睡眠剥夺对大鼠免疫功能的影响
完全睡眠剥夺对大鼠caspase-3表达的影响
完全睡眠剥夺对大鼠ｃａｓｐａｓｅ－3表达的影响【摘要】目的：探讨完全睡眠剥夺对大鼠caspase-3的影响及其导致记忆、认知等功能障碍的机制。
方法：取Sprague-Dawley大鼠35只，随机分为正常对照组、大平台对照组和完全睡眠剥夺组。
其中正常对照组(NC)5只大鼠，正常笼养；大平台对照组(TC)只有72、96及120 h 3个时间点，每个时间点5只大鼠；完全睡眠剥夺组(TSD)也有72、96及120 h 3个时间点，每个时间点5只大鼠。
采用小平台水环境法建立完全睡眠剥夺模型，在不同的时点处死大鼠后运用免疫组化SP法检测各组大鼠海马和皮质caspase-3的分布规律和动态变化。
结果：caspase-3在各组的海马和皮质均有表达，随着睡眠剥夺时间的延长，caspase-3的表达逐渐增加，与正常对照组、大平台对照组差异有显著性（P<0.01)。
结论：完全睡眠剥夺能引起大鼠海马和皮质caspase-3的表达增加，并随睡眠剥夺时间的延长而渐趋明显。
可能是完全睡眠剥夺引起大鼠神经元调亡，进而引起大鼠记忆、认知等功能障碍的机制之一。
【关键词】完全睡眠剥夺；Caspase-3；皮质；海马睡眠是人的生理需要，是机体复原、整合和巩固记忆的重要环节，是健康不可缺少的重要组成部分。
由于现代社会生活节奏日益加快，家庭、社会的压力日益增大，以及夜生活、饮酒等不良生活习惯，睡眠障碍问题日趁严重，越来越多的人面临着睡眠剥夺，另外一些特殊人群如网瘾者和军人，还存在完全睡眠剥夺(Total sleep deprivation，TSD)。
有资料表明睡眠剥夺对人体免疫力、认知能力、内分泌、代谢和基因表达等均有严重影响，但其确切机制仍未阐明。
本研究采用小平台水环境法建立完全睡眠剥夺模型，观察大鼠顶叶和海马caspase-3和P38表达、分布的情况，力图揭示TSD导致的空间学习、记忆功能障碍的相关机制。
1 材料和方法1．1 实验动物：成年雄性SD大鼠35只，体重250～300 g，购自第三军医大学实验动物中心。
睡眠剥夺对大鼠胃肠道黏膜免疫功能的影响
睡眠剥夺对大鼠胃肠道黏膜免疫功能的影响王景杰;黄裕新;姜慧玲;秦明;杨琦;刘震雄;王旭霞【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2005(14)6【摘要】目的探讨睡眠剥夺(Sleep deprivation,SD)对大鼠胃肠道黏膜免疫的影响,为防治睡眠剥夺对胃肠道黏膜免疫功能的损害提供理论依据.方法采用小平台-水环境法制作睡眠剥夺大鼠模型;应用放免分析法和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(Mononuclear cell cytotoxicity assay,MTT),分别检测不同时间,睡眠剥夺对大鼠胃、十二指肠、空肠以及回盲部组织中分泌型免疫球蛋白(Secretory immunoglobulin,SIgA)以及上皮内淋巴细胞(Intraepithelial lymphocyte,IEL)和固有黏膜层淋巴细胞(Luminia propria lymypho-cytes,LPL)影响的情况.结果随着睡眠剥夺时间的不断延长,大鼠的胃、十二指肠、空肠以及回盲部组织中的SIgA、IEL和LPL水平逐渐降低,尤其以十二指肠部位变化最为显著.结论睡眠剥夺可导致胃肠道免疫功能明显下降,十二指肠部位受影响最为明显.【总页数】3页(P626-628)【作者】王景杰;黄裕新;姜慧玲;秦明;杨琦;刘震雄;王旭霞【作者单位】第四军医大学唐都医院消化内科,西安,710038;第四军医大学唐都医院消化内科,西安,710038;第四军医大学唐都医院消化内科,西安,710038;第四军医大学唐都医院消化内科,西安,710038;第四军医大学唐都医院消化内科,西安,710038;第四军医大学唐都医院消化内科,西安,710038;第四军医大学唐都医院消化内科,西安,710038【正文语种】中文【中图分类】R574【相关文献】1.复方灵芝口服液对睡眠剥夺大鼠睡眠的影响 [J], 周彦娜;薄世兴;陈莹;黄厚今2.加味酸枣仁汤对睡眠剥夺大鼠细胞免疫功能紊乱的调节作用 [J], 刘文娟;胡霖霖;刘义;宋明芬;蒋海寅;张永华3.睡眠剥夺对大鼠免疫功能的影响 [J], 袁义强;乔鹏;章茜;王书春;张朝;王雨若4.部分睡眠剥夺对大鼠免疫功能的影响 [J], 章茜;阎艳琴;乔鹏;袁义强;王书春;张朝;王雨若5.酸枣仁提取物对睡眠剥夺大鼠免疫功能的影响 [J], 赵翠;张颖;王璐;王国玉;陈军;曲忠慧;李伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
睡眠剥夺对大鼠血清激素水平及咬肌炎症指标的影响
[4][5][6][7][8][9]based technique to augment the3D virtual skull model with a de－tailed dental surface[J].International Journal of Oral and Maxillofa－cial Surgery,2009,38(1):48-57.Pettersson A,Komiyama A,Hultin M,et al.Accuracy of virtuallyplanned and template guided implant surgery on edentate patients[J].Clinical Implant Dentistry and Related Research,2012,14(4):527-537.Schneider D，Marquardt P，Zwahlen M，et al.A systematic review onthe accuracy and the clinical outcome of computer-guided template-based implant dentistry[J].Clin Oral Implants Res,2009，20(Suppl4):73-86.