0.5 mol/L EDTA, pH 8.0EDTA·2H2O 186.1 gNaOH ~20 g将EDTA·2H2O加入800ml水中,在磁力搅拌器上剧烈搅拌。
用NaOH调节pH 至8.0,EDTA直到接近pH 8.0才完全溶解,定容至1L。
分装后高压蒸汽灭菌。
0.4%酚红溶液取酚红0.4g置于研钵中逐滴加入1mol/L NaOH溶液11.28ml,边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中,加双蒸水至100ml,过滤后,4℃ 冰箱保存。
醋酸钾(Potassium Acetate)在60ml 5mol/L醋酸钾溶液中,加入11.5ml冰醋酸和28.5ml水。
该溶液用于碱性裂解。
3mol/L 醋酸钠(Sodium Acetate),pH5.2和pH7.0在800ml水中溶解408.1g三水醋酸钠,用冰乙酸调pH至5.2或用稀释乙酸调pH至7.0,加双蒸水至1L。
分装后高压灭菌。
柠檬酸钠缓冲液(Sodium Citrate Buffer)柠檬酸钠 1.8gHCl(1mol) 4ml无水乙醇 95ml先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠,然后加入HCl和无水乙醇,再补充去离子水至总量200ml。
饱合硫酸铵溶液(Saturated Ammonium Sulfate Solution)取500ml双蒸馏水,加入约400克硫酸铵,水浴加热至70℃,磁力搅拌器充分搅拌,直到加入的硫酸铵不再溶解,以氨水(也可用NaOH)调pH7.2,室温保存。
二、酶免疫检测常用试剂配制包被液(Coating Buffer)(pH9.5碳酸盐缓冲液)Na2CO3·10H2O 8.58gNaHCO35.8g溶于双蒸水至1000ml。
封闭液(Confining liquid)(5%脱脂乳-PBS溶液,pH7.4)脱脂乳 50g加0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)至1000ml溶解。
洗液(washing liquid)氯化钠 8.0g磷酸二氢钾 0.2g磷酸氢二钠(12H2O) 2.9g吐温-20 0.5ml加去离子水至1000ml溶解即可。
终止液(stop buffer)(2mol/L H2SO4):21.7ml H2SO4加去离子水至200ml。
缓冲甘油(glycerine buffer)甘油 9份PB(pH8.0) 1份将9份甘油与1份PB合并,充分混匀。
0.5%H2O2-甲醇液(Hydrogen Peroxide-Methanol Solution)(总体积120ml)3%H2O220ml甲醇 100mlDAB-H2O2底物缓冲液(DAB- H2O2Substrate Buffer)取6mg二氨基联苯胺(3,3’-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride DAB)溶解于10ml 0.05mol Tris-HCl pH7.6。
使用前取0.3%H2O20.1ml加入到DAB溶液中(H2O2的终浓度为0.003%)。
如有沉淀生成,则用滤纸过滤。
5-溴-4-氯-3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液(BCIP/NBT Substrate Solution)贮存液配制:NBT:在10ml 70%的乙醇中溶解0.5g NBT。
BCIP:在10ml 100%二甲基甲酰胺中溶解0.5g BCIP。
贮存液4℃保存,可稳定一年。
底物显色液:取66μl NBT贮液与33μl BCIP加入到10ml碱性磷酸酶缓冲液中,充分混匀,底物显色液应在用前1小时内配制。
三、细胞相关试剂配制L-谷氨酰胺(L-G)溶液(L-glutamin Solution)(0.2 mol/L)称2.9 g L-谷氨酰胺(分子量为146.15)用去离子水溶解至100 ml,过滤除菌,分装小瓶,4~5 ml/瓶,-20℃冻存。
100x青-链霉素(双抗)溶液(P/S Penicillin/Streptomycin Solution)取青霉素G(钠盐)100万单位和链霉素(硫酸盐)1 g,溶于100 ml去离子水中,分装小瓶,4~5 ml/瓶,-20℃冻存。
7.5% NaHCO3溶液(NaHCO3Solution)称分析纯NaHCO37.5 g,用去离子水溶解至l00ml,过滤除菌,分装小瓶,4~5 m1/瓶,盖紧瓶塞,4℃保存。
HEPES溶液(HEPES Solution)(1mol/L)称23.83 g HEPES(N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid,N-2-羟乙基呱嗪-N'-2-乙基磺酸,分子量为238.3),用去离子水溶解至100 ml,过滤除菌,分装小瓶,4~5 m1/瓶,4℃保存。
氨基喋呤(A)贮存液(Aminopterin Stocking Solution)(100×, 4×10-5mol/L)称1.76 mg氨基喋呤(Aminopterin, 分子量440.4),溶于90 m1去离子水中,滴加l mol/L NaOH 0.5 m1,并不断搅动,待氨基喋呤完全溶解后,加1 mol/L 的HCl 0.5m1中和,再补加去离子水至100 m1。