染色体分带(C带)实验
合集下载
三带喙库蚊核型及染色体C带研究
后， ５ 饱 和 Ｂ（ 用 ａ ０Ｈ） 液 在 ５ ℃ 恒 温水 浴 锅 中处 理 ｚ溶 ０ １ｍｉ， ５ ｎ 再经 ２ Ｓ ×Ｓ Ｃ在 ６ ℃处理 ６ ｎ 自来 水 冲洗 ， 干， ０ ０ｍｉ， 晾 在 ５ 的 Ｇｉ ａ染 液 （ Ｈ７ ２ １ １ ｅ ｍｓ ｐ ． ， ／ ５磷 酸 缓 冲液稀 释） 中扣
制提供了新途径 。迄今为止 ， 全世 界已知 ３３ ０ ５ 余种 蚊虫 中 ，
染 色 体编 号
图 ｌ 三带喙库蚊体染色体核型 Ｃ带 及 模式图
已作过核型分析或分带研究的 已有 ３ ０ 种 ， ０余 然而库 蚊染 色 体分带未见报告。本文 报道 并探讨 三带 喙库 蚊核 型特 征及
Ⅱ、 Ⅲ号染 色体均呈 中央 着丝 粒 （ ，Ｉ号染 色体 短臂 相对 ｍ） Ｉ Ｉ
较长 。
染 ３ ｎ ０ｍｉ。蒸馏水冲洗 ， 温 自然干燥 。制片在莱卡 （ ｅｃ） 室 Ｌｉ ａ 显微镜 （ ０ 、 ｏ ） ×４ ０ ×１ｏ ｏ 下观 察 ， 采用 Ｍｉ ａ ｓ图像分 析 系统 摄
维普资讯
贵州 医药 ２０ ０ ７年 ８月第 ３ 卷第 ８ １ 期
・
・
７ ４７ ・
预 防医 学 ・
三带喙库蚊核 型及染色体 Ｃ带研究
贵阳医学院生物学教研室 （５０４ 温 小军 陈汉彬 ５００ ）
中图分类号 ： １ ４ Ｒ ８ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ：０ ０７ ４ ２ ０ ） ８０ ４ －２ １ ０ －４ Ｘ（０ ７０ －７ ７０
分裂相进行剪切 翻拍 ， 获得三带 喙库蚊有 丝分裂核 型特征如 图 ２ 示， 所 其分 裂相 中染 色体着 丝点可 以清 晰辨认 ， 据着 根 丝点位置 ， 测定 染色体 的长臂数 （ ） 短臂数 （ ） ｑ、 ｐ 和绝对 长度 （ ＋ｑ 并计算 臂 比值 （ ／ ） ｐ ） ｑＰ 以及 Ｉ ／Ⅱ＋ Ⅲ比值 （ １ ， 表 ） Ｉ、
制提供了新途径 。迄今为止 ， 全世 界已知 ３３ ０ ５ 余种 蚊虫 中 ，
染 色 体编 号
图 ｌ 三带喙库蚊体染色体核型 Ｃ带 及 模式图
已作过核型分析或分带研究的 已有 ３ ０ 种 ， ０余 然而库 蚊染 色 体分带未见报告。本文 报道 并探讨 三带 喙库 蚊核 型特 征及
Ⅱ、 Ⅲ号染 色体均呈 中央 着丝 粒 （ ，Ｉ号染 色体 短臂 相对 ｍ） Ｉ Ｉ
较长 。
染 ３ ｎ ０ｍｉ。蒸馏水冲洗 ， 温 自然干燥 。制片在莱卡 （ ｅｃ） 室 Ｌｉ ａ 显微镜 （ ０ 、 ｏ ） ×４ ０ ×１ｏ ｏ 下观 察 ， 采用 Ｍｉ ａ ｓ图像分 析 系统 摄
维普资讯
贵州 医药 ２０ ０ ７年 ８月第 ３ 卷第 ８ １ 期
・
・
７ ４７ ・
预 防医 学 ・
三带喙库蚊核 型及染色体 Ｃ带研究
贵阳医学院生物学教研室 （５０４ 温 小军 陈汉彬 ５００ ）
中图分类号 ： １ ４ Ｒ ８ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ：０ ０７ ４ ２ ０ ） ８０ ４ －２ １ ０ －４ Ｘ（０ ７０ －７ ７０
分裂相进行剪切 翻拍 ， 获得三带 喙库蚊有 丝分裂核 型特征如 图 ２ 示， 所 其分 裂相 中染 色体着 丝点可 以清 晰辨认 ， 据着 根 丝点位置 ， 测定 染色体 的长臂数 （ ） 短臂数 （ ） ｑ、 ｐ 和绝对 长度 （ ＋ｑ 并计算 臂 比值 （ ／ ） ｐ ） ｑＰ 以及 Ｉ ／Ⅱ＋ Ⅲ比值 （ １ ， 表 ） Ｉ、