收稿日期:2013-10-30 plications associated with scanning,processing,surgery,and pros－thetics[J].Journal of Oral and Maxillofacial Surgery,2009,67(11):13-22.Ramasamy M,Raja R,Narendrakumar R.Implant surgical guides:From the past to the present[J].Journal of Pharmacy And BioalliedSciences,2013,5(5):98.Krauser J．The use of computerized treatment planning and a cus－tomized surgical template to achieve optimal implant placement[J]．Inside Dentistry，2008,4(22):15-17.许卫华,唐志辉,吴敏节,等.结合三维激光扫描的仿真颌骨模型在口腔种植中的应用[J].口腔医学研究,2011,27(6):514-516.Swennen GRJ,Mommaerts MY,Abeloos J,et al.A cone-beam CT睡眠是人类生命进程的重要组成部分，随着人类的生活节奏增快，由此引发的一系列睡眠障碍疾患明显增多，从而引起机体行为、情绪、学习、记忆等各方面的变化，造成生理节律的紊乱。
睡眠剥夺对异丙酚麻醉大鼠认知功能的影响论文
平台上活动。实验箱顶部放有饲料和水供大鼠自由 摄取。当大鼠进入ＲＥＭ睡眠时，全身肌肉张力降 低，平台较小，大鼠落入水中或头部触水惊醒，达到 剥夺ＲＥＭ睡眠的目的。实验室内温度维持２２～
２４℃，４０ Ｗ
１２
１３光灯照射０８：００—２０：００。１２ ｈ光照，
ｈＡ暗。睡眠剥夺从上午８：００至第２天８：００，持
ｒａｔｓ．
ａｆｔｅｒ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｓ ｒｅｌａｔｅｄ
ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｕ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｓｌｅｅｐ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ；Ｐｒｏｐｏｆｏｌ；Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ
面约ｌ ｏｍ，保持水温２２～２４℃，大鼠可自行在不同
冲洗，ＤＡＢ显色。Ｔａｕ蛋白染色阳性为神经元的突 起和胞浆呈棕黄色。在ＩＸ７１ Ｍｏｄｅｌ光学显微镜 （ｘ４００，Ｏｌｙｍｐｕｓ公司，１３本）下观察海马ＣＡｌ区，选 取３个互不重叠的视野，计数阳性神经元数目反映 Ｔａｕ．ｐＴｈｒ”１表达，取３个视野的平均值，取３张切片 的平均值。 采用ＳＰＳＳ １９．０统计学软件进行分析，计量资 料以均数±标准差（ｉ土ｓ）表示，组问比较采用单因素 方差分析，Ｐ＜Ｏ．０５为差异有统计学意义。
醉后ｌ ｄ时逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马ＣＡｌ区Ｔａｕ—ｐＴｈｒ”１表达上调（Ｐ＜０．０５），ＳＤＰ
组更明显（Ｐ＜０．０５），其它时点组间比较差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）；麻醉后１ ｄ时ＳＤＰ组海马ＣＡｌ
区病理学损伤明显重于Ｐ组，麻醉后３、７ ｄ时ＳＤＰ组与Ｐ组间海马ＣＡｌ区病理学损伤无明显差异。 结论 有关。 睡眠剥夺可加重异丙酚麻醉大鼠一过性认知功能障碍，其机制与促进Ｔａｕ蛋白的过度磷酸化
电针对睡眠剥夺大鼠突触超微结构及突触功能相关蛋白的影响
电针对睡眠剥夺大鼠突触超微结构及突触功能相关蛋白的影响目录一、内容综述 (2)1. 睡眠剥夺的研究背景与意义 (3)2. 突触超微结构与突触功能相关蛋白的研究进展 (4)3. 电针治疗在改善睡眠方面的应用前景 (5)4. 本研究的目的与意义 (5)二、材料与方法 (6)1. 实验动物与分组 (7)2. 睡眠剥夺模型的建立 (8)3. 电针干预方案 (9)4. 样本收集与处理 (10)5. 主要观察指标及方法 (11)三、电针对睡眠剥夺大鼠突触超微结构的影响 (11)1. 比较组间突触数量和形态的差异 (12)2. 分析电针对突触间隙宽度的影响 (13)3. 探讨电针对突触后膜超微结构的改变 (14)4. 研究电针对神经元内部结构的影响 (15)四、电针对睡眠剥夺大鼠突触功能相关蛋白的影响 (15)1. 分析电针对突触囊泡转运蛋白的影响 (17)2. 探讨电针对突触前膜递质释放功能的作用 (18)3. 研究电针对突触后膜受体表达的影响 (19)4. 分析电针对神经递质受体亲和力的调整作用 (20)五、讨论 (21)1. 电针改善睡眠剥夺大鼠突触超微结构的机制探讨 (22)2. 电针调节睡眠剥夺大鼠突触功能相关蛋白的表达及其意义 (23)3. 电针治疗在改善睡眠质量方面的潜在作用机制 (24)4. 本研究的局限性与未来研究方向 (25)六、结论 (26)1. 总结电针对睡眠剥夺大鼠突触超微结构及突触功能相关蛋白的主要影响272. 讨论电针治疗的临床应用前景 (28)3. 提出针对性的建议和改进措施 (30)一、内容综述随着睡眠医学的不断发展，睡眠剥夺（Sleep Deprivation, SD）对中枢神经系统的影响逐渐受到广泛关注。
