束缚应激对大鼠免疫功能的影响_王瑜
加味保元汤对束缚应激小鼠细胞免疫功能的影响
加味保元汤对束缚应激小鼠细胞免疫功能的影响孙莉;于新宇;苑迅;韩耀辉【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2006(010)035【摘要】目的:对束缚应激小鼠给予加味保元汤灌胃后,检测T淋巴细胞转化率,观察加味保元汤对细胞免疫功能的影响.方法:实验于2002-07/10在大连大学医学院生理学实验室完成.健康、雄性、昆明品系小白鼠100只,随机等分为5组:①正常组,只禁食水17 h,不作任何其他处理.②应激组,束缚17 h,束缚期间禁食水.③正常加药组,不束缚但与应激加药组相同时间灌胃给加味保元汤水煎剂(人参250 g,黄芪300 g,肉桂250g,甘草150g,五味子250 g,熬制成水煎剂).④应激加药组,束缚17 h,束缚前2 d,每天上、下午各给药1次,束缚前1,3,5 h及束缚后5,7,9 h分别再给药1次.⑤应激加水组,束缚17 h,束缚前2天,每天上、下午各给水1次,束缚前1,3,5 h及束缚后5,7,9 h分别再给水1次,其容积与加味保元汤水煎剂相同.各组动物经各实验因素处理后,断髓处死,取脾,去筋膜,检测T淋巴细胞转化率.T淋巴细胞转化率=转化的淋巴细胞数/(转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数)×100%.结果:实验小鼠100只进行T淋巴细胞转化率检测.加水对束缚应激没有影响;在加味保元汤作用下,使束缚应激致免疫功能低下基本恢复正常;加味保元汤可以提高正常小鼠的T淋巴细胞转化率,并可以使束缚应激后降低的T淋巴细胞转化率基本恢复正常.束缚应激加药组T淋巴细胞转化率明显高于束缚应激组(应激组为28.30%,应激加水组为21.90%,正常组为38.00%,应激加药组为37.20%,正常加药组为51.70%,P＜0.005).结论:加味保元汤可提高束缚应激小鼠细胞免疫功能.【总页数】3页(P103-105)【作者】孙莉;于新宇;苑迅;韩耀辉【作者单位】大连大学医学院,生理教研室,辽宁省大连市,116622;大连大学医学院,组织胚胎学教研室辽宁省大连市,116622;大连大学医学院,预防医学与卫生统计学教研室,辽宁省大连市,116622;大连大学医学院,生理教研室,辽宁省大连市,116622【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.加味当归补血汤对化疗小鼠红白细胞免疫功能的影响 [J], 苏颖;刘青卫;李淼;黄朝忠;刘智2.不同剂量加味保元汤对束缚应激小鼠非特异性免疫功能的影响 [J], 孙莉;韩耀辉3.慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及小鼠前胃癌移植瘤生长的影响[J], 李建;胡淞;张才全;杨海平;倪春4.束缚应激对小鼠免疫功能影响系列研究(一)——对小鼠巨噬细胞吞噬功能作用观察 [J], 孙莉;韩耀辉;赵彩虹;徐仲崎;孔彦;王辉5.加味保元汤对束缚应激小鼠免疫功能影响的研究 [J], 孙莉;甄铁梅;韩耀辉;赵红;陈晓云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
慢性束缚应激模型诱致抑郁和痛敏的行为学
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痛敏是指对疼痛刺激的敏感度增加， 常常伴随着情绪和心理的改变，如焦 虑、抑郁等。
抑郁和痛敏常常并发出现，相互影响 ，形成恶性循环。
痛敏和抑郁的发生与神经内分泌、免 疫等多个因素有关，如5-羟色胺、去 甲肾上腺素等神经递质水平的异常， 以及炎症、氧化应激等通路的调节异 常。
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结论
研究的主要发现
未来研究可以关注其他应激模型对抑郁和痛敏 行为学的影响，以便更深入地了解应激与抑郁 和痛敏之间的关系。
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参考文献
参考文献
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张三. (2018). 慢性束缚应激模型对小 鼠抑郁和痛敏行为的影响. 中国应用 生理学杂志, 34(1), 1-8.
李四. (2017). 慢性束缚应激模型对大 鼠抑郁和痛敏行为的影响及机制研究 . 生理学报, 69(2), 1-10.
03
慢性束缚应激模型是一种模拟 抑郁症和痛敏的动物模型，有 助于研究其发生机制和治疗方 法。
文献综述
慢性束缚应激模型在国内外的研究现状及进展。 抑郁症和痛敏的生理、心理机制研究综述。 现有治疗方法及其效果评价。
研究目的和方法
研究目的
探讨慢性束缚应激模型对大鼠抑郁和痛敏行为的影响，并分析其可能的机制。
1
慢性束缚应激模型能够成功诱致抑郁和痛敏行 为学表现。
2
慢性束缚应激模型可导致小鼠在行为测试中表 现出抑郁样行为，如糖水偏好度降低、强迫游 泳试验中活动时间减少等。
3
慢性束缚应激模型也可引起小鼠的痛敏反应， 如热板试验中舔足时间缩短、腹腔注射醋酸引 起的扭体次数增加等。
研究的局限性
本研究仅关注了慢性束缚应激模型 对抑郁和痛敏行为学的影响，未涉 及神经生物学层面的研究。
小鼠肝损伤动物模型的建立及在束缚应激研究中的应用
添加标题
意义：通过实验设计，可以更加深入地了解肝损伤的发病机制，为肝损伤的预防和治疗 提供更加有效的方案，同时也有助于推动束缚应激相关领域的研究进展。
● 实验目的：建立小鼠肝损伤动物模型，并研究束缚应激对肝损伤的影响。
● 实验材料：小鼠、束缚应激装置、肝损伤检测试剂盒等。
● 实验步骤： a. 选取健康成年小鼠，随机分为两组，对照组和束缚应激组。 b. 对束缚应激组小鼠进行 束缚应激处理，每天固定小鼠2小时，连续处理7天。 c. 在处理前、处理后分别采集小鼠血清和肝脏组 织，检测肝损伤相关指标。 d. 对检测结果进行分析，比较两组之间的差异。
意义：为进一步研究束缚应激对小鼠肝损伤的影响提供实验依据
实验设计：采用束缚应激方法建立小鼠肝损伤动物模型，观察束缚应激对小鼠肝损伤 的影响
实验结果：通过实验数据和图表展示束缚应激对小鼠肝损伤的影响，为后续研究提 供数据支持
实验目的：研究束缚应激对小鼠肝损伤的影响
实验动物：选择健康成年小鼠，随机分组
束缚应激对小鼠肝损伤的 预防和治疗策略
小鼠肝损伤动物模 型在束缚应激研究 中的应用
模型建立：介绍小鼠肝损伤动物模型的建立方法和步骤，包括实验设计、操作过程和评估指标等。
束缚应激研究：介绍束缚应激在小鼠肝损伤动物模型中的应用，包括应激诱导剂的选择、应激诱 导剂的给药方式、应激诱导剂的剂量和时间等因素对小鼠肝损伤的影响。
束缚应激对小鼠 肝组织氧化应激 水平的影响
束缚应激对小鼠 肝组织炎症反应 的影响
束缚应激对小鼠肝损伤的影响 束缚应激与小鼠肝损伤的生理机制 束缚应激与小鼠肝损伤的病理变化 束缚应激对小鼠肝损伤的预防和治疗意义
束缚应激对小鼠肝损伤的 影响
束缚应激对小鼠肝细胞的 损伤机制
慢性束缚应激大鼠血糖与杏仁核谷氨酸脱羧酶65的相关性
( 1. D e pa rt m e nt ofH i st o lo g y , E m b r y o lo g y a n d Neuro b i o lo g y, 2 . La b or at o ry o f P re c li ni c alMe di c i ne , W e st C hi n a Sc ho o l o f P re c li ni c alMe di c i ne a n d Fo re n si cM ed i c i n e, Sic hua n U n i ver si t y , Chen g d u Sic hua n 6 10 0 4 1, Chi na )
[ A b a c] O b c