植物染色体giemsa分带技巧[精彩]
![植物染色体giemsa分带技巧[精彩]](https://img.taocdn.com/s3/m/a7e19c3dcec789eb172ded630b1c59eef8c79aa9.png)
实验十植物染色体Giemsa分带技术一、实验目的1. 掌握植物染色体Giemsa的C带、G带分带技术和方法。
2. 学习染色体带型分析方法。
二、实验原理植物染色体显带是借助于特殊的处理程序后，进行Giemsa染色，使染色体某些结构成分发生特异反应而出现深浅不同的带纹，从而使核型分析中更准确地识别染色体的每个成员以及其结构变异。
通过改变Giemsa分带处理程序可产生不同带型，因此有C带、G带、N带、Q带、T带等不同技术。
C带(组成异染色质带)：C带技术是应用最广泛的技术，它主要显示着丝粒、端粒、核仁组成区域或染色体臂上某些部位的组成异染色质而产生相应的着丝粒带、端粒带、核仁组成区带、中间带等，这些带可以在一条染色体上同时出现，也可以只有其中的一条或几条带。
G带(Giemsa带)：显示染色粒，G带分布于染色体的全部长度上。
以深浅相间的横纹形式出现。
G带能清楚地反映染色体的纵向分化，能提供较多的鉴别标志。
因此，G带是分带技术中最有价值的一种。
R带(反带)：与G带相反的染色带．由于处理程序不同，染色体在同一部位染色效果相反。
N带：专一地显示出核仁组织区。
T带：专一地显示出端粒区域。
以上几种带型在植物上应用最多的为C带和G带，本次实验主要介绍这两种分带技术。
三、实验材料（一）材料大麦(Hordeum spp．2n=14)的种子、蚕豆(Vicia faba 2n=12)的种子、洋葱(Allium cepa 2n=16)的鳞茎。
以上材料可任选一种。
（二）器材培养箱、恒温水浴锅、分析天平、小台秤(200g) 、量简(50ml、100ml、1000ml、10m1) 、烧杯(200m1) 、容量瓶(1000m1) 、棕色试剂瓶(200m1)、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、显微镜、显微照相及冲洗放大设备、剪刀、镊子、刀片、滤纸、玻璃板、牙签、切片盒。
（三）试剂Giemsa母液、磷酸缓冲液、氯化钠、柠檬酸钠、甲醇、乙醇、冰醋酸、氢氧化钡、秋水仙素或对二氯苯、α-溴萘、纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶、醋酸洋红、45% 醋酸等。
实验六 人类染色体核型分析
相对长度=
每个染色体长度 单倍染色体长度
×100%
（2）臂指数（arm index），指长臂与短臂之比。
按Levan（1964）划分标准，臂指数在1.0~1.7之间为中部 着丝粒染色体，1.7~3.0之间为亚中着丝粒染色体，3.0~7.0 之间为亚端着丝粒染色体，＞7.0为端部着丝粒染色体。
（3）着丝粒指数（centromere index），指短臂占 该染色体长度的比率，决定着丝粒的相对位置。
实验六 人染色体核型分析
一、实 验 目 的
掌握人类染色体核型分析的方法。 了解人类染色体数目和结构特征。
二、实 验 原 理
核型（Karyotype）是指一个细胞内有 丝分裂中期所有染色体的表型，如：数 目、大小和形态特征等。 通常将显微摄影得到的照片进行剪贴， 使整套染色体按照一定的顺序排列构成 图像。以核型图(karyogram)的方式表示。 有四种方法：