电针作为中医传统疗法之一，在改善睡眠质量、调节神经系统功能方面具有显著疗效。
本文旨在综述电针对睡眠剥夺大鼠突触超微结构及突触功能相关蛋白的影响，以期为进一步探讨电针治疗睡眠障碍的机制提供实验依据。
褪黑素对急性睡眠剥夺大鼠行为的影响及机制
褪黑素对急性睡眠剥夺大鼠行为的影响及机制【关键词】褪黑素Effect of melatonin on behavior of rats of acute sleep deprivation and its working mechanismLIU FangE1，LIU LiBing1，CHEN JianKang1，CHEN ZhiYang1，YANG Fang1，HUA QianZhen2，QU Ping11Center of Basic Medicine Teaching Experiment， School of Basic Medicine， 2School of Nursing， Fourth Military Medicine University，Xian 710033， China【Abstract】 AIM: To explore the effect of melatonin (MT) on the behavior of rats with acute sleep deprivation (SD) and the related biomechanism. METHODS: Twentyfour Sprague Dawley rats were pided into 3 groups: control group (SD + sodium chloride)， experimental group 1 (SD + MT， 5 mg/ kg) and experimental group 2 (SD + MT， 15 mg/ kg). Therats were injected intraperitoneally with MT or sodium chloride one time a day for 1 week. SD was induced in the rats housed on small platform over water. After 72 h SD， the rats behavior was measured by "openfield test" and then malondialdehyde (MDA) and nitric oxide (NO) contents in cerebral cortex and hippocampus of the rats were measured by TBA and Griess method respectively. RESULTS: The excitability and explorative behavior of the 2 experimental groups in the "open field" significantly decreased compared with those of the control group(P<0.05， P<0.01). There was a doseeffect relationship in the experimental groups. The contents of NO or MDA in cerebral cortex and hippocampus of the experimental groups were lower than those of the control group（P<0.01）. CONCLUSION: Melatonin depresses theexcitability in the rats of acute sleep deprivation， possibly by inhibiting the increase of NO and MDA in cerebral cortex and hippocampus of the rats.【Keywords】 melatonin; sleep deprivation; behavior; NO; MDA【摘要】目的：探讨褪黑素对急性睡眠剥夺（SD）大鼠行为的影响及可能的作用机制. 方法：将Sprague Dawley 24只大鼠随机分为3组，对照组给予SD和生理盐水腹腔注射，2个实验组分别给予SD和褪黑素5 mg/kg和15 mg/kg腹腔注射，连续给药7 d后，采用小平台水环境法建立大鼠SD模型，SD 72 h用旷场反应箱测试大鼠的行为，用试剂盒检测大鼠大脑皮层和海马中一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）含量. 结果：实验组旷场反应测试大鼠兴奋性和探索性行为均明显小于对照组（P<0.05， P<0.01），有量效关系. 实验组大鼠大脑皮层和海马组织中NO和MDA含量明显低于对照组（P<0.01）. 结论：褪黑素对睡眠剥夺大鼠行为障碍有改善作用，这种作用可能与抑制睡眠剥夺大鼠大脑皮层和海马中NO及MDA 的升高有关.【关键词】褪黑素；睡眠剥夺；行为；一氧化氮；丙二醛0引言睡眠剥夺（sleep deprivation，SD）不但可引起动物或人产生疲劳、情绪不良、思维紊乱、甚至抵抗力低下、而且能引起学习记忆受损和行为的改变. 