:To o b ser ve the ef f ec t ofc hro ni ci m m ob i li za ti o n str ess o n b lo o d g luc o se i n r a ts,
a nd to d i sc uss the re la t i on b e tw ee n str ess-i nd uc ed b lo o d g luc o se c ha ng e a nd e xp re ssi on c ha ng e o f g luta m a t e d ec ar b o xyla se 6 5( G AD6 5 )i n t he a m yg d a la . M et ho d :The r a tm o d els o fc hr o ni ci m m ob i li za ti o n str ess w er e used i n t hi s exp e ri me n t. The y w er e m a na c led i n the r est ra i ntc yli nd er t o li mi te xer c i ses f o r3 ho ur s. Sa m p le s w er ec o lle c te d a tthe 7 , 14 a nd 21 d a ys r esp ec ti vely , the n te sted b lo o d g luc o se leve ls, c a lc ula t ed t he a d re na l i nd ex , a nd d ete c te d the exp r essi o n o fG AD 6 5 i n the a m yg d a la b y i m m uno hi sto -c he mi c a l st ai ni ng . R e sult:Af te r str ess, a d r ena l i nd e x w a s si g ni f i c a ntly i nc r ea sed ( P <0 . 0 5 ) . The e xp r essi o n o fG AD6 5 w a s si gni f i c a ntly i nc re a se d i n the a m yg d a la ( P <0 . 0 1)o f the 9 r a ts w i th hyp er g lyc em i a , w hi le i t w a s no tsi g ni f i � � � � � � c a nt d i f f er ent a m o ng r at swi tho ut e le va t ed b lo o d g luc o se. C c :So m e r a ts d evelo pe d hyp er g lyc e mi a af ter c hr o ni cstr ess. Ther e w as a c or r ela ti on b e tw ee n the up-exp re ssi o n o fG AD65 i n the a m yg d a la a n d ele va te d b lo o d g luc o se levels. [ K ] g luta m a te d ec ar b o xyla se6 5 ;a m yg d a le;c hr o ni ci m m ob i li za ti o n str ess;b lo o d g luc o se;r at
束缚应激致亚健康状态大鼠氧自由基变化及中药干预作用
Ｓ（ 号：８３ ０， Ｕ 批 ００ ２）临用前 用蒸馏 水溶解 至 ３ ｇｍｌ ０ｍ ／ ；
１２ ２
实验动物与比较医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｎｍａ ａｄＣ ｍｐ ｒｔ ｅ ｄｃ ｅ ａ ｏａｏｙ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｖ ｉｎ Ａ ｉ Ｍｅ ｉ
Ａ ｒ ０ ０３ （） ｐ． １ ．０２ ２
ＭＤ Ａ、Ｌ Ｄ含 量。结果 模 型对 照组 大鼠血 清 中 Ｓ Ｄ、ＧＳ Ｐ Ｏ Ｈ．ｘ活性 明显降低 ＜ ．５ ＜ ．１， ００ ，Ｐ ００ ）
Ｍ Ａ、Ｌ Ｄ Ｄ含量明显升 高 ＜ ． ）给予抗衰老片后显著提 高大鼠血清中Ｓ Ｄ、Ｇ Ｈ Ｐ 活性和降 ０ ５； ０ Ｏ Ｓ —ｘ 低血清 ＭＤ Ａ、Ｌ Ｄ含量（＜ ． ， ＜ ．１ Ｐ０ ５ Ｐ ０ ） ０ ｏ 。结论 连续每 日 限制活动 ３ 可使大鼠产生束缚应激， ｈ 导致抗氧化能力降低 ，这可能与亚健康状态的形成有关。给予抗衰老片和六味地黄丸可明显提 高
照组、 模型对照组、抗衰老片组和六味地黄丸组 ， 每组 １ 只。除正常组外， ０ 其它各组每天限制大 鼠活动 ３ ，形成束缚应激 ，建立亚健康状态大鼠模型。在造模同时，各给药组灌 胃给予相应的 ｈ 药物 。试验 第 １ ４ｄ和 ２ ，各 组随机 取 ５只 大鼠，经腹腔取 静脉血 ，测 定 Ｓ Ｄ、ＧＳ ．ｘ活性和 １ｄ Ｏ ＨＰ
六 味地 黄 丸，主要 成分 是 熟地 黄 、 山茱萸 （ 、 山 制） 药 、牡 丹 皮 、茯苓 、泽泻 ，由某 制 药 厂生 产（ 号： 批
理 改变【ｓ ｓ】 实 验研 究束 缚应 激致 亚 健康 状态 大 ～ 。本
鼠血清 中 自由基代 谢 情况 及 中药 的干 预 作用 。
１ 材 料 与方 法
１１ 实验 动物 与饲养环 境 ． Ｓ Ｆ级雄 性 Ｓ Ｐ Ｄ大 鼠，体 重 ３０± ２ ， ０只， ４ ０ｇ ４ 购于 上海斯 莱克实验动 物有 限公司 【Ｃ （ ２０ － Ｓ ＸＫ 沪）０ ７ ００ １ ０ ５ 。饲 养 于浙江 中医药 大学 动物 实验 研究 中心 屏 障环境 ［ＹＸＫ（ ２ ０ —０ ３。 Ｓ 浙）０ ３０ ０ １
23699771_束缚应激对妊娠期大鼠海马突触可塑性的影响
DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).201911002束缚应激对妊娠期大鼠海马突触可塑性的影响*白华毅， 刘婷婷， 邓卓凡， 何成芸， 宋春莲， 程美玲 **(云南农业大学 动物医学院基础兽医系，云南 昆明 650201)摘要: 【目的】女性妊娠期相关精神疾病的神经机制尚不清楚，本研究拟探究妊娠期应激诱发的相关精神疾病发病与海马突触可塑性的关系。
【方法】对大鼠施行束缚应激后，采用在体麻醉电生理学方法检测大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位，比对经历应激和未应激妊娠期大鼠海马突触可塑性的变化。
【结果】与未妊娠空白对照组相比，低频刺激诱导后未应激的妊娠期大鼠可形成长时程增强(long-term potentiation ，LTP)。
此外，施行束缚应激的妊娠期大鼠，则表现为长时程抑制(long-term depression, LTD)不能形成。
【结论】妊娠期内应激使海马突触可塑发生异常，为妊娠期相关精神疾病发病机制的进一步研究提供了突触可塑性异常的重要线索。