A：1，2，3对染色体，体积大，易于区别，有中 央着丝粒。第2对的着丝粒略偏离中央。无随 体，1号常见次缢痕。 B：4，5两对，体积大，有亚中部着丝粒，无随 体，彼此不易区分。 C：包括6—12对常染色体和X染色体，中等大小， 为亚中部着丝粒染色体。第6对的着丝粒靠近 中央，X染色体大小接近介于第6，7对之间。 第9对染色体长臂上有一次缢痕，第11对染色 体的短臂较长，第12对染色体的短臂较短。
R带：与G带明暗相反（Reverse G-bands）
目前所用的R显带方法是RBG法 (R-band by BrdU using Giemsa)，即经BrdU处理后用 Giemsa染色。 意义： G带染色体的两末端都不显示深染，而在 R带中则被染上深色，因此R带有利测定染色体 长度和末端区域结构的变化。对揭示染色体末端 缺失、重复、易位和断裂点的异常等有很高的价 值。
每个染色体长度 单倍染色体长度
×100%
（2）臂指数（arm index），指长臂与短臂之比。
按Levan（1964）划分标准，臂指数在1.0~1.7之间为中部 着丝粒染色体，1.7~3.0之间为亚中着丝粒染色体，3.0~7.0 之间为亚端着丝粒染色体，＞7.0为端部着丝粒染色体。
（3）着丝粒指数（centromere index），指短臂占 该染色体长度的比率，决定着丝粒的相对位置。
实验六 人染色体核型分析
一、实 验 目 的
掌握人类染色体核型分析的方法。 了解人类染色体数目和结构特征。
二、实 验 原 理
核型（Karyotype）是指一个细胞内有 丝分裂中期所有染色体的表型，如：数 目、大小和形态特征等。 通常将显微摄影得到的照片进行剪贴， 使整套染色体按照一定的顺序排列构成 图像。以核型图(karyogram)的方式表示。 有四种方法：
A：1，2，3对染色体，体积大，易于区别，有中 央着丝粒。第2对的着丝粒略偏离中央。无随 体，1号常见次缢痕。 B：4，5两对，体积大，有亚中部着丝粒，无随 体，彼此不易区分。 C：包括6—12对常染色体和X染色体，中等大小， 为亚中部着丝粒染色体。第6对的着丝粒靠近 中央，X染色体大小接近介于第6，7对之间。 第9对染色体长臂上有一次缢痕，第11对染色 体的短臂较长，第12对染色体的短臂较短。
R带：与G带明暗相反（Reverse G-bands）
目前所用的R显带方法是RBG法 (R-band by BrdU using Giemsa)，即经BrdU处理后用 Giemsa染色。 意义： G带染色体的两末端都不显示深染，而在 R带中则被染上深色，因此R带有利测定染色体 长度和末端区域结构的变化。对揭示染色体末端 缺失、重复、易位和断裂点的异常等有很高的价 值。
小麦_黑麦染色体代换的研究
2 .2 代换系的细胞学观察
价值
20-19 、20 -21 两个品系 , 经染色体 C -分带
M ettin 等指出 :在黑麦 1R 的短臂(1RS)上带有
鉴定 , 均有一对染色体 短臂上具有随 体 , 长臂 具端 抗白粉病的基因 Pm8 、Pm 9 、Pm17 、抗杆锈 Sr31 、抗
带 , 小麦没有这条染色体 , 是黑麦 1R 染色体 。 检测 叶锈 Lr26 、抗 条 锈 Yr9 基 因 、抗 麦 蚜 虫 Sr31 基 小麦的 21 对染色体缺 1D 染色体 , 因而确定为 1R/ 因[ 3] 。在黑麦 1R 染色体上还有 S 型雄性不育的保
2 21
规则的二价体 , 正常可育 , 在生产上可以直接利用 。 1 .2 杂交组合及代换系的选育
如果用异附加系与单体杂交 , 可获得一条染色体的 在新麦 73 ×克旱 9 号 , Rosners ×克 156 、广 74