随着社会的发展，人们的生活节奏越来越快，睡眠剥夺现象日益常见. 因此，探讨减少睡眠剥夺对机体不良影响的措施具有十分重要的意义. 本实验拟研究褪黑素对睡眠剥夺大鼠行为的影响及可能的作用机制，为睡眠剥夺引起的行为障碍的防治提供理论依据.1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物上海产Sprague Dawley大鼠24只，成年、雄性、健康，体质量(180±15) g(第四军医大学实验动物中心提供). 将24只大鼠随机分为3组，每组8只. 对照组：睡眠剥夺+生理盐水；实验1组：睡眠剥夺+小剂量褪黑素；实验2组：睡眠剥夺+大剂量褪黑素.1.1.2药品和仪器睡眠剥夺装置参照文献［1］自制，旷场反应箱，秒表，褪黑素（Sigma公司，使用前需少量乙醇助溶，以生理盐水配制成所需浓度，终溶液中乙醇量<50 mL/L），MDA试剂盒，NO试剂盒，离心机，721分光光度计，恒温水浴箱等. 所有试剂盒均购自南京建成生物工程研究所.1.2方法1.2.1给药实验1组和实验2组于每日17：00腹腔注射褪黑素，剂量分别为5 mg/kg和15 mg/kg配制成2 mL溶液，给药，对照组在相同时间腹腔注射生理盐水2 mL，连续7 d，然后给予睡眠剥夺3 d. 睡眠剥夺期间，依然按分组每日给予褪黑素或生理盐水.1.2.2建立睡眠剥夺模型采用小平台水环境法（flower pot）建立大鼠SD 模型. 制作30 cm×30 cm×30 cm的鼠箱，其中有一直径为6.3 cm，高8.0 cm的平台，在平台周边注满水，水温保持在20℃左右，水面距平台面约1.0 cm. 鼠在平台上可自行进食饮水. 若其睡眠，则由于肌肉张力松弛而落入水中，大鼠只能重振精神爬上平台，如此反复达到SD的效果. 大鼠活动空间内持续40 W日光灯照射，室内温度控制在18℃～22℃. 睡眠剥夺前，让大鼠熟悉适应环境7 d，即在给予大鼠褪黑素或生理盐水腹腔注射的同时，将大鼠放在没有注水的睡眠剥夺箱内，让其熟悉睡眠剥夺环境. 而后进行睡眠剥夺72 h.1.2.3行为学测试用旷场反应箱测试大鼠的行为变化和情绪兴奋性. 将旷场反应箱放置在一个较封闭的屋内，有照明装置可调节光线强弱. 旷场反应箱为一个底部面积100 cm×100 cm，上口面积120 cm×120 cm，高30 cm的方形容器，底面小上口大，便于观察大鼠在箱内的活动，旷场反应箱正上方有一个摄像头监视大鼠的活动，并可将实验数据和图像信息输入计算机. 观察大鼠在旷场反应箱中5 min内的运动，并观察动物情绪变化、修饰行为（如洗脸行为、抓挠行为）和大小便次数. 每只大鼠在睡眠剥夺72 h后测量1次，每次测试后，用稀硫酸溶液清洗旷场周壁及底面，以免上次动物余留的信息（如大鼠的大、小便、气味）影响下次测试结果.1.2.4海马、大脑皮层内NO，MDA测定取上述各组睡眠剥夺结束后大鼠立即处死，于冰浴中取出海马与大脑皮层. 分析天平称质量，按质量海马加冰冷的100 mL/L PBS溶液(pH 7.0) 稀释至10%，大脑皮层加冰冷的生理盐水稀释至10%，并以玻璃匀浆器匀浆， 1000 r/min，离心5 min后沉淀，取上清液均置于冰箱中待测. 根据试剂盒的操作步骤，采用硝酸还原法检测NO，硫代巴比妥酸法检测MDA. 由专人一次检测完成.统计学处理：所有数据以x±s表示，结果采用SPSS 10.0软件包进行方差分析，均数间的多重比较用LSDt进行显著性检验.2结果2.1大鼠兴奋性和探索性褪黑素对大鼠行为的影响测试显示，随给药剂量不同，大鼠的情绪状况有一定差异：2个实验组比对照组，小剂量组比大剂量组，大鼠的修饰行为和大小便次数均明显减少，实验组更易受激惹. 在旷场反应箱中，运动总距离（total distance，TD）表示大鼠在旷场反应箱中5 min内运动的总路程，较快运动距离（quick speed distance， QSD）表示大鼠速度大于5 cm/s时运动的总路程. 实验中用运动总距离和较快运动距离表示大鼠的行为兴奋性，运动总距离和较快运动距离越大，说明大鼠的兴奋性越高.离开边界总距离(leave border distance，LBD)表示大鼠不沿边界运动时的总路程，即离开边界15 cm时运动的距离；内环内距离（inner toriod distance，ITD）表示大鼠在内环内部运动的总路程，内环是指以旷场中心点为圆心，以44 cm为半径的圆. 用离开边界总距离和内环内距离表示大鼠的探索性行为，离开边界总距离和内环内距离越大，说明大鼠的探索性行为越多(表1).表1褪黑素对睡眠剥夺大鼠的行为的影响(略)2.2睡眠剥夺大鼠大脑皮层和海马NO和MDA含量褪黑素对睡眠剥夺大鼠大脑皮层和海马NO和MDA含量的影响（表2）.表2褪黑素对睡眠剥夺大鼠大脑皮层和海马NO和MDA的影响(略)3讨论SD是一种特殊的生理心理状态，它可引起机体生理、心理功能的改变. 已有动物实验表明［2］SD 24 h和48 h时动物表现最为活跃，而12，72和96 h 时兴奋性较弱，说明若睡眠剥夺时间短，情绪状态表现为兴奋，72 h以后则有抑制趋势. 本实验结果与上述结果有所不同，SD 72 h后，对照组大鼠比实验组大鼠大小便次数增多，修饰行为或“洗脸”行为增多，对于给它的刺激敏感、易怒，实验后将它放入饲养笼中，对其他鼠进攻行为也增多. 这说明，大鼠仍处于较兴奋的状态. 这与Youngblood等［3］的报道结果较一致，他的研究认为在48和72 h睡眠剥夺后大鼠游泳行为增加. 据报道［4］修饰行为常发生于产生矛盾或害怕的情境中，大鼠SD后精神行为表现出一定的兴奋性，修饰行为增多，说明SD环境使大鼠情绪非常紧张恐惧，攻击行为增多. 本实验结果提示褪黑素对睡眠剥夺引起的情绪兴奋有抑制作用.