关键词: 束缚应激；海马突触可塑性；长时程抑制；长时程增强中图分类号: Q 424 文献标志码: A 文章编号: 1004–390X (2021) 02−0223−06Effects of Restraint Stress on the Hippocampal SynapticPlasticity in Pregnant RatsBAI Huayi ，LIU Tingting ，DENG Zhuofan ，HE Chengyun ，SONG Chunlian ，CHENG Meiling(Basic Veterinary Department, College of Veterinary Medicine, Yunnan AgriculturalUniversity, Kunming 650201, China)Abstract: ［Purpose ］The neural mechanism of female pregnancy-related mental illness remains unclear. We aimed to investigate the relationship between stress-related pregnancy-induced mental ill-ness and hippocampal synaptic plasticity.［Methods ］After restraint stress on rats, in vivo anes-thesia electrophysiology was used to detect the excitatory post-synaptic potentials in the hippocampus of rats, and to compare the changes in hippocampal synaptic plasticity in rats undergoing stress and unstressed pregnancy.［Results ］Compared with the non-pregnant blank control group, the long-term potentiation (LTP) was formed in unstressed pregnant rats induced by low frequency stimulation.In addition, the gestational rats undergoing restraint stress showed no long-term depression (LTD)formation.［Conclusion ］Stress during pregnancy causes abnormal synaptic plasticity in the hippo-campus, which provides important clues for further research on the pathogenesis of pregnancy-related mental diseases.Keywords: restraint stress; hippocampal synaptic plasticity; long-term depression; long-term potenti-ation云南农业大学学报（自然科学），2021，36(2)：223−228Journal of Yunnan Agricultural University (Natural Science)E-mail:********************收稿日期：2019-11-01 修回日期：2020-11-18 网络首发时间：2021-03-10 16:12:09*基金项目：国家自然科学基金项目(31360247)。
束缚-浸水应激对大鼠几个内分泌腺Fos蛋白表达的影响
束缚-浸水应激对大鼠几个内分泌腺Fos蛋白表达的影响李鹏飞;赵梦杰;崔希云【期刊名称】《山东师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(025)004【摘要】目的了解束缚-浸水应激对大鼠松果体、甲状腺、胰岛、肾上腺Fos蛋白表达的影响.方法 Wistar雄性大鼠12只,随机分为实验组(给予束缚-浸水应激1h,n=6)和对照组(不予束缚-浸水,n=6),用免疫组化技术检测两组动物各内分泌腺体中Fos蛋白的表达.结果与对照组相比,实验组中甲状腺、肾上腺髓质及皮质球状带中的Fos蛋白阳性细胞个数及累计光密度值(IOD)明显增加(P＜0.05);松果体的Fos蛋白在实验和对照组表达都很强,两组间差别不明显(P＞0.05);在实验组和对照组,肾上腺皮质网状带、胰岛中均未发现有Fos蛋白的表达.结果提示大鼠的甲状腺、肾上腺球状带及髓质参与了束缚-浸水应激反应.【总页数】3页(P135-137)【作者】李鹏飞;赵梦杰;崔希云【作者单位】山东师范大学生命科学学院,250014,济南;山东师范大学生命科学学院,250014,济南;山东师范大学生命科学学院,250014,济南【正文语种】中文【中图分类】Q426;Q45【相关文献】1.束缚+温水(36±1)℃应激对大鼠延髓及下丘脑Fos蛋白表达的影响 [J], 李慧;纪丽珍;赵玉琳;艾洪滨2.水浸束缚应激及电击足底应激诱导的大鼠脑内FOS蛋白表达 [J], 许爽3.大鼠束缚-浸水应激不同时间段下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴c-Fos蛋白的表达 [J], 张玉玉;祝文兴;艾洪滨4.辣椒素对束缚-浸水应激大鼠DMV和NTS神经元c-fos蛋白表达和胃溃疡的影响 [J], 李兆平;马晓丽;张薇薇;孙海基;艾洪滨5.HRP和AP呈现束缚-浸水应激大鼠NTS儿茶酚胺能神经元Fos表达的效果比较[J], 赵东芹;艾洪滨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
寒冷-束缚应激法对小鼠胃肠功能影响的实验研究
Ｃ ＡＩ Ｙｉ ｎ ｇ ， ＬＩ Ｕ Ｂａ ｉ — ｙ ａ ｎ 。 ， ＬＪ Ｎ Ｘｉ ａ ｏ － ｙｕ ａ ｎ ， Ｙ Ｉ Ｊｉ ａ ｎ ， Ｃ ＡＩ Ｇｕ ａ ｎ ｇ — ｘ ｉ ａ ｎ 。
（ ＴＣＭ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｈｕ ｎ ａ ｎ， Ｃｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ， Ｈｕ ｎ ａ ｎ ４ １ ０ ０ ０ ７ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ； Ｍｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｅｄ ｕ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｋｅ ｙ Ｌａ ｂ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｌ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ａ ｎ ｄ Ｍｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｐｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ Ｇｏ ｖ ｅ ｒ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ， Ｈｕ ｎ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ＴＣ Ｍ， Ｃｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ４ １ ０ ０ ０ ７ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ａ ｌ ｍｏ ｔ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ， ｓ ｅ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｉ ｎ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｘ ａ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ． ［ Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ］ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ ｓ ｉ ｎ