代换 , 这条染色体在减数分裂中将作为同祖单体起 ×克旱 9 号杂交组合的 F2 、F 3 世代中选择带有某些 作用 , 可诱导小麦单体染色体与同祖染色体联会 , 产 黑麦性状的普通小麦类型植株 , 并按性状继代选择 ,
91.2
11.3
18
56
38
同上
抗旱
正常 杆强 、颖具茸毛
20 -35
112.5
11.2
22
64
34
同上
抗旱
正常
同上
20 -39
106.5
10.8
20
62
35
同上
抗旱
正常
同上
20 -15
110.5
12.5
18
58
34
水牛染色体gc带核型的观察
１对亚中部着丝点染色体及 １对亚端部着丝点 染色体组成，按相对长度递减排列，第 １，４，５号 是 中部着丝点染色体，第 ２号是亚端部着丝点 染色体，第 ３号是亚中部着丝点染色体。该组 各染色体容易识另曳
Ｂ组（６－２３）：由 １８对端部着丝点染色体 组成 ，按相对长度递减排列。
（二）Ｇ分带分析 通过对西林水牛和南宁水牛各 １３个细胞
伽 １４ ．
染 色体 编号
叹１ ︐乙 电Ｊ ４ １Ｉ ︸
染 色体 编号
︐ 且 ︐ ‘ 几ｊ ４ ～１沙
表 ３ 水牛染色体 臂比值
西 林 水 牛 ‘》 富 钟 水 牛 ｘ） 南宁水 牛，）
１．３７土 ０．１１ ３．０５＋ ０．４０ ２．３０土 ０．２８ １．５３士 ０．１８ １．５０士０．１６
１．３２＋ ０．０９ ３．２０士 ０．３６ ２．２６＋ ０．２１ １．６４土 ０．２９ １．５２士 ０．２９
互比较带型，这两种水牛的Ｇ分带基本一致。根 体属小型的端部着丝点染色体、但不是核型中
据Ｇ分带带型绘制了水牛染色体Ｇ分带模式图 最小的端部着丝点染色体，它的长度与Ｘ染色
（图 １）０
体长度的比值为 ０．３６３５，大于Ｂ组的 ２３号染色
（三）Ｃ分带分析
体（见表 ５）０
用西林水牛和南宁水牛各 １０个 ｃ分带照
１．２７士０．０８ ３．０６土０．４７ ２．２６士０．２０ １．４３士０．１６ １．５７士０．２２
表 ４ 水牛染色体， 丝点指数
西林水牛，》 富 钟 水 牛 幻 南 宁水牛，）
４２．２０士 １．８１ ２４．９８土 ２．３４ ３０．５８士 ２．４７ ３９．６６士 ２．８５ ３９．９０士 ２．９３
４３．０３士 １．６６ ２３．９６士２．１５ ３０．２４＋ １．４７ ３８．７２士２．４８ ４０．１０士３．９６
岷江百合根尖染色体的C-分带和FISH分析
’ ｏ ｅ ｏｄ ｇ ｕ ｏ， ｓｉ ｊ ． ｕ Ｃ ｒ ｓ ｎ ｉ ａｔ ｒ ｊ ＠ｎｆ ￣ ． ｒｐ ｎ ｈ ｈ ￣ｄ ｅ ｎ
Ａ ｓ ａ ｔ Ｇ ｅ ａＣ ｂ ｎ ｉｇａ ｄＦＳ ａ ｓ ｆｈ ｎｉ ｇｌｙｃ ｒｍｏｏ ｓ ｉｕ ｒｇｌ）ｒ ｍ ｏ ｐ ｂ ｔ ｃ ｉｍｓ —ａ ｄｎ Ｉ Ｈ ａ ｌ ｉｏ ｔｅ ｊ ｌ ｏ ｓｍｅ ｌ ｍ ａｅ ｆ ｒ ｔｉｓ ｒ ｎ ｎ ｙｓ Ｍｉ ａ ｉ ｈ ｎ ｉ ｅ ｏ ｏ ｔ
Ｃ ｂ ｄｎ ｔ ｓ ｙ ｌ ｕｄｂ ｃ ｇ ｉｅ ． ５ ＮＡ ｓ ｓｄａ ｒｂ ｒ ＩＨ ａ ａ ｓ （ ｕ ｒｓｅ ｃ ｉ －ａ ｉｇｉ ｅ ｉ ｓ ｃ ｌ ｅ ｅｏ ｎｚｄ ４ Ｓｒ ｎ ｎ ｎ ｔａ ｏ ｏ ｒ Ｄ ｗａ ｅ ｐｏ ｅ ｏ Ｓ ｌ ｉ ｆ ｏｅｃｎ ｅ ｎｓ ｕ ｕ Ｓ ｆ Ｆ ｎ ｙ ｓｌ ｉ ｔ ｈ ｂｉｉａ ｏ ）ａ ｄ５ｃｕ ｌｓ ｆ ｙ ｒ ｉａ ｏ ｇ ａ ｒ ｉ ｌ ｅ ｎｔｅｃｒ ｍｏｏ ｅ ｔｍｅｅｏ ｒｍｏ ｙ ｒ ｚｔ ｎ， ｎ ｏ ｐｅ ｂ ｄｚｔ ｎｓ ｌｗｅｅｄｓ ａ ｄｏ ｈｏ ｓｍｅｃｎｒ ｒ ｆ ｈｏ — ｄ ｉ ｏｈ ｉ ｉ ｉ ｓ ｎ ｐｙ ｈ ｉ ｃ