本研究在旷场试验中用运动总距离和较快运动距离指标考察大鼠的兴奋性状态. 大鼠在旷场反应箱中，由于环境陌生，常表现为恐惧、紧张、好奇等，基本上处于运动状态. 运动速度大于5 cm/s时，大鼠处于行走或跑步的状态；运动速度小于5 cm/s时，大鼠在缓慢移动，即处于相对“静止”状态. 因此，用运动总距离和较快运动距离表示大鼠的运动量，代表其兴奋性状态. 实验结果显示，实验1组和实验2组与对照组相比，运动总距离和较快运动距离都显著减少，说明褪黑素对睡眠剥夺大鼠的行为兴奋性有明显的抑制作用，而且褪黑素的剂量越大，抑制作用越强. 实验用离开边界总距离和内环内距离两个指标考察大鼠的探索性行为. 人或动物在情绪兴奋或烦躁时，就会导致行为的目的性减弱，注意力不集中，对安全的考虑减少，对危险的防范意识降低. 因此，大鼠在72 h睡眠剥夺后，行为兴奋，注意涣散，违背本能，离开边界运动的总距离和内环内运动总距离明显增多. 本实验结果显示，两个实验组与对照组比较离开边界总距离和内环内距离明显减少，表明褪黑素对睡眠剥夺大鼠的探索性行为也有抑制作用，但是大、小剂量之间无统计学意义.研究发现［5］，睡眠剥夺组大鼠脑组织NO含量升高，其中额叶及海马NO含量升高更明显. 而且随着SD时间的延长，NO含量升高越明显. 丙二醛（MDA）是体内脂质过氧化的产物，其含量高低间接反映自由基对生物大分子的损伤程度. 褪黑素是一种内分泌激素，为体内抗自由基、抗氧化作用很强的活性物质. 褪黑素在预防皮层功能紊乱，如运动、感觉、记忆和心理损伤方面是非常有用的［6］. 我们研究表明，2个褪黑素实验组大鼠大脑皮层和海马NO和MDA的含量明显低于对照组，提示褪黑素对睡眠剥夺大鼠大脑皮层和海马组织中NO 和MDA的含量的升高有显著的抑制作用. 据报道［7］，褪黑素对中枢神经兴奋性的抑制机制可能通过抑制一氧化氮合酶，使谷氨酸受体激活产生NO水平下降而起作用. 说明MT抑制NO及MDA的升高作用，即抗自由基和抗过氧化损伤作用，可能是其发挥改善睡眠剥夺大鼠行为障碍的重要作用机制之一.参考文献［1］ Youngblood BD，Zhou J， Smagin GN， et al. Sleep deprivation by the "Flower Pot" technique and spatial reference memory［J］. Physiol Behav， 1997，61(2):249-256.［2］宋国萍，皇甫恩，苗丹民，等. 睡眠剥夺对大鼠学习和行为的影响［J］.第四军医大学学报， 2000，21(6):663-666.［3］ Youngblood BD，Smagin GN，Elins PD，et al．The effects of paradoxical sleep deprivation and valine on spatial learning and brain 5HT metabolism［J］．Phsiol Behav， 1999，67(5)：643-649．［4］ Brady K， Brown JW，Thurmond JB. Behavioral and neurochemical effects of dietary tyrosine in young and aged mice following coldswim stress［J］. Pharmacol Biochem Behav， 1980，12(5):667-674.［5］吴兴曲，杨来启，王晓峰，等. 睡眠剥夺对大鼠一氧化氮和一氧化氮合酶的影响［J］. 中国临床心理学杂志，2002，10(2): 106-107.［6］ Takashi Kondoh，Hisayuki Uneyama，Hitoo Nishino， et al. Melatonin reducea cerebral edema formation caused by transient forebrain ischemia in rats［J］. Life Sci，2002，72:583-590.［7］汤业磊，潘以正. 褪黑素对FeCl3致痫大鼠行为及脑电图的影响［J］.中国临床神经科学，2003，11(1):42-45.。
睡眠剥夺对大鼠学习记忆和神经递质的影响及中西药的干预作用
福建医科大学硕士学位论文睡眠剥夺对大鼠学习记忆和神经递质的影响及中西药的干预作用姓名：王雅丽申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：黄俊山2011-06睡眠剥夺对大鼠学习记忆和神经递质的影响及中西药的干预作用中文摘要目的：1.研究快速眼动睡眠剥夺（RSD）和对氯苯丙氨酸（PCPA）所致完全性失眠两种睡眠剥夺（SD）模型对大鼠学习记忆及血浆中单胺类神经递质去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）及5-羟色胺（5-HT）的含量的影响。
2.研究松郁安神方和阿普唑仑对两种SD模型干预后大鼠学习记忆及血浆中单胺类神经递质含量的变化。
方法：健康雄性Sprague-Dawley大鼠88只，体重200±10g，随机选取其中40只用于建立SD模型。
采用改良多平台法（MMPM）建立RSD模型，采用腹腔注射PCPA建立完全性失眠模型，分成5组：空白对照（CC）组、大平台环境对照（TC）组、快速眼动睡眠剥夺（RSD）组、腹腔注射PCPA组、腹腔注射生理盐水（NS）对照组。
另外48只用于药物干预：建立两种SD模型后分别用松郁安神方和阿普唑仑灌胃5天。
大鼠分成6组：NS+蒸馏水组、PCPA+蒸馏水组、RSD+中药组、RSD+西药组、PCPA+中药组、PCPA+西药组。