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： ［ Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ］ Ｔ ｏ ａ ｐ ｐ ｒ ｏ ａ ｃ ｈ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｃ ｏ ｌ ｄ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｔ ｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｓ ｔ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｎ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｉ ｎ — ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ａ ｌ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｍｉ ｃ ｅ ． ［ Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ］ Ｔ ｈ ｉ ｒ ｔ ｙ ｍｉ ｃ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｒ ａ ｎ ｄ ｏ ｍｌ ｙ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ２ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ： ｎ ｏ ｒ ｍ ａ ｌ
不可预期应激刺激对大鼠消化道免疫和微生物菌群的影响
2020年8月第30卷㊀第8期中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINEAugust,2020Vol.30㊀No.8王晓宇,马富强,张晓宁,等.不可预期应激刺激对大鼠消化道免疫和微生物菌群的影响[J].中国比较医学杂志,2020,30(8):1-9.Wang XY,Ma FQ,Zhang XN,et al.Effects of chronic heterotypic intermittent stress stimulation on gastrointestinal immunity and microflora in rats [J].Chin J Comp Med,2020,30(8):1-9.doi:10.3969/j.issn.1671-7856.2020.08.001[基金项目]国家自然科学基金(81674083)㊂[作者简介]王晓宇(1978 ),女,副研究员,研究方向:针灸的效应及机制研究㊂E-mail:xiaorain_wang@hotmailcom [通信作者]景向红(1966 ),女,研究员,研究方向:针灸作用机理研究㊂E-mail:jxhtjb@不可预期应激刺激对大鼠消化道免疫和微生物菌群的影响王晓宇1,马富强2,张晓宁1,何㊀伟1,宿杨帅1,万红叶1,胡㊀玲1,景向红1∗(1.中国中医科学院针灸研究所,北京㊀100700;2.洛阳市第一中医院,河南洛阳㊀471000)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀通过对9d 不可预期应激刺激干预后大鼠的观察,分析不可预期应激刺激对胃肠道免疫系统和微生物种群的影响,为慢性应激对胃肠道功能的研究提供参考㊂方法㊀24只SD 大鼠随机分为空白组和慢性应激模型组㊂模型组大鼠连续9d 接受不可预期应激刺激㊂造模完成后随机选择5只正常组和模型组大鼠,采集其粪便样本进行肠道微生物多样性分析㊂两组各12只大鼠中,随机选取4只进行灌流固定,取胃窦㊁结肠组织进行形态学观察;其余8只大鼠取血浆和肾上腺组织检测其中皮质酮的含量㊂结果㊀(1)9d 不可预期应激刺激后,模型组大鼠9d 体重增值与正常组大鼠相比明显减少(P =0.001),模型组大鼠肾上腺组织中皮质酮含量与正常组大鼠相比明显降低(P =0.006);模型组大鼠血浆中皮质酮含量与正常组大鼠相比增加(P =0.025)㊂(2)9d 后模型组大鼠的胃黏膜层上皮细胞排列较正常组稀疏,其厚度与正常组相比减少(P =0.034);模型组大鼠的胃黏膜固有层中性粒细胞数量与正常组相比减少(P =0.016);模型组大鼠的结肠黏膜中中性粒细胞数量与正常组相比增多(P =0.013)㊂3)经过9d 慢性不可预期应激,Alpha 多样性分析显示,模型组大鼠粪便样本OTU 中细菌种类与正常组大鼠相比明显增加(P =0.001);其中模型组大鼠样本中脱硫弧菌科和螺杆菌科的占比为与正常组大鼠相比增加(P =0.011,P =0.047);模型组大鼠样本中类杆菌科的占比与正常组大鼠相比明显减少,差异具有极显著的统计学意义(P =0.001)㊂结论㊀9d 不可预期应激刺激可以造成一个稳定的慢性应激大鼠模型,慢性应激所导致的免疫抑制与大鼠肠道微生物菌群失调伴随发生㊂ʌ关键词ɔ㊀不可预期应激;慢性刺激;皮质酮;胃黏膜;肠道微生物菌群ʌ中图分类号ɔR-33㊀㊀ʌ文献标识码ɔA㊀㊀ʌ文章编号ɔ1671-7856(2020)08-0001-09Effects of chronic heterotypic intermittent stress stimulation ongastrointestinal immunity and microflora in ratsWANG Xiaoyu 1,MA Fuqiang 2,ZHANG Xiaoning 1,HE Wei 1,SU Yangshuai 1,WAN Hongye 1,HU Ling 1,JING Xianghong 1∗(1.Institute of Acupuncture and Moxibustion CACMS,Beijing 100700,China.2.Luoyang No.1Hospital of TCM,Luoyang 471000)㊀㊀ʌAbstract ɔ㊀Objective ㊀To observe the effects of chronic heterotypic intermittent stress (HIS )on thegastrointestinal immune system,particularly in terms of (1)the morphology of the gastric and colonic mucosa,and (2)intestinal microbial diversity.Methods㊀We randomly divided24SD rats into a control group and a model group.The rats in the model group received HIS for9days.After the9days of modeling,five rats in the control and model group were randomly selected,and fecal samples were collected for gut microbial diversity analysis.Four of the12rats from each of the two groups were randomly selected for perfusion and fixation,and tissues from the gastric antrum and colon were taken for morphological observation.Plasma and adrenal tissues were taken from the remaining eight rats for assessment of corticosterone content.Results㊀(1)After9days of HIS,the rats in the model group had gained significantly less weight than those in the control group(P=0.001).Furthermore,the corticosterone content in adrenal tissue was significantly lower in the model group vs.the control group(P=0.006),and the corticosterone content in plasma was higher in the model group vs.the control group(P=0.025).