６＋ ２ ＋ ＋ ２ Ｉ＋ Ｉ ＋ Ｌ Ｔ 乃 ｅ ｓ ｅ ｉ ｃ Ｃ－ ａ ｄ ｎ ｏ ｔ ｎ ｅ ｃ ｈ ｏ ｃｆ ｂ ｐ ｉ ｎ ｉ ｇ ｐ ｉ ｓ ａ ｈ ｃ ｒ ｍｏ ｏ ｅ ｃ ｕ ｄ ｂ ｉ ｉ ｇ ｉｈ ｄ ａ ｄ ｔ ｅ ｄ ｆｅ ｅ ｃ ｓ ｆ ｎ ｏ ｓ ｍ ｏ ｌ ｅｄ ｓ ｎ ｕ ｓ ｅ ｔ ｎ ｈ ｉ ｒｎ ｅ ｏ
为 ５ 分别位于 Ａ、 、 对， Ｂ Ｈ和 Ｋ ４ 对同源染色体 的着丝点区域和一对 Ｇ染色体的长臂上。 通过 Ｇ ｅ ａ 一 ｉ 带 ｍｓ Ｃ 和 ＦＳ 的方法 可 以将 岷江 百 合 的每 条 染色 体 区分 开来 。 ＩＨ
实验八 人类染色体核型分析
1.在显微互动实验室捕获和提交人染色体G 带核型并进行分析。
2.制片质量的关键步骤是哪些？
充分研磨，甘油总量为60mL,倒入烧杯中于5560℃水浴加热2小时，冷却后加入60mL甲醇， 混匀后室温放置2-3天过滤，在棕色瓶中长期 保存。
实验步骤
1. 将 老 化 7d 的 染 色 体 标 本 浸 入 37℃ 0.0125%胰蛋白酶溶液中处理2分钟。
2.取出标本，在蒸馏水中漂洗后放入1： 10 Giemsa染液中染色20-30分钟。
3.自来水冲洗，晾干，镜检。
显微镜观察
在显微镜下，可见分布在染色体全长上 的宽窄不同的相间条带。带纹的多少随 染色体的不同而异，另外还与染色体所 处的时期不同而有所差异，一般中期染 色体带纹较少，早中期与晚前期染色体 的带纹较多，前期染色体多呈颗粒状。
人类染色体G-带照片
染色体核型分析
作业及思考题
实验九 人染色体分带技术
目的和要求
1.掌握染色体G带制备的方法和基本原理。 2.了解染色体C显带技术。
实验原理
G带的形成与Giemsa染料的组成及染色特性有 关。 Giemsa染料是由亚甲蓝，天蓝和伊红组 成的复合染料，除伊红外，均为噻嗪类染料， 它只与DNA中的PO43-基结合而不与蛋白质结合， 所以染色体着色首先取决于两个噻嗪分子与 DNA的结合，其次取决于一个有助于染料沉淀 物积累的疏水环境。染色体上高浓度疏水性蛋 白的区域有利于噻嗪-伊红沉淀物的形成，这 些区域相当于含高比例二硫键的氧化态蛋白质 区域，经一系列处理后显示暗带，而另一些区 域则为含巯基的还原态蛋白质，为亲水性蛋白 质，对染料亲和力低，所以不显色。
实验用品
主要仪器： （1） 超净工作台 （2） 大容量低速离心机 （3） 二氧化碳培养箱和电热恒温培养箱 （4） 电热恒温干燥箱 （5） 水浴锅 （6） 天平 （7） 显微镜
2.制片质量的关键步骤是哪些？
充分研磨，甘油总量为60mL,倒入烧杯中于5560℃水浴加热2小时，冷却后加入60mL甲醇， 混匀后室温放置2-3天过滤，在棕色瓶中长期 保存。
实验步骤
1. 将 老 化 7d 的 染 色 体 标 本 浸 入 37℃ 0.0125%胰蛋白酶溶液中处理2分钟。
2.取出标本，在蒸馏水中漂洗后放入1： 10 Giemsa染液中染色20-30分钟。
3.自来水冲洗，晾干，镜检。
显微镜观察
在显微镜下，可见分布在染色体全长上 的宽窄不同的相间条带。带纹的多少随 染色体的不同而异，另外还与染色体所 处的时期不同而有所差异，一般中期染 色体带纹较少，早中期与晚前期染色体 的带纹较多，前期染色体多呈颗粒状。
人类染色体G-带照片
染色体核型分析
作业及思考题
实验九 人染色体分带技术
目的和要求