各组动物实验前后行Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力。
实验结束后，腹主动脉取血，用高效液相色谱-电化学检测法（HPLC-ECD）检测血浆中NE、DA、5-HT的含量。
结果：1．大鼠学习记忆能力变化：造模后Morris水迷宫测试各组的潜伏期较造模前均下降（P<0.05）。
RSD 造模后，RSD组的潜伏期比TC组、CC组明显延长（P<0.05）。
药物干预后，与RSD组相比，RSD+中药组和RSD+西药组大鼠潜伏期缩短（P<0.05）。
2．血浆中NE、DA、5-HT含量的变化：（1）SD模型组：与CC组、TC组、NS组相比，RSD组、PCPA组NE含量升高（P<0.05）。
《基于觉醒水平探讨五味子木脂素改善睡眠剥夺大鼠的睡眠作用》
《基于觉醒水平探讨五味子木脂素改善睡眠剥夺大鼠的睡眠作用》一、引言随着现代生活节奏的加快，睡眠问题逐渐成为影响人们生活质量的重要问题之一。
睡眠剥夺对机体的影响日益凸显，不仅会导致精神疲惫、注意力不集中，还会引发一系列的生理紊乱和健康问题。
因此，研究改善睡眠剥夺的机制和方法具有重要的实际意义。
五味子木脂素作为一种天然药物成分，其具有镇静安神的作用，有望在改善睡眠质量方面发挥重要作用。
本文旨在基于觉醒水平探讨五味子木脂素对睡眠剥夺大鼠的睡眠作用。
二、材料与方法1. 实验材料本实验选用健康成年SD大鼠作为实验对象，五味子木脂素为实验药物。
实验所需设备包括多通道生理记录仪、行为学观察装置等。
2. 实验方法（1）建立睡眠剥夺模型：采用渐进性多平台剥夺法建立大鼠睡眠剥夺模型。
（2）分组与给药：将大鼠随机分为对照组、睡眠剥夺组和五味子木脂素治疗组，治疗组分别在剥夺后进行不同剂量的五味子木脂素给药。
（3）觉醒水平监测：利用多通道生理记录仪对大鼠的觉醒水平进行实时监测。
（4）行为学观察：观察大鼠的行为变化，包括活动量、探索行为等。
（5）统计分析：对实验数据进行统计分析，比较各组之间的差异。
三、实验结果1. 觉醒水平变化（1）对照组大鼠觉醒水平稳定，无明显波动。
（2）睡眠剥夺组大鼠觉醒水平显著升高，表现出明显的觉醒亢进现象。
（3）五味子木脂素治疗组大鼠觉醒水平较睡眠剥夺组有所降低，且随着药物剂量的增加，觉醒水平逐渐降低。
2. 行为学变化（1）睡眠剥夺组大鼠活动量增加，探索行为减少。
（2）五味子木脂素治疗组大鼠活动量有所降低，探索行为增加，接近正常对照组水平。
3. 药物作用分析五味子木脂素对大鼠的睡眠作用表现出剂量依赖性，随着药物剂量的增加，对觉醒水平的抑制作用逐渐增强，同时能够改善大鼠的行为学表现。
与未治疗组相比，治疗组大鼠在药物作用下能够更好地恢复正常的睡眠觉醒周期。
四、讨论五味子木脂素能够改善睡眠剥夺大鼠的觉醒水平和行为学表现，这可能与五味子木脂素的镇静安神作用有关。
心理应激复合睡眠剥夺对大鼠工作记忆、抗氧化能力及边缘营养素的影响
心理应激对机体的影响涉及到各个方面，其中最早的应激反应发生在神经内分泌系统，
进而导致认知功能的改变。应激反应与应激方式和应激持续时间密切相关，按照应激的一般 规律，过度而持久的刺激将使机体的反应由兴奋期转为抑制期，即心理学上的“进攻行为” 转为・・逃跑行为”，在认知功能方面农现为学习记忆能力下降‘３１。 睡眠剥夺是指由于各种原因引起的睡眠丢失状态，可引起动物或人产生疲劳、激惹等 不良的情绪状态、思维紊乱、学习记忆受损等。睡眠是由快速眼球运动睡眠（ｒａｐｉｄ
１．３实验方法
（１）动物处理：单～４笼饲养于隔音室，使Ｊ＝｛ｆｊ ４０Ｗ白炽灯照明。温度为（２３士２）℃。实 验前自由进食普通饲料，适应ｌ周。（２）心理应激：采用Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ Ｂｏｘ心理应激模型进 行心理应激。第ｌｄ至１４ｄ，实验动物给予心理应激３０ｍｉｌｌ／次，１次／ｄ。（３）睡眠剥夺：采用 改良后的小平台法睡眠剥夺模型进行睡眠剥夺。第１３ｄ、第１４ｄ给予持续睡眠剥夺（计４８ｈ）。 （４）水迷宫训练：利用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫进行大鼠定位航行实＠（ｐｌａｃｅ ｎａｖｉｇａｔｉｏｎΒιβλιοθήκη （一００５）。见表ｌ，图ｌ。
表Ｉ心理应激复合睡眠剥夺对大鼠总逃逸潜伏期的影响（ｘ±ｓ）
注：与第１天比较ａ Ｐ＜００５
Ｐ＜Ｏ ０５
ｃｃ
ａａ
Ｐ＜Ｏ Ｏｌ与空自对照纽比较ｂＰ＜００５．ｂｂＰ＜Ｏ Ｏｌ：与复合因素时胤组比较ｃ
Ｐ＜Ｏ ０１
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２．１．２心理应激复合睡眠剥夺对大鼠第１象限逃逸潜伏期的影响 结果表明，训练强化期间（第ｌ天．第３天），各组的太鼠第】象限逃逸潜伏期均呈现 减少的趋势，与褶应组第ｌ天比较，第４天各组的大鼠第ｌ象限逃逸潜伏期均明显减少
《基于觉醒水平探讨五味子木脂素改善睡眠剥夺大鼠的睡眠作用》
《基于觉醒水平探讨五味子木脂素改善睡眠剥夺大鼠的睡眠作用》一、引言随着现代生活节奏的加快，睡眠问题逐渐成为影响人们生活质量的重要问题之一。
睡眠剥夺对机体的影响日益受到关注，而寻找有效的改善睡眠质量的方法也变得尤为重要。
五味子木脂素作为一种具有广泛药理作用的天然成分，近年来在改善睡眠质量方面的研究逐渐增多。
本文旨在探讨基于觉醒水平，五味子木脂素对睡眠剥夺大鼠的睡眠作用。
二、研究背景及意义五味子木脂素是一种具有镇静、抗抑郁、抗氧化等作用的天然成分，被广泛应用于中医药领域。
近年来，其在改善睡眠质量方面的研究逐渐增多，但具体作用机制尚不完全清楚。
因此，本研究旨在通过实验探讨五味子木脂素对睡眠剥夺大鼠的睡眠作用，以期为临床应用提供理论依据。