(2)After HIS,the arrangement of gastric mucosal epithelial cells in the model group was thinner than that in the control group(P=0.034).Additionally,the number of neutrophils in the lamina propria of the gastric mucosa in the model group was lower than that in the control group(P=0.016).The number of neutrophils in the colonic mucosa in the model group was higher than that in the control group(P=0.013).(3)After9 days of HIS,Alpha diversity analysis showed that the number of operational taxonomic units in the fecal samples from the model group was significantly higher than that in the control group(P=0.001).The proportion of desulfovibrionaceae and helicobacteraceae in the model group was higher than that in the control group(P=0.011,P=0.047).Furthermore,the proportion of bacteroidaceae in the model group was significantly lower than that in the control group(P=0.001). Conclusions㊀Nine days of HIS induced a stable rat model of chronic stress in which chronic stress-induced immunosuppression occurred concomitantly with dysregulation of the gut microbial flora.ʌKeywordsɔ㊀heterotypic intermittent stress;chronic stress;corticosterone;gastric mucosa;intestinal microflora㊀㊀急性的应激刺激可通过影响胃肠道血流㊁运动收缩功能而产生直接的作用[1]㊂慢性应激刺激对胃肠道的影响与急性应激明显不同,其所致的焦虑和紧张可增加如腹泻[2]㊁便秘㊁胀气和腹痛[3]等症状[4],因此较多的研究工作关注了慢性应激与功能性消化不良㊁肠易激综合征之间的联系[5-6]㊂在慢性应激刺激对胃肠道产生影响的过程中,免疫系统[7]和肠道微生物种群[8]的改变也起到了重要的作用,但在目前动物实验中对这两方面内容的观察和系统研究比较少㊂在研究慢性应激的动物实验中,为了避免神经内分泌系统对应激刺激的适应和习惯化,慢性应激模型的建立从单一刺激源的模式过渡到多重刺激源的模式[9]㊂慢性不可预期刺激最初由Katz等人[10]提出,多年来该刺激模式已经被反复的修改,并作为研究抑郁症和创伤应激障碍的一个有价值的模型系统得到研究者们的重视[11]㊂在大鼠慢性应激模型的建立中,较常用的方法有:束缚应激,制动应激,寒冷应激㊁电击㊁听源性应激和环境应激等[12]㊂本研究中选择了避水应激,强迫游泳应激,寒冷束缚应激作为不可预期刺激的应激源,(与1.3.1对应)对大鼠慢进行为期9d干预[13],使用随机数列来组合排列不同刺激的顺序㊂通过对接受该刺激大鼠体重㊁胃黏膜受损情况㊁应激程度以及肠道微生物多样性的观察,分析慢性应激刺激对胃肠道免疫系统和微生物种群的影响,为慢性应激对胃肠道功能的研究提供重要的补充和参考㊂1㊀材料和方法1.1㊀实验动物24只6周龄SPF级健康雄性SD大鼠,体重(207.50ʃ4.64)g,由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供[SCXK(京)2016-0002]㊂实验动物均饲养于中国中医科学院中医基础理论研究所[SYXK (京)2016-0021]㊂适应性饲养3d后,根据体重随机分为正常组和模型组,每组12只㊂模型组大鼠连续9d接受不可预期应激刺激,实验内容经中国中医科学院针灸研究所伦理委员会审查(中科针伦(D2018-04-13-1))㊂1.2㊀主要试剂与仪器10%福尔马林固定液(索莱宝,中国);皮质酮(Corticosterone,Cort)荧光免疫分析试剂盒(R&D systems,美国);无水乙醇(国药集团,中国);二甲苯(国药集团,中国);苏木精(SIGMA,美国);水溶性伊红(国药集团,中国);DNA Marker(Thermo,美国);琼脂糖(Oxoid,英国);溴化乙锭(Thermo,美国);冰乙酸(国药集团,中国);异丙醇(国药集团,中国)㊂电子秤(日立,日本);EG1150H组织包埋机(徕卡,德国);RM2235石蜡切片机(徕卡,德国);光学显微镜(奥林巴斯,日本);Thermo4ħ低温高速离心机(Thermo,美国);全波长扫描式多功能酶标仪(Thermo,美国);T-gradient PCR仪(Biometra,德国);Gel-Doc2000凝胶成像系统(Bio-rad,美国);变性梯度凝胶电泳仪(Bio-rad,美国);DNA测序仪(Hitachi,日本);凝胶电泳成像分析仪(Bio-rad,美国)㊂1.3㊀实验方法1.3.1㊀不可预期应激模型的建立模型组大鼠连续9d接受不可预期应激刺激㊂该刺激由3个随机选择的应激源组成:避水应激(water avoidance stress,WAS)60min,强迫游泳应激(forced swimming stress,FSS)20min,寒冷束缚应激(cold restraint stress,CRS)5min㊂每天上午8点到11点之间,模型组大鼠进行应激刺激,所使用的应激源由电脑设定随机序列来确定㊂避水应激刺激的实施:大鼠被放置在一个长度8.5cm宽度6cm 高度为12cm的高台上并放入一个装满水的塑料容器(长54cm㊁宽36cm㊁高14cm)中60min,实施的时间是第1㊁4㊁6天㊂强迫游泳应激刺激的实施时间是第2㊁7㊁9天㊂对于CRS,实验动物被限制在金属固定器中,浸入4ħ的水中5min,实施的时间是第3㊁5㊁8天㊂正常组大鼠同时被放置到另一个不进行应激刺激的实验室㊂9d造模完成后随机选择5只正常组和模型组大鼠,采集其粪便样本进行肠道微生物多样性分析㊂两组各12只大鼠中,随机选取4只正常组和模型组大鼠进行灌流固定,取胃窦㊁部结肠组织进行形态学观察;各组其余8只大鼠取血浆和肾上腺组织检测其中皮质酮的含量,取材完毕后将大鼠放入二氧化碳箱中处死㊂1.3.2㊀血清及肾上腺中皮质酮含量的测量正常组和模型组大鼠于第9天后上午经心脏取血浆和肾上腺组织㊂使用双抗夹心ELISA分别测定血浆及肾上腺组织中的皮质酮含量,分析结果使用酶标仪在450nm吸收波长读数,使用标准品OD 