1.掌握染色体G带制备的方法和基本原理。 2.了解染色体C显带技术。
实验原理
G带的形成与Giemsa染料的组成及染色特性有 关。 Giemsa染料是由亚甲蓝，天蓝和伊红组 成的复合染料，除伊红外，均为噻嗪类染料， 它只与DNA中的PO43-基结合而不与蛋白质结合， 所以染色体着色首先取决于两个噻嗪分子与 DNA的结合，其次取决于一个有助于染料沉淀 物积累的疏水环境。染色体上高浓度疏水性蛋 白的区域有利于噻嗪-伊红沉淀物的形成，这 些区域相当于含高比例二硫键的氧化态蛋白质 区域，经一系列处理后显示暗带，而另一些区 域则为含巯基的还原态蛋白质，为亲水性蛋白 质，对染料亲和力低，所以不显色。
实验用品
主要仪器： （1） 超净工作台 （2） 大容量低速离心机 （3） 二氧化碳培养箱和电热恒温培养箱 （4） 电热恒温干燥箱 （5） 水浴锅 （6） 天平 （7） 显微镜
实验五：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色
实验五：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色
一.小鼠骨髓染色体的制备
【实验目的】 n 学会小鼠骨髓染色体标本的制备
【实验原理】
n 处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,由于阻断了 纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此 时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。
n 本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活 性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分 裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、 滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞 染色体标本。
【仪器、材料和试剂】
n （一）仪器 光学显微镜,冰箱,恒温水浴锅。
n （二）材料 n 已制备好的小鼠骨髓染色体载玻片,染色缸,烧杯,镊子
等。 n （三）试剂 n 盐酸(0.2mol/l),5％Ba(OH)2(50℃预热),2×SSC溶液
(60-65℃预热),Giemsa染液
【实验步骤】
1.按上述小鼠骨髓染色体的制备步骤制备染色体
二.染色体C带的制备
【实验目的】 学会小鼠骨髓染色体C带的制备
【实验原理】
n 借助特殊的燃料及染色程序,使染色体的一定部 位呈现深浅不同的带纹,可用来鉴别染色体组, 单个染色体以及深入认识染色体的结构和功能。
n C带可使着丝粒区,端粒区的异染色质及其他染 色体区段的异染色质部分呈Giemsa深染,其他 部分呈淡染。
（三）试剂
n 1．秋水仙素:以1mg/mL的浓度溶于0.85％ 生理盐水中。
n 2．低渗液: 0.075mol/lKCl取5.59gKCl加 到1000mL蒸馏水中,在37℃下预热。
n 3．固定液:甲醇:冰醋酸以3:1配制(新鲜的)
【实验步骤】