三、实验方法1. 实验动物与分组选用健康成年SD大鼠，随机分为四组：正常组、睡眠剥夺组、五味子木脂素治疗组和安慰剂对照组。
2. 实验过程通过限制睡眠时间的方法建立睡眠剥夺模型，观察各组大鼠的觉醒水平、睡眠时间和质量等指标。
在五味子木脂素治疗组中，给予适量五味子木脂素进行干预。
3. 数据分析收集实验数据，采用统计软件进行分析，比较各组大鼠的觉醒水平、睡眠时间和质量等指标的差异。
四、实验结果1. 觉醒水平分析实验结果显示，睡眠剥夺组大鼠的觉醒水平明显高于正常组，而五味子木脂素治疗组的大鼠觉醒水平较睡眠剥夺组有所降低，接近正常组水平。
2. 睡眠时间和质量分析与正常组相比，睡眠剥夺组大鼠的睡眠时间缩短，睡眠质量下降。
而五味子木脂素治疗组的大鼠在接受治疗后，睡眠时间和质量均有明显改善，与正常组无显著差异。
3. 五味子木脂素对生物指标的影响五味子木脂素对大鼠的生物指标如心率、呼吸等无明显影响，说明其安全性较好。
五、讨论本研究结果表明，五味子木脂素能够改善睡眠剥夺大鼠的觉醒水平、睡眠时间和质量。
这可能与五味子木脂素的镇静、抗抑郁、抗氧化等作用有关。
五味子木脂素通过调节神经系统功能，降低机体的应激反应，从而改善睡眠质量。
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subtotal nephroectom y .Rats wer e randomized as three gr oups :Sham group ,chronic renal failure (CRF )group and treat -ment group .1,25(OH )2D 3was administrated by i .p .injection of 25pmol calcitriol once daily for ten days .After 31days ,ordinary parameters were measured ,and the expression of PCaR mRNA in all groups was investigated by semi -quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT -PCR ).(1)The concentrations of serum creatinine (SCr ),PTH in CRF group were significantly higher than those in sha m gr oup (69.30±11.20vs 21.15±8.20μmol L ,P <0.05;256±72vs 41±7pg mL ,P <0.05),PTH levels in treatment group were significantly lower than that in CRF group (112±47vs 256±72pg mL ,P <0.05).(2)There was no difference in levels of PCaR mR NA between CRF group and sham group (1.100±0.153vs 1.074±0.119),and so did it between CRF group and treatment group (1.131±0.108vs 1.074±0.119).In this model ,2°HPT developed without change of expression of PCa mR NA .The treat -ment of 1,25(OH )2D 3in the 2°HPT induced by subtotal nephroectom y had no effect on the expression of PCaR mRNA .Key words :chronic renal failure ;parathyroid gland calciu m -sensing receptor ;secondary hyperparathyroidism 收稿日期:2000-11-06 修回日期:2001-04-25文章编号:1001-6325(2001)05-0451-02睡眠剥夺对大鼠免疫功能的影响袁义强,乔 鹏,章 茜,王书春,张 朝,王雨若(河南医科大学生理教研室,河南郑州450052) 中图分类号:Q428;R392 文献标识码:A 已有实验证明,睡眠剥夺或缺失可降低机体的防御能力。
Brown [1]曾发现睡眠剥夺能使小鼠对流感病毒的抵抗力减弱,IL -1或胞壁肽可对抗这一改变。
相继的研究显示白细胞介素与肿瘤坏死因子等细胞因子可不同程度地促进睡眠[2]。
睡眠是否与免疫有关,本文拟通过对睡眠剥夺大鼠T 细胞和B 细胞增殖反应的变化,来探讨睡眠对免疫功能的影响。
1 材料与方法1.1 主要仪器及药品:刀豆蛋白A (Con A ),北京中山生物公司;脂多糖(LPS ),Sigma 产品;四甲基偶氮唑盐(MTT ),瑞士FLUKA 产品;十二烷基硫酸钠(SDS ),日本产品;二甲基甲酰胺(DMF ),上海试剂一厂;绵羊红细胞(SRB C )及豚鼠血清,由河南医科大学实验动物中心提供。
酶联免疫检测仪,DG -3022型,华东电子管厂。
1.2 动物及分组:雄性SD 大鼠(河南医科大学实验动物中心提供)94只,体重200～263g 。
实验分2部分:部分睡眠剥夺和持续性睡眠剥夺。
每部分实验又分2阶段进行。
部分睡眠剥夺的第一阶段(观察脾细胞增殖反应及脾细胞分泌抗体功能)用鼠22只,分成2组,即实验组与对照组,每组11只;第二阶段(观察迟发型超敏反应和免疫器官的变化)动物22只亦分为实验组和对照组,各11只。