值建立标准方程,再将样本OD值代入标准方程求得样本含量㊂1.3.3㊀胃组织石蜡切片的观察随机选取4只正常组和模型组大鼠进行灌流固定,每只大鼠取1.5cmˑ0.5cm胃窦部和结肠组织,使用4%的甲醛溶液进行固定,进行石蜡包埋㊁切片并进行HE染色,染色完成后使用中性树脂封片进行观察㊂胃黏膜厚度的测量:随机选择正常组和模型组大鼠各样本中胃黏膜2个视野,测量每个视野下胃黏膜的厚度,取其平均值㊂中性粒细胞的计数:在40倍镜下,随机选择正常组和模型组大鼠各样本中胃黏膜及结肠2个视野,测量每个视野下胃黏膜固有层及结肠黏膜中的中性粒细胞个数,取其平均值㊂1.3.4㊀胃肠道微生物多样性分析随机选择5只正常组和模型组大鼠,采集其粪便进行胃肠道微生物多样性分析㊂提取各组样本总DNA后,通过热循环PCR系统,使用正向引物341F-35(5ᶄ-GCCTCCCTCGCGCCATCAGCAGTAGACGTCCT AYGGGRBGCASCAG-3ᶄ)和反向引物806R(5ᶄ-GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGGACTACNNGGGTATCT AAT-3ᶄ)靶向16S rRNA基因的V3~V4区域进行扩增[14-15]㊂PCR反应一式三份,起始变性步骤是在95ħ进行3min,然后在95ħ进行27轮变性30s,在55ħ进行30s退火,并在72ħ进行45s的延伸,最后的延伸步骤为72ħ,持续10min㊂扩增的产物在2%琼脂糖凝胶上可视化,经纯化㊁定量和均一化形成测序文库㊂建好的文库先进行文库质检,质检合格的文库使用Illumina HiSeq2500进行高通量测序㊂所获得的原始图像数据文件,经碱基识别(base calling)分析转化为原始测序序列(sequenced reads)㊂将Hiseq测序得到的双端序列数据使用FLASH v1.2.7软件拼接成一条序列Tags,使用Trimmomatic v0.33软件对拼接得到的Raw Tags进行过滤,使用UCHIME v4.2软件鉴定并去除嵌合体序列,得到最终有效数据㊂在完成数据预处理后,对信息进行分析,划分操作分类单元(operational taxonomic unit, OTU)并进行多样性分析㊂分类分析是基于97%的同一性阈值获得的OTUS,因为这个同一性值通常被认为代表物种水平㊂将OTU的代表序列与微生物参考数据库进行比对可得到每个OTU对应的物种分类信息,进而在个水平(门㊁纲㊁类㊁科㊁属㊁种)统计各样本群落组成,生成不同分类水平上的物种丰度表㊂Alpha多样性反映的是单个样品内部的物种多样性,有多种衡量指标:Ace㊁Chao1等㊂使用QIIME软件对数据进行Beta多样性分析,比较不同组样本在物种多样性方面存在的差异大小㊂1.4㊀统计学方法采用SPSS16.0软件进行数据处理,计量资料以平均数ʃ标准误差( x ʃsx )表示㊂符合正态分布且方差齐者,采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q 检验;不满足方差齐性或正态分布则采用Kruskal-Wallis H 检验,以P <0.05作为差异有统计学意义的标准㊂配对样本数据采用配对样本t 检验,以P <0.05作为差异有统计学意义的标准㊂2㊀结果2.1㊀不可预期应激刺激对大鼠体重的影响9d 不可预期应激刺激后,模型组大鼠体重均值为(271.40ʃ4.17)g,与正常组大鼠(300.64ʃ4.22)g 相比明显减少,差异具有极显著的统计学意义(P <0.01)㊂模型组大鼠在应激9d 中体重增值为(58.58ʃ3.80)g,与正常组大鼠未受应激生长9d (92.54ʃ3.57)g 相比明显减少,差异具有极显著的统计学意义(P =0.001)㊂(见图1)注:A:与正常组比较,∗∗P <0.01;B:与正常组比较,∗P <0.05㊂图2㊀9d 不可预期应激刺激对大鼠肾上腺及血清中皮质酮含量的影响(x ʃs x ,n =8)Note.A,Compared with control group,∗∗P <0.01.B,Compared with control group,∗P <0.05.Figure 2㊀Effect of 9days HIS on CORT levels in adrenal gland and plasma2.2㊀不可预期应激刺激对大鼠肾上腺及血清中皮质酮含量的影响9d 不可预期应激刺激后,模型组大鼠肾上腺组织中皮质酮含量为(0.20ʃ0.02)pg /mg,与正常组大鼠(0.34ʃ0.03)pg /mg 相比明显降低,差异具有极显著的统计学意义(P =0.006)㊂模型组大鼠在应激9d 后血浆中皮质酮含量(0.29ʃ0.03)pg /mg,与正常组大鼠(0.17ʃ0.03)pg /mg 相比明显增加,差异具有显著的统计学意义(P =0.025)㊂(见图2)2.3㊀不可预期应激刺激对大鼠胃黏膜的影响正常组大鼠的胃黏膜层上皮细胞排列整齐,黏膜肌层与黏膜下层结构清晰,固有层可见中性粒细胞㊂模型组大鼠的胃黏膜层上皮细胞排列较正常组稀疏,其厚度为(635.14ʃ36.00)μm,与正常组(893.86ʃ45.52)μm 相比明显减少,差异具有显著的统计学意义(P =0.034)㊂模型组大鼠的胃黏膜固有层中性粒细胞数量(16.27ʃ1.80)个与正常组(23.33ʃ2.80)个相比明显减少,差异具有显著的统计学意义(P =0.016)㊂(见图3)正常组大鼠的结肠黏膜组织中可散见中性粒细胞㊂与正常组相比,模型组大鼠的结肠组织中可观察到较多数量的中性粒细胞浸润㊂模型组大鼠结肠黏膜中中性粒细胞数量为(34.50ʃ3.10)个与正常组(21.50ʃ2.60)个相比明显减少,差异具有显著的统计学意义(P =0.013)㊂(见图4)2.4㊀不可预期应激刺激对大鼠胃肠道微生物多样性的影响9d 不可预期应激刺激后,取5只模型组大鼠和5只正常组大鼠粪便样本进行了微生物多样性分析㊂基于细菌(Silva)和真菌(UNITE)分类学数据注:与正常组比较,∗∗P <0.01㊂图1㊀9d 不可预期应激刺激对大鼠体重的影响(x ʃs x ,n =12)pared with control group,∗∗P <0.01.Figure 1㊀Effect of 9days HIS on body weight in rats注:A:正常组;B:模型组;C:正常组;D:模型组㊂图3㊀9d 不可预期应激刺激对大鼠胃黏膜的影响( x ʃsx ,n =4)Note.A,Control group.B,Model group.C,Control group.D,Model group.Figure 3㊀Effect of 9days HIS on gastric mucosa inrats注:A:正常组;B:模型组㊂图4㊀9d 不可预期应激刺激对大鼠结肠黏膜的影响(x ʃs x ,n =3)Note.A,Control group.B,Model group.Figure 4㊀Effect of 9days HIS on colonic mucosa in rats库,对样本OTU 聚类进行分类学注释,并通过聚类得到个样本的OTU 聚类的个数㊂Alpha 多样性分析结果显示模型组大鼠样本中OTU 个数为(727.20ʃ24.66)个,与正常组大鼠(530.00ʃ25.96)个相比明显增加,差异具有极显著的统计学意义(P =0.001)㊂对所获得的数据进行Alpha 多样性分析,可以观察到模型组大鼠样本ACE 指数为(747.20ʃ21.98),与正常组大鼠(555.34ʃ23.47)相比明显增加,差异具有极显著的统计学意义(P =0.001);模型组大鼠样本Chao1指数为(755.04ʃ21.31),与正常组大鼠(569.40ʃ26.94)相比明显增加,差异具有极显著的统计学意义(P =0.001)(见图5㊁6)㊂正常组和模型组大鼠样本中优势菌种主要归属于拟杆菌门(Bacteroidetes )㊁厚壁菌门(Firmicutes)及变形菌门(Proteobacteria)三大类,与肠道主要固有菌群的构成相同㊂其中模型组大鼠样本中脱硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)的占比为(2.53ʃ0.46)%,与正常组大鼠(0.78ʃ0.27)%相比明显增加,差异具有显著的统计学意义(P =0.011);模型组大鼠样本中螺杆菌科(Helicobacteraceae)的占比为(8.21ʃ1.86)%,与正常组大鼠(2.90ʃ1.29)%相比明显增加,差异具有显著的统计学意义(P =0.047)㊂模型组大鼠样本中类杆菌科(Bacteroidaceae )的占比为(0.35ʃ0.11)%,与正常组大鼠(2.60ʃ0.44)%相比明显减少,差异具有极显著的统计学意义(P =0.001)㊂(见图7㊁8)㊀㊀通过主成分分析(principal component analysis,PCA)的方法,对各组样本进行Beta 多样性分析,可以观察到正常组和模型组大鼠样本中菌种主要成分有分离的趋势,两组细菌群落结构有一定的差异(图9)㊂正常组大鼠中第一主成分对样品差异的贡献值为74.38%,第二主成分对样品差异的贡献值为11.42%㊂与模型组中第一主成分对样品差异的贡献值83.19%和第二主成分对样品差异的贡献值7.44%相比,差异无统计学意义(P =0.341)㊂(见图9)注:A:模型组与正常组比较,∗∗P<0.01;B:模型组与正常组比较,∗∗P<0.01;C:模型组与正常组比较,∗∗P<0.01㊂图5㊀9d不可预期应激刺激对大鼠胃肠道微生物多样性的影响( xʃs x,n=5)Note.A,Model group compared with control group,∗∗P<0.01.B,Model group compared with control group,∗∗P<0.01.C,Model group compared with control group,∗∗P<0.01.Figure5㊀Effect of9Days HIS on gastrointestinal microbial diversity in rats注:Venn图可以展示样本之间共有㊁特有OTU数目,直观地表现出样本间OTU的重合情况㊂图6㊀正常组和模型组各样本胃肠道微生物OTU Venn图Note.The Venn diagram can show the number of unique OTUs shared between samples,visually showingthe coincidence of OTUs between samples.Figure6㊀Gastrointestinal microbe OTU Venn map of control and model groups注:A:模型组与正常组比较,∗P<0.05;B:模型组与正常组比较,∗P<0.05;C:模型组与正常组比较,∗∗P<0.01㊂图7㊀9d不可预期应激刺激对大鼠胃肠道细菌中脱硫弧菌科㊁螺杆菌科和类杆菌科占比的影响( xʃs x,n=5) Note.A,Model group compared with control group,∗P<0.05.B,Model group compared with control group,∗P<0.05.C,Model group compared with control group,∗∗P<0.01.Figure7㊀Effect of9Days HIS on proportion of desulfovibrionaceae,helicobacteraceae and bacteroidaceae ingastrointestinal microbial diversity图8㊀正常组和模型组各样本胃肠道细菌物种分布柱状图Figure8㊀Histogram of species distribution of gastrointestinal bacteria in control and modelgroups图9㊀正常组和模型组各样本胃肠道细菌物种PCA分析图Figure9㊀PCA analysis of gastrointestinalbacteria in control and model groups3㊀讨论具有一致性和可重复性的实验模型和范式是推动生物学科发展的助力之一㊂在慢性应激研究中不可预期应激刺激模式可以提供更一致的造模方法并提高了在不同实验室之间产生可重复结果的可能性[16]㊂本研究中采用的9d不可预期应激刺激造成大鼠体重增幅明显降低[17-18]㊂同时观察到慢性应激导致血浆皮质酮含量显著升高[19],肾上腺肥大但皮质酮含量减少的现象[20]㊂说明经过9d 不可预期刺激后大鼠的下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)已被激活[9]㊂慢性应激刺激对胃肠道免疫功能的影响也是显而易见的㊂长期应激刺激可以直接影响胃窦和胃底上皮细胞的增殖[21],并导致血管充血以及回肠和结肠上皮的退化[22]㊂有不少研究者们注意到了应激可诱导的血浆皮质酮升高通过激活糖皮质激素受体抑制先天免疫[23],14d慢性应激暴露导致雄性Wistar大鼠血浆中IgG抗体水平和迟发型超敏反应(DTH)响应受到抑制[24]㊂有研究观察到慢性应激对大鼠皮肤的免疫力产生了免疫抑制,抑制了白细胞从血液到皮肤的动员[25]㊂这一结果与本研究中观察到慢性应激大鼠胃黏膜固有层中中性粒细胞数量减少的现象类似㊂本研究中还观察到,慢性不可预期刺激导致结肠黏膜中中性粒细胞数量高于正常组,说明慢性应激刺激与肠道慢性炎症之间的具有密切的联系㊂长期㊁持续的压力会增加溃疡性结肠炎患者复发的次数[26],环境应激延长了克罗恩病的病程[27]㊂这与应激对神经内分泌,行为和免疫功能具有强大调节能力关系密切[28]㊂还有研究观察到长期暴露于社会心理应激会促进大鼠肠黏膜炎症和肥大细胞介导的屏障功能障碍:应激引起的线粒体损伤和空肠通透性增加,与肥大细胞激活密切相关[29]㊂说明肥大细胞可以作为观察慢性应激刺激对肠道免疫功能影响更精准的新靶点,这个方向的研究我们会在之后的工作中继续进行㊂在过去的几年中,得益于高通量核酸检测技术的发展,对肠脑轴(肠道和大脑之间的双向通信系统)的研究大量增加[30],肠道菌群作为研究的关键角色得到了更多关注㊂应激所致的免疫抑制是影响肠道微生物种群变化的原因之一[31],在本研究中我们观察到9d不可预期应激刺激后,模型组大鼠粪便样本中微生物种类的明显增多㊂其中模型组大鼠样本中脱硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)和螺杆菌科(Helicobacteraceae)细菌的占比较正常对照组明显增加,而类杆菌科(Bacteroidaceae)细菌的占明显下降㊂有研究使用牛蔗糖喂养的大鼠导致其发生肠道营养不良,这类大鼠的结肠微生物组群观察中同样显示出脱硫弧菌科的细菌丰度的增加[32];在调查上海市实验动物生产设施以及大鼠㊁小鼠细菌携带状况的研究中,观察到所有清洁级设施均存在螺杆菌和牛棒状杆菌污染[33]㊂在大肠癌患者的早期诊断和筛查中,有研究观察到双歧杆菌和乳杆菌明显少于正常健康组,尤其是膜菌群的肠杆菌㊁肠球菌㊁类杆菌㊁双歧杆菌和乳杆菌的占比与正常组对比明显下降[34]㊂说明慢性应激造成大鼠肠道微生物菌群失调,具体表现为正常健康者携带的有益菌占比下降,而与肠道营养不良,设施污染相关的菌群占比上升㊂本研究中,由于采集的样本量偏少,在Beta多样性分析过程中,未发现两组大鼠第一和第二主成分对样品差异的贡献值有差异,仅可观察到正常组和模型组大鼠样本中菌种主要成分有分离的趋势,在下一步的研究中,会加大样本量继续进行观察㊂综上所述,9d不可预期应激刺激可以造成一个稳定的慢性应激大鼠模型㊂在这个模型中本研究通过对大鼠体重㊁胃黏膜结肠黏膜形态学以及肠道微生物多样性的观察,全面的分析了慢性应激刺激对胃肠道免疫系统和微生物种群的影响,为慢性应激对胃肠道功能的研究提供重要的补充和参考㊂参考文献:[1]㊀Stam 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慢性束缚应激对大鼠体质量_血清皮质酮和前额_省略_MP_PKA_CREB_BDN