1.取雌雄小鼠各一只,注射秋水仙素0。1mL于腹腔中,经3。54h后拉颈椎处死。 2.剪开腹腔,剥离出两条后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢(注 意不要将股骨剪断)。 3.将骨骼外面的肌肉尽可能剪掉,剩下附着在骨骼上的少许肌 肉,用棉花或 纱布蘸75％酒精来回搓,直到骨骼外面不带任何肌肉为止。 4.剥离股骨,并将股骨头的两端减去少许,然后用4号针头插入 骨髓腔内,将股骨穿通(注意:不要用力过大,以防骨骼破裂)。
一.小鼠骨髓染色体的制备
【实验目的】 n 学会小鼠骨髓染色体标本的制备
【实验原理】
n 处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,由于阻断了 纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此 时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。
n 本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活 性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分 裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、 滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞 染色体标本。
【仪器、材料和试剂】
n （一）仪器 光学显微镜,冰箱,恒温水浴锅。
n （二）材料 n 已制备好的小鼠骨髓染色体载玻片,染色缸,烧杯,镊子
等。 n （三）试剂 n 盐酸(0.2mol/l),5％Ba(OH)2(50℃预热),2×SSC溶液
(60-65℃预热),Giemsa染液
【实验步骤】
1.按上述小鼠骨髓染色体的制备步骤制备染色体
二.染色体C带的制备
【实验目的】 学会小鼠骨髓染色体C带的制备
【实验原理】
n 借助特殊的燃料及染色程序,使染色体的一定部 位呈现深浅不同的带纹,可用来鉴别染色体组, 单个染色体以及深入认识染色体的结构和功能。
n C带可使着丝粒区,端粒区的异染色质及其他染 色体区段的异染色质部分呈Giemsa深染,其他 部分呈淡染。
（三）试剂
n 1．秋水仙素:以1mg/mL的浓度溶于0.85％ 生理盐水中。
n 2．低渗液: 0.075mol/lKCl取5.59gKCl加 到1000mL蒸馏水中,在37℃下预热。
n 3．固定液:甲醇:冰醋酸以3:1配制(新鲜的)
【实验步骤】
1.取雌雄小鼠各一只,注射秋水仙素0。1mL于腹腔中,经3。54h后拉颈椎处死。 2.剪开腹腔,剥离出两条后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢(注 意不要将股骨剪断)。 3.将骨骼外面的肌肉尽可能剪掉,剩下附着在骨骼上的少许肌 肉,用棉花或 纱布蘸75％酒精来回搓,直到骨骼外面不带任何肌肉为止。 4.剥离股骨,并将股骨头的两端减去少许,然后用4号针头插入 骨髓腔内,将股骨穿通(注意:不要用力过大,以防骨骼破裂)。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验用品
1.材料 小鼠骨髓细胞制片 2 . 药 品 5 % BaOH 溶 液 、 2 * SCC 溶 液 、 mol/L盐酸 盐酸、 Giemsa染液 0.1mol/L盐酸、5%Giemsa染液 显微镜、水浴锅、 3.器具 显微镜、水浴锅、染缸
实验步骤