持续睡眠剥夺的观察指标同上,第一阶段用鼠26只,实验组及对照组各13只;第二阶段24只,实验组与对照组各12只。
1.3 动物模型的建立:参照Rechtschaffen 睡眠剥夺法加以改良。
持续睡眠剥夺为剥夺24h 睡眠,连续4d 。
部分睡眠剥夺为剥夺12h 睡眠,连续4d 。
1.4 Con A 诱导脾细胞增殖反应[3]:用20%SRBC 致敏实验组和对照组大鼠,继之对实验组大鼠剥夺睡眠,4d 后将两组动物同时处死,无菌操作快速取出脾脏,制备脾细胞悬液,细胞密度为2.5×106cell mL 。
96孔培养板每孔加细胞悬液0.1mL ,并加10mg L Con A 0.1mL 。
37℃,5%CO 2培养箱中孵育66h 后,取出培养板,加5g L 的MTT 溶液10μL ,继续培养4h 后再次取出,从每孔中吸掉上清液0.1mL ,另加入0.1mL 的20%SDS ～50%D MF ,充分振动30min ,最后用酶联免疫检测仪测定其OD 值,检测波长570nm ,参考波长630nm ,以检测波长测出的OD 值减去参考波长测出的OD 值,这个OD 的差值来反应细胞的活性及其增殖能力。
1.5 LPS 诱导脾细胞增殖反应[3]:按上述方法制备脾细胞悬液,细胞浓度同上。
在96孔培养板中加入0.1mL细胞悬液及0.1mL LPS(20mg L),置37℃,5%C O2培养箱中培养72h,酶联免疫检测仪测定其OD值(方法同上)。
1.6 脾细胞抗体分泌功能观察[3]:脾细胞悬液制备同4。
将脾细胞释稀成1.0×107cell mL。
取1mL,加20%SRBC0.1mL、PBS0.9mL、1:10补体1mL,混匀,37℃水浴1h,离心(3000r min)。
721分光光度计,波长413nm,测OD值反映上清液中红细胞释放的Hb量。
1.7 免疫器官的形态观察:睡眠剥夺4d后,将实验和对照鼠同时处死,迅速取出脾和胸腺,分别称重。
以脾脏或胸腺重量(mg100gB W)分别表示脾脏和胸腺的大小。
取上述脾和胸腺一部分,10%甲醛溶液固定48h,乙醇逐级脱水,石蜡包埋,切片,HE染色。
1.8 统计学处理:全部数据以x—±s表示,组间差异性比较采用t检验。
2 结果与讨论2.1 睡眠剥夺对脾细胞免疫功能的影响:睡眠剥夺大鼠精神萎靡、虚弱、消瘦、皮毛无光泽。
表1示部分睡眠剥夺4d: LPS诱导的脾细胞增殖反应降低,OD值下降38.3%(P< 0.05);Con A诱导的脾细胞增殖反应亦有降低趋势,OD值降低16.9%,但与对照组相比差异无显著性;脾细胞分泌抗体的功能明显降低,其OD值降低约55.6%(P<0.001)。
表1 部分睡眠剥夺对脾细胞功能的影响Table1 Effect of partial sleep deprivation on spleen cell function(x—±s,n=22)Con A-induced proliferation L PS-inducedproliferationantibody s ecretionControl group0.69±0.260.69±0.171.42±0.63 Test group0.57±0.250.43±0.26＊0.63±0.34＊＊ ＊P<0.05;＊＊P<0.001vs control group表2 持续睡眠剥夺对脾细胞功能的影响Table2 Effect of sustained sleep deprivation on spleen cell function(x—±s,n=24)Con A-inducedproliferationL PS-inducedproliferationantibody s ecretion Control group0.54±0.110.53±0.110.68±0.08Test group0.40±0.10＊0.41±0.11＊＊0.27±0.16＊＊ ＊P<0.01;＊＊P<0.001vs control group表2示持续睡眠剥夺4d:Con A及LPS诱导的脾细胞增殖反应明显降低,其OD值分别下降25.7%及23.2%,各组间差异有显著性,均P<0.01。
脾细胞产生抗体的量明显减少,其OD值下降59.8%,实验组与对照组相比P<0.001。
2.2 睡眠剥夺对免疫器官的影响:部分睡眠剥夺使大鼠胸腺重量和脾重量分别减低了52.5%和14%,由对照组的134.63±47.68和307.04±65.19下降为63.96±24.88和264.05±82.32,分别P<0.001和P>0.05。
持续睡眠剥夺可见胸腺和脾脏明显缩小,胸腺重量和脾重量分别从100.89±28.99和299.28±34.06下降为61.20±7.67和233.79±30.22,分别降低了39.4%、21.9%,均P<0.001。
胸腺和脾脏组织学未见明显变化。
参考文献:[1]Brown R,Husband AJ,Pang G,et al.Suppress ion of immunityto influenza virus infection in the respiratory tract following sleep deprivation[J].Reg Immunol1989,2:321-325.[2]Lancel M,Mathias S,Faulhaber J,et al.Effect of interleukin-1beta on EEG power density during sleep depends on circadian phase[J].Am J Physiol,1996,270:R830-910.[3]郑永唐,彭昆龙.测定细胞存活和增殖的MTT方法的建立[J].免疫学杂志,1992,8:95-97.。