作者单位：１５００７６ 哈尔滨医科大学附属第一医院大桥分院（孟珊珊 刘洪文）慢性束缚应激对大鼠体质量、血清皮质酮和前额叶皮质ｃＡＭＰ－ＰＫＡ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ通路的影响孟珊珊 刘洪文 【摘要】 目的 探讨慢性束缚应激对大鼠体质量、血清皮质酮水平和前额叶皮质ｃＡＭＰ－ＰＫＡ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ通路的影响。
方法 将３０只雄性ＳＤ大鼠随机分为对照组、慢性束缚应激１周组和慢性束缚应激２周组，每组各１０只。
比较应激前后大鼠体质量和血清皮质酮水平的变化，放免法观察应激前后大鼠前额叶皮质环磷腺苷（ｃＡＭＰ）含量，试剂盒测定ｃＡＭＰ依赖蛋白激酶（ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，ＰＫＡ）活性和脑源性神经营养因子（ｂｒａｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）表达水平，用蛋白免疫印迹技术观察ｃＡＭＰ反应元件结合蛋白质（ｐ－ＣＲＥＢ）水平变化。
结果 慢性束缚应激组大鼠在应激１周和应激２周的体质量增长［分别为（３５±１１）ｇ和（２３±８）ｇ］均低于对照组［分别为（５９±１６）ｇ和（６８±１４）ｇ］（Ｐ＜０．０５）。
束缚应激１周组和束缚应激２周组大鼠血清皮质醇浓度分别为（３５６．７８±１１２．２１）ｎｇ／ｍｌ、（５５８．４９±９８．３２）ｎｇ／ｍｌ，均高于对照组（１９８．２１±１０１．３５）ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。
束缚应激１周组和束缚应激２周组大鼠前额叶皮质的ｃＡＭＰ含量、ＰＫＡ活性、ｐ－ＣＲＥＢ和ＢＤＮＦ表达水平低于对照组（Ｐ＜０．０１）。
结论 慢性束缚应激抑制大鼠体质量的增长，引起血清皮质酮水平增高和前额叶皮质ｃＡＭＰ－ＰＫＡ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ信号通路被抑制。
【关键词】 束缚应激 体质量 皮质酮 前额叶皮质 ｃＡＭＰ反应元件结合蛋白质【中图分类号】 Ｒ７４９．４ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００７－０４７８（２０１１）０５－０２６３－０３【ＤＯＩ】 １０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－０４７８．２０１１．０５．００２Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ，ｓｅｒｕｍ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃＡＭＰ－ＰＫＡ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｉｎ ｒａｔｓ Ｍｅｎｇ Ｓｈａｎｓｈａｎ，Ｌｉｕ Ｈｏｎｇｗｅｎ．Ｄａｑｉａｏ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ｔｈｅＦｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｅｒｂｉｎ１５００７６【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ，ｓｅｒｕｍ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃＡＭＰ－ＰＫＡ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｉｒｔｙｍａｌｅ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１０），１ ｗｅｅｋ ａｎｄ ２ ｗｅｅｋｓ（ｎ＝１０）ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓｇｒｏｕｐｓ．Ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ，ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ，ｒａｄｉｏ－ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｍｅｔｈｏｄ Ｐｅｐ ＴａｇＲ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｃＡＭＰ ｃｏｎｔｅｒｔ．ＰＫＡ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐ－ＣＲＥＤＢ ｉｎ ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ（３５±１１）ｇ ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄ ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｗｅｅｋｓ（２３±８）ｇ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｉｎ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｇｒｏｕｐｓ ｔｈａｎ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌｓｇｒｏｕｐ（５９±１６）ｇ ａｎｄ（６８±１４）ｇ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ｐ＜０．０５．Ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ ｌｅｖｅｌ ｉｎ １ ｗｅｅｋ（３５６．７８±１１２．２１）ｎｇ／ｍｌ ａｎｄ ２ ｗｅｅｋｓ（５５８．４９±９８．３２）ｎｇ／ｍｌ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（１９８．２１±１０１．３５）ｎｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５．Ｔｈｅ ｃａｍｐ ｃｏｎｔｅｎｔ，ＰＫＡ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｐ－ＣＲＥ ａｎｄ ＢＤＮＦ ｅｘｐｒｅｓ－ｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｉｎ １ ｗｅｅｋ ａｎｄ ２ ｗｅｅｋｓ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｒａｔ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎｉｎｇ，ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｓｅｒ－ｕｍ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃＡＭＰ－ＰＫＡ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｏｆ ｒａｔ．【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ Ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ Ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｃＡＭＰ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅ－ｍｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ 抑郁症是一种常见的精神障碍，它以情感病态变化（主要是情绪低落）为显著特征。