盐酸处理30分钟 1. 0.1mol/L盐酸处理 分钟，蒸馏水洗净 盐酸处理 分钟， 染色体标本放入新配的5 BaOH染液的染缸中 染液的染缸中， 2 . 染色体标本放入新配的 5 % BaOH 染液的染缸中 ， 室温静置15分钟 分钟。 室温静置 分钟。然后将染缸连同制片放在水龙 头下冲洗（逐步置换法） 头下冲洗（逐步置换法） 制片放入60 60℃ SCC溶液中保温 小时， 溶液中保温1 3. 复性 制片放入60℃，2*SCC溶液中保温1小时， 洗净 放入5 Giemsa染液的染缸中 染色10 染液的染缸中， 104. 染色 放入5%Giemsa染液的染缸中，染色1020分钟 20分钟 5. 观察 洗净干燥后观察
绘图
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
绘制小鼠骨髓细胞中期染色体C带图 绘制小鼠骨髓细胞中期染色体 带图
常见的带型
也叫G显带，这是临床上最常用的显带方法。 G带 也叫G显带，这是临床上最常用的显带方法。用蛋 白水解酶，尿素待处理中期染色体标本均可显带。 白水解酶，尿素待处理中期染色体标本均可显带。G带的 特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。 特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。 Q带 用喹吖因染料染中期染色体标本可出现一种特征性 黄光亮暗带型，一般富含AT DNA区段表现为亮带 AT区段表现为亮带， 黄光亮暗带型，一般富含AT-DNA区段表现为亮带，富含 GC-DNA区段黄光较暗 常用于人类Y染色体长臂的观察。 区段黄光较暗， GC-DNA区段黄光较暗，常用于人类Y染色体长臂的观察。 临床上较少用，不能长久保存。 临床上较少用，不能长久保存。 这种方法将结构异染色质和高度重复的DNA DNA区域染 C带 这种方法将结构异染色质和高度重复的DNA区域染 色。在人类染色体上这些区域位于着丝粒和Y染色体上。 在人类染色体上这些区域位于着丝粒和Y染色体上。 常用于某一科题的研究。 常用于某一科题的研究。 带相近，常用于染色体末端的研究。 R带 与G带相近，常用于染色体末端的研究。 Ag也称银染色，着色的为与rDNA rDNA转录有关的酸性 Ag-NOR 也称银染色，着色的为与rDNA转录有关的酸性 蛋白，即显示的是有转录活性的核仁形成区。 蛋白，即显示的是有转录活性的核仁形成区。用于研究 rRNA的初态变化 临床上常用于着丝粒，随体等研究。 的初态变化， rRNA的初态变化，临床上常用于着丝粒，随体等研究。
染色体分带（C带）实验
实验目的
初步掌握染色体分带（C带）的显带技术 初步掌握染色体分带（
实验原理
用常规的染色体处理方法和染色方法， 用常规的染色体处理方法和染色方法，一般只能显 示染色体的外部形态特征，如大小或长短、 示染色体的外部形态特征，如大小或长短、着丝点或次 缢痕的位置以及随体等。 缢痕的位置以及随体等。但对于核型分析中较准确地识 别染色体组的每个成员，以及其结构的变异， 别染色体组的每个成员，以及其结构的变异，则仍有不 少困难。 少困难。通过不同的预处理和染色方法可导致染色体内 部结构的分化染色，以获得更多的具鉴别性特征的信息， 部结构的分化染色，以获得更多的具鉴别性特征的信息， 即染色体的“解剖学”特征。也就是染色体的分带技术。 即染色体的“解剖学”特征。也就是染色体的分带技术。 广义而言，凡能显示染色体结构分化的实验技术， 广义而言，凡能显示染色体结构分化的实验技术，均可 列为染色体的分带技术。 列为染色体